文摘

神经性疼痛(NP)是一个棘手的临床问题没有令人满意的治疗方法。但是,某些天然产物已经发现是有效的治疗药物的管理疼痛。在这项研究中,我们使用了脊神经结扎(SNL)疼痛模型探讨antinociceptive triptolide效果(T10),传统中药的主要活性成分雷公藤钩f .鞘内T10抑制机械痛觉反应SNL没有干扰引起的电机性能。此外,T10的anti-nociceptive效应的抑制与脊髓星形胶质细胞的激活。此外,鞘内管理T10减毒SNL-induced janus激酶(激酶)信号传感器和催化剂的转录3 (STAT3)信号通路激活和抑制促炎细胞因子的upregulation,如白细胞介素- 6、β及肿瘤坏死因子-α在背角星形胶质细胞。此外,NR2B-containing脊髓N-methyl D-aspartate受体(NMDAR)随后被抑制。最重要的是,T10可以减轻SNL-induced NP通过抑制脊髓背角存在炎症。T10的抗炎作用可能与抑制脊髓星形JAK-STAT3激活。我们的研究结果表明,T10可能是一个很有前途的药物治疗NP。

1。介绍

神经性疼痛(NP)造成很多痛苦的经历的病人。NP可以损害引起的外周或中枢神经系统(CNS)由于创伤性损伤,手术治疗,糖尿病,和感染1- - - - - -3]。尽管许多药物,如三环类抗抑郁药和钙通道- - - - - -δ配体,用于治疗NP,取得了令人满意的缓解疼痛,和副作用是很常见的2,4]。

近年来,大量证据证实神经胶质激活是必需的和足够的慢性疼痛敏化作用[5- - - - - -8]。先前的研究已经证实脊髓神经胶质时应该考虑治疗NP。激活后,神经胶质可以释放强大的神经调质,如促炎细胞因子和趋化因子,生长因子,这被证明能对感冒加重疼痛过敏在脊髓背角神经元兴奋性增强(SDH) [6,9,10]。我们先前的研究结果表明,激活的小胶质细胞和星形胶质细胞SDH的感应和维护是至关重要的NP (3,11,12]。具体来说,星形胶质细胞中扮演着至关重要的角色NP的维护;的astrocyte-specific细胞毒素L -α-aminoadipate (LAA)可以有效地缓解晚期机械触诱发痛打断神经元和星形胶质细胞之间的“相声”(3,13,14]。此外,越来越多的证据表明,星形胶质细胞的激活依赖于janus激酶(激酶)的磷酸化状态信号传感器和催化剂的转录3 (STAT3)信号通路15,16]。因此,抑制JAK-STAT3通路在脊髓星形胶质细胞的激活可能是一个有效的方法来减少背角神经元的周围神经创伤性兴奋过度和疼痛反应(15,17,18]。细胞因子信号的抑制因子3 (SOCS3),生理JAK-STAT3通路的抑制蛋白,产生反馈调节JAK-STAT3通路和NP (17,19]。

雷公藤钩F。(雷公藤)是一种传统的中药。Triptolide (T10) tripterygium提取物的主要活性成分之一,已发现有强大的抗炎和免疫抑制特性20.,21]。雷公藤历史悠久的使用治疗类风湿性关节炎和其他自身免疫性疾病(22,23]。最近的研究也阐明T10的抗炎作用在中枢神经系统(CNS)的差别通过对这些活化的星形胶质细胞21,24,25]。帕金森病大鼠模型,T10已被证实能起到神经保护作用,抑制炎症的黑质(20.,21]。更重要的是,据报道,T10可以防止星形胶质细胞活性激活,专门阻止JAK2-STAT3通路在脊髓损伤的大鼠模型26]。然而,报告机制和T10对NP稀缺的影响。在这项研究中,我们提出,T10可能有助于缓解NP通过抑制星形胶质细胞的激活。

在目前的研究中,鞘内注射的镇痛效果T10是探索在老鼠模型中使用行为测试NP第五腰椎后脊神经结扎(SNL)和神经炎症的抑制和脊髓星形JAK-STAT3 T10治疗也探索途径。

2。方法

2.1。动物

男性Sprague-Dawley老鼠(220 - 250 g)被安置在一个温控房间塑料笼子(每笼6动物)和免费的食物和水在22日至25日°C在12小时光/暗周期。所有的实验报告在本研究进行了一个实验动物使用的协议和护理研究和教育委员会第四军医大学(西安,中国)。所有的努力都是尽量减少动物的痛苦和实验用动物的数量27]。

2.2。鞘内注入

鞘内注入所述执行在我们先前的研究[13,28,29日)插入聚乙烯(PE)管材通过药物直接注入的腰椎蛛网膜下腔扩大。手术后,神经正常的老鼠注射2%利多卡因(10μL)通过鞘内导管确认PE管在蛛网膜下腔。只有那些老鼠显示完全瘫痪的后肢和利多卡因的尾巴后,政府用于后续实验。在每个试验中,PE管的位置在腰囊内的空间扩大被暴露腰椎脊髓直观地验证。数据有错误的PE管材的老鼠的位置被丢弃的研究。

2.3。脊神经结扎

SNL是根据我们之前的协议13,28]。简单地说,老鼠anesthetised与水合氯醛(300毫克/公斤,i.p)。中线切口当时L3-S2水平,和背部脊柱L4 S2被曝光。部分16种横突后小心翼翼地移除,左侧L5脊神经小心地孤立和紧密的结扎远端背根神经节(DRG) 6 - 0丝线。Sham-operated动物受到类似手术的孤立的脊髓神经不结扎。

2.4。药品监督管理局

T10、来自福建医学科学院(福建,中国),纯化雷公藤。T10的纯度大于99%。T10在DMSO溶液溶解,然后稀释为0.9% (w / v)生理盐水。鞘内的剂量管理T10选择根据先前的研究和我们的初步实验30.]。动物被分成4组管理:Sham-Vehicle集团(,10卷μL生理盐水注入Sham-operated老鼠),一个SNL-Vehicle集团(,10卷μL生理盐水注入SNL老鼠),一个SNL-T10集团(16为每个3子组;10μT10 L(3 10到30μ为每个子群g / kg)注入SNL老鼠,职责),和一个Sham-T10集团(,10卷μT10 (30 Lμ克/公斤)注入Sham-operated老鼠)。

2.5。Rotarod测试

运动功能障碍可以对疼痛的行为有明显影响测试(31日]。评估是否T10鞘内管理的运动机能的影响,rotarod在老鼠身上进行了测试使用一个加速旋转杆(尤格Basile 7650瓦雷泽,意大利)。1分钟的训练后,老鼠放在rotarod,线性加速从4 - 40 rpm超过5分钟。老鼠前的时间落在每个3分10分钟间隔运行记录每个老鼠。测试是重复30分钟T10鞘内管理或生理盐水后为7天,每天一次,时间上的老鼠依然rotarod被记录。最终结果表示为一个百分比的老鼠的基线值。

2.6。机械超敏反应

老鼠放在一个高细网,完全暴露后中间的爪子。机械过敏性测试使用·冯·弗雷丝(美国WI Stoelting,基尔)实验人失明组分配(32]。冯·弗雷细丝的刚度是2,4,6,8,10,15日和26 g。与每个灯丝,后爪是按订单的增加刚度,5 s。快速收缩、咬或摇晃的后肢在5 s后肢被冯·弗雷的扎丝被撤离的一个积极的迹象。试验的间隔至少5分钟。为每个审判,后肢被单个刺激10倍·冯·弗雷灯丝之前被下一个刺激更大的灯丝。最小值,导致至少六个反应10刺激被记录。的公式计算百分比变化基线的SNL-T10−post-SNL-T10)(基线SNL-Vehpost-SNL-Veh)。

2.7。Immunofluorescent组织化学

老鼠深刻anesthetised注射戊巴比妥(60毫克/公斤,i.p。)和灌注transcardially 200毫升的5毫米钠磷酸盐0.9% (w / v)盐(PBS, pH值7.3),其次是500毫升的4% (w / v)多聚甲醛在0.1磷酸盐缓冲剂(铅、pH值7.4)。L5脊髓段收获和沉浸在30% (w / v)蔗糖在4°C 0.1 PB在一夜之间。横向脊髓部分(25μ米厚度)然后减少低温恒温器(徕卡CM1800;德国海德堡)。部分冲洗在PBS (pH值7.2 - -7.4)3次(10分钟)和阻塞1小时在0.01米37°C PBS含有10%正常山羊血清和特里同x - 100年的0.3%。部分是在室温下2 h,然后孵化48 h在4°C的混合antiglial原纤维酸性蛋白(GFAP)小鼠免疫球蛋白(1:5000;美国Chemicon泰梅库拉,CA)和anti-pSTAT3兔免疫球蛋白g (1: 1000;细胞信号、马、美国)在PBS含有0.3% (v / v)特里同x - 100, 0.25% (w / v)λ角叉菜胶,5% (v / v)驴血清(PBS-XCD)。洗后三次0.01 PBS(10分钟),部分被孵化4 h与的混合物在室温下10μ兔免疫球蛋白g / mL Alexa488-conjugated驴抗体和10μ小鼠免疫球蛋白g / mL Alexa594-conjugated驴抗体(1:500;美国微孔,Billerica的)。染色后,所有的部分都安装上玻璃幻灯片和cover-slipped 50% (v / v)甘油和2.5% (w / v) triethylenediamine(抗衰落代理)在0.05 M PBS。使用共焦激光扫描显微镜(FV1000;奥林巴斯、东京、日本),观察适当的激光束的部分和过滤设置Alexa488(激发,488海里;发射,510 - 530 nm)和Alexa594(激发,543海里;发射,590 - 615 nm)。数字图像捕获使用fv10 -反潜战- 1.6软件(奥林巴斯),修改对比度增强(15 - 20%)在Photoshop中CS2 (Adobe Systems,圣何塞,CA),然后保存为TIFF文件。

2.8。免疫印迹分析

动物被注射戊巴比妥深深anesthetised(60毫克/公斤,i.p。),然后迅速牺牲。L5脊髓段解剖在冰根据终止L4和L5背根。左背侧脊髓进一步分割的一部分,然后用一个手持单一化杵在SDS示例缓冲区(10毫升/毫克组织)含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂(σ,密苏里州,美国)。蛋白质浓度估计使用bicinchoninic酸(BCA)方法。样本在沸水中加热8分钟,装上10% SDS-polyacrylamide凝胶(Bio-Rad实验室、CA、美国),和转移到聚乙二烯二氟化物薄膜(PVDF、Immobilon-P微孔,Billerica,妈,美国)。膜被封锁在5% BSA溶液后2小时和探测主要抗体在一夜之间在4°C: anti-GFAP老鼠免疫球蛋白g (1: 5000;美国Chemicon泰梅库拉,CA), anti-pSTAT3兔免疫球蛋白g (1: 300;细胞信号,马,美国),anti-pJAK2兔免疫球蛋白g (1: 300;细胞信号,马,美国),anti-pNR2B兔免疫球蛋白g (1: 100;美国加州圣克鲁斯生物技术,Santa Cruz),和反β肌动蛋白小鼠免疫球蛋白(σ1:3000)。膜被孵化与下列二次抗体2小时:HRP-coagulated anti-rabbit驴免疫球蛋白g (1: 5000;中山,中国北京)和HRP-coagulated anti-mouse驴免疫球蛋白g (1: 5000;中山)。膜冲洗三次(10分钟)与Tween-20 Tris-buffered盐水(TBST)之间的每一个步骤。所有的反应都是增强化学发光检测到的(ECL)检测方法(Amersham)。分析了密度的蛋白质印迹使用进行软件(英国紫外线产品)。目标蛋白质和密度β肌动蛋白免疫反应性的乐队与背景减法量化。相同大小的平方是在每个频带测量密度和乐队是减去附近的背景。靶蛋白水平正常化β肌动蛋白水平和表达为相对折叠变化相比Sham-Veh组。墨迹是量化的强度与微的人盲目的不同治疗方法。

2.9。酶联免疫吸附试验

的左背侧角L5脊椎的动物在不同的组将根据相同的方法用于免疫印迹分析。il - 1的含量β、il - 6和TNF -α测量通过酶联免疫吸附测定使用Multi-Analyte ELISArray装备系统(Mix-N-Match;SABiosciences,弗雷德里克,医学博士,美国)根据制造商的指示。

2.10。实时定量聚合酶链反应

老鼠深切anesthetised戊巴比妥(60毫克/公斤)和牺牲。从L5脊椎段提取总RNA试剂盒(GIBCO / BRL生命技术公司,大岛,纽约,美国)。互补DNA(互补)是合成低聚糖(dT) 12 - 18使用上标三世逆转录酶为rt - pcr(美国表达载体,卡尔斯巴德,CA)。本研究中使用的引物的设计如表所示1。等量的RNA (1μg)被用来准备cDNA使用SYBR预混料交货Taq TM(豆类、东京、日本)和分析实时PCR检测系统(美国应用生物系统公司,培育城市,CA)。7500年数据进行分析与系统SDS软件1.3.1(应用生物系统公司)采用标准曲线法。所有值正常化GAPDH表达式。

2.11。量化和统计分析

2.11.1。统计分析

所有的数据被收集和分析人员蒙蔽的手术和试剂使用。重复测量方差分析(Bonferroni调整置信区间)进行了测试的数据从rotarod vonFrey实验。免疫印迹的数据、实时PCR和ELISA试验分析了使用单向方差分析其次是Newman-Keuls测试进行事后分析。皮尔森相关分析是用来确定T10的镇痛效应之间的相关性和相关蛋白的表达。所有的数据提出了均值±SEM,和所有使用SPSS统计分析软件版本16.0(美国SPSS Inc .,芝加哥,IL)。一个< 0.05被认为是具有统计学意义的价值。

2.11.2。量效曲线和艾德₅₀计算

T10剂量变成了对数剂量与棱镜nonline配合执行,建立量效曲线。量效曲线基础上,₅₀T10对镇痛的影响进行了计算。的可靠性₅₀计算从特定的量效曲线评估使用生成的斜率因子GraphPad棱镜Windows版本5.01(美国圣地亚哥,,http://www.graphpad.com/)。

3所示。结果

3.1。鞘内T10管理局对运动机能的影响在Rotarod测试

运动功能障碍在疼痛的行为测试中可以产生明显的影响。因此,它是必要的评估是否T10管理在当下研究的剂量(3、10和30μ克/公斤)运动功能受损。另一个用来评估24老鼠T10管理的影响的运动机能rotarod测试。鞘内T10管理局(3、10和30μ克/公斤)没有明显影响大鼠注射后30分钟的运动功能相比,自己的基线(图1)。

3.2。鞘内管理T10变弱SNL-Induced机械触诱发痛剂量依赖性的方式

我们评估是否T10预防伤害感受SNL的神经性疼痛模型。不同剂量(3、10和30μ克/千克)的T10从术后每天注射一次(POD) 3到6天,和行为实验进行30分钟后注入(图2(一个))。SNL受伤导致了著名的机械触诱发痛所示SNL-Veh集团()。与SNL-Veh组相比,一个鞘内T10产生显著和剂量依赖性降低SNL-induced机械痛觉过敏同侧SNL,爪子在如图2(一个)。然而,无论是高(30μ克/公斤;图2(一个))和低(3和10μ克/公斤,数据未显示)剂量的T10 Sham-operated组基底阈值改变。T10 SNL-induced机械触诱发痛的影响计算基于日志——(剂量响应曲线(图)2 (b))计算的剂量反应曲线(图2 (c))。的艾德₅₀11.27的T10 SNL-induced机械触诱发痛μ克/公斤,斜率系数为1.667,表明我们的剂量选择的方案是健壮的。因此,10的剂量μ克/公斤,类似于ED₅₀的T10 SNL-induced机械触诱发痛,被选为后续实验。

3.3。鞘内的影响T10 SNL-Induced GFAP表达升高

我们调查了GFAP表达POD 3和POD 6各团体确定antiallodynic和antihyperalgesic T10的影响伴随着星形激活的抑制(数字3和4)。免疫组织化学数据显示SNL-induced GFAP表达的增强身体的同侧的SDH在豆荚6(数字3(B)和3(C))。此外,星形胶质细胞激活SNL过分生长细胞体和增厚的过程。增强GFAP表达引起SNL也验证了免疫印迹分析(,比Sham-Veh;数据4(一)和4 (b))。相比之下,T10鞘内管理从豆荚3舱6导致减少在背角GFAP表达免疫印迹分析(,比SNL-Veh;数据4(一)和4 (b))。SNL-T10组的免疫组织化学数据还显示,星形胶质细胞并不处于激活状态,类似于老鼠处于幼稚状态(图3(D))。

3.4。鞘内T10的影响SNL-Induced JAK2-STAT3途径激活

此外,鞘内政府的T10 STAT3磷酸化的影响进行了测试。增强pSTAT3-immunoreactivity观察身体的同侧的SDH在豆荚6 SNL老鼠,而弱pSTAT3-immunoreactivity在天真的老鼠。另外,几乎所有与GFAP pSTAT3-positive细胞double-labelled(数字3(C)和3(C′′))。进一步检查JAK2-STAT3通路是否参与T10对病患SNL-induced激活的抑制效果,我们评估的水平的磷酸化JAK2和STAT3免疫印迹分析。类似于T10对GFAP表达的影响,SNL-induced海拔pSTAT3的水平也显著减弱(,比SNL-Veh;数据4 (e)和4 (f))。一个类似的结果是获得pJAK2表达式。的pJAK2也抑制了T10 (,比SNL-Veh;数据4 (c)和4 (d))。进一步评估效果的T10 JAK-STAT3通路,STAT3的目标基因的表达谱SOCS3决心。实时PCR表明,显著增强SOCS3 mRNA水平与周围神经损伤有关。此外,T10的政府也降低了SNL-induced SOCS3信使rna浓度的增加(,比SNL-Veh;图5(a))。

3.5。鞘内的影响T10 SNL-Induced促炎细胞因子的表达升高

促炎细胞因子(TNF -α,il - 1β和il - 6)表达式分析了使用酶联免疫吸附试验。T10政府并没有改变脊髓促炎细胞因子的表达正常大鼠(数字5(b1),5(b2),5(b3)。然而,SNL导致显著增加促炎细胞因子表达在身体的同侧的SDH POD 6 (相比,Sham-Veh;数据5(b1),5(b2),5(b3)。此外,促炎细胞因子的差别有显著对这些受到SNL的T10管理组(相比,SNL-Veh;数据5(b1),5(b2),5(b3)。

3.6。鞘内的影响T10对NR2B-Containing SNL-Induced激活脊髓N-Methyl D-Aspartate受体(NMDAR)

我们也决定T10鞘内管理是否影响NMDARs SNL-induced激活,这是通过磷酸化演示。每组的表达pNR2B被免疫印迹分析(图检测6)。我们发现显著增加pNR2B同侧SNL (SDH在Sham-Veh相比;数据6(一)和6 (b))。然而,SNL-induced增加与T10 pNR2B被明显抑制治疗(相比,SNL-Veh;数据6(一)和6 (b))。

3.7。T10的Antinociceptive性质与相关蛋白的表达有关

T10的镇痛效应之间的关系和GFAP的表达,pJAK2, pSTAT3, pNR2B,线性回归分析显示,如图所示7。T10的镇痛效应之间的皮尔逊相关系数和GFAP的表达−0.601 (;图7(一)),镇痛效果之间的皮尔逊相关系数T10 pJAK2的表达和pSTAT3−0.697 (;图7 (b))和−0.625 (;图7 (c)),分别。最后,T10的镇痛效应之间的皮尔逊相关系数和pNR2B−0.651的表达(;图7 (d))。

4所示。讨论

在目前的研究中,我们观察到,鞘内T10明显变弱引起的机械触诱发痛SNL 10和30的剂量μ克/公斤。随后,我们调查了T10 antiallodynic背后机制的影响。我们发现鞘内T10 (10μ克/公斤)抑制腰椎SDH的反应性星形胶质细胞的增殖。有趣的是,SNL-induced JAK-STAT3通路的激活被T10抑制,这对调节星形激活是很重要的。此外,T10治疗也导致了低水平的促炎细胞因子在SDH,尤其是il - 6。在一起,我们的研究表明,JAK-STAT3通路抑制T10的镇痛效果。

目前的研究表明,鞘内管理T10抑制SNL-induced机械触诱发痛(vonFrey测试所显示的那样)在剂量依赖性的方式。越来越多的证据表明,反应性星形胶质细胞、小胶质细胞,对神经性疼痛的维护至关重要3,33]。一旦激活,胶质细胞释放炎性刺激物包括细胞因子、前列腺素和神经营养因子,可以改变传入神经元的分化特点,从而调节疼痛信息的传播在中枢神经系统34- - - - - -36]。根据埃德₅₀的T10 SNL-induced机械触诱发痛,一剂10μ克/公斤被选为探索T10的antiallodynic效应的机理。我们的研究结果表明,T10下调GFAP表达在SDH SNL受伤后的剂量10μ克/公斤。T10已报道在调节免疫功能方面扮演重要角色内外的神经系统20.,24,37- - - - - -39]。据报道,T10可能是有用的治疗各种炎症和自身免疫性疾病,如风湿性关节炎(23,越来越多的证据表明,T10可以抑制帕金森病模型大鼠神经胶质激活(20.,38)和阿尔茨海默疾病(39)通过抑制促炎和细胞毒性因子的释放,如肿瘤坏死因子-α和il - 1β。T10对神经炎症的抑制作用与其他几个协议研究关于T10对其他疾病的影响。此外,我们的相关分析表明,GFAP表达的规定在T10 SNL的T10的镇痛效应的负相关。基于这些发现,抑制脊髓星形激活可能参与T10的镇痛效果。

JAK-STAT通路是一个重要的信号机制来应对各种细胞外刺激;这个途径能传感信号从细胞表面相关的核与细胞增殖、分化、细胞迁移,细胞凋亡(16,40,41]。JAK-STAT通路在免疫/炎症反应中起着重要的作用。几项研究已经涉及JAK-STAT3信号在astrogliosis在许多神经病理条件下,如脊髓损伤(16,42),脑缺血(43,44),和神经性疼痛15,18]。最近的证据表明,星形JAK / STAT3通路是至关重要的调控星形胶质细胞增殖,参与维护周围神经创伤性神经损伤后2 - 6天的异常性疼痛SDH的老鼠15]。然而,多个相互冲突的研究报道,增加磷酸化STAT3只是参与SNL受伤后小胶质细胞的激活在老鼠17,18]。这种差异是由于不同时间窗口SNL受伤后进行分析。脊髓损伤模型的另一项研究报道,JAK-STAT3激活在不同细胞类型依赖于时间受伤后(42]。我们的结果证实星形JAK2-STAT3信号之间的窗口被激活SNL后5至7天。此外,我们目前的研究表明,在这个时间窗口减毒pJAK2 T10和pSTAT3表达式,并伴随着抑制星形激活。相比之下,减少核易位STAT3在T10观察星形胶质细胞治疗组。相关分析还表明,pJAK2的表达式和pSTAT3 SNL后T10与T10的镇痛效应负相关。此外,T10可以抑制SOCS3 mRNA的表达,这是一个负面的反馈JAK-STAT3通路的抑制剂。周围神经损伤,增加SOCS3蛋白表达可以阻止JAK-STAT3通路及其下游信号。因此,我们的研究结果表明,抑制脊髓星形JAK2-STAT3途径激活可能参与T10的镇痛效应。

水平的提高TNF -α,il - 1β,il - 6已观察到在DRG、SDH在神经性疼痛的脊神经结扎模型(10,45- - - - - -47]。最近越来越多的证据支持一个重要的角色在痛苦中促炎细胞因子敏化作用在NP的发展(45,46,48]。据报道,il - 1β和肿瘤坏死因子-α参与发起的NP,而il - 6对NP的维护很重要45,49,50]。此外,il - 6表达的增加在SDH直接诱导il - 1β和肿瘤坏死因子-α(36,50]。作为一种免疫抑制剂,T10可以抑制促炎细胞因子的生产主要培养小胶质细胞和保护多巴胺神经元的损伤引起的炎症(38]。此外,il - 6的主要催化剂JAK-STAT3通路(15,17,51]。我们目前的结果表明,鞘内T10可以下调肿瘤坏死因子的水平α,il - 1β特别是il - 6在SDH POD SNL后6。这些结果也符合JAK-STAT3抑制。

NMDAR在肤浅的SDH已经涉及兴奋性疼痛的传播的主要因素。增加谷氨酸NMDA受体介导的兴奋性突触传递SDH神经元可以表现为神经创伤性中枢敏化作用28]。大量证据表明,NR2B亚基的一种功能性NMDAR,可能扮演一个角色在疼痛传输和慢性疼痛的发展(28,52]。据报道,NR2B亚单位的表达增加SDH神经元开始后48 h SNL的老鼠。增加3天达到高峰,持续14天,并返回到试运行的水平后28天SNL [52]。星形胶质细胞的激活导致顺向释放neuroexcitatory物质,如前列腺素、il - 1、il - 6,随后引发的磷酸化NR2B亚基在脊髓神经元10,53,54]。在目前的研究中,免疫印迹分析表明,鞘内T10可以抑制SNL-induced海拔pNR2B表达式。此外,监管的表达pNR2B SNL后T10与T10的镇痛效应负相关。因此,我们推测的规定的表达pNR2B SNL后T10可能与抑制星形激活。

5。结论

这里给出这些结果强烈表明,鞘内T10 (3、10、30μ克/公斤)产生一个一致的和在SNL-induced NP antinociceptive存在剂量依赖的相关性的影响。镇痛效应的一种可能的机制包括T10是T10会使肿瘤坏死因子的水平α,il - 1β随后,il - 6,抑制星形激活的抑制JAK-STAT3信号通路。鞘内T10还可以减少NR2B-containing NMDAR磷酸化在SDH神经元,从而衰减SNL-induced中枢敏化作用。我们的研究结果表明,T10可能是一个很有前途的药物治疗NP。

作者的贡献

j . Tang Z。- - - - - -H Li, and S.-N Ge contributed equally to this work.

确认

这项研究受到了中医科研的关键主题的军事(没有。10 ZYZ35)和中国国家自然科学基金(81070900号,81070997)。