在体外Ultramorphological罂Acid-Rich引起的细胞凋亡在河北的评估分数Typhonium flagelliforme块茎

文摘

这种植物Typhonium flagelliforme,俗称“啮齿动物块茎”在马来西亚,通常是用作健康补充和替代癌症治疗的传统疗法,包括白血病。本研究旨在评估在体外anti-leukemic活动二氯甲烷提取/分数7号(DCM / F7)t . flagelliforme人类T4 lymphoblastoid块茎(cems)细胞系。DCM提取块茎的分馏柱层析法。获得的分数进行评估对cems的细胞毒性细胞以及人类主要血液淋巴细胞(人外周血)。评估产生的细胞凋亡最活跃的一部分被各种显微技术评估,进一步确认细胞凋亡是由末端转移酶的dUTP尼克结束标记(TUNEL)测定。植物化学的筛选是由气相色谱分析-质谱法(gc - ms)。结果表明,7的12分数显示明显的细胞毒性对选中的细胞系cems,分数DCM / F7, DCM季和3 DCM / F12显示异常活动,5和6.2克毫升⁻¹,分别。进一步研究癌变PBL方面表现出显著的选择性的DCM / F7相比其他分数。细胞学观察表明染色质缩合,细胞收缩,异常的嵴膜起泡、细胞质和凋亡形成机构double-staining证实了集体的吖啶橙(AO) / propidium碘(π)、SEM和TEM。此外,DCM / F7增加了细胞治疗的细胞DNA断裂。气显示,DCM / F7含有亚油酸、棕榈酸和9-hexadecanoic酸。目前的结果表明,t . flagelliforme拥有一个有价值的anti-leukemic效应和能够产生独特的形态学特征对应于细胞凋亡的细胞死亡。

1。介绍

属Typhonium最近获得良好的分类和药理的关注。这种植物是天南星科植物家族的一员。天南星科植物的特点是偶尔美丽奇特苞和纤维的组合称为inflorescenceis,用于捕获他们的传粉者,因为他们的特定的形态和组织他们的花序(1]。Typhonium在马来西亚低地物种是常见,经常发现在不安的地方2]。这种植物t . flagelliforme,俗称“啮齿动物块茎”在马来西亚,通常是作为另类癌症治疗的传统疗法,包括白血病在内的各民族人口(3]。这种植物广泛分布于软、潮湿,阴暗的栖息地在东南亚,甚至扩展到澳大利亚北部和南印度4]。Typhonium flagelliforme目前商用医疗补充治疗乳腺癌、肺癌、直肠癌、肝癌、前列腺癌、胰腺癌和宫颈癌症和白血病(5]。

最近获得的方法证明了几个DCM和正己烷提取物的分数t . flagelliforme被发现抑制NCI-H23非小细胞肺癌细胞系的生长明显;然而,大多数这些活跃的分数也发现抑制非致瘤性的生长Bagg白化BALB / c 3 t3(小鼠成纤维细胞系4]。一项研究报道,己烷提取的t . flagelliforme呈现出可怜的细胞毒性的活动在体外P388小鼠白血病细胞(6]。较低的细胞毒性活动表现出了这种植物的极地分数在体外(7),发现提供救济在咳嗽和哮喘8]。老鼠还表示,药理研究t . flagelliforme汁提取可以防止hepatocarcinogenesis [4]。

植物天然产物是生物活性化合物的有价值的来源和应用在几乎所有的文化和社区几千年来(9]。之前与植物化学的研究t . flagelliforme透露一些化学成分。据报道,己烷提取物含有饱和烃和脂肪酸成分(7),而乙酸乙酯提取物被发现含有芳香脂肪酸(10),整个植物展品的DCM提取棕榈酸的存在,1-hexadecene、叶绿醇、叶绿醇的衍生物(4]。此外,phenylpropanoid苷、甾醇类和一个脑苷脂anti-hepatotoxic活动也报告了这种植物的根(11]。

替代药物在世界各地得到广泛应用(12,13]。一些天然植物目前正在广泛用于食品和保健品,帮助对抗癌症/肿瘤和刺激免疫。在任何情况下,补充和替代药物的使用在现代医学尚未作为流行,直到最近。这可能是最有可能由于缺少足够的生物学证据说明其功能机制。但在过去的几十年里,补充和替代医学(CAM)的价值已经被许多现代科学研究人员发现,和众多的研究建立了草药制剂的潜在用途14,15]。然而,研究需要了解进一步的使用替代疗法,包括卫生保健食品补充剂(维生素、抗氧化剂和脂肪酸)和草药制剂在治疗癌症,特别是使用这样的益处和风险可食植物疗法治疗。很少有文献上可用的机理t . flagelliforme及其对其他癌症的影响。在这项研究中,我们旨在建立这种植物之间的关系对白血病及其抗癌作用,对细胞死亡的机制和可能的植物化学物质。

2。方法

2.1。植物材料

Typhonium flagelliforme(Lodd)。布卢姆(天南星科)整个植物(叶片和块茎)收集2008年7月从雪兰莪州,马来西亚。身份验证是理学院,大学Putra马来西亚,凭证标本TF-TL100156沉积。

2.2。提取t . flagelliforme块茎

新鲜植物收获和洗用自来水和蒸馏水,彻底其次是块茎分开天线部分干燥之前。块茎被风干,然后烤箱干(12月7 Memmert模型100 - 800年,德国)在较低的温度。完全干燥块茎粉和冷浸渍前称重。块茎粉被提取与己烷删除非极性分数,然后与扩张型心肌病治疗。7天的DCM抽提是偶尔摇晃(瓶的埃德蒙•巴克勒、模型KS-15 Hechingen,德国)和过程重复3次。合并后的提取是通过绘画纸41号滤纸过滤(孔隙大小:20 - 25μ米)和真空干燥使用旋转蒸发器(Postfach Buchi, r - 210,瑞士),体重来计算提取的收益率。提取被保持在4°C,直到进一步的要求。

2.3。DCM的分离提取

DCM提取(2 g)t . flagelliforme块茎由真空分馏液相色谱(VLC)。固定相是由玻璃列挤满了硅胶60 PF_254年与石膏(默克公司,达姆施塔特,德国)。己烷的流动相组成的组合,乙酸乙酯和甲醇洗脱溶剂强度逐渐增加,增加更多的极性溶剂的成分。纯化的提取物,最初的溶剂成分是乙酸hexane-ethyl (9: 1 v / v;1000毫升),然后改为hexane-ethyl醋酸(7:3 v / v;1000毫升),其次是hexane-ethyl醋酸(1:1 v / v;1000毫升)、乙酸乙酯(500毫升),最后甲醇(500毫升)。100毫升的洗脱液收集在分数。每个部分的化学成分是评估使用薄层色谱法(TLC)和可视化与紫外(UV)光(254 nm和365 nm)。基于薄层色谱资料,这些分数与类似的作品汇集在一起,集中在减少压力。总共12个组合得到了分数和指定为DCM / F1, DCM / F2,…, DCM / F12。每个分数的屈服值被记录(表1)。

2.4。细胞生存能力分析

人类T4-lymphoblastoid细胞系提供了cems的国立卫生研究院(NIH)艾滋病研究和参考试剂项目,艾滋病、分工NIAID, NIH:美国,用于本研究(订单:20081911)。细胞悬液(010万毫升细胞⁻¹镀)到96 -微量滴定板。所有的12个分数都溶解在二甲亚砜(DMSO)和最后的DMSO溶液的浓度是0.1% (v / v)。不同浓度的样品是用连续稀释。二甲亚砜(0.1%)被用作控制。

毒性资料的分数是评估使用3 - 4 5-dimethylthiazol-2-yl 2, 5-diphenyltetrazolium溴化(MTT)微量培养四唑可行性分析(16]。此后,不同浓度的样品镀一式三份。每个板块包括未经处理的细胞颗粒控制的控制和一个空白。68 h孵化后,MTT(5毫克毫升⁻¹)被添加到每个和进一步的盘子孵化4 h和媒体移除。DMSO后来被添加到每个溶解甲瓒晶体。吸光度是阅读的波长595 nm使用微量滴定板读者(Tecan日出基本、Groedig、奥地利)。细胞生存能力的百分比计算考虑通过适当的控制。浓度,抑制细胞生长的50% (IC₅₀值)。每个提取的所有实验进行了一式三份。细胞增殖的抑制率是由以下公式计算:增长抑制=−OD对OD控制/ OD控制×100。样品癌细胞的细胞毒性是表示为IC₅₀的吸光度值(药物浓度减少50%的细胞治疗对未经处理的细胞)。

2.5。选择分数的影响刺激(扩散)主要人血淋巴细胞

自原油DCM提取IC展出₅₀价值6克毫升⁻¹,这些分数的DCM提取显示集成电路₅₀价值低于这个浓度对正常细胞用于研究,如前所述,肖恩et al。17与一些细微的修改。因此比较选择的分数的影响,DCM / F7, DCM /季和DCM / F12在白血病细胞(cems)对等效非癌症细胞的影响,其影响主要人血淋巴细胞(人外周血)被调查。离心管(尺寸:25毫升)充满了10毫升淋巴细胞分离介质(PAA、派斯克、奥地利)。未稀释的肝素化全血然后小心地倒在lymphocyte-separation解决方案。分离过程是由离心20分钟的1200×g。淋巴细胞(70 - 100%浓缩)集中在等离子体之间的间期(白色层)和分离的解决方案。他们随后提取仔细使用无菌巴斯德吸管和在培养基洗两次。文化媒体使用量子PBL媒体含有10%胎牛血清和100 U ml(的边后卫)补充⁻¹青霉素,100μ克毫升⁻¹链霉素和植物凝集素(PHA) 10毫米(PAA、派斯克、奥地利)37°C 5%二氧化碳(有限公司₂)的气氛。与1×10的玻璃瓶被播种⁶细胞和治疗的分数与各自的IC₅₀细胞浓度对河北72 h。0.1%的负控制使用了v / v DMSO溶液。三个独立单独为每个暴露试验。72 h的暴露后,细胞收获之后,测试对淋巴细胞细胞细胞毒性的证据是由台盼蓝排斥试验。台盼蓝排斥试验检测只有死细胞受损细胞膜(坏死细胞),因为台盼蓝不渗透活细胞(18]。

2.6。识别和生物活性的化学分析部分采用气相

分析了生物活性DCM / F7 gc - ms GC-17A岛津制作所。BP-X5毛细管柱(30米0.25毫米身份证0.25 lm膜厚度)是用于气相色谱分析物的分离。注射量是125 l的分流比:1;喷油器温度保持恒定在250°C。氦是用作载气入口压力的46.9 kPa,对应1.0毫升的流量最小⁻¹。柱温箱的温度是35°C(3分钟)举行,提出8°C min⁻¹到280°C(3分钟)举行,最后举行300°C,持续15分钟。质谱仪的操作在电子轰击(EI)模式70 eV的电离能。转让行被设定为290°C。分析物的化学成分被确定通过对比女士分裂模式与NIST / EPA / NIH质量的特殊数据库库气系统。

2.7。显微镜使用相差倒置显微镜观察细胞形态

分析检查是否细胞凋亡可能参与调节细胞死亡在河北细胞引起的分数t . flagelliforme块茎。DCM / F7选择在这个分析中,由于这部分显示最低的IC₅₀较高的选择性与其他分数。治疗细胞的形态外观与未经处理的控制通过使用普通倒置显微镜。细胞的形态改变普通倒置显微镜下观察治疗后(19]。的集成电路₅₀扩张型心肌病的价值/ F7随后被用于这项研究。人类T4-lymphoblastoid细胞系(cems)治疗的一部分48和72 h。未经处理的细胞作为消极的控制。

2.8。量化的使用Propidium碘和吖啶橙Double-Staining细胞凋亡

DCM / F7-induced细胞死亡在河北白血病细胞是量化使用propidium碘(π)和吖啶橙(AO) double-staining根据标准程序和荧光显微镜下检查(Lieca附有Q-Floro软件)。简单,治疗进行了25毫升培养瓶(Nunc、鲁开德、丹麦)。河北细胞被镀1×10的浓度⁶细胞毫升⁻¹和治疗扩张型心肌病/ F7 IC₅₀浓度。烧瓶在大气中5%的孵化有限公司₂在37°C 24和48 h。细胞被旋转300 g×10分钟。浮在表面的丢弃,细胞被洗两次使用磷酸缓冲盐(PBS)离心法在300 g×10分钟后去除剩余的媒体。10毫升水中包含AO荧光染料(10μ克毫升⁻¹)和π(10μ克毫升⁻¹)被添加到细胞颗粒体积相等。刚染色细胞悬液放入载玻片和盖玻片覆盖。幻灯片UV-fluorescence显微镜下观察前30分钟内荧光颜色开始消退。可行的百分比,凋亡早期,晚期凋亡和继发性坏死细胞测定在> 200个细胞。AO和π插入核酸acid-specific荧光染料的发射绿色和橙色荧光,分别时绑定到DNA。的两个,只有AO可以交叉可行和早期凋亡细胞的质膜。识别的标准如下:(i)可行的细胞似乎绿核完整结构;(2)早期凋亡表现出一个绿色的核显示细胞核染色质凝结;(3)密集的橙色区域的染色质凝结显示晚期凋亡和橙色(iv)完整的核描绘继发性坏死(20.]。这个试验提供了一个有用的定量评价和在一式三份(n= 3)。

2.9。外部对河北细胞超微结构影响的DCM / F7 (SEM)

河北细胞培养集成电路₅₀DCM / F7和孵化24和48 h。癌细胞在500×g离心10分钟。颗粒固定在4% (v / v)戊二醛在0.1 M coccadylate缓冲区(pH值:7.4)为4 h, 4°C。固定细胞被洗了三个变化的钠coccadylate缓冲了10分钟,你找找1%锇tetraoxide在4°C。钠的标本被洗了三个变化coccadylate缓冲区(pH值:7.4)10分钟,在提升等级的丙酮脱水(35岁,50、75、95和100%),并带到临界点干燥的临界点干燥机(CPD 030、Bal-TEC Balzer说,瑞士)30分钟。细胞被固定在一个金属SEM存根和黄金sputter-coated利用SEM涂料单位(E5100极化子,西萨塞克斯郡,英国)。涂布标本被认为使用扫描电子显微镜(JOEL 64000年,东京,日本)15 - 25 kV的加速电压。

2.10。传播对河北细胞超微结构影响的DCM / F7 (TEM)

河北细胞培养集成电路₅₀DCM / F7和孵化24和48小时37°C。培养细胞的收获和离心10分钟500×g在室温下。球固定在4% (v / v)戊二醛在0.1 M coccadylate缓冲区(pH值7.4)为4 h在4°C。固定细胞离心,小球被封锁在一夜之间血清后来固定在glutaraldeyde 4°C。三个变化的标本洗coccadylate钠缓冲(pH值7.4)10分钟,你找找1%锇tetraoxide在4°C。钠的标本被洗了三个变化coccadylate缓冲区(pH值:7.4)10分钟和一系列分级的丙酮脱水(35岁,50、75、95和100%)。然后细胞渗透与丙酮和树脂和嵌入式波束胶囊树脂100%,60°C,聚合在48 h。感兴趣的领域的嵌入式细胞树脂块选择使用toulidine蓝染色和后使用光学显微镜检查。选中的区域被切断在超薄的部分使用一个超切片机。部分被存入一个网格,沾染了醋酸双氧铀10分钟之后50%丙酮过滤,最后染色使用铅,然后用蒸馏水洗两次。 The stained samples were then viewed under transmission electron microscope (Phillips, Eindhoven, The Netherlands).

2.11。ApoBrdU-Terminal原位转移酶dUTP尼克标签试验结束

孵化后细胞凋亡的诱导DCM / F7河北细胞评估与末端转移酶的dUTP缺口末端标记(TUNEL)分析根据制造商的协议(APO-BRDU装备,σ,圣路易斯,密苏里州)。简单地说,约1×10⁶指数增长的细胞被播种和治疗扩张型心肌病/ F7 12、24和48 h。培养细胞的收获,下面两个洗1毫升的PBS,细胞被固定在1%多聚甲醛在PBS和放在冰15分钟然后固定5毫升的70% (v / v)乙醇在冰上30分钟。在洗衣服洗后缓冲区(APO-BRDU工具包(σ),细胞培养60分钟37°C温控浴刚做好的偶尔摇晃DNA-labeling解决方案(含Br-dUTP APO-BRDU工具包,σ)和负酶。最后孵化,细胞与冲洗冲洗两次缓冲区(APO-BRDU工具包(σ),后在室温下培养30分钟在黑暗中0.1毫升的包含anti-BrdUFITC单克隆抗体的抗体溶液。孵化后的抗体,增加了解决π/核糖核酸酶的细胞悬液在黑暗中在室温下30分钟。细胞被Dako然后分析流式细胞分析仪配备一个氩激光(青色ADP、Dako、丹麦),分析使用峰会V4.3软件。

2.12。统计分析

结果报告为均值±SD至少三为每个样本分析。正常和方差齐性的假设被检查。统计分析根据社会科学统计软件包的版本16 (spss(16.0)包。方差分析进行使用方差分析(方差分析)的过程。皮尔逊卡方检验是用于分析的数据比较不同分数对PBL的选择性。显著差异(P< . 05)之间的手段测定使用邓肯的多个测试。

3所示。结果

3.1。在体外细胞毒性对河北和刺激主要人血淋巴细胞

DCM的分离提取植物块茎的真空液柱色谱法产生了总共12分数。总共7的12分数显示明显的细胞毒性对选定的细胞,河北(表1)。MTT结果表明分数DCM / F7, DCM季和3 DCM / F12表现出特殊的活动,5和6.2克毫升⁻¹分别是原油DCM提取的细胞毒性水平以下。相对、5 -氟尿嘧啶、药物和抗肿瘤的活性被用于这项研究。5 -氟尿嘧啶是广泛应用于白血病的治疗对河北细胞抑制作用的集成电路₅₀值为1.43±0.06μ克毫升⁻¹。为了进一步评估分数的机械的研究,我们比较了cytotoxicty DCM / F7对DCM /季和DCM / F12非致瘤性细胞(人类PBL)。有趣的是,与3的影响克毫升⁻¹河北DCM / F7,杀了一半的细胞群在72 h,没有重要的对人类培养细胞毒性的证据。DCM / F7,此外,表现出非常少对人类培养细胞毒性,相比其他两个分数(图1)。

3.2。细胞凋亡的量化使用相差显微镜检查和Propidium碘和吖啶橙Double-Staining

正常进行倒置显微镜观察细胞的形态发生改变DCM / F7,处理好与未经处理的细胞。数据2(一个)- - - - - -2 (c)显示一些形态变化的处理和未经处理的细胞在72 h后处理×400放大。治疗细胞表现出明显的变化比未经处理的细胞。河北治疗细胞显示细胞膜出泡,更重要的生长抑制和细胞的收缩。相反,未经处理的细胞仍在潜伏期汇合的。

此外,对河北细胞荧光显微镜下得分为了量化可行的,早期细胞凋亡,凋亡晚期和继发性坏死。我们任意数200个细胞和不同,与未经处理的负面的控制。这项研究表明,DCM / F7引发时间的方式与细胞凋亡相关的形态学特征(数字3(一个)- - - - - -3 (d))。早期细胞凋亡明显是闰AO内分散的DNA。在几个这样的情况下,荧光绿色的颜色只能在河北细胞治疗。相比之下,未经处理的细胞被观察到有绿色完整的核结构。在24小时治疗扩张型心肌病/ F7,起泡和核染色质缩合注意到(中度细胞凋亡)。此外,晚期凋亡的变化,如出现橘红色的绑定AO变性DNA 48 h后观察治疗。微分评分治疗河北细胞(200人口)显示有统计学意义(P< . 05)差异apoptosis-positive细胞,这表明清楚,时间apoptogenic效应发生。另一方面,没有统计学意义(P> . 05)坏死数量差异在不同的处理时间(图4)。

3.3。Ultramorphological凋亡的观察在DCM / F7-Treated河北细胞

河北治疗细胞形态分析进行了来洞察形态学改变DCM / F7所致。额外和胞内结构分析是由SEM和TEM分别。解释SEM electromicrographs显示独特的形态变化对应于一个典型的凋亡细胞表面形态,包括细胞收缩、膜起泡和凋亡体(数据的形成5 (b)和5 (c))。TEM观察到intramorphological特征表现出明显的形态学改变原子核与大幅的形成,均匀细颗粒质量,加边与核膜(数字6 (b)和6 (c))。部分退化凋亡的存在体在细胞细胞质也明显。所有这些形态学和超微结构的变化归因于河北细胞的孵化与3μ克毫升⁻¹DCM / F7 24和48 h特性与细胞凋亡有关。相反,未经处理的cems细胞显示保存完好的形态学和细胞细胞器的数字5(一个)和6(一)。这些凋亡效应被发现是时间相关的现象,这是发现当考虑气泡形成的数量(细胞质扩展)作为指标,通过细胞凋亡细胞死亡。

3.4。ApoBrdU-TUNEL化验

细胞凋亡的生化标志是internucleosomal退化细胞DNA的酶,这导致DNA片段的出现。为了检测免费3′-哦以DNA片段,TUNEL检测方法,因此凋亡细胞可以被识别。凋亡细胞的比例确定DCM / F7治疗后如图所示7。凋亡细胞的数量显著增加,治疗后观察DNA片段在DCM / F7用于3的浓度克毫升⁻¹12、24和48 h。此外,重要的时间增加分散在每个时间点观察DNA。我们的研究结果表明,凋亡细胞数量的增加12 h后治疗后(表2)。

3.5。识别和生物活性的化学分析部分采用气相

表3显示了DCM / F7 gc - ms的分析,显示共有40个化合物和迟疑地确定30化合物包括亚油酸,n棕榈酸、9棕榈酸和stigmasta-5 22-dien-3-ol。不饱和的ω- 6脂肪酸、亚油酸有大量在DCM / F7(51.2%)紧随其后n棕榈酸(17.89%)、9-hexadecanoic酸(6.99%)和stigmasta-5 22-dien-3-ol (6.06%)。

4所示。讨论

癌症是世界上第二大死因。转移癌患者的预后仍然是一个关心和占超过一半的癌症死亡。几乎所有人工代理目前被用于癌症治疗被认为是有毒的,他们对正常细胞造成严重损害。因此,化学预防或化疗通过无毒的药物和食品补充剂可能是一种方法来降低这些癌症的发病率(21]。最近,凸轮直接对治疗至关重要的全球疾病的兴趣(22),包括草药(23]。天然食品和药用植物中发现的化合物,从理论上讲,作为替代化学抗癌药物设计(24),这种药物发现与凸轮(25]。

的影响t . flagelliforme研究了在人类癌症细胞系和小鼠P388 [4,5,7]。我们的结果表明,这种植物的细胞毒性和抗癌潜力在河北细胞通过诱导细胞凋亡。DCM / F7显示浓度抑制细胞生长的cems细胞系,MTT试验建立的。MTT是一个标准比色测定(一个分析衡量变化颜色)测量细胞的增长。美国国家癌症研究所的指导方针设定的极限活动抑制原油提取50% (IC₅₀< 30扩散克毫升⁻¹72 h的曝光时间后(26]。因此,DCM分数以及本研究中使用的最大浓度< 30克毫升⁻¹。MTT结果表明分数DCM / F7, DCM季和3 DCM / F12表现出特殊的活动,5和6.2克毫升⁻¹分别是原油DCM提取的细胞毒性水平以下。至关重要的抗癌剂表现出高细胞毒性但这种活动应该只特定的癌细胞。从当前的调查结果表明,河北细胞更敏感的细胞毒性作用DCM / F7人外周血相比。这些结果与之前的研究一致,报告说的DCM提取获得的分数t . flagelliforme显示细胞毒性对NCI-H23细胞活动,但不要非癌变BALB / c 3 t3细胞(4]。

形态学观察显示额外的-和胞内结构都强烈影响后DCM / F7治疗。直到今天,显微镜检查是最精确的检测细胞凋亡的黄金标准(27]。用这项技术的整个过程可以观察到细胞凋亡和评估基于原始形态标准(28]。凋亡最初定义的结构性变化在细胞中可观察到的各种显微技术(29日]。减少数量的可行的细胞治疗是依照其细胞毒性属性显示工厂分数。细胞凋亡的明显迹象,如细胞质收缩和膜起泡,被相衬显微镜观察。此外,使用AO的属性和π,河北细胞治疗扩张型心肌病/ F7确定其抗增殖和apoptogenic字符。DCM / F7的抗增殖特性可以通过计数的数量然后评估可行的癌细胞,而apoptogenic测定通过观察典型的细胞凋亡形态学改变。在目前的研究活细胞的细胞活力的结果显示一个明显的减少在DCM / F7治疗组。这些细胞典型的形态变化与细胞凋亡相关的比如染色质缩合、DNA碎片,膜起泡和凋亡体形成,在荧光显微镜下观察AO / PI染色。众所周知,在细胞凋亡,最早的公认的形态变化是压实和隔离的核染色质,染色质着边的结果和凝结的细胞质30.]。的凝结过程是伴随着卷积核和细胞轮廓紧随其后的核分解成离散的细胞碎片和崭露头角的生产作为一个整体面上凋亡体(31日]。细胞凋亡的细胞事件完成的非常快,只有几分钟时间在流逝的发病过程和集群之间形成凋亡的身体。在这项研究中,采用SEM获取详细信息cems的细胞表面,使用透射电镜超微结构变化进行了研究。当前调查显示不同的SEM电镜形态学变化对应于一个典型的凋亡细胞表面形态,包括细胞收缩、膜起泡和凋亡的身体治疗后的形成。此外,TEM观察细胞核染色质marginization治疗,染色质凝聚和液泡的形成凋亡细胞的特点。除此之外,细胞治疗(cems)的浓缩嵴线粒体作为细胞凋亡的典型形态特征。相比之下,未经处理的细胞核含有均匀分布的染色质和核仁,线粒体是大型和无数,粗面内质网、核糖体和双膜核信封也见过。

细胞凋亡是一种主动的生理过程导致的细胞自我毁灭涉及特定的形态和生化变化在细胞核和细胞质。细胞凋亡是由两个主要途径:外在(受体介导)和内在线粒体介导的通路。由于内在途径的敏感性,肿瘤出现经常通过这个途径比外在途径(32]。在双向凋亡内切酶降解染色体DNA在程序性细胞死亡。核DNA的乳沟nucleosome-sized碎片是细胞凋亡的一个签名。因为这样的乳沟降解基因的材料是至关重要的生产细胞蛋白质,DNA碎片可以说代表了最严重的破坏细胞(33]。在目前研究TUNEL分析显示凋亡诱导在河北细胞暴露于DCM / F7 3μ克毫升⁻¹(集成电路₅₀在不同的时间点)。类似的观察从DCM前所述当一小部分提取的植物通过比色TUNEL检测凋亡[4]。

高浓度不饱和脂肪族化合物的存在显然是明显的植物化学物质。罂acid-enriched分数集中在保健品的重要性可作为药物或防止恶性肿瘤的发生。众所周知,高浓度的某些脂肪酸会导致细胞死亡通过细胞凋亡或坏死(34]。亚油酸(35- - - - - -38以及共轭亚油酸是有据可查的凋亡效应(39- - - - - -42]。此外,Yoo et al。43孤立的三种脂肪酸包括棕榈酸已被证明是一个有前途的抗癌剂对细胞凋亡由caspase-3激活。此外,棕榈酸的参与已经证明线粒体环孢菌素A-insensitive孔隙引起Pal / Ca^{2 +}配合物在凋亡过程中(44)和Fas-mediated PC12细胞凋亡(45]。丰富的亚油酸和对肿瘤细胞的特异性是在协议与以前的研究表明饮食共轭亚油酸可以诱导细胞凋亡的p53野生型鼠乳腺肿瘤前期病变,但不是正常的乳腺上皮细胞(46]。基于这些文献可以提出,亚油酸和棕榈酸的存在可能是负责生产的凋亡效应DCM / F7河北。

天然药物抑制恶性细胞的增殖,诱导凋亡可能代表一个有用的机械观癌症化学预防和化疗。因此,越来越多的关注在使用植物材料用于治疗各种癌症的发展更安全、更有效的治疗药物(47]。由于添加剂或协同效应,竞争或干扰植物提取物的48),比较这些特征明显影响肿瘤细胞系提供大纲和模型的讨论和分析可能的生物学机制,产生临床效果(49,50]。类似的研究辅助识别提供选择性的化疗药物作用对癌细胞没有麻烦的对正常细胞的影响(51]。我们的研究表明,DCM / F7的一部分t . flagelliforme有选择地抑制白血病癌细胞扩散,通过诱导细胞凋亡。细胞凋亡是一个高度管制和组织细胞死亡过程控制的发展和内稳态多细胞生物在多种生理和病理条件下发生的,它的特点是一些定义良好的功能,包括细胞形态改变,染色质凝聚和oligonucleosomal DNA解理(52]。我们的结果被证明是由于细胞凋亡细胞凋亡的形态学特征的示范和观察细胞含有分散核和DNA(图8)。这些结果清楚地表明t . flagelliforme已被用作医疗补充以及传统医学行为通过程序性细胞死亡。此外,我们的研究结果强调重要的健康保健品和草药含有脂肪酸。还需要更多的研究来确定的分子机制及其路径选择及其活性成分和比例来评估这种潜在的抗癌活性在活的有机体内。

资金

这项研究的部分资金由美国国家癌症协会(MAKNA),马来西亚。作者也承认额外支持从大学Putra马来西亚(芬欧蓝),Serdang、马来西亚(91143年格兰特没有地毯)。

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