文摘
无功α,β等不饱和醛丙烯醛(ACR)是环境污染的主要组成部分,涉及神经退行性和心脏疾病。在这项研究中,水飞蓟素的保护作用(SN)对ACR在小鼠体内诱导毒性评估。研究进行7组,每组六个动物,包括车辆控制(生理盐水+ 0.5% w / v甲基纤维素),ACR(7.5毫克/公斤/天,填喂法)为3周,SN(25、50和100毫克/公斤/天,i.p) + ACR,维生素E(维生素E 100 IU /公斤,i.p) + ACR和SN(100毫克/公斤,i.p)组。老鼠收到SN ACR和日常前7天之后整个研究。预处理与SN减毒ACR-induced增加水平的丙二醛(MDA)、血清心肌肌钙蛋白I (cTnI)和肌酸kinase-MB(水平),以及组织病理学变化的心脏组织。此外,SN提高谷胱甘肽(GSH)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活动ACR-treated小鼠的心脏。免疫印迹分析表明,SN预处理抑制细胞凋亡引起ACR通过伯灵顿/ bcl - 2比例减少,胞质细胞色素c含量,裂解caspase-3心里层面。总之,SN可能对毒性保护作用的ACR通过减少脂质过氧化反应,更新抗氧化酶的活动,防止细胞凋亡。
1。介绍
丙烯醛(ACR, CH2= CH-CHO)被用作生产一个中间一些有机化学物质和杀虫剂在农业和工业供水系统(1,2]。
据美国环境保护署分类、ACR是一个高优先级空气和水毒性药物(3]。ACR,无处不在的环境污染物,不完全燃烧产生的塑料、汽油、木材、汽油和柴油燃料、石蜡、烟草、和在油煎的食物(1,2]。ACR在不同级别(10 - 600μ克/公斤)被发现在某些食物,如奶酪,甜甜圈,鱼,面包,土豆,和酒精饮料4,5]。同时,ACR形成内生的多不饱和脂肪酸氧化和聚胺的代谢和环磷酰胺1,3]。ACR的来源相关的毒性和人体接触可以分为饮食,内源性和环境资源(1]。ACR,高活性α,β不饱和醛,可共价结合细胞硫醇和糖胺组,磷脂、蛋白质和DNA碱基和诱导氧化应激和促炎效应在各组织和细胞(6,7]。ACR引起有害影响通过活性氧簇(ROS)的产生和脂质过氧化反应在许多细胞类型(8,9]。增加的证据表明,氧化应激可能拥有一个重要的影响在心血管疾病的发病机制包括缺血性心脏病、心力衰竭、和动脉粥样硬化10- - - - - -12]。
除了氧化应激,ACR能诱导细胞凋亡在不同细胞线粒体通路的激活或死亡受体信号(13,14]。一些实验研究表明,ACR能产生不利影响在成年小鼠心肌细胞和心脏组织凋亡细胞死亡(6,9]。细胞凋亡参与了许多化学物质的毒性和环境污染物15]。细胞凋亡是一种生理性细胞死亡,在开发和维护中起着重要作用的细胞内稳态。凋亡细胞死亡和细胞增殖之间的失衡破坏正常状态并导致神经退化疾病和心脏疾病(14,16]。
水飞蓟素(SN),多酚类黄酮素,是标准化提取得到水飞蓟的种子和水果。的混合物包括silybin在内的一些异构flavonolignans isosilybin, silydianin, silychristin [17]。SN表明有效抗氧化性能(18)除了抗炎(19)和抗癌的行动(20.在动物和人类研究中)。SN已经应用于临床,提高慢性炎症性肝病和肝硬化。Hepatoprotection可以关联到它通过清除自由基和抗氧化作用增加内源性抗氧化防御系统等细胞内谷胱甘肽(GSH) (21]。已经证明SN和牛奶蓟methanolic提取物预防顺铂引起的肾毒性由于降低血尿素氮(BUN)测定,血清肌酐和管状损伤大鼠22]。据报道,SN可以改善cisplatin-induced增加血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO),以及减少谷胱甘肽和抗氧化酶的活动如超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)在大鼠肝23]。SN也变弱毒性和肾毒性阿霉素诱导的大鼠脂质过氧化的抑制作用,在这些组织谷胱甘肽耗竭(24]。进一步的研究表明,SN可以消除或显著减少细胞色素P450的海拔同种型CYP1A1、诱导一氧化氮合酶(间接宾语),和金属硫蛋白i ii (MT)表达式在肝脏,肾脏,心脏的pyridine-treated叙利亚仓鼠(25]。它已经表明,预处理的雄性ICR小鼠SN防止doxorubicin-induced氧化应激和细胞死亡发生在肝脏细胞凋亡或坏死(26]。此外,SN可以大大改善顺铂毒性的降低血清生化标记和MDA水平,增加谷胱甘肽含量、SOD活性和总蛋白的内容(27]。因此,我们设计了本实验,以评估SN的保护作用对ACR导致的毒性亚急性暴露在老鼠身上。
2。材料和方法
2.1。化学物质
ACR、锡、氟化phenylmethanesulfonyl (PMSF),完整的蛋白酶抑制剂的鸡尾酒,和减少谷胱甘肽是来自Sigma-Aldrich化学公司。维生素E(维生素E DL -α生育酚乙酸酯)提供了从OSVE药业有限公司(伊朗德黑兰)。钠十二烷基硫酸盐(SDS)、MDA、硫代巴比土酸(稍后通知),,,,-Tetramethylethylenediamine (tem),β巯基乙醇(β加)从默克公司提供。兔兔单克隆caspase-3抗体,单克隆caspase-8抗体,兔多克隆Hsp27抗体,兔多克隆Hsp70抗体,一半寿命兔多克隆抗体,兔子bcl - 2单克隆抗体,兔多克隆抗体,伯灵顿兔多克隆抗体,细胞色素c anti-rabbit免疫球蛋白,辣根peroxidase-conjugated抗体,鼠单克隆β肌动蛋白抗体,anti-mouse免疫球蛋白、山葵peroxidase-conjugated抗体购自细胞信号。聚偏二氟乙烯(PVDF)膜和布拉德福德从Bio-Rad蛋白质鉴定装备了。试验用品等抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)从Biovision购买(美国CA)和试验设备对心肌肌钙蛋白I (cTnI)从生活提供了诊断,Inc .)试验设备对肌酸kinase-MB Azmun(水平)是提供从帕尔斯(德黑兰,伊朗)。BCA蛋白质化验设备,线粒体隔离包组织和免疫印迹检测试剂(ECL),提供从皮尔斯。其他化学物质都是等级最高的商业应用。
2.2。动物治疗
男性白化Razi老鼠(重约25 - 35 g)得到的动物屋马什哈德大学药物科学研究中心的医学科学。动物被安置在一个通风的房间在12/12 h光/暗周期°C,有免费的水和食物在整个实验周期。所有动物实验进行了按照马什哈德大学医学科学,伦理委员会的行为。
老鼠被分为7组,每组六个动物。化学物质管理在早上(9点到11点之间)28]。
组1(车辆控制集团)。车辆控制集团收到生理盐水+ 0.5% w / v甲基纤维素作为工具,口头的填喂法一天一次,3周。
组2 (ACR-Treated组(ACR组))。在这一组,动物对ACR 7.5毫克/公斤/天生理盐水+ w / v甲基纤维素0.5%,口服,填喂法一天一次,3周。
组3、4、5 (SN + ACR-Treated组(ACR + SN组))。SN w / v分散在生理盐水+ 0.5%甲基纤维素和注射剂量25日50和100毫克/公斤/天小鼠腹腔内,7天前ACR(7.5毫克/公斤/天,一天一次,口头)和日常之后整个研究(3周)22]。
组6 (Vit E + ACR-Treated集团(ACR +维生素E组))。服用维生素E (100 IU /公斤)是分散在生理盐水+ w / v甲基纤维素和0.5%,腹腔内,每周注射三次为3周,和口头管理了ACR填喂法(7.5毫克/公斤/天,一天一次)为3周。服用维生素E已经被视为一个积极的控制(28]。
集团7 (SN-Treated组(SN组))。在这一组,老鼠收到SN(100毫克/公斤/天,腹腔内)为4周。
在实验的最后时间,overnight-fasted状态后,从每组动物被斩首了。树干血样立即收集在干燥管和允许凝块然后在2000 g×15分钟离心分离的血清保存在−70°C的生化分析水平和cTnI水平。腹部的老鼠被打开,仔细心被移除,在冰冷的等渗盐水洗,立即沉浸在液态氮,储存在−80°C的各种分析。
2.3。心肌氧化应激评估
2.3.1。心肌脂质过氧化,减少谷胱甘肽含量
MDA的测量(如脂质过氧化作用的标志),心脏在冰冷的均相溶液的匀浆1.15%氯化钾生产10% (w / v)。匀浆离心机在3000 g×10分钟,和获得的上层清液被用来作为总心均质样品。蛋白质的水平和MDA测定上层清液。
蛋白质含量是评估使用布拉德福德蛋白质分析工具包(Bio-Rad实验室)和牛血清白蛋白(BSA)作为标准。根据生产指令,10μL用移液器吸取上层清液或BSA标准样品的分离微量滴定板井,然后200年μL稀释染色试剂(包含1与4部分染色试剂集中一部分蒸馏,去离子水)被添加到每个好,彻底混合板瓶。5分钟后在室温下孵化,反应的吸光度测量在595海里。蛋白质浓度计算的同时准备校准曲线使用BSA标准。
脂质过氧化产物MDA水平根据被测量评估Niehaus和萨缪尔森的方法29日]。上层清液MDA的水平是决定spectrophotometrically通过测量硫代巴比土acid-reactive物质最大吸光度在532海里。短暂,0.5毫升的样品混合3毫升的1%磷酸和1毫升0.6%解决方案稍后通知。混合物在沸水浴加热45分钟,冷却到室温。然后,添加了4毫升的正丁醇,混合物是涡和离心机3000 g×10分钟。丁醇阶段的吸光度(上层清液)以532海里。组织MDA内容表示为nmol /毫克的蛋白质。
心肌谷胱甘肽含量决定根据白痴的方法等。30.]。冰冷的心均质磷酸盐缓冲盐水(PBS), pH值7.4,获得匀浆10% (w / v)。匀浆离心机在3000 g×10分钟,和收集到的浮层被认为是总心均质样品。蛋白、谷胱甘肽的内容在上层清液进行评估。蛋白质含量是决定使用布拉德福德蛋白质分析工具包(Bio-Rad实验室)和BSA作为标准。减少谷胱甘肽含量测定用5、5′-dithiobis (2-nitrobenzoic酸)(DTNB)产生一个黄色5-thio-2-nitrobenzoic酸(TNB)。简而言之,相同数量的样本和20%三氯乙酸(TCA)涨跌互现,在3000×g离心5分钟。0.5毫升的上层清液加入2毫升PBS(0.1米,pH值8.0)和0.5毫升的0.04% DTNB试剂。然后,黄色开发测量spectrophotometrically 412海里。表示为组织谷胱甘肽含量μg /毫克的蛋白质。
2.3.2。心脏抗氧化酶
心脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性从Biovision取决于可用的设备提供。心脏在冰冷的均质0.1三羟甲基氨基甲烷/盐酸,液pH值7.4包含0.5% Triton x - 100、5毫米β加,0.1毫克/毫升PMSF和离心机在14000 g×5分钟在4°C获得上层清液。蛋白质的含量和SOD活性在上层的评估。上层清液获得的蛋白质含量是决定用BCA蛋白质分析工具包(皮尔斯)和BSA作为标准。根据生产指令,10μL的示例是用移液器吸取上层清液或BSA标准分离微量滴定板井,然后200年μL BCA工作试剂(BCA试剂混合物50部分BCA试剂B)和1部分是添加到每个好,小心翼翼地混合在盘子里摇动,持续30秒。30分钟后孵化在37°C,反应的吸光度测量在562海里。蛋白质浓度测定的同时准备校准曲线使用BSA标准。
在这个分析,黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶产生超氧化物阴离子与四唑氯反应生成黄色甲瓒染料。在450 nm SOD活性测定。心脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性被表示为(抑制率%)/毫克的蛋白质。
猫的活动确定了使用商业套装从Biovision获得。评估猫活动,心里在寒冷的分析均质缓冲区和离心机在10000 g×15分钟在4°C获得上层清液。蛋白质含量和猫浮在表面的测量活动。浮在表面的决心用BCA蛋白的蛋白质含量测定工具包(皮尔斯)和BSA作为标准。一个单位的猫被定义为所需的酶分解1μM H2O2在1分钟。的分解速度H2O2测量spectrophotometrically 570海里。猫在心脏组织的活动表示为μ/毫克的蛋白质。
2.4。血清生物标记物的毒性
血清cTnI决心使用mice-specific酶联免疫试剂盒从生活诊断(西切斯特,PA)和血清水平从Pars Azmun用商业比色测量工具(伊朗德黑兰)根据制造商的指示。
2.5。组织病理学研究
心中缓冲福尔马林固定在10%至少24小时,然后加工显微镜测定的标准协议。石蜡部分约5μ米被苏木精和伊红染色评估光显微镜下。组织病理学炎症和水肿等确定半定量的标准从轻微(+)到中度(+ +),切断(+ + +),切断(+ + + +)。
2.6。免疫印迹分析
心脏在裂解缓冲包含50 mM Tris-HCl均质,pH值7.4,2毫米乙二胺四乙酸(EDTA), 2毫米乙烯glycol-bis (2-aminoethylether),,,-tetraacetic酸(EGTA),氟化钠10毫米,1毫米原钒酸钠,10毫米β甘油磷酸盐,0.2%钠脱氧胆酸盐,1毫米PMSF和完整的蛋白酶抑制剂的鸡尾酒。在10000 g×10分钟离心后,上层清液的蛋白质浓度测定用布拉德福德蛋白质分析工具包(Bio-Rad实验室)和BSA作为标准。上层清液储存在−80°C。共有50μg蛋白质用于评价内容的伯灵顿,bcl - 2, caspase-3, caspase-8, Hsp27、Hsp70,一半。
评估水平的细胞色素c在胞质分数,线粒体隔离包组织(美国皮尔斯生物技术,罗克福德,IL)被用来分离胞质分数根据制造商的指示。短暂的,新鲜的心脏组织用PBS洗净,切小块。然后,BSA /试剂添加和组织均质在冰用40中风dounce组织磨床。添加试剂C之后,匀浆在700×g离心10分钟在4°C。获得上层清液离心机在3000 g×15分钟在4°C,从颗粒,视为胞质分数。然后,在胞质蛋白的浓度分数决定。共有50μg的胞质部分蛋白质用于评价细胞色素c含量。
西方墨点法进行了评估水平的伯灵顿,bcl - 2,细胞色素c, caspase-3, caspase-8, Hsp27、Hsp70,和一半的适当的抗体,辣根peroxidase-conjugated二级抗体。蛋白质(50μg)在Laemmli样品水溶性缓冲区。然后,样本煮5分钟在95°C,和变性样本12% SDS-polyacrylamide凝胶电泳分离和转移到PVDF膜。转让后,一夜之间,膜被被孵化在4°C 5%的脱脂牛奶。与抗体阻断后,屁股被孵化:巴克斯(细胞信号没有。2772),bcl - 2(细胞信号没有。2870),细胞色素c(细胞信号没有。4272),caspase-3(细胞信号没有。9665),caspase-8(细胞信号没有。4790)、Hsp27(细胞信号没有。2442),Hsp70(细胞信号没有。 4872), and Hsp90 (Cell Signaling no. 4874) at 1000-fold dilutions for 2 h at room temperature. Mouse monoclonalβ肌动蛋白抗体(细胞信号没有。3700年代)是用来证实等于负荷条件。这些墨迹与TBST洗了三次(TBS 0.1%渐变20),然后用辣根孵化peroxidase-conjugated anti-rabbit抗体(没有。7074细胞信号)或辣根peroxidase-conjugated anti-mouse抗体(没有。7076年代细胞信号)1:3000稀释1小时在室温下,再次三洗TBST紧随其后。最后,发现了蛋白质乐队使用增强chemiluminescnce (ECL)试剂(皮尔斯ECL免疫印迹基质)和联盟4.7 Geldoc(英国)。分析了蛋白质乐队使用UVtec软件(英国)。蛋白质水平正常化β肌动蛋白强度。
2.7。统计分析
均值±SEM测定每个学习小组和测试与方差分析Tukey-Kramer的多重比较检验。差异与被认为是重要的。
3所示。结果
3.1。SN对脂质过氧化作用的影响及谷胱甘肽含量
氧化应激可以评估的评估氧化损伤的最终产品,如MDA表明细胞膜的脂质过氧化作用,谷胱甘肽的含量,在自由基和解毒作用不同的外源性物质(31日]。心肌组织MDA的水平是图所示1。ACR-treated小鼠心肌MDA水平显著增加相比,车辆控制()。预处理在ACR与SN + SN组导致显著降低MDA值相比ACR-treated集团()。SN单独剂量100毫克/公斤没有增加车辆控制相比,组MDA水平。谷胱甘肽的含量在心里如图2。ACR-treated老鼠,心肌谷胱甘肽含量显著降低相比,车辆控制()。然而,预处理与SN ACR + SN组显著增加谷胱甘肽的含量相比ACR-treated老鼠()。这项研究的结果表明,治疗小鼠SN单独剂量100毫克/公斤没有改变车辆控制相比,谷胱甘肽组的内容。
3.2。SN对心肌抗氧化酶的影响
抗氧化酶SOD和CAT的成员发挥重要作用的内源性抗氧化剂保护生物系统对氧化损害(31日]。在心脏组织中SOD和CAT的活动在数据证明3和4,分别。政府ACR的小鼠显著降低SOD和CAT的心脏活动和车辆控制()。然而,显著增加SOD和CAT的活动观察预处理后与SN ACR + SN组相比ACR-treated组(和、职责)。数据显示,SN治疗没有降低SOD和CAT的心脏活动相比,车辆控制。
3.3。SN对血清生物标志物的影响和组织病理学研究
cTnI以及从受损的细胞释放,这些都是敏感心肌损害的因素32]。评估cTnI以及血清中水平是如图5和6,分别。目前的数据显示,cTnI的水平以及血清在ACR-treated显著增加小鼠相比,车辆控制()。预处理在ACR与SN + SN组显著减少这些生物标志物相比ACR-treated集团(和、职责)。cTnI的水平以及血清中没有显示出显著变化仅在小鼠接受SN比车辆控制。
毒性引起的ACR被苏木精和伊红染色部分进一步评估。心从车辆控制集团和SN独自住在剂量(100毫克/公斤)表示正常心肌架构(数据7(一)和7 (g))。如图7 (b)组织学结果显示异常和心脏组织的毒性作用小鼠暴露于ACR。突出的间质水肿(+ + +)和焦温和的间质炎症(+ +)观察ACR-treated小鼠的心脏。预处理在ACR与SN + SN组减少心肌损害(数字7 (c),7 (d),7 (e),7 (f)、职责)。
(一)
(b)
(c)
(d)
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(f)
(g)
3.4。通过免疫印迹分析SN对心肌细胞凋亡的影响
心脏水平的蛋白参与细胞凋亡通路如图8- - - - - -14。
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蛋白质的bcl - 2家族被认为居住在线粒体外膜,参与调节细胞凋亡通路的膜透性。伯灵顿和bcl - 2是两个的bcl - 2家族成员具有调节细胞凋亡的重要影响。评估SN ACR-induced凋亡的保护作用的老鼠,伯灵顿/ bcl - 2比例是评价(16,33]。如数据所示8(一个)和8 (b)小鼠显著调节管理ACR,伯灵顿/ bcl - 2比例相比,车辆控制(),预处理与SN ACR + SN组明显减弱伯灵顿/ bcl - 2比例相比ACR-treated老鼠()。当前数据显示,治疗的小鼠SN独自没有移植伯灵顿/ bcl - 2比例相比,心脏组织车辆控制。
从线粒体细胞色素c的天平动细胞质中还存在导致的激活参与内在凋亡通路,以及上游信号的细胞色素c被认为是诱导caspase-3 [16,34]。免疫印迹分析进行评估ACR和SN的影响心脏的细胞色素c水平胞质分数。如数据所示9(一个)和9 (b),细胞色素c在胞质部分的内容在ACR-treated动物相比显著增加车辆控制集团()。然而,预处理与SN ACR + SN组施加显著减少细胞中的细胞色素c含量相比ACR-treated老鼠()。SN单独的内容并没有改变细胞色素c与车辆控制相比,胞质分数。
Caspase-3是一个重要的效应细胞凋亡蛋白酶(刽子手半胱天冬酶)中可以激活凋亡通路(35]。评估ACR的影响和SN caspase-3激活,免疫印迹分析是确定的水平进行裂解caspase-3和procaspase-3心脏组织。数据10 ()和10 (b)表示,政府的ACR水平显著增加小鼠裂解caspase-3与车辆控制(),预处理与SN ACR + SN组显著降低的水平裂解caspase-3相比ACR-treated动物()。同时,数据显示,水平的裂解caspase-3在ACR +维生素E组减轻。SN单独治疗剂量为100毫克/公斤的水平没有增加裂解caspase-3相比,车辆控制在心脏组织。
外在通路介导细胞凋亡的死亡受体导致激活发起者caspase-8 [36]。检查ACR和SN caspase-8激活,免疫印迹分析确定procaspase-8的表达和裂解caspase-8在心脏组织。如数据所示(11日)和11 (b),ACR动物管理局表示水平无显著变化裂解caspase-8相比,车辆控制(),水平的裂解caspase-8并非在所有组显著不同()。
热休克蛋白(休克)被认为是生物系统的有利影响。为了应对一些刺激,如氧化应激,休克蛋白的表达增加,其中一些如Hsp27、Hsp70,一半可以保护细胞免受氧化损伤和细胞凋亡37]。调查的影响ACR和SN Hsp27、Hsp70,一半,免疫印迹分析来检测这些蛋白质的水平在小鼠的心脏。如数据所示12(一个),12 (b),(13日),13 (b),(14日),14 (b)Hsp27水平无显著变化,Hsp70,一半寿命和观察ACR-treated老鼠与车辆控制相比,和这些蛋白质的水平没有显著不同的在所有组()。
4所示。讨论
水飞蓟素、多酚类黄酮,是孤立的水飞蓟的种子和水果。抗氧化和抗凋亡的影响SN已报告在许多研究[17,21,23,24]。ACR是一个无处不在的环境污染物,对公众健康具有重要的意义。据报道,大量的ACR存在于食品、香烟烟雾,水,加热油,汽车尾气,和煤炭2]。一些研究报道,ACR的有害和cardiotoxic效果与ROS的产生和脂质过氧化作用8,9]。氧化应激和脂质过氧化反应在许多疾病如心脏病(一个重要的角色12]。本研究的主要目的是调查SN的保护作用对ACR-induced小鼠的毒性。
结果表明,心脏的MDA水平显著增加,而谷胱甘肽含量明显下降后ACR管理与车辆控制集团相比。氧化应激诱导的脂质过氧化反应,这是由于自由基相互作用不同的起源和细胞膜不饱和脂肪酸。这种情况会导致几个有毒产品和MDA积累。MDA的水平被认为是一个适当的脂质过氧化指标(26]。这些数据表明,ACR诱导的氧化应激和脂质proxidation膜不饱和脂肪酸。与其他研究结果一致的报道,ACR能引起毒性由于氧化应激和快速损耗的谷胱甘肽(6,9]。ACR引起的脂质过氧化可能归因于氧自由基的生成。可能一些机制。首先,ACR能代谢由黄嘌呤氧化酶或醛脱氢酶超氧化物。第二,ACR ROS增加生产快速损耗的内源性抗氧化剂,如谷胱甘肽(38,39]。同时,心脏组织非常敏感的氧化损失是由于其高度氧化代谢,降低抗氧化系统(24]。数据表明政府的SN显著防止ACR-induced毒性通过抑制脂质过氧化,谷胱甘肽含量的增加。有几个调查在不同的模型证明了SN的抗氧化性能。在一些研究中,结果表明:SN可以减弱心里阿霉素引起的脂质过氧化反应,肝脏和肾脏(24,26]。同样,SN可以改善cisplatin-induced毒性包括氧化应激和减少谷胱甘肽含量(27]。SN的保护作用可能与抗氧化活动有关,因为它影响脂质过氧化作用抑制剂和质膜稳定剂和抗氧化剂的刺激24,27]。此外,抗氧化剂减少含硫醇组织谷胱甘肽是一种重要的细胞防御自由基和氧化应激。的内容减少谷胱甘肽和总硫醇在心脏组织氧化损伤的一个标志。谷胱甘肽作为自由基的清除剂,消除了几个外源性物质(31日]。
数据显示,SN预处理改善ACR毒性增加谷胱甘肽含量的心脏组织。然而,谷胱甘肽的含量在老鼠的心没有改变治疗后单独使用SN剂量100毫克/公斤与车辆控制相比,与其他报告和我们的研究结果是一致表明,单独使用SN的疗法并没有改变肝脏谷胱甘肽的水平,心脏,肾脏(23,24,40]。
当前数据显示,猫心肌抗氧化酶的活动和SOD明显降低ACR政府相比,车辆控制。这些发现支持了先前观察到的谷胱甘肽耗竭和MDA积累在心脏组织。ACR的有害影响猫的活动和SOD据报道在一些组织和细胞类型41,42]。SOD和CAT活动的减少可能与超氧化物自由基生成的高程在ACR的新陈代谢。抗氧化酶SOD和CAT等涉及的第一行生物防御氧化应激(31日]。SOD将超氧化物自由基转化为过氧化氢和O2,猫将过氧化氢转化为H2O, O2。因此,SOD和CAT发挥重要作用的消除活性氧(43]。降低抗氧化酶的活动可以阐明他们的疲惫与氧化损害的基础上44]。
据报道,SN的神经保护作用可能是由于改善在局灶性脑缺血大鼠抗氧化防御系统(45]。此外,SN可以增加抗氧化剂酶活性在肝纤维化硫代乙酰胺诱导的大鼠(46]。我们的研究结果表明,SN预处理可以提高抗氧化酶在心脏组织的活动。
ACR政府显著增加小鼠血清肌钙蛋白i以及水平相比,车辆控制的实验组中。cTnI水平的增加以及ACR-treated组可以归因于心脏损伤,这是证实了这个器官的病理变化。相比之下,SN预处理血清水平显著地抑制ACR-induced海拔cTnI和水平。事实上,cTnI被认为是一个非常敏感的、具体的、持久的心肌损伤的标志,以及一个可用的指标的诊断心脏损伤(47]。我们的研究结果与以前的研究报道,SN调和改善cisplatin-induced毒性减少血清水平的水平和血浆cTnI [27]。SN的保护作用与抑制脂质过氧化有关活动导致稳定的等离子体膜,防止心肌酶的释放。同时,组织病理学的研究结果表明,SN预处理防止ACR-induced毒性由于减少这些动物的心脏损害。因此,减少泄漏这些指标可能与心肌细胞完整性的稳定。
ACR-induced细胞凋亡在心肌组织进行免疫印迹分析蛋白质的参与凋亡通路。结果表明,ACR诱导细胞凋亡在伯灵顿/ bcl - 2比例的增加导致的细胞色素c在细胞质中。细胞色素c的胞质分数的增加激活caspase-3水平和提高裂解caspase-3导致细胞凋亡诱导的心脏组织。然而,结果施加水平无显著变化裂解caspase-8 ACR-treated组相比,车辆控制。其他研究表明,ACR的毒性可能是由于细胞凋亡的诱导。据报道,ACR导致人类肺癌细胞A549细胞凋亡的线粒体途径可能是由活性氧(35]。ACR能引起细胞凋亡在成年小鼠心肌细胞通过增加细胞内氧自由基和钙浓度(9]。同时,它已被证实,长期口服治疗ACR诱发氧化应激和细胞凋亡在小鼠的心脏6]。
众所周知,氧化应激和细胞的抗氧化能力的下降可能是一个重要的中介凋亡细胞死亡(48,49]。同时,心肌细胞分化失去增殖活动后,和凋亡诱导物可以大大损害这个器官(27]。线粒体和死亡受体途径是生物系统的两个主要的凋亡过程(16]。职业之间的平衡——和凋亡蛋白bcl - 2家族在细胞凋亡过程中扮演着关键角色所以伯灵顿的比例/ bcl - 2和天平动从线粒体细胞色素c细胞质被认为是细胞凋亡的评估(33,50]。的确,从线粒体细胞色素c的释放到胞质诱发caspase-3在细胞的激活16]。Caspase-8发起者半胱天冬酶,可以诱导细胞表面死亡受体。管理ACR caspase-8活动的老鼠显示没有明显的改变,所以外在的细胞凋亡途径可能有轻微影响小鼠的毒性ACR的心脏组织。尽管ACR能激活细胞凋亡的线粒体途径通过伯灵顿/ bcl - 2比例的增加和细胞色素c的海拔在细胞质的增加水平的裂解caspase-3 ACR-treated集团的心里,据报道,细胞凋亡的线粒体途径等几个因素诱导的氧化应激和接触有毒物质。因此,ACR-induced线粒体途径凋亡可能是由一代的氧化剂和活性氧,抗氧化能力下降,最后诱导氧化应激(35]。
数据显示,SN可以减弱ACR诱导细胞凋亡在小鼠的心脏。SN管理降低了比伯灵顿/ bcl - 2胞质部分和细胞色素c水平。胞质细胞色素c的减少降低了激活caspase-3导致凋亡效应SN的心脏组织。这些结果表明,SN可以减轻心脏损伤引起的ACR通过抑制细胞凋亡的线粒体途径。我们的研究结果一致的其他研究报告SN的凋亡特性对顺铂的毒性和不利影响,阿霉素,铅对心脏和肝脏组织(26,27,51]。
结果表明,Hsp27、Hsp70,一半没有透露ACR-treated老鼠车辆控制相比有很大的变化。热休克的cytoprotective活动已经表明在某些作品的研究尤其是体外;然而,这些影响并不总是观察体内研究[52]。的条件是细胞死亡发生在短期内,这可能不允许时间热休克诱导损伤的有效交付网站或休克的快速重排及时发挥其保护作用[37,52]。可能在治疗休克蛋白水平的改变了协议,但在采样的时候,我们不能观察水平的增加。似乎表达热休克取决于许多因素,如采样的时间,组织类型,严重的细胞损伤,应力诱导物,保护中介(53]。
5。结论
我们的数据表明,SN对ACR-induced保护作用毒性对小鼠通过衰减脂质过氧化作用,增加谷胱甘肽含量、延长抗氧化酶的活动,和减轻细胞凋亡调节伯灵顿/ bcl - 2比,胞质细胞色素c含量和级别的caspase-3分开。
缩写
| ACR: | 丙烯醛 |
| SN: | 水飞蓟素 |
| 服用维生素E: | 维生素E |
| MDA: | 丙二醛 |
| cTnI: | 心肌肌钙蛋白I |
| 水平: | 肌酸kinase-MB |
| 谷胱甘肽: | 谷胱甘肽 |
| SOD: | 超氧化物歧化酶 |
| 猫: | 过氧化氢酶 |
| ROS: | 活性氧 |
| 包子: | 血尿素氮 |
| ALT: | 丙氨酸转氨酶 |
| AST: | 天冬氨酸转氨酶 |
| 没有: | 一氧化氮 |
| GSHPx: | 谷胱甘肽过氧化物酶 |
| 伊诺: | 诱导一氧化氮合酶 |
| MT: | 金属硫蛋白i ii |
| PMSF: | Phenylmethanesulfonyl氟化 |
| SDS: | 钠十二烷基硫酸盐 |
| 透射电镜: | ,,,-Tetramethylethylenediamine |
| β加: | β巯基乙醇 |
| 稍后通知: | 硫代巴比土酸 |
| PVDF: | 聚偏二氟乙烯 |
| BSA: | 牛血清白蛋白 |
| PBS: | 磷酸缓冲盐 |
| DTNB: | 5、5′-dithiobis (2-nitrobenzoic酸) |
| TNB: | 5-thio-2-nitrobenzoic酸 |
| 柠檬酸: | 三氯乙酸 |
| EDTA: | 乙二胺四乙酸 |
| EGTA: | 乙烯glycol-bis (2-aminoethylether),,,-tetraacetic酸 |
| 热休克: | 热休克蛋白。 |
利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
承认
作者感谢副总理的研究,马什哈德大学医学科学的财政支持。本文中描述的结果是博士学位论文的一部分。