文摘

电针刺激(EA)被用来抑制海洛因成瘾者渴望和条件性位置偏爱(CPP)在大鼠吗啡。问题仍然EA本身是否会产生一些有益的效果。这是研究在目前的研究中使用CPP过程。结果表明,小鼠表现出明显的偏好的2赫兹EA-paired隔间。这种奖励效应阻止EA的预处理与阿片受体拮抗剂纳洛酮[2毫克公斤⁻¹腹腔内(i.p)], CB1大麻素拮抗剂AM251 (3μg每鼠intracerebroventricularly)或多巴胺D1受体拮抗剂SCH23390(0.1毫克公斤⁻¹,分别i.p)。TempspacetempspaceIt得出2赫兹EA能够诱导CPP的老鼠通过激活内源性阿片样物质,大麻素和dopamine-systems。

1。介绍

电针刺激(EA),比手动针灸(更有效1],已被证明是一个安全、温和、有效的方法治疗各种各样的疾病或症状,如急性和慢性疼痛2]。我们最近的研究已经证明,EA也可以作为潜在的治疗阿片成瘾。例如,EA或穴位神经刺激可以改善戒断综合症和渴望毒品海洛因成瘾者(3- - - - - -5),抑制吗啡条件性位置偏爱(CPP)的表达在老鼠4- - - - - -6)和推迟复发药物在解毒重用以前的海洛因成瘾者(5]。值得注意的是,EA对吗啡CPP的表达的抑制作用可能是被阿片受体拮抗剂纳洛酮(1毫克公斤⁻¹腹腔内(i.p)),这表明这一效应是由内源性阿片系统可能通过μ受体(7]。此外,取得直接证据,低频率(2 Hz) EA可以增加释放肽在中枢神经系统,与之交互μ- - -δ阿片受体(8,9]。由于内源性阿片肽在中枢神经系统是已知的影响(10,11),我们想知道EA本身可能导致CPP。考虑到网络系统在中枢神经系统比较复杂,EA可以调解的效果不仅由内源性阿片系统也被一些其他相关系统在大脑中。因此,神经系统的参与建议自吗啡CPP的老鼠可能被SR141716A canabinoid受体1 (CB1)拮抗剂[12,13,多巴胺能传播的可能参与这一事实表明了EA-induced CPP被多巴胺D1受体拮抗剂(14]。神经系统和中脑边缘多巴胺系统然后被认为在目前的研究。

2。方法

2.1。动物

男性Sprague-Dawley老鼠(8 - 10-weeks-old)从北京大学实验动物中心,获得重180 - 220克的实验。动物被安置四个每笼十二12 h光/暗周期(灯07:00)可以使用食物和水。室温保持在研讨会°C和相对湿度45 - 50%。动物是在光线条件和测试阶段的周期。他们每天处理后的第一个星期的到来。实验过程都是动物使用委员会批准的北京大学健康科学中心。

2.2。Intracerebroventricular注入

动物与戊巴比妥钠麻醉(40毫克公斤⁻¹科夫立体定位i.p)和定位,乐器。24-gauge不锈钢引导插管被双边侧脑室的阿特拉斯Paxinos和沃森15]。坐标设置如下:0.8毫米后,前囱1.6毫米侧中线和4毫米腹侧表面的皮层。套管是由珠宝商的螺丝固定在头骨牙科丙烯酸。为了防止堵塞,不锈钢雌雄同体(计27日)被放置在引导插管,直到动物被给予intracerebroventricular (i.c.v)注入。所有的动物都被允许康复手术的5天。药物输注,动物是用手轻轻地克制;引导插管的雌雄同体被拆除,取而代之的是27-gauge注射针头,延长注射针0.5 mm以下提示引导插管的i.c.v.注入。每个i.c.v.注射单元是由聚乙烯管连接到一个10μl汉密尔顿注射器。侧脑室注入了一个4μl解决方案(4μl /鼠)在2分钟内。注射针被在一个额外的60年代允许扩散,然后是匕首被插入到引导插管。

2.3。药物

盐酸纳洛酮、SCH23390及eticlopride(美国所有来自σ)溶解在0.9%的盐水,分别和老鼠注射ip。AM251(英国布里斯托尔Avonmouth Tocris)溶解在99.9% DMSO(σ,圣路易斯,密苏里州,美国)i.c.v.注入。注射量是4μl 5紧随其后μl盐水冲洗,在3分钟完成。

2.4。条件性位置偏爱

空调是three-compartment装置中进行一个客观的设计。装置是一个长方形的黑色PVC盒(75×22×30厘米³门被送上断头台)分为三个室分开的。两个端室(30×22×30厘米³)用于调节连接由一个小中心室(15×22×30厘米³)。两个端钱伯斯互相区别在两个方面。有一群四个灯排列成正方形模式端墙和一个不锈钢网状层(1.3×1.3厘米³),而其他的墙上的灯排列成一个三角形形式和杆地板(1.3公分)16]。中心室有灰色的墙壁和光滑的地板上。15红外光束间距为5厘米是监测大鼠的运动。红外传感器的通信通过一个接口计算机每100毫秒。实验事件都是由计算机和自动控制和记录的接口是位于同一个房间。电脑也提供了连续的白噪声屏蔽外部声音。

CPP过程包括三个阶段包括检测前,调节和测试。开始之前的实验中,受试者每鼠(2分钟)处理每天两次(上午8点和下午2点)为5天。考前一天(0),老鼠分别放在断头台的中心室门。他们被允许自由地探索整个下半场会话器。每个舱的时间自动记录。老鼠花更多的时间(100岁以上)的结束比另一个室,和那些花费了超过300年代在中间室被排除在实验。未来10会话(每天两次)受试者收到double-alternating微分调节序列。在早晨,老鼠直接放置在车厢里指定为“non-EA”45分钟。下午(6 h后),老鼠接受EA和放置在车厢里指定为“EA”。每个调节会话后,老鼠回到家中的笼子里,整个装置清洗用酒精擦拭困气味降到最低。 On the test day (Day 6) 24 h after the last training, rats in every group were tested under the conditions used for pre-test without any treatment [16]。然后通过使用修正系数(修正系数= 900 /(时间EA-paired non-EA-paired舱+时间),中央室的时间按比例分成两个空调车厢。也就是说,每个空调室的纠正时间相当于记录时间乘以修正系数。所以总纠正时间总是在空调室相当于900年代,它是充分的分析所花费的时间在一个隔间17]。

2.5。电针刺激

老鼠在特殊的持有者与他们的后腿和尾巴暴露(9]。两个0.3毫米直径的不锈钢针插入穴位中的每个后腿ST36(5毫米外侧前胫骨结节)和SP6(3毫米近端向上级内踝的边境,在胫骨的后缘)。恒定电流方波电刺激是由汉斯lh - 800编程脉冲发生器(北京航天和航空航空大学,北京,中国)。EA是2赫兹的频率。强度逐步从0.5提高到1马,马在1.5结束,每一步持续10分钟。控制约束的不可避免的影响从EA治疗压力,限制组的受试者只是限制在30分钟的持有人。

2.6。数据分析

在CPP测试、数据的时间花在EA-paired舱被当作意味着±SEM。单向方差分析(方差分析)是用于分析所花费的时间在目标隔间。当发现显著差异,事后进行了分析使用Student-Newman-Keul的测试。统计学意义的接受水平P< . 05。

3所示。结果

举个测试表明,大多数动物(75%)花了等量的时间在两个终端室和更少的时间在小室中心的选择。预先测试后,几大鼠(25%),花更多的时间(100岁以上)的房间比其他结束,中间花了300年代>室被排除在实验中,所以我们的研究中使用的老鼠真的是无偏的偏好(数据未显示)。

3.1。EA本身可能诱发CPP

无偏条件,老鼠被分为三组:空白组、限制组和EA组。老鼠没有空白组治疗每个调节会话之前,老鼠克制组成员被克制了30分钟的持有者,没有和老鼠在EA组处理EA 30分钟前调节节中描述2。如图1,老鼠接受了EA治疗花了更多时间在EA-paired舱比空白和克制集团(P<。05、单因子变异数分析Student-Newman-Keul紧随其后的调节测试)后5天。

3.2。内源性阿片样物质卷入EA-Induced CPP

澄清如果内源性阿片与EA-induced CPP开发,我们首先测试如果纳洛酮政府,45分钟前放置到CPP训练室,可以引起厌恶属性。24老鼠被随机分为两组(纳洛酮和生理盐水)。后5天的条件,结果表明,大鼠纳洛酮治疗不能显示显著的CPA属性与生理盐水组相比(数据没有显示)。第二,另两组老鼠条件与EA为5天。一组(Nx + EA)收到纳洛酮(2毫克/公斤)15分钟每个EA治疗前,另一个收到了盐水注射(生理盐水+ EA)。空白组和克制组被用作控制。图2表明建立EA-induced CPP完全被纳洛酮。所花费的时间在EA-associated舱Nx + EA组明显低于生理盐水+ EA组(P< . 01),而不是明显不同于空白和克制集团(P> . 05)。

3.3。CB1拮抗剂AM251 EA-Induced CPP受损

探讨内源性大麻素是否参与EA-induced CPP,我们调查了AM251 CB1拮抗剂,EA-induced CPP的建立。44,老鼠都被分成了4组。每个EA会话前15分钟,DMSO + EA组处理DMSO (4μl DMSO, i.c.v),和其他三组不同剂量的AM251 (0.3、1、3μg / 4μ分别每鼠l)。结果如图3。一个i.c.v.注入AM251 (3μg,但不是0.3和1.0μg剂量)阻塞EA-induced CPP的建立。

3.4。多巴胺受体拮抗剂对EA-Induced CPP的影响

如图4,多巴胺D1受体拮抗剂SCH23390或其车辆注入每个EA前15分钟,这是表明SCH23390剂量依赖性降低EA-paired舱的时间。相比之下,D2拮抗剂eticlopride未能影响EA-induced CPP的表达式。

4所示。讨论

在目前的研究结果表明,2赫兹EA本身可以引起男性的条件优先EA-associated隔间Sprague-Dawley老鼠,这CPP举政府可能受损的纳洛酮(反对μ阿片受体),AM251 (CB1拮抗剂)和SCH23390 (D1拮抗剂)。这些发现表明,2赫兹EA可能产生奖赏效应通过激活内源性阿片样物质,大麻素,dopamine-systems在大脑的反馈回路。

加速脑啡肽的释放β刺激脑内啡在低频EA一再被证明在先前的研究8,18EA),而引发的内源性阿片类物质可能产生奖赏效应,由最近的一项研究显示,支持enkepahlins和内啡肽,但不是dynorphin,参与条件食品强化的调制(10]。阿片类药物的网站的行动回报进一步识别热点在伏隔核(NAc)和腹侧苍白球(VP)。阿片类药物在南汽和副总裁共同促进和奖励享乐的影响(“喜欢”)来激励动机(“希望”),而阿片类药物在南汽合作与其他大脑区域如外侧下丘脑、杏仁核和许多其他结构执行“想要”的行为(11]。此外,在目前的研究结果显示,剂量的纳洛酮(2毫克公斤⁻¹),足以阻止μ- - -δ阿片受体(19),可以阻止EA-induced CPP,但没有显著CPA财产,这是与以往的研究结果不一致20.,21]。这种差异可能主要是由于不同时间点的纳洛酮。在他们的作品中,纳洛酮(1或2毫克公斤⁻¹)2分钟前大鼠或小鼠注射进室。而在我们的研究中,老鼠收到纳洛酮注射前15分钟EA会话持续了30分钟,所以老鼠放入CPP培训室注射纳洛酮后45分钟。事实上,总监et al。21)已经表明,如果老鼠进行训练30分钟后纳洛酮(2毫克公斤⁻¹、i.p)治疗,他们不会表达厌恶属性了。

大脑中神经系统已被证明与阿片系统交互anti-nociception等许多生理活动(22),镇静/木僵[23- - - - - -26和奖励21]。后者表明大麻类和阿片类药物可能的奖励属性功能联系在一起。然而,它仍在争议是否连接串行或并行。有证据显示,收购吗啡引起的CPP(4毫克公斤⁻¹)可以剂量依赖性被pre-pairing管理CB1拮抗剂SR141716A(0.03 - 3毫克公斤⁻¹)在大鼠(12,13),这表明神经系统可能是下游的阿片类药物。也称CB1受体激动剂CP55,940可能引起CPP的剂量20μg公斤⁻¹,进而引起完全通过预处理2毫克公斤⁻¹烯丙羟吗啡酮(22),这意味着endocanabinoind系统内源性阿片系统的上游。没有迹象表明可以从我们的研究发现,在这方面,因为EA的奖赏效应可能被CB1 -或μ受体拮抗剂。

内源性阿片肽和阿片药物都知道提高DA的释放在南汽感应的奖励。如果EA可以激活两种阿片系统和endocannabioid系统,它也可以激活DA系统。事实上,据报道,EA可以调节中枢神经系统多巴胺的作用[27]。关于D1拮抗剂SCH23390, SCH23390记录,高剂量(0.5毫克公斤⁻¹)能引起注册会计师,而在我们的研究中,我们使用了相对较小的剂量(≤0.1毫克公斤⁻¹),这已被证明不是引起注册会计师(28]。目前的结果显示,2赫兹EA-induced CPP只能阻止多巴胺D1受体拮抗剂SCH23390,但不是D2拮抗剂Eticlopride,生理浓度有关,这表明D1受体可能在EA-induced CPP发挥更重要的作用。因为老鼠缺乏D2受体不能开发opioid-CPP,然而行为一样野生型老鼠在CPP范式当食物作为奖励刺激(29日EA),似乎更像一个自然比药物(如食物)奖励奖励。关于CPP的强度,而EA-induced CPP是一个统计上显著的和可再生的现象,它比吗啡CPP温和。

综上所述,自发现表明2赫兹EA可以诱导CPP,内源性阿片系统和神经系统都受牵连。两个系统的激活可能调节多巴胺系统,奖励提高联想学习的过程。