文摘

本研究的目的是调查可能ethanolic提取物的镇痛和抗炎机制答:morrisonensisHayata ()。两个模型被用于评估镇痛效应:醋酸段扭动响应和formalin-induced爪子舔。结果表明,减少响应为醋酸试验和扭动的舔在福尔马林测试时间。抗炎效果评估老鼠的爪子水肿引起的λ卡拉胶。显著降低诱导爪子水肿后三到四个小时λ角叉菜胶注入。此外,结果表明,抗炎机制的水平下降可能是由于一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)在浮肿的爪子。此外,肿瘤坏死因子-α(TNF -下降α)和白细胞介素- 6 (il - 6)的水平,随后导致前列腺素的减少和减轻水肿。隔离和净化的提取决定p-hydroxyacetophenone主要组件在130毫克/克提取。没有观察到死亡率的急性毒性试验的剂量10克/公斤。这项研究显示了可能的镇痛和抗炎作用的机制老鼠和为民族植物学的利用提供了证据答:morrisonensis在治疗炎症性疾病。

1。介绍

类风湿性关节炎(RA)是一种慢性的、系统性的,炎症,免疫紊乱造成关节破坏和残疾,通常观察到在30至50岁之间的人1]。这种疾病会影响0.5 -1%的成年人,其发病率和患病率高于工业化国家(2]。风湿性关节炎药物治疗包括非甾体类抗炎药(非甾体抗炎药),低剂量口服或关节内的糖皮质激素,疾病修饰风湿性关节炎药物、生物反应调节剂,每日钙和维生素D (3]。炎症是由于宿主防御组织损伤和/或对致病性刺激;然而,持续或hyperinflammation最终会导致组织损伤和器官衰竭如果控制不当。为了应对传染性病原体或炎性刺激,激活单核细胞/巨噬细胞分泌细胞因子,生长因子,和炎症介质包括interleukin-1 (il - 1)、白细胞介素- 6 (il - 6)、肿瘤坏死因子-α(TNF -α)、一氧化氮(NO)、前列腺素E₂和活性氧(ROS),会导致炎症损伤(4,5]。没有将迅速结合超氧化物阴离子(过度)生成过氧亚硝基(ONOO⁻),它可以通过促进氧化应激导致发病机制,组织损伤和癌症。过氧硝酸盐是一种强氧化剂能够与蛋白质、脂质、和DNA,导致后续的多级致癌作用[6,7]。ROS可能导致氧化损伤,进而可以启动和促进各种慢性疾病的进展,如心血管疾病、老年痴呆症,以及糖尿病(8]。因此,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH),谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、谷胱甘肽还原酶(研磨)扮演重要角色在改善炎症反应通过减少氧化应激和损伤减少自由基的生产(9,10]。丙二醛(MDA)、低分子量最终产品由细胞膜的分解,形成提供了一个在炎症过程的评价指标11]。另外,脂质过氧化反应在许多疾病在氧化损伤是一个可靠的评估。除了抑制PG,没有相应的合成酶的抑制,cyclooxygenase-2 (cox - 2)和诱导一氧化氮合成酶(什麽)已经证明是有益的治疗炎性疾病(12]。天然产物从草药或药用植物提供大量的cox - 2和/或没有抑制剂,可能发展成新的抗炎药物先导物。本研究的动机是想寻求新奇的自然起源的物质,将演示在抗炎、镇痛有效性活动较低毒性。

艾属(菊科)是用于治疗流感,风湿性关节炎,背痛,头痛在美洲印第安人(13,14]。答:morrisonensisHayata是一种流行和多年生草本植物或半灌木发现路边或斜坡在台湾山(2700米以上15]。传统上,这种植物被用于治疗风湿性关节炎、过敏性鼻炎、头痛、原住民和水肿。然而,治疗潜力,潜在机制仍然难以捉摸和活性成分(s)尚未系统地识别。植物化学的研究艾属透露,单萜、倍半萜烯、香豆素类和黄酮类化合物的结构多样性分离和识别16]。先前的研究已经表明,酚醛树脂在药用植物具有抗炎活动通过清除ROS和减少促炎细胞因子(例如,TNF -α,il - 1β和il - 6)。一些研究表明,酚醛树脂的含量随着海拔增加变得更高由于对紫外线保护作用[17]。因此,通过高效液相色谱法定量分析界面的紫外吸收和/或女士必须确定目标选民声称负责特定疾病的治疗。

在这项研究中,ethanolic提取物的镇痛和抗炎活动答:morrisonensisHayata(我_EtOH)在小鼠进行评估。镇痛活动是由乙酸段时间响应和福尔马林试验而扭动的抗炎活性_EtOH确定使用λ-carrageenan-induced老鼠爪子水肿模型。为了披露抗炎作用的机制,肿瘤坏死因子-的活动α、il - 6和cox - 2的水平没有化验和MDA在水肿的组织,和抗氧化酶的活动(SOD、GPx和研磨)在肝脏被测量。

2。材料和方法

2.1。化学药品和试剂

λ角叉菜胶,吲哚美辛,甲酸(FA)和格里斯试剂购自Sigma-Aldrich化工有限公司(台北,台湾)。福尔马林是来自日本Shiyaku产业有限公司(台北,台湾)。SOD、GPx研磨,MDA测定试剂盒购自草毒死实验室有限公司(英国Crumlin)。il - 6和TNF -α得到从试验设计有限公司(美国密歇根州)。cox - 2抗体购自研发系统。没有试验设备从开曼群岛化工有限公司获得HPLC-grade甲醇和乙腈从默克公司购买(达姆施塔特,德国)。其他试剂均为分析纯。

2.2。植物材料

艾morrisonensis沿着高速公路14 Hayata收集,海拔2718米(57.8 N24°06′′′E121 52.0°13′′′), 2011年6月台湾南投。植物被Yen-Hsueh博士曾,林业部门,国立中兴大学。凭证标本(am - 1 - 06032011)上的生态学和进化生物学研究所,中国医科大学。干茎和叶(260克)这种植物被切成小块,与70%乙醇提取和通过滤纸的四倍。合并后的滤液集中在减压下给干提取(8.6 g,成功率3.3%)。药理试验之前,这种提取物溶解在dd H₂O。

2.3。色谱分离和分析

我_EtOH溶解在250毫升水和三次分区具有同等体积的乙酸乙酯乙酸乙酯层(2.75 g)。这一层是通过硅胶柱色谱给30个小分支的22日通过交联葡聚糖(222.8毫克)进一步纯化LH-20筛选了与丙酮收益率122.0毫克p-hydroxyacetophenone。¹核磁共振(500 MHz, CDCl₃):2.58(年代,3 h), 6.95 (d,赫兹,2 h), 7.90 (d,赫兹,2 h)¹³理化性质:26.2 (q), 115.6 (d), 115.6 (d), 129.3 (s), 131.2 (d), 131.2 (d), 161.7 (s), 198.9(年代)。质(负模式)显示分子离子m / z:135年,在120年和93年删除对应的甲基,进一步去除有限公司。上面的数据是完全一致的p-hydroxyacetophenone报道,证实了其结构。高效液相色谱系统由日立l - 2130紫外探测器探测到l - 2420。色谱分离进行NUCLEODUR C-18 HTec(4.6毫米×250毫米ID, 5μauto-sampler l - 2200 m)。水的流动相由混合物(a)和乙腈(B)使用梯度程序设置如下:0分钟:5% B, 5分钟:30% B, 30分钟:95% B, B和50分钟:5%流量为1.0毫升/分钟和检测波长为315 nm。质是Phenomenex神童ODS(2), 5米,532610 - 1,2.0毫米×150毫米和250流量μL / min耦合力量HCT超离子阱MS光谱仪。流动相是H₂O FA (+ 0.1%) + 5% ACN FA(+ 0.1%)和移动阶段B是ACN FA (+ 0.1%)。梯度程序设置如下:0分钟:10% B, 15分钟:60% B, 17 - 20分钟:90% B, B .的身份和21 - 25日分钟:10%p-hydroxyacetophenone被保留时间确定,分子和碎片离子质中找到。定量分析是由建立校准曲线的峰值区域曲线标准添加法。的浓度是_EtOH准备5毫克/毫升和上升0、0.5、1、2和5毫克/毫升的吗p-hydroxyacetophenone和该组件的数量决定g / g提取(均值±相对标准偏差)。

2.4。实验动物

雄性ICR小鼠(20 g为抗炎镇痛试验和32 - 35 g每个测试)是由BioLASCO台湾有限公司有限公司的老鼠在中国医科大学动物中心的温度控制°C,相对湿度%,12 h光/ 12 h黑暗周期为1周之前的实验。动物被赋予与啮齿动物的饮食和干净的水随意。所有研究进行了按照美国国立卫生研究院(NIH)指导实验室动物保健和使用的。所有测试的指导下进行国际疼痛研究协会(18]。实验动物研究委员会批准的协议是中国医科大学。醚用于麻醉动物牺牲前。

2.5。急性毒性研究

小鼠急性毒性试验进行根据廖等的方法。19]。雄性ICR小鼠(22 - 25 g) 10只小鼠被随机分为三组,每个和老鼠的口服药物_EtOH(10 g / kg)。实验小鼠用饲料和水随意定期观察和保持在14天内死亡率或行为变化。

2.6。醋酸段扭动响应

挣扎在老鼠身上测试是由科斯特的方法et al。20.]。雄性ICR小鼠()前24小时禁食用免费水实验。醋酸(1.0%)是腹腔内注射(i.p。0.1毫升/ 10 g体重),诱导扭动。我_EtOH(20、100和500毫克/公斤)是口头管理(订单),每组小鼠醋酸注入前60分钟。吲哚美辛(10毫克/公斤)是腹腔内接种积极控制注射醋酸前30分钟。肌肉收缩的数量统计后5分钟注射醋酸和持续了10分钟。记录数据代表总数的扭动着。

2.7。福尔马林测试

福尔马林测试方法的基础上进行Tjølsen et al。21]。雄性ICR小鼠()前24小时禁食用免费水实验。20微升5%福尔马林的盐水是皮下注入后每个老鼠的爪子。我_EtOH(20、100和500毫克/公斤)口服接种到动物注射福尔马林前60分钟。同样体积的蒸馏水是口头管理车辆控制。吲哚美辛(10毫克/公斤,i.p。)管理福尔马林处理前30分钟。这些老鼠被单独放在一个透明的有机玻璃笼子里(25×15×15厘米)。所花费的时间在秒舔注入的爪子被记录在早期阶段(0 - 5分钟)和后期阶段(20 - 30分钟)后,福尔马林注入神经源性炎症性疼痛,分别。

2.8。λ-Carrageenan-Induced老鼠爪子水肿

测试是根据醋等人的方法进行一些修改(22]。雄性ICR小鼠()前24小时禁食用免费水实验。50微升1%λ卡拉胶悬浮在生理盐溶液(0.9% w / v氯化钠)注入右足底的一面后爪子,爪子成交量衡量plethysmometer 1日,2日,3日,4小时后注射。肿胀的程度由三角洲评估卷(),““代表的数量正确的后爪化学治疗后,““治疗前的体积。我_EtOH(20、100和500毫克/公斤)和正常生理盐水在120分钟后口服药物试验和车辆控制λ分别注射角叉菜胶。吲哚美辛(10毫克/公斤,i.p。)管理的150分钟后λ角叉菜胶注入积极的控制。在二级实验,另一组老鼠口服接种与生理盐水_EtOH前面描述的那样,吲哚美辛用同样的条件。正确的后爪和肝脏组织的老鼠在四小时后λ角叉菜胶注入。爪子组织立即清洗,放置在冰冷的生理盐水4倍体积均化之前在4°C。随后,匀浆在12000转离心5分钟和上层清液得到MDA和储存在−20°C, cox - 2,不,TNF -α和il - 6的分析。整个肝组织清洗,放置在冰冷的生理盐水以同样的体积均化之前在4°C。匀浆离心机在12000 rpm 5分钟和上层的获得和存储在−20°C抗氧化酶(谷胱甘肽过氧化物酶,超氧化物歧化酶、谷胱甘肽还原酶活性分析。

2.9。cox - 2,肿瘤坏死因子-α,il - 6试验

cox - 2,肿瘤坏死因子-α,il - 6由定量夹心酶免疫分析法测定技术(23]。cox - 2的捕获抗体,TNF -α,il - 6被播种到每一个96孔板在一夜之间。在第二天,第二组的生物素化的抗体与样品或标准组织抗原孵化前板streptavidin-HRP终于补充道。cox - 2与肿瘤坏死因子-α以450海里,以确定他们的数量。cox - 2活动表示为U /毫升/蛋白质(U /毫升/毫克蛋白)而TNF -α每毫克蛋白被表示为沙克(pg /毫克)。il - 6的吸收以405海里,表示为pg /毫克。

2.10。没有分析

没有测量方法的基础上Moshage和绿色等。24,25]。硝酸盐转化为亚硝酸盐利用硝酸还原酶。亚硝酸盐随后与磺胺酸反应生成重氮离子和N - (1-naphthyl)乙二胺的反应给发色团的偶氮衍生物(紫色红色),这可能被记录在540海里。这个过程获得的值代表亚硝酸盐和硝酸盐和表示为M的总和。

2.11。MDA测定

注入λ角叉菜胶诱发MDA的生产,这是评价2-thiobarbituric酸反应物质(TBARS)方法(26]。MDA可以与硫代巴比土酸反应在酸性和高温条件下(稍后通知)。MDA和稍后通知然后形成red-complex TBARS,可以测量colorimetrically。TBARS决心的吸光度测量532海里。MDA水平表示为nmole MDA /毫克的蛋白质。

2.12。抗氧化酶的测定

SOD测定方法后Woolliams et al。27]。黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶超氧化物自由基反应生成2 - (4-iodophenyl) 3 - (4-nitrophenyl) 5-phenyltetrazolium氯(INT)形成一个红色甲瓒染料的颜色被记录在540 nm,确定其金额。以前的上层清液从肝组织(20μL)被添加到120μL 0.1磷酸盐缓冲剂(帽40更易与L, EDTA 0.94更易/ L, pH值7.0)和混合。一个5整除μL混合添加到340年μ0.05 L的混合基质(黄嘌呤更易与L, INT 0.025更易/ L)是通过添加黄嘌呤氧化酶记录在505 nm, 37°C每隔30秒日立U 2000分光光度计的6倍。酶活性被表示为INT的数量,抑制氧化50%等于1单位(U)和表达为U /毫克的蛋白质。GPx测量根据Ceballos-Picot等人的方法通过检测研磨和NADPH的内容28]。氧化NADPH辅酶ii⁺伴随着吸光度下降记录在340海里。研磨时测量检测谷胱甘肽(GSSG)的降低NADPH的存在(29日]。

2.13。统计分析

所有数据代表均值±SE ()。与SPSS统计分析软件和计算使用单向方差分析其次是矫正的多个范围测试。统计学意义的标准确定。

3所示。结果

3.1。色谱分析

质指纹档案为基础成立色谱峰(BPC)_EtOH(图1(一)),p-hydroxyacetophenone被确认与保留时间()在6.6分钟。提取离子色谱(共同)如图1 (b)作为在134.9和被选在负离子模式下。BPC的真实p-hydroxyacetophenone如图1 (c)与是一致的、分子和碎片离子。色谱检测到315海里是图所示2与在15.99分钟,用于定量分析。

3.2。急性毒性研究

急性毒性的我_EtOH评估在剂量的小鼠10克/公斤。口服后14天,_EtOH没有造成任何行为变化,没有观察到的死亡率。因此,LD₅₀我的_EtOH得出的结论是大于10克/公斤在老鼠身上,表明几乎nonacute有毒。

3.3。醋酸段扭动响应

图3表明乙酸段作为老鼠扭动的反应表明镇痛活动施加的_EtOH。腹腔内注射醋酸的生产在对照组痛苦地扭动着。翻滚的反应大大降低了吲哚美辛治疗(10毫克/公斤)或我_EtOH在100和500毫克/公斤低于0.05和0.001,分别。

3.4。福尔马林测试

在早期阶段,_EtOH(20、100和500毫克/公斤)和吲哚美辛(10毫克/公斤)没有任何明显的变化与对照组相比(图4(一))。阶段后期,舔反应引起的皮下注射福尔马林持续了在对照组。如图4 (b)时间显著下降,吲哚美辛(10毫克/公斤)或治疗_EtOH在100和500毫克/公斤低于0.05和0.001,分别。

3.5。的影响在λ-Carrageenan-Induced老鼠爪子水肿

如图5,老鼠爪子增加水肿开发并担任注入后炎症活动的迹象λ卡拉胶。我_EtOH(100和500毫克/公斤)和吲哚美辛(10毫克/公斤)显著降低爪子水肿在注射后3日和4日h。我_EtOH在100和500毫克/公斤的浓度了一样平等的活动和抑制消炎痛(10毫克/公斤)小于0.001。

3.6。的影响对cox - 2浓度

在图6、cox - 2浓度显著增加λ角叉菜胶组(U /毫升/毫克蛋白)。与吲哚美辛治疗后(10毫克/公斤)或我_EtOH在100和500毫克/公斤,显著抑制cox - 2中可观察到浓度低于0.01和0.001,分别。

3.7。的影响肿瘤坏死因子-α和il - 6

如数据所示7和8肿瘤坏死因子-α和il - 6水平λ-carrageenan-induced水肿爪子显著提高。吲哚美辛治疗(10毫克/公斤)或我_EtOH在100和500毫克/公斤显著抑制肿瘤坏死因子-的浓度α与分别是小于0.05和0.001(图7)。同样,il - 6水平明显降低_EtOH(100和500毫克/公斤)3 h后注入或消炎痛(10毫克/公斤)小于0.05(图8)。

3.8。的影响在没有集中

在图9,没有浓度急剧增加λ角叉菜胶组(米)。与吲哚美辛治疗后(10毫克/公斤)或我_EtOH在100和500毫克/公斤,显著抑制观察NO浓度低于0.01和0.001,分别。

3.9。的影响在MDA水平

在图10、MDA水平显著增加λ角叉菜胶组(nmole /毫克蛋白)。与吲哚美辛治疗后(10毫克/公斤)或我_EtOH在100和500毫克/公斤,显著抑制MDA浓度的观察低于0.01和0.001,分别。

3.10。的影响对超氧化物歧化酶(SOD)的活性

在图11,SOD活性增加了吲哚美辛治疗(10毫克/公斤)或我_EtOH在100和500毫克/公斤比λ角叉菜胶组低于0.01和0.001,分别。

3.11。的影响谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的活动

在图12、GPx活性增加了吲哚美辛治疗(10毫克/公斤)或我_EtOH比在500毫克/公斤λ角叉菜胶组小于0.01。

3.12。的影响谷胱甘肽还原酶的活性(研磨)

在图13、接地的活动增加了吲哚美辛治疗(10毫克/公斤)或我_EtOH在100和500毫克/公斤比λ角叉菜胶组低于0.01和0.001,分别。

4所示。讨论

Compositaceous植物是众所周知的抗炎和王亚南活动以及膳食补充剂用于chemofpreventive在某种癌症基于ethnopharmacological证据(30.]。艾是一个属的400种物种中发现全球温带地区。著名的化学成分答:籼稻主要挥发油、香豆素类、黄酮类化合物;然而,植物化学物质答:morrisonensisHayata仍不清楚(16,31日]。因此,我们开始着手调查活性成分和可能的镇痛和抗炎作用的机制答:morrisonensisHayata。

两个动物模型包括醋酸段扭动响应和福尔马林测试是用来评估的镇痛效应_EtOH。采用醋酸诱发疼痛的反应已经被证明是类花生酸的参与和拟交感神经胺。醋酸的镇痛活性段扭动模式可能属性释放肿瘤坏死因子-α,(il - 1)及interleukin-8(引发)居民小鼠腹腔巨噬细胞和肥大细胞(32]。在这项研究中,_EtOH(100和500毫克/公斤)拥有anti-nociceptive影响减轻腹部醋酸诱导的小鼠痛苦地扭动着。福尔马林测试涉及到两相的疼痛反应包括瞬态早期阶段之后,主音后期阶段。早期阶段是由周围疼痛的刺激引起的福尔马林在主音后期阶段是由于炎症反应。然而,最近的研究表明,疼痛反应后期阶段依赖于长期存在的早期阶段,因此,在相互依存的(33]。目前的研究表明,治疗_EtOH(100和500毫克/公斤)减少疼痛的反应在福尔马林诱导第二阶段测试。结果表明,施加的止痛效果_EtOH可能由于其抗炎活性。λ-Carrageenan-induced老鼠爪子水肿是一种两相的发展评估的抗炎剂在活的有机体内(22]。组胺、缓激肽、5 -羟色胺(5 -)和血小板激活因子(PAF)参谋长被释放在第一阶段发生从1到4 h后注入。代理来自受伤的组织刺激释放肿瘤坏死因子-α进一步刺激释放il - 1、il - 6和引发。il - 6和引发反过来增加了环氧酶催化花生四烯酸转化为前列腺素和血栓素。信使rna诱导cox - 2的表达明显增加的站点λ-carrageenan-induced爪子水肿(34]。肿瘤坏死因子-α刺激细胞因子诱导的中性粒细胞释放的化学引诱物1 (CINC-1)与引发调解交感疼痛刺激交感胺的释放(35]。嗜中性粒细胞浸润和激活也导致这种炎症反应通过生产oxygen-derived自由基,也就是说,超氧化物阴离子()和羟基自由基(36]。4到10小时后λ注射角叉菜胶,没有产生什麽参与炎症反应的维护,包括血管通透性的增加和水肿通过局部血流量的变化。一氧化氮与超氧化物成为过氧亚硝基阴离子(ONOO反应⁻),它提出了发挥主要的致病作用在炎症过程中特别是在macrophage-like细胞。在这项研究中,_EtOH显示显著的抗炎作用λ-carrageenan-induced老鼠爪子水肿3到4小时的剂量依赖性的方式。此外,肿瘤坏死因子的水平α和il - 6也减少了处理_EtOH和吲哚美辛。因此,合理的抗炎机制_EtOH可能与抑制肿瘤坏死因子-α和il - 6。在急性炎症反应,活性氧(ROS),包括过氧化氢、羟自由基、超氧化物阴离子在中性粒细胞扮演关键的角色,因此导致DNA,脂质和蛋白质损伤(37]。MDA是一个被动的醛,作为生物标志物的评价氧化应激和炎症过程。抗氧化防御系统清除,减少活性氧的形成通过酶、SOD、GPx,研磨38]。SOD超氧化物阴离子的过氧化氢催化转换之后,过氧化氢酶,水和氧气。GPx清除过氧化氢水和氧气,同时,给氧化谷胱甘肽(GSSH),后来再生通过研磨和NADPH作为氢的来源。因此,增加SOD、GPx和研磨将减少ROS和作为评估的程度的炎症。细胞因子是一组多肽合成的宿主免疫反应和炎症反应。例如,il - 1、TNF -α已报告,il - 6在炎症反应的影响。il - 1、TNF -α随后也调节躯和cox - 2的表达,调节和铂族元素₂(39]。努力减弱这些多效性的炎症介质已经吸引了太多的关注在开发新的抗炎药物。的主要组件_EtOH是p-hydroxyacetophenone的结构完全一致的文献数据在核磁共振光谱学40]。定量分析是由高效液相色谱检测与标准添加法[315海里41]。的主要成分金银花粳稻绿原酸的抗炎活性确认(42,43]。色谱表明,绿原酸被发现在RT 3.9分钟。然而,我们观察的量很小虽然被发现答:scopariae(44]。一项研究显示,p-hydroxyacetophenone产生保护作用λ-carrageenan-induced爪子水肿在老鼠注射后1 - 3 h (45]。定量研究p-hydroxyacetophenone被报告答:scopariae通过毛细管电泳和确定为6.732 - -8.795毫克/克(44]。在这项研究中,我的主要组成部分_EtOH是p-hydroxyacetophenone和决心是130毫克/克。

本研究证明_EtOH具有镇痛活性对疼痛的反应引起的腹腔内注射醋酸浓度的100和500毫克/公斤。爪子舔时间大大减少后期阶段intraplantar注射福尔马林的100和500毫克/公斤。我_EtOH拒绝了爪子水肿体积剂量的100和500毫克/公斤引起的λ卡拉胶。两种可能的途径,提出了抗炎效应产生的_EtOH。首先是降低TNF -的浓度α和il - 6,不仅抑制cox - 2的下降导致PG发布也没有减少的浓度,防止水肿。第二个是通过增加抗氧化活性的酶(SOD、GPx和研磨)在肝脏,自由基是回收和MDA的水平下降。镇痛效应被发现其抗炎活性有关,作为一个可能的理由_EtOH在传统医学。

利益冲突

作者没有利益冲突声明。

作者的贡献

研究所。周和Y.-J。赵的贡献同样这项工作。

确认

本研究支持由中国医学委员会及制药、卫生,行政院(ccmp101 - rd - 002, ccmp100 - rd - 020),美国国家科学委员会(101 - 2320 - b - 039 - 032 - my2),和中国医科大学(CMU99-N2-03-1和CMU99-N2-03-2)。