抗增殖活动肉桂的成分和影响Pifithrin-Alpha消息灵通的G2细胞凋亡信号通路

文摘

肉桂醛(Cin),肉桂酸(Ca)和苯丙烯醇(Cal)的主要成分肉桂,已被证明具有抗氧化、抗炎、抗癌等活动。在这项研究中,我们的目的是评估这些化合物在人类肝癌的抗增殖活动消息灵通的G2细胞并检查pifithrin-alpha(击球时的影响α;特定的p53抑制剂)凋亡的信号转导机制。抗增殖活动被XTT试验测量。apoptosis-related蛋白质的表达被免疫印迹检测。结果表明,在一个集中的30μM,消息灵通的G2细胞的抗增殖活动的秩序是Cin > Ca >卡尔。Cin (IC₅₀9.76±0.67μ米)展示了一个抗增殖能力一样好5 -氟尿嘧啶(抗癌药物;集成电路₅₀9.57±0.61μ米)。进一步的Cin的凋亡机制的研究表明,它表达下调Bcl -的表达_XL调节CD95 (APO-1)、p53和伯灵顿蛋白质,以及裂开保利(ADP-ribose)聚合酶(PARP)时间模式。击球αpre-incubation显著减少Cin-induced细胞凋亡的影响。它明显调节抗凋亡(Bcl -_XL)表达和表达下调pro-apoptotic(伯灵顿)表达式,以及有效地阻止CD95 (APO-1)和p53表达,和PARP乳沟Cin-treated细胞。本研究表明,Cin是最强有力的抗增殖成分c .桂皮消息灵通的G2细胞,其凋亡机制可以通过p53诱导和调节CD95 (APO-1)信号通路。

1。介绍

肉桂Presl。(樟科)传统上用于治疗消化不良、胃炎、血液循环障碍和炎性疾病1];这是一个重要的因素在草药制剂2,3]。其主要成分桂皮醛(Cin),肉桂酸(Ca)和苯丙烯醇(Cal)据报道,各种生物活动。例如,钙具有抗氧化、抗炎和抗癌特性4- - - - - -6]。卡尔是一种香味成分,用于化妆品、洗发水、肥皂和其他化妆品7]。Cin表现出抗真菌,退热剂,抗氧化剂,抗菌和杀灭幼虫的活动(8- - - - - -10),以及调节t细胞分化[11]。在抗癌的研究中,Cin积极反对人类肝脏,肺癌和白血病癌细胞(12- - - - - -14]。然而,antihepatoma活动和Cin的作用机制(s), Ca和卡尔在消息灵通的G2细胞从来没有被调查。

在我们之前的研究中,p53诱导和MAPK通路被证明需要Cin-mediated凋亡的PLC /脉冲重复频率/ 5细胞(14]。在这项研究中,我们审查的anti-hepatoma活动c .桂皮生物活性成分在消息灵通的G2细胞系。消息灵通的G2细胞是高度分化的细胞(15),而PLC /脉冲重复频率/ 5分裂较少但高度迁移肝癌细胞(16]。它功能上的表现是高度分化的肝实质细胞和karyologically区分从PLC /脉冲重复频率/ 5由于存在三染色体细胞6 (pt导致q14)和15号染色体的长臂q + (15]。消息灵通的G2不PLC /脉冲重复频率/ 5细胞分泌IGF载体蛋白(17)和生产α2-plasmin抑制剂(α生理-π)抑制剂(18]。PLC /脉冲重复频率/ 5细胞具有突变或null p53蛋白而消息灵通的G2细胞有野生型p53蛋白(14,19]。

细胞凋亡过程中,细胞死亡是通过激活以有序的方式发起和完成和/或基因产物的合成所必需的细胞破坏(20.]。p53直接激活启动子的CD95 (APO-1)基因在DNA损伤反应的抗癌剂。的upregulation CD95 (APO-1)死亡受体与野生型p53只观察到细胞,但细胞p53突变或null (19]。激活p53(肿瘤抑制蛋白)是已知的导致各种基因的转录改变涉及sensing新陈代谢,细胞周期调控和细胞凋亡21,22]。pro-apoptotic(伯灵顿,贝克,报价,病因,等等)和抗凋亡(Bcl - 2, Bcl -_XL,mcl1 Bcl-w等)已报告蛋白是细胞凋亡的主要监管机构(23]。由p53基因转录调节与促进细胞凋亡,其中包括bcl - 2家族成员(如伯灵顿,Bak)和病因基因蛋白(24- - - - - -26]。的p53-dependent凋亡途径可能导致细胞蛋白质解理(例如,PARP), DNA损伤和细胞死亡。

Pifithrin-alpha(击球α;p53抑制剂)能够抑制p53-mediated transactivation [27]。它大大减少了p53表达野生型p53细胞,但没有影响p53突变细胞或p53-deficient细胞(28]。在这项研究中,我们的目标是(我)评估的抗增殖活动Cin, Ca和卡尔在人类肝癌消息灵通的G2 (CD95-positive)细胞;(2)调查p53的角色,Bcl - 2家族蛋白质(伯灵顿和Bcl -_XL)和PARP Cin-mediated细胞凋亡;和(3)来研究击球时的影响αp53、bcl - 2家族蛋白质,以及在消息灵通的G2细胞PARP乳沟。

2。方法

2.1。化学物质

Cin, Ca和卡尔纯度大于98%的人从默克公司购买化学工业公司(德国)。Pifithrin-alpha(击球α)从Calibiochem购买(美国圣地亚哥,CA)。杜尔贝科修改鹰的介质(DMEM)、二甲亚砜(DMSO)、青霉素、链霉素、aprotonin, trypsin-EDTA钠3 3′- (1 - (phenylaminocarbonyl) 3, 4-tetrazolium) -国际清算银行(4-methoxy-6-nitro)苯磺酸(XTT) 5-flurouracil (5 fu)和反β肌动蛋白的身体从西格玛化工有限公司购买(圣路易斯,密苏里州,美国)。胎牛血清(的边后卫)获得GIBCO BRL(盖瑟斯堡,医学博士,美国)。anti-Bax anti-Bcl -_XLanti-CD95 (APO-1 / CD95)、anti-p53 anti-PARP, anti-rabbit免疫球蛋白和anti-mouse免疫球蛋白尸体从PharMingen购买(美国圣地亚哥,CA)。

2.2。细胞培养的准备和测试解决方案

人类肝癌消息灵通的G2细胞(写明ATCC hb - 8065)从美国获得类型文化集合(罗克维尔市,医学博士,美国)。他们生长在DMEM补充10%的边后卫,100毫升⁻¹青霉素和100克毫升⁻¹链霉素在37°C在湿润的气氛中5%的有限公司₂。股票的解决方案都是准备在DMSO浓度的10毫米,储存在-20°C,直到使用。测试化合物的浓度用于本研究1、10、30、50和70米,刚做好每个实验,最终DMSO浓度的0.1%。控制样品总是接受相同数量的DMSO (0.1% v / v)为相应的实验中使用。

2.3。抗增殖活动的分析

细胞被播种密度1×10⁵细胞每12-well板块。然后他们被处理各种浓度的Cin, Ca,卡尔或0.1% DMSO(控制)为0,6、12和24小时。治疗后,细胞被洗过一次增加100L FBS-free介质包含XTT,其次是酝酿在37°C 4 h。测定样品的吸光度与ELISA阅读器(美国Bio-Rad)的测试波长492 nm和参考波长690 nm)。

2.4。Pifithrin-alpha(击球α;p53抑制剂)治疗

细胞向正常生长抑制剂治疗前。融合性的细胞在每个实验中进行1 h和30M击球α溶解在DMSO溶液。细胞治疗与30M Cin或0.1% DMSO(控制)24 h,然后收获凋亡检测。抑制剂准备根据制造商的指示。在所有的实验中,所使用的车辆准备股票的解决方案是注意到在细胞生存能力没有影响。

2.5。分析击球α对Cin-Induced细胞凋亡的影响

细胞被播种密度1×10⁵细胞每到12-well板块。他们接受0.1% DMSO(控制)或30M Cin只有30或使用M击球α1小时前增加30M Cin。经过24小时的治疗,细胞被洗过一次增加100L(包含XTT FBS-free介质。4 h孵化后37°C,测定样品的吸光度与ELISA读者。

3所示。西方免疫印迹分析

细胞收获和接受过程前面描述的(14]。本研究中使用的特定抗体主要anti-Bax (1: 250), anti-Bcl -_XL(1:500),anti-CD95 / APO-1 (1: 5000), anti-p53(1: 500)和anti-PARP(1: 500)抗体。

3.1。统计分析

值是由单向方差分析评价,其次是邓肯的多个范围测试使用统计分析系统(SAS研究所卡里、数控、美国)。差异被认为是重要的时P价值是< . 05。

4所示。结果

4.1。抗增殖活动Cin, Ca和卡尔在消息灵通的G2细胞

检查Cin的抗增殖作用,Ca和卡尔消息灵通的G2细胞,细胞治疗使用XTT测定不同浓度的这些化合物。结果表明,所有测试化合物表现出对玫瑰G2细胞的生长抑制的影响,集成电路₅₀值为9.76±0.67M Cin, 34.20±0.99Ca和58.30±1.49米卡尔(图1)。Cin的效力被关闭的积极控制5 FU (IC₅₀9.57±0.61米)。因此,它被选为凋亡机制的详细研究。

4.2。抑制细胞增殖的Cin

如表所示1,Cin抑制消息灵通的G2的增殖细胞剂量和时间的方式。与控制相比,Cin在30岁M造成近71%抑制细胞生长,在凋亡细胞的数量显著增加。这个浓度Cin的所有进一步的实验中使用。

4.3。CD95 (APO-1 / CD95)参与Cin-Induced细胞凋亡

CD95 (APO-1 / CD95)通路已经有据可查的参与某些抗癌药源性细胞凋亡。在这项研究中,结果表明,Cin CD95造成时间增加(APO-1 / CD95)蛋白表达在消息灵通的G2细胞(图2)。

4.4。Cin治疗会使Bcl -_XL和移植伯灵顿和p53蛋白的水平

治疗30M Cin的差别导致了对这些抗凋亡(Bcl -_XL)的upregulation pro-apoptotic(伯灵顿)蛋白质在时间的方式(图2)。Bcl -的表达_XL蛋白质是指出24 h (Cin)治疗后消失。正如所料,Cin并导致p53的水平增加消息灵通的G2细胞含有野生型p53。

4.5。Cin-Induced凋亡展品PARP乳沟

为了进一步确认Cin-induced细胞凋亡,细胞治疗Cin为0,6、12和24小时。PARP乳沟是由免疫印迹分析。结果表明,PARP proform(分子质量116 kDa)裂解给85 kDa的片段在Cin-treated细胞(图12和24 h后治疗2)。

4.6。Pifithrinα(击球α)防止Cin-Induced细胞凋亡

确定Cin诱导的细胞凋亡影响的存在30M击球α,消息灵通的G2细胞pre-incubated击球α以1 h,然后诱导凋亡治疗Cin。结果表明,击球α显著(P< . 05)抑制了Cin-induced消息灵通的G2细胞死亡(图3)。

4.7。击球α抑制的表达CD95 (APO-1 / CD95)、p53和伯灵顿蛋白质

评估的相对作用CD95 (APO-1 / CD95)、p53、Bcl - 2家族(伯灵顿,Bcl -_XL)蛋白质和PARP乳沟Cin-induced凋亡事件,细胞被使用在击球α。结果显示,与30 pre-incubation消息灵通的G2细胞M击球α单独和30M击球α+ 30M Cin有效地抑制了伯灵顿的表情,p53和CD95以及PARP(图的乳沟4)。这些预处理的差别也阻止了对这些基因Bcl -_XL在细胞。

5。讨论

我们已经证明的主要组件c .桂皮,Cin, Ca和卡尔具有不同程度的抗增殖作用对人类肝癌消息灵通的G2细胞。其中,Cin是最有效的化合物,它表现出一个集成电路₅₀封闭的商业价值抗癌剂5 -氟尿嘧啶。

Cin已被证明具有抗肿瘤活性通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡29日- - - - - -31日]。其抑制作用在细胞周期进程通过逮捕了被证明是人类PLC /脉冲重复频率/ 5 S期细胞(31日]。在这项研究中,Cin在消息灵通的G2的影响细胞凋亡被指出在CD95 (APO-1 / CD95)信号转导和p53通路。也发现,预处理与p53抑制剂(击球α)可以阻止细胞程序性死亡的过程,防止凋亡信号转导通路。

多项研究表明,蛋白质的bcl - 2家族是凋亡的中央监管(32,33]。过度的Bcl - 2和Bcl -_XL中止的凋亡反应虽然伯灵顿,报价和贝克活动促进细胞死亡(32]。我们的结果显示,Cin激活野生型p53和引起了up-expression伯灵顿以及触发Bcl -的抑制_XL的后续推广消息灵通的G2细胞凋亡活动。p53报道调解伯灵顿upregulation [25]。伯灵顿的Cin-mediated激活可能触发PARP的乳沟,导致p53-dependent通路。野生型p53的凋亡诱导细胞也被提到在台湾大,藤黄酸(34,35]。

击球α,小分子抑制剂的p53转录活动,已被证明能够防止有毒副作用的抗癌治疗正常组织(36,37]。它也可能干扰肿瘤细胞的凋亡中DNA损伤反应基因毒性压力(38]。在这项研究中,击球α能够完全抑制CD95调制(APO-1 / CD95)、p53和伯灵顿蛋白质,抑制PARP乳沟的Cin-treated细胞。这表明击球α显著预防Cin-mediated通过阻断细胞凋亡的表达凋亡信号等因素CD95 (APO-1 / CD95),伯灵顿,p53和PARP退化在消息灵通的G2细胞(图5)。

6。结论

的主要组件之一c .桂皮,Cin已经证明拥有最强有力的抗增殖活动消息灵通的G2细胞。这是第一个研究证明CD95的角色(APO-1 / CD95)和p53 Cin-induced凋亡信号。此外,击球α被发现明显阻止Cin-induced凋亡通过上调抗凋亡(Bcl -_XL),表达下调pro-apoptotic(伯灵顿)蛋白,以及抑制PARP乳沟。重要的是,击球α完全减毒的激活CD95 (APO-1 / CD95)和p53在Cin-treated细胞。这些结果表明,调制的凋亡通路通过CD95 (APO-1 / CD95), p53, PARP乳沟和bcl - 2家族蛋白信号转导可能是一个重要的治疗目标在癌症的预防和治疗。

承认

作者要感谢贾南药房和科学大学这项研究的部分资金。

引用

1. z .问:卢和秦,物种分类和质量评价常用的中国传统药物,卷1,北京大学医学出版社,北京,中国,1995。
2. j .守屋z诗杰(j . Yamakawa r . Chen t .高桥和h . Sumino则”,毛泽东延长,降低TNF -的生存$\alpha$表达与病毒性心肌炎小鼠,“以证据为基础的补充和替代医学,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. f·p·陈,m . s . Jong, y . c . Chen y y, t·j·陈,陈和f . j .,”台湾的中国草药处方失眠在2002年期间,“以证据为基础的补充和替代医学,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. l . p .张和z z霁”,肉桂酸合成、抗炎、抗癌活动,他们的衍生物和类似物,”姚雪雪包27卷,第823 - 817页,1992年。视图:谷歌学术搜索
5. y Akao, h . Maruyama k松本et al .,“细胞生长抑制作用的肉桂酸衍生物蜂胶对人类肿瘤细胞系,”生物和医药公告,26卷,不。7,1057 - 1059年,2003页。视图:谷歌学术搜索
6. m . c . Foti c Daquino, c . Geraci“电子转换反应的甲基肉桂酸及其酯${\text{DPPH}}^{•}$激进的酒精的解决方案,”《有机化学》杂志上卷,69年,第1214 - 2309页,2004年。视图:谷歌学术搜索
7. c·s·莱蒂齐亚j . Cocchiara j . Lalko a . Lapczynski和a . m . Api,“香肉桂醇材料审查,”食品和化学毒物学,43卷,不。6,837 - 866年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. c c。林,S.-J。吴,学术界。常,L.-T。Ng,“肉桂的抗氧化活性,植物疗法的研究,17卷,不。7,726 - 730年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. s . s . Cheng j.y.刘,k h .蔡w·j·陈,s . t . Chang精油化学成分和蚊虫杀灭幼虫活动从不同的叶子Cinnmomum osmophloeum产地。”农业与食品化学杂志》上52卷,第4400 - 4395页,2004年。视图:谷歌学术搜索
10. H.-O。金,S.-W。公园和》。公园,“失活大肠杆菌O157: H7的肉桂醛纯化肉桂射击,”食品微生物学,21卷,不。1,第110 - 105页,2004。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. b . m . w . s . Koh郑胜耀尹,Kwon t·c·宋,k . s .南和m . y .汉“肉桂醛抑制淋巴细胞增殖,调节t细胞分化。”国际免疫药理学杂志》上,20卷,不。11日,第660 - 643页,1998年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. k . h .月亮和m . y .包”,肉桂醛在白血病L1210细胞的细胞毒性,”药物和化学毒物学》第六卷,没有。6,521 - 535年,1983页。视图:谷歌学术搜索
13. t . Imai k . Yasuhara t田村et al .,“抑制性影响肉桂醛的4 - (methylnitrosamino) 1 - (3-pyridyl) 1-butanone-induced rasH2小鼠肺部致癌作用,”癌症的信,卷175,不。1,9到16,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. S.-J。吴和L.-T。Ng”、MAPK抑制剂和pifithrin-alpha块cinnamaldehyde-induced细胞凋亡在人类PLC /脉冲重复频率/ 5细胞,”食品和化学毒物学,45卷,不。12日,第2453 - 2446页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. d·西蒙·d·p·亚丁湾,比比诺尔斯,“人类肝癌细胞株染色体,”国际癌症杂志》上,30卷,不。1,即,1982页。视图:谷歌学术搜索
16. i Zvibel、大肠Halay和l·m·里德“肝素和荷尔蒙调节信使rna合成和大量的自分泌生长因子:与克隆、肿瘤的生长”分子和细胞生物学,11卷,不。1,第116 - 108页,1991。视图:谷歌学术搜索
17. a·c·摩西,a·j·弗赖恩克尔比比诺尔斯,和d·p·亚丁湾,“证明人类肝癌细胞株产生特定的胰岛素样生长因子载体蛋白,”临床内分泌和代谢杂志》上卷,56号5,1003 - 1008年,1983页。视图:谷歌学术搜索
18. h .齐藤l . t . Goodnough比比诺尔斯,和d·p·亚丁湾,”阿尔法2-plasmin抑制剂的合成和分泌人类肝细胞株,建立“美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国卷,79年,第5687 - 5684页,1982年。视图:谷歌学术搜索
19. m·穆勒,怀尔德,d . Bannasch et al .,“p53激活CD95 (APO-1 / Fas)基因在DNA损伤反应的抗癌药物,”实验医学杂志,卷188,不。11日,第2045 - 2033页,1998年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. 黄j . l .吴s i Tashiro s Onodera和t . Ikejima“活性氧介导oridonin-induced消息灵通的G2凋亡通过p53、MAPK,和线粒体信号通路,”药理科学杂志》卷,107年,第379 - 370页,2008年。视图:谷歌学术搜索
21. Y.-J。李,H.-C。郭,彭译葶。楚,C.-J。王,观测。林,郭宏源。曾先生,”参与肿瘤抑制蛋白p53和p38 MAPK的咖啡酸苯乙基ester-induced C6神经胶质瘤细胞凋亡,”生化药理学,卷66,不。12日,第2289 - 2281页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. 白和ai Cederbaum,“环己酰亚胺保护从血清withdrawal-induced HepG2细胞凋亡减少p53和p53磷酸化水平,”药理学和实验治疗学杂志》上,卷319,不。3、1435 - 1443年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. j·m·亚当斯和s·科里,bcl - 2蛋白家族:仲裁者的细胞生存,”科学,卷281,不。5381年,第1326 - 1322页,1998年。视图:谷歌学术搜索
24. 富尔达,e·迈耶,K.-M。CD95 Debatin”,代谢抑制剂进行宣传(APO-1 / Fas)全身的细胞凋亡,显示Fas-associated死域白介素1-converting酶抑制蛋白表达,“癌症研究,60卷,不。14日,第3956 - 3947页,2000年。视图:谷歌学术搜索
25. n . o . Karpinich m .法尼r·j·罗斯曼m·a·罗威和j·l·法伯”的etoposide-induced DNA受到损伤的细胞凋亡和p53激活线粒体释放细胞色素c”,《生物化学》杂志上卷,277年,第16552 - 16547页,2002年。视图:谷歌学术搜索
26. c·波尔纳“bcl - 2蛋白家族:传感器和检查点的生死攸关的决定,”分子免疫学,39卷,不。11日,第647 - 615页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. p·g·科马罗夫·e·A·Komarova r . v . Kondratov et al .,“化学抑制剂的p53保护小鼠免受癌症治疗的副作用,”科学,卷285,不。5434年,第1737 - 1733页,1999年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. j . f . Charlot m . Nicolier j·l·Pretet和c·摩根,”调制的p53 PRIMA-1和Pifithrin——转录活动αstaurosporine-induced凋亡的野生型和突变p53上皮细胞,”细胞凋亡,11卷,不。5,813 - 827年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. b m。Kwon工程学系。李,美国美国崔et al .,”合成和在体外细胞毒性的肉桂醛人类实体瘤细胞。”档案调药的研究,21卷,不。2、147 - 152年,1998页。视图:谷歌学术搜索
30. S.-J。吴,L.-T。Ng, c c。林:“维生素E对cinnamaldehyde-induced凋亡机制在人类的PLC /脉冲重复频率/ 5细胞,”临床和实验药理学和生理学没有,卷。31日。11日,第776 - 770页,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. S.-J。吴,L.-T。Ng, c c。林,”Cinnamaldehyde-induced细胞凋亡在人类的PLC /脉冲重复频率/ 5细胞通过激活proapoptotic bcl - 2家族蛋白质和MAPK通路,”生命科学,卷77,不。8,938 - 951年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. 科里和j·m·亚当斯”BCL2家庭:监管者的细胞生死攸关的开关,“自然评论癌症,卷2,不。9日,第656 - 647页,2002年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. w . Yu b·g·桑德斯和k·克莱恩,“存款准备金率α生育酚succinate-induced人类乳腺癌细胞凋亡是伯灵顿易位线粒体,”癌症研究,卷63,不。10日,2483 - 2491年,2003页。视图:谷歌学术搜索
34. P.-J。Ho C.-K。周,中州。郭,L.-C。你和S.-F。叶,“台湾大诱导细胞周期阻滞和p53-dependent人类肝癌细胞凋亡HepG2细胞,”生命科学,卷80,不。5,493 - 503年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. h·顾x, s . Rao j . Wang j .赵和f . l .任“藤黄酸介导细胞凋亡作为mdm2在野生型p53诱导物通过下调p53-expressing癌细胞,”分子癌症治疗,10卷,第3305 - 3298页,2008年。视图:谷歌学术搜索
36. “e·a·Komarova和a . v .古德考夫p53的抑制:新方法克服抗肿瘤治疗的副作用,”生物化学,卷65,不。1,41-48,2000页。视图:谷歌学术搜索
37. “e·a·Komarova和a . v .古德考夫保护以免于p53-dependent凋亡:p53抑制剂的临床应用潜力,”生化药理学,卷62,不。6,657 - 667年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. e·洛伦佐c . Ruiz-Ruiz a . j . Quesada et al .,”阿霉素诱导细胞凋亡和CD95在人类主要通过p53-dependent内皮细胞基因表达机制,“生物化学杂志,卷277,不。13日,10883 - 10892年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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