文摘

百里香醌(TQ)是一种生物活性成分中发现许多草药。在这项研究中,我们报告的顺利和心脏肌肉松弛剂活动这种化合物。TQ浓度依赖性抑制自发收缩兔子空肠同时放松高K⁺(80毫米)诱导宫缩在空肠和豚鼠回肠,指示活动压控Ca^{+ +}渠道(船承运人)。此外,TQ流离失所的Ca^{+ +}量效曲线,获得在Ca^{+ +}无环境,向右,显示船承运人的封锁。类似的活动观察维拉帕米,一个标准的船承运人拦截器。TQ也表现出nonadrenergic放松agonist-induced在豚鼠气管收缩。当测试fluo-4-loaded鼠肺片,TQ抑制ACh-induced气道狭窄和Ca^{+ +}信号在气道平滑肌细胞。在endothelium-intact和endothelium-denuded鼠主动脉,TQ抑制高K⁺全身收缩浓度显著低于-去氧肾上腺素(PE) (1 microM)诱导宫缩。放松PE-induced收缩被L-NAME和阿托品对封锁。在豚鼠心房,TQ显示noncholinergic放松心房力和收缩。这些数据表明光滑,心脏肌肉松弛剂TQ活动可能介导的,在某种程度上,通过船承运人的封锁。结果也证明使用TQ含有植物相关疾病如绞痛,腹泻、咳嗽、哮喘。

1。介绍

百里香醌(IUPAC: 2-Isopropyl-5-methylbenzo-1 4-quinone);TQ是一种芳香酮(图1发现在许多药用植物。这是一个活跃的植物化学的成分的种子黑种草或黑孜然1),整个工厂的Satureja蒙大拿或好吃的2),和精油Monarda fistulosa或野生佛手柑(3]。这些植物都是闻名的传统治疗胃肠道和呼吸道疾病的价值。黑孜然用于疝痛,咳嗽,哮喘,支气管炎4];美味闻名解痉药,止泻剂,anticolic,化痰的潜在的4),而野生佛手柑是有用的肠道疾病,咳嗽,支气管炎4]。TQ是知道这些药用植物的成分,值得研究这种化合物的药理学。

TQ已经报道了其治疗潜力的医疗条件。最值得注意的是,它被认为是一种强有力的抗氧化剂5,6)以及闻名的镇痛和抗炎(7],nephroprotective [8],王亚南[5,6),神经保护(9),和抗癌10]属性。进一步探索这个治疗的药理学活性化合物,我们测试了它在不同标准的孤立的光滑和心肌的准备工作。我们发现TQ展品肠道解痉药,气管和气管松弛剂(Ca^{+ +}信号在气道平滑肌细胞或ASMC使用fluo-4-loaded鼠肺片),血管舒张和心脏肌肉松弛剂活动介导最可能至少部分通过Ca的封锁^{+ +}通过压控Ca涌入进入细胞^{+ +}渠道(船承运人)。

2。方法

2.1。动物

研究所的实验符合裁决执行的实验动物资源,生命科学委员会,国家研究理事会,伦理审查委员会批准阿迦汗大学、麦克马斯特大学的研究伦理委员会和圣约瑟夫医院。实验通过使用当地的兔子(1公斤;性),几内亚猪(500 - 600克;性),Sprague-Dawley老鼠(170 - 200克;男性)和Balb-C老鼠(6 - 8个月大的时候;女性)。这些被安置在阿加汗大学动物季度(兔、豚鼠和大鼠)和圣约瑟夫医院(老鼠)环境控制(第23 - 25°C)和特定的无菌条件。动物有一个标准的食物随意并允许免费使用自来水。

2.2。药品和试剂

TQ,本研究的主题,从σ获得化学公司(圣路易斯,密苏里州,美国)。以下参考化学物质从源获得指定:氯化乙酰胆碱(ACh),硫酸阿托品,carbamylcholine氯(碳酰胆碱,CCh),盐酸异丙肾上腺素,-nitro-L-arginine甲酯盐酸盐(L-NAME),盐酸去氧肾上腺素(PE),盐酸普萘洛尔、盐酸维拉帕米(σ化学公司)。下面的化学物质被用来使生理盐解决方案:氯化钾(σ化学公司)、氯化钙、葡萄糖、氯化镁、硫酸镁、磷酸二氢钾、碳酸氢钠、氯化钠、磷酸二氢钠(e .默克,达姆施塔特,德国)和乙二醇四乙酸(EGTA) (BDH实验室用品,普尔,英格兰)。使用的所有化学品纯度最高的等级。

从表达载体细胞培养试剂获得生活Technologies-GIBCO(美国加利福尼亚州卡尔斯巴德)。杜尔贝科——修改鹰的介质(DMEM)片孵化与PennStrep补充(青霉素10000单位/毫升,链霉素10000两性霉素B (125 g / mL)35克),L-ascorbic酸5 g / mL,转铁蛋白g / mL,硒3.25 ng / mL, 2.85和胰岛素克/毫升。所有试剂都是来自Sigma-Aldrich(圣路易斯,密苏里州,美国),除非另有指定。Hanks-balanced盐溶液(哈佛商学院;英杰公司Inc .,伯灵顿,加拿大)补充了4 - (2-hydroxyethyl) 1-piperazine ethanesulfonic酸缓冲(消息灵通的,0.02米)和与氢氧化钠滴定pH值7.4在37°C。Agarose-type七世的解决方案(4% w / v, Sigma-Aldrich)溶解在蒸馏水60°C,冷却到37°C,混合着2 x哈佛商学院给agarose-HBSS 2%解决方案在37°C。

2.3。孤立的兔子空肠准备

实验进行了如前所述[11]。兔子空肠段(2厘米)悬浮在10毫升组织包含Tyrode浴的解决方案,充气的95%氧气和5%二氧化碳(carbogen),并保持在37°C。Tyrode组成的解决方案在2.68毫米是氯化钾,MgCl 136.9氯化钠,1.05₂11.90 NaHCO₃0.42不₂阿宝₄1.8 CaCl₂和5.55葡萄糖。等张肠道反应记录使用哈佛学生示波器和力传感器。每个组织都允许平衡之前至少30分钟的药物。在这种情况下,兔子空肠展品自发的有节奏的收缩,使测试直接松弛剂(解痉药)活动没有兴奋剂的使用。任何潜在的测试材料收缩效应评估的百分比最大效应产生的药物控制,空调采暖(10米),而抑制作用测量自发收缩变化百分比的兔子空肠前增加测试获得的化合物。

2.4。钙的测定^{+ +}在孤立的兔子空肠拮抗剂活动

评估测试化合物的解痉药活动是否介导通过Ca^{+ +}通道封锁,高K⁺(80毫米)浓度是用来去偏光兔子空肠准备所描述的Farre et al。12]。高K⁺添加到组织浴,肌肉持续收缩产生的准备。测试化合物添加到组织浴累积的方式获得浓度抑制反应(13]。的放松与高K空肠准备订婚⁺用百分比表示的控制响应由高K⁺。可能证实了这一点^{+ +}拮抗剂活性测试的化合物,允许组织稳定在正常Tyrode的解决方案,当时Ca所取代^{+ +}无Tyrode的解决方案包含EGTA(0.1毫米)30分钟以删除所有Ca^{+ +}从组织。这个解决方案进一步取代K⁺丰富和Ca^{+ +}无Tyrode的解决方案,有以下成分:氯化钾氯化钠91.04,MgCl₂1.05,NaHCO₃11.90,不₂阿宝₄0.42、5.55葡萄糖和EGTA 0.1毫米。30分钟的潜伏期后,控制钙的量效曲线(crc)^{+ +}加入组织浴,构造。当控制crc的Ca^{+ +}被发现超级imposable(通常是两个周期后),组织了60分钟的测试化合物预处理确认可能的Ca^{+ +}通道阻塞的效果。Ca的crc^{+ +}然后重建的测试化合物的浓度增加。维拉帕米作为一个积极的控制。

2.5。孤立的豚鼠回肠的准备

豚鼠回肠段2厘米是安装在10毫升组织包含Tyrode浴的解决方案,与carbogen充气,维持在37°C。等渗的反应被记录在哈佛学生示波器。在这些条件下,回肠的行为作为一个静止的物质准备和有助于评价收缩活动。1 g的预加载应用到每个组织和在整个实验过程中保持不变。平衡时间的30分钟后,等张收缩课时(0.3M)重复稳定准备。的受体激动剂接触时间20秒,连同3分钟剂量之间的时间间隔。持续收缩,高K⁺(80毫米),也导致测试可能放松的活动。

2.6。孤立的豚鼠气管准备

豚鼠气管管解剖出来,保存在克雷布斯的解决方案组成(氯化钠118.2毫米),NaHCO₃25.0,CaCl₂2.5,4.7氯化钾,KH₂阿宝₄1.3,MgSO₄1.2,11.7和葡萄糖;pH值7.4。气管导管被切割成戒指,2 - 3毫米宽,每个都包含2软骨环。每个气管环由纵切腹一边打开对面平滑肌层,形成中部的一条气管平滑肌之间的软骨边缘部分(14]。准备被安装在一个20毫升组织含克雷布斯的解决方案保持在37°C和充气carbogen气体。1 g的预张力是适用于每一个气管条。组织平衡的1小时,之后轻快收缩反应高频的浓度(1米),45分钟的时间间隔,记录到可再生的反应。然后我们测试测试化合物的影响休息基线气管条的张力以及对(1米)和高K⁺-(80毫米)诱导宫缩。测试的参与肾上腺素能受体的放松效应测试化合物,组织进行了1小时与普萘洛尔(1米),测试化合物的反应是重复在对手面前CCh-induced收缩。

2.7。气道收缩性和Ca^{+ +}]_我在小鼠肺片:切片的制备

小鼠的肺片准备如前所述[15,16]。老鼠被公司实施安乐死₂其次是终端放血。气管被暴露和使用blunt-ended 19 G针插管,其次是胸壁切除暴露肺部。肺膨胀了大约1.2毫升琼脂糖(2%,哈佛商学院;37°C)。清除气道腔,0.2毫升空气注入冲洗agarose-HBSS解决方案的航空公司进入肺泡组织。肺与4°C 1 x哈佛商学院和冲洗整个鼠标保持在4°C 15分钟。肺被删除并放置在4°C哈佛商学院一个额外的30分钟,确保完整的肺内的琼脂糖凝胶。肺部分离成单个叶和沐浴在寒冷的哈佛商学院。片(大约120米厚)切成4°C hbs的ems - 4000组织切片机(电子显微镜科学,哈特菲尔德,PA,美国)从右上叶,转移到室温哈佛商学院,直到所有片叶了,然后转移到DMEM,孵化一夜之间在37°C。

2.8。气道收缩性和Ca^{+ +}]_我在小鼠肺片:Ca^{+ +}荧光测定法

实验进行了如前所述[16]。肺片被选为研究前提:(a)感兴趣的气道是琼脂糖的自由,(b)殴打观察纤毛和(c)气道上皮的完好无损。在每组实验中,从不同的老鼠用切片。用于共焦激光扫描显微镜,片加载1 h与Ca 37°C^{+ +}敏感的荧光探针,fluo-4 (7M;分子探针,尤金,或者美国)溶解在二甲亚砜0.01%普朗尼克f - 127添加到提高溶解度(17]。片被安装在两个玻璃罩,在位置的一块尼龙网(复合材料- 300 b,一小部分,迈阿密湖泊、FL,美国),并放置在舞台上的一个定制的共焦显微镜配备20 x的目标。洗澡的解决方案对所有实验在37°C carbogen-aerated 1 x哈佛商学院是交换不断通过溢出在整个实验。组织与1 x hbs 30分钟洗实验开始之前移除细胞外fluo-4。

2.9。气道收缩性和Ca^{+ +}]_我在小鼠肺片:图像采集

组织使用488纳米光照亮一个20 mW光电二极管激光器(美国相干技术,巴勒斯坦,TX),同时收集和两个不同的图像:一个由染料发出的光线(只有波长大于500纳米,使用长传球过滤器),表明细胞内钙的变化^{+ +}浓度([Ca^{+ +}]_我)在单个细胞(给荧光图像),以及488 nm激光传播穿过整个组织的组织提供结构细节(给激光图像)。图像形成和可视化计算机屏幕上发出(荧光)和传播(激光)图像使用录音软件视频莎凡特(IO Industries Inc .,伦敦,加拿大)。气道直径(平均直径变化范围是145 - 235m)是由画一条直线在呼吸道传播形象,和一条线进行扫描获得直径变化在特定的位置。接触组织的激光实验仅限于图像收集期间使用电脑控制快门来减少光漂白。帧捕获在延时一帧每秒的速度,存储为TIF成堆的几百帧。每个时间点的数字化图像刺激后通过选择感兴趣的区域进行了分析像素的测量(Ca^{+ +}]_我,而细胞像素强度逐帧分析使用图像分析软件中另外宏接穗(Scion公司,弗雷德里克,医学博士,美国)。荧光强度保存和绘制时间SigmaPlot (Systat软件公司,里士满,CA,美国)。荧光强度的增加被解读为一种增加(Ca^{+ +}]_我。自体荧光在nonloaded准备和评估被发现只有不到5%的荧光fluo-4-loaded组织。

与哈佛商学院组织过冷后30分钟,基线(Ca^{+ +}]_我图片记录。后,空调采暖(10⁻⁵M)添加在灌注室和过冷肺片准备大约2分钟记录的影响ACh气道直径和Ca^{+ +}处理(改变[Ca^{+ +}]_我ASMC)。车辆控制的影响,孤独,气道直径和平均荧光强度(AFI)也确定是测试物质的影响,仅在基线气道直径和AFI。切片与哈佛商学院,然后洗过冷后孵化了TQ 40分钟,以测试其影响ACh-induced (Ca的变化^{+ +}]_我和气道直径。之后,ACh反应是重复在TQ面前。此外,排除任何减少乙酰胆碱的反应由于受体脱敏,空调采暖的效果是重复,30分钟后,只在车里。记录这些反应在整个呼吸道后,我们能够评估周围的录像,专注于单一ASMC航空公司早前被证明对ACh:这样的反应,单独或在阻断剂的存在,可以分析ASMC在单一的层面上。

2.10。孤立Endothelium-Intact和Endothelium-Denuded鼠主动脉准备

Furchgott和泽瓦茨基的过程18]又做了一些调整。护理观察分离胸大鼠主动脉,以避免任何内皮损伤。戒指,3毫米宽,被安装在5毫升组织浴克雷布斯的解决方案与carbogen 37°C和充气气体。1 g的预加载应用到组织准备和被允许孵化了30分钟。张力的变化记录通过世界精密仪器(WPI)等距力传感器(100)堡Transbridge 4 m并显示在连接到个人电脑通过cvm数据采集系统。平衡时间的30分钟后,体育组织与重复稳定浓度(1米)。稳定后,与PE(1诱导收缩了米)。一旦实现高原,课时(0.1米)是管理这PE-induced收缩确认endothelium-dependent放松。组织的内皮细胞衬里被温柔的摩擦,导致失踪的放松。研究潜在的血管舒张效应测试的化合物,以下策略随访。(1)确定测试化合物的血管舒张效应endothelium-intact准备在PE - (1米)和高K⁺-(80毫米)诱导宫缩。(2)测试化合物的血管舒张效应在L-NAME(0.1毫米;60分钟)和阿托品(1M;20分钟)预防PE - (1米)简约endothelium-intact准备。(3)确定测试化合物的血管舒张效应;这次endothelium-denuded准备在PE - (1米)诱导宫缩。

2.11。孤立的豚鼠心房准备

实验进行了如前所述[19]。孤立左、右心房从豚鼠分别安装在20毫升组织浴含有克雷布斯的解决方案保持在32°C(不稳定记录温度> 32°C)和充气carbogen气体。组织被允许打自然的静息张力下1 g。一个平衡的前30分钟是任何药物的应用。控制反应的ACh (0.1 - -0.3和异丙肾上腺素(0.1 M)米)获得至少一式两份。张力的变化组织记录通过草-位移传感器(模型FT-03)使用草测谎仪(7)模型。在看到一个纯化合物的反应可能在这个组织,这种反应会挑战阿托品1的存在米(20分钟)为了确定毒蕈碱的受体参与行动的模式。

2.12。数据分析

所有的数据都表示为意味着均值的标准误差(SEM、=数量的实验)和最大有效浓度(EC的一半₅₀)和95%置信区间(CIs)。统计比较是用单向方差分析(方差分析)其次是图基的多重比较测试或双向方差分析,指出作为统计学意义(GraphPad程序,GraphPad圣地亚哥分校、钙、美国)。

3所示。结果

3.1。影响孤立的兔子空肠

当测试的自发收缩兔子空肠,TQ被发现没有任何兴奋剂的效果,而造成浓度(100 - 1000年(图)解痉药效果2(一个)),一个电子商务₅₀156.9米(95% CI 137.6 - -178.9;)。进一步调查这个放松的效果,化合物的反应测试高K⁺-(80毫米)诱导宫缩。TQ展出浓度(100 - 3000年米)放松K⁺全身收缩(图2 (b)),一个电子商务₅₀值为400.7米(95% CI 243.2 - -659.9;)。这种潜在的相互作用^{+ +}渠道在空肠进一步研究。TQ浓度依赖性(200 - 500年M;)改变了Ca^{+ +}crc(图右侧3(一个)),类似于由维拉帕米(0.3 - -1.0M;;图3 (b))。

3.2。影响分离的豚鼠回肠

TQ休息基线测试张力豚鼠回肠1000没有任何影响米,从而排除的可能性兴奋剂制备这种化合物在这个组织的影响。TQ操作是否有一个放松的效果,类似于在一只兔子空肠准备,持续收缩是引起高K⁺(80毫米),允许收购抑制量效TQ操作数据。累计TQ,组织浴,轻松高K⁺全身收缩在豚鼠回肠(图2 (b)从50 - 1000)M电子商务₅₀值为272.4米(95% CI 183.8 - -403.7;)。

3.3。影响分离的豚鼠气管

TQ首次测试基线休息的组织。它被发现没有任何效果的剂量1000米(不显示;)。后来,当测试高K⁺——(80毫米)和- (1米)全身收缩、TQ浓度依赖性(30 - 1000米)抑制这些收缩(图4(一))电子商务₅₀值为270.1米(95% CI 184.0 - -396.5;)和295.3米(95% CI 254.4 - -342.7;),分别显示没有选择性的反对任何受体激动剂(图4 (b),)。TQ这种放松的效果,当测试CCh-induced收缩,被发现对封锁心得安(1米)(图4 (b))。

3.4。小鼠肺片准备:对气道收缩性的影响

乙酰胆碱(10米)产生明显萎缩肺片老鼠气道的准备,视为个人气道直径(减少数据5(一个)和6(一))。收缩是快速、重现性好,航空公司回到基线直径一旦受体激动剂洗掉。TQ,当独自一人(到1000年米)的肺片准备,没有表现出任何影响休息气道收缩性/直径。当肺片了40分钟的预处理浓度增加的TQ (10 - 100米),减少ACh-induced观察气道收缩。图6 (b)显示了TQ(100的效果米)在肺片ACh-induced气道收缩,而图6 (c)显示了汇集数据10和100 TQ操作的影响。%减少气道直径与哦,在TQ 10和100年的存在米,为73.5±4.8% (;;%的ACh控制)和33.5±8.0% (;;分别为%的ACh控制)(图6 (c))。维拉帕米,在1到10的浓度米,略微减毒气道收缩效应产生的ACh(图6 (c))。在维拉帕米1和10米,课时减少气道直径82.7±1.0% (;%的ACh控制)和77.5±1.7% (;;%的ACh控制)。

3.5。小鼠肺片准备:影响(Ca^{+ +}]_我在公司

除了气道收缩,空调采暖(相对于基线值)也导致海拔AFI,增加(Ca的一项指标^{+ +}]_我在ASMC(数据5 (b)和7(一))。TQ,浓度的10和100年米,并不影响基线AFI但抑制ACh-induced Ca^{+ +}瞬变和振荡(显示为荧光行扫描ASMC的减少和抑制ACh-induced AFI线图,图7 (b))。AFI ACh-induced增加,在10和100年M TQ, 61.1±3.4 (,,%的ACh反应)和26.7±3.7 (,),分别。汇集数据显示%增加荧光的ACh孤独,在TQ浓度增加的存在,在图7 (c)。维拉帕米1的浓度米和10米,类似于TQ,抑制ACh-induced海拔AFI(图7 (c)),87.7±1.1 (;%的ACh控制)和29.1±2.1 (;,分别%的ACh控制)。

3.6。影响分离大鼠主动脉

TQ是没有任何活动休息基线张力的组织的最高浓度测试(1000米)(没有显示)。当测试对PE - (1米)诱发宫缩,TQ浓度依赖性(300 - 3000年米)放松agonist-induced收缩(图8),一个电子商务₅₀值为406.2米(95% CI 310.6 - -531.2;)。该组织后来用L-NAME预处理,TQ是重新测试。TQ准备(300 - 3000年再次放松在类似的浓度(M)的人物8)。之间没有显著差异的量效曲线TQ没有或存在L-NAME ()。此外,无论是与阿托品预处理纸巾(1米)(图8),也不能剥夺的内皮组织(数据未显示),有任何变化对效力或TQ功效的血管舒张药活动。

当TQ是测试高K⁺——(80毫米)诱发宫缩,浓度放松(300 - 3000年米)观察(图8),一个电子商务₅₀值为290.1米(95% CI 255.3 - -329.8;)。的血管舒张作用TQ高K⁺全身收缩是展出浓度显著低于PE-induced收缩(;参见图8)。

3.7。影响分离的豚鼠心房

TQ展出一个部队(50 - 1000的浓度放松米)和速度(50 - 2000米)的心房收缩(图9(一个))电子商务₅₀值为609.1米(95% CI 212.1 - -1749.0;)和246.4米(95% CI 140.6 - -432.0;),分别。没有显著差异()TQ放松效应之间的力量或心房收缩(图9 (b))。松弛剂效果的化合物被阿托品对封锁(1米)(数据没有显示)。

4所示。讨论

TQ显示浓度的抑制作用自发的空肠的指示肠道平滑肌松弛剂活动做准备。平滑肌的自发收缩,包括兔子空肠,依赖增加细胞质免费的Ca^{+ +},激活收缩元素(20.]。为了调查这个松弛剂作用的可能机制,持续收缩得到高K⁺(80毫米),包括条目的Ca^{+ +}进入细胞通过船承运人(21]。化合物,当测试高K⁺全身的收缩,造成浓度放松可能表明限制条目的Ca^{+ +}通过船承运人,从而显示Ca^{+ +}拮抗效应(20.]。为了进一步研究这种机制,兔子空肠组织和周围的媒体呈现的Ca^{+ +}——用EGTA, Ca^{+ +}螯合剂,Ca^{+ +}crc是由外部管理^{+ +}到组织浴在没有或存在TQ (22]。在这种情况下,外部管理^{+ +}引起收缩的组织通过输入通过船承运人(23]。TQ Ca转移^{+ +}crc的权利,进一步表明复合的可能的能力阻止入境的Ca^{+ +}通过船承运人。这种效应的TQ是类似于维拉帕米是一个标准的肠道解痉的代理与船承运人拮抗剂作用[24]。

TQ操作测试在另一个分离的豚鼠回肠的肠道准备。如预期的结果在空肠,化合物没有收缩效应虽然回肠是更敏感的物质与收缩活动(25]。当测试高K⁺全身收缩,TQ显示浓度放松,类似于空肠。以前Al-Majed et al。26]显示TQ-mediated放松的组胺,serotonin-contracted豚鼠回肠是通过结合途径:(1)抑制花生四烯酸代谢和脂氧合酶产品(2)通过非特异性机制不明。帮助在我们的研究中获得的结果在肠道空肠和回肠组织,我们现在可以可能表明,非特异性机制TQ操作可以通过船承运人的封锁。胃肠道,TQ一直报道gastroprotective活动特别是在结肠炎(27和胃粘膜损伤28]。TQ操作也可以解释我们的结果显示解痉药活动的有利影响TQ-containing药用植物如黑孜然、美味和野生佛手柑肠道的亢奋状态。

确定TQ在呼吸系统的活动组织,它最初是在孤立的豚鼠气管,然后测试荧光dye-loaded鼠肺片。TQ操作没有任何收缩影响基线时语气中孤立的气管准备,concentration-dependently压制不同agonist-induced收缩。TQ放松高K的诱导宫缩⁺和在相同的效力。气管松弛剂效应被普萘洛尔抗封锁,非特异性肾上腺素能阻滞剂(29日]因此排除了这一机制的效果。

进一步观察气道TQ放松效应及其与Ca的关系^{+ +}信号,我们筛选化合物fluorescence-dye——(fluo-4)小鼠肺片和加载能够关注TQ在Ca的效果^{+ +}处理和整个ASMC气道收缩。空调采暖产生AFI的增加由[Ca的急剧上升^{+ +}]_我(Ca^{+ +}瞬态,需要建立气道紧张时气道收缩),紧随其后的是这个级别,然后持续下降与多个Ca高原^{+ +}振荡(气道收缩期间需要保持张力)。这些ACh-induced Ca^{+ +}瞬变和振荡,ASMC在先前文献已报告(15,30.]。TQ,增加浓度,抑制ACh-induced Ca^{+ +}瞬变和振荡从而表明它可能会干扰Ca^{+ +}信号在航空公司。在鼠ASMC ACh-induced增加(Ca^{+ +}]_我被认为是导致:(1)间接通过大量细胞外钙^{+ +}通过Ca^{+ +}渠道在质膜和(2)直接通过Ca的释放^{+ +}从细胞内钙^{+ +}商店(15]。这意味着TQ操作也可能干扰/这两个机制来抑制ACh-induced增加(Ca^{+ +}]_我。标准船承运人拮抗剂维拉帕米,也抑制了ACh-induced增加(Ca^{+ +}]_我可能通过其停止Ca的能力^{+ +}大量进入细胞,从而阻止内部Ca的再充填^{+ +}商店。船承运人拮抗剂也废除高K⁺全身的增加(Ca^{+ +}]_我在鼠ASMC [30.]。上气道收缩,ACh显示出深刻的收缩效应。这种收缩效应的ACh浓度增加抑制了TQ,但有趣的是,而不是维拉帕米。不像TQ,维拉帕米略微抑制ACh-induced气道收缩,之间没有显著差异的影响两个异搏定浓度增加ACh-induced气道收缩()。因此,TQ显示类似的效应维拉帕米在Ca ACh-induced增加^{+ +}瞬态和振动而非胆碱能机械响应。这显示了不同模式的作用TQ和维拉帕米在鼠标超导公司。佩雷斯和桑德森(30.)表明,高浓度的K⁺内,提高运动的Ca^{+ +}通过开放的船承运人在鼠ASMC,引起的变化AFI但老鼠气道收缩几乎没有任何明显的变化。这可能是一个原因为什么在我们的结果中,维拉帕米增加抑制了ACh-induced AFI但不是ACh-induced气道收缩。这还重申阻滞剂船承运人的原因并不在哮喘临床使用。相反,TQ表现出抑制作用,与维拉帕米,能够显著抑制Ca^{+ +}瞬态振荡和气道收缩。气道松弛剂效果的TQ也解释了母公司的传统使用药用植物像黑孜然,美味和野生佛手柑亢奋状态等呼吸系统的咳嗽和哮喘。一些先前的研究26,31日]显示气管松弛剂TQ操作的效果。如果没有指定,这些研究表明存在一个额外的机制。我们已经成功地表明TQ不仅干扰Ca^{+ +}信号通路也抑制气道收缩。TQ也被证明具有抗炎作用[32,33和哮喘的治疗效果在动物模型34,35]。TQ的气管和气管松弛剂效果在这项研究中,连同其报道抗炎行动,表明其在哮喘治疗中获益。哮喘是一种慢性疾病,其特征是炎症和过敏性气道平滑肌不同spasmogens [36]。

TQ也是测试心血管制剂对大鼠主动脉和豚鼠心房。大鼠主动脉被用来检查TQ对血管阻力的影响。大鼠主动脉是一个标准的组织用于确定endothelium-dependent和独立的血管舒张(37]。TQ被发现没有任何血管收缩剂对血管的影响基线的语气,但是当测试endothelium-intact鼠主动脉预约与PE或高K⁺,它抑制持续收缩引起的受体激动剂表明TQ挡住两个Ca^{+ +}涌入通路。TQ是在放松高K更有效⁺比PE-induced收缩,表明偏好比receptor-operated Ca船承运人^{+ +}通道(ROCC) (38]。PE诱发Ca^{+ +}通过ROCC涌入,而高K⁺诱发Ca^{+ +}通过涌入船承运人(39]。血管内皮中起着举足轻重的作用在调节血管平滑肌的收缩性血管舒张药的释放和括约肌因素(40]。一个这样的血管舒张因子一氧化氮(NO),而毒蕈碱的M₃受体是一组通过激活受体没有释放的18]。观察任何可能nitrergic和/或毒蕈碱的参与TQ的血管舒张作用,组织分别与L-NAME preincubated,一个标准的一氧化氮合酶抑制剂(41),和阿托品,毒蕈碱的受体阻断剂(42]。这导致的血管舒张作用没有改变TQ表示没有这样的机制在TQ血管舒张效应。endothelium-independent参与TQ的血管舒张效应进一步证实当剥夺主动脉内皮的准备也没有做出任何的血管松弛剂效果差TQ(数据没有显示)。因此,这可能只是一个Ca的存在^{+ +}拮抗效应模式从TQ放松的能力明显高K⁺全身收缩在较低的浓度,与PE相比。类似vasorelaxant TQ操作的影响,但在隔离大鼠肺动脉环,最近被Suddek报道(43]谁还显示nonnitrergic / nonmuscarinic松弛剂TQ操作的效果。Suddek [43]认为TQ展品非特异性vasorelaxant效果明显,对收缩的抑制作用由多个受体激动剂诱导。我们这里显示非特异性松弛剂质量TQ可能涉及船承运人的封锁。

最后我们检查了TQ对心肌收缩性的影响用豚鼠心房准备。TQ放松自然的力量和速度心房收缩浓度的方式。这种抑制作用在心脏组织被阿托品对封锁指示操作独立于毒蕈碱的受体激活。我们无法进一步调查这一效应的机制。我们的观察可能心血管放松效应已报道的TQ操作增加了其心血管治疗效果,如高血压和肾损害(44),cyclophosphamide-induced毒性(45),methionine-induced半胱氨酸(46),和动脉粥样硬化47]。

总之,我们的结果显示TQ在孤立的平滑肌解痉药活动准备的肠胃,气道,在心脏和血管平滑肌组织,同时肌肉准备。虽然这些结果是小说和新信息添加到已有药理数据这种化合物,他们还帮助证明使用TQ含有药用植物像黑孜然,开胃菜和野生佛手柑肌肉极度活跃的胃肠疾病,呼吸道和心血管系统。更详细的研究正在进行中,进一步调查TQ肌肉松弛剂活性的机制。

利益冲突

作者没有利益冲突。

确认

这项研究是由支持作者。m . Ghayur博士后奖学金接受者从加拿大胸协会(加拿大肺协会的医疗部分),l·詹森支持加拿大卫生研究院的研究,而从巴基斯坦高等教育委员会a·吉拉尼。