窄带紫外线B光疗和甲氨蝶呤对微(146)在银屑病患者的血液水平

文摘

背景。最近,一些microrna已经证明显示异常表达在银屑病和在疾病的发病机制中发挥作用。客观的。找出NB-UVB或甲氨蝶呤治疗是否会影响全血人类microrna的水平(146)在银屑病患者和证明其与疾病严重程度的相关性。方法。血液样本得到健康控制和银屑病患者治疗前及治疗后12周NB-UVB,甲氨蝶呤。量化人类microrna的(146)的实时聚合酶链反应(rt - PCR)。结果。血人类microrna(146)水平更高的牛皮癣患者比健康对照组();没有显著的积极与PASI评分的患者(,)。实时PCR表明,治疗12周后与NB-UVB光疗或与甲氨蝶呤治疗,有显著减少miR146a水平(;、职责)。结论。miRNA146a增加的表达在整个牛皮癣患者的血液样本,我们可以评估其可能作为未来治疗牛皮癣的治疗目标。屏幕与这些标记,它能够治疗效果或改变进一步积极治疗牛皮癣。

1。介绍

牛皮癣是一种常见的皮肤疾病影响大约3%的世界人口。它的特点是复发的皮肤病变显示表皮增生,炎症浸润和血管生成。炎症反应在很大程度上被认为是先天免疫之间的相互作用的结果(由抗原递呈细胞和自然杀伤T淋巴细胞)和后天免疫(由T淋巴细胞)1]。

小分子核糖核酸(microrna)短,内生,non-protein-coding rna在健康和疾病有重要作用。microrna负调节基因的表达通过绑定3′翻译地区mrna和启动平移镇压或劈理2,3]。

几项研究已经指出microrna在银屑病的发病机制的参与miR203, miR21,和miR146a都增加,而miR125b下调而健康的皮肤。这表明,microrna在银屑病发病机制中发挥作用。增加miR203水平与本构激活STAT3信号相关联,这是通过直接针对SOCS3的抑制,在角化细胞参与炎症反应和功能(4]。微放松管制是参与银屑病的发病机制和导致的功能障碍和居民之间的相声浸润细胞(4]。

这些差异表达microrna可能影响许多参与银屑病发病机理的过程如血管生成(miR21、miR31 miR378),表皮分化(miR135b, miR205, miR203-AS)和炎症(miR142-3p) [5]。其他异常的microrna表达牛皮癣miR146a miR125b。过度的miR146a银屑病是由转录因子NF -控制的κNF - BκB TRAF6和伊拉克的目标基因参与调控肿瘤坏死因子-α信号通路(6),这表明miR146a可能控制肿瘤坏死因子-α皮肤的信号(7]。在人类T细胞,miR146a表达在低水平在天真的T淋巴细胞中大量表达记忆T细胞并诱导细胞刺激后,符合其表达式依赖NF -κB感应(6,8]。MiR146a已被证明在体外和体内直接目标两个丝氨酸/苏氨酸激酶,receptor-associated激酶1 (IRAK1)及肿瘤坏死因子(TNF) receptor-associated因子6 (TRAF6),成为与受体(IL-1R)在刺激及部分负责IL-1-induced upregulation NF -κb这个绑定结果的表达的抑制NF -κ如白细胞介素il - 6 B的目标基因,引发和il - 1β和TNF (TNF -α)[9]。

窄带紫外线B (NB-UVB)治疗与I型和II型干扰素信号抑制,downmodulation Th17通路,调制表皮分化的基因lesional银屑病表皮。此外,一些抗炎通路,如糖皮质激素、维生素D,过氧物酶体扩散者激活受体和il - 4信号调制在NB-UVB治疗(10]。

甲氨蝶呤是一个成功的和受欢迎的医学用于治疗严重的牛皮癣和其他一些严重的或广泛的皮肤状况。它有消炎作用;行动的确切机制并不清楚,但可能与增加细胞内腺苷,嘌呤核苷的抗炎效果。甲氨蝶呤也有弱的免疫抑制效果,也减少皮肤细胞增殖的速度;叶酸拮抗剂,这意味着它可以防止的作用重要的B族维生素,叶酸,在细胞功能导致减少嘧啶、嘌呤、DNA甲基化(11]。

目标的工作。这项工作的目的是比较的血液水平miR146a牛皮癣患者和健康对照组和评估NB-UVB和甲氨蝶呤治疗的效果在银屑病患者血miR146a水平。

2。患者和方法

这种情况下控制研究包括四十中度或重度慢性斑块性银屑病患者选择门诊Benha大学医院皮肤科诊所的,从2013年1月至2013年10月开始。患者没有接受系统性免疫抑制治疗或光疗,至少1个月,局部治疗2周之前纳入本研究。对照组由20看似健康的人;病人和控制在18岁和65岁。患者的知情同意是对自己接受的研究,这是Benha大学的伦理委员会批准。

一个常见的问卷是用来完成人口和特征信息(如年龄、性别、发病年龄、疾病,和家族病史)。银屑病面积和严重程度指数(PASI)每个牛皮癣患者评估的分数。

患者分为两组。组我二十慢性斑块型银屑病患者,11个男性和9个女性,平均年龄为39.9±16.9年;他们收到甲氨蝶呤12.5毫克肌内一周一次,连续12周。

第二组有20个病人诊断为plaque-type牛皮癣,11个男性和9个女性,平均年龄为42.4±14.1;个人最低红斑剂量NB-UVB治疗前评估。NB-UVB辐照是管理整个身体一周两到三次使用内阁PCL 8000年Puva结合光,ARKADE, Heverlee,比利时,配备荧光灯UVB TL100W / 01,飞利浦,荷兰埃因霍温。24会议期间有2 - 3个月,初始剂量的0.1 - -0.3J /厘米²根据皮肤,增加相应的公差和临床反应。

2.1。分子生物学调查(量化人类miRNA146a)实时聚合酶链反应(rt - PCR)

患者的血样和12周后开始治疗之前收集与甲氨蝶呤和NB-UVB辐照。样本收集立即成RNA保护动物血管提供的试剂盒,德国。管包含溶解血细胞的试剂,用于稳定细胞内RNA的保护基因表达谱。样品被储存在−80°C进行进一步处理。

2.1.1。总RNA提取包括微

总RNA包括microrna在RNA从血液样本中提取稳定保护动物血管,使用MiRNeasy保护动物血包(试剂盒、GmbH是一家现代化的、希尔登,德国)根据制造商的指示12]。

2.1.2。逆转录定量实时PCR一步

总RNA反转录成cDNA使用特定逆转录(RT)引物(表1)。20的反应混合物µL包含20吴总RNA, 2µL的底漆,2µ核苷酸的L, 1µL (RT酶2µL (RT缓冲区,0.5µ20 L(单位)核糖核酸酶抑制剂,nuclease-free水20µl .互补dna被稀释到200µl

2.1.3。实时PCR检测miRNA146a

microrna的量的实时PCR,目标的microrna (miRNA146a)规范化对内源性RNA的引用。在这项研究中我们使用U6标准化控制。的相对数量miRNA146a规范化对内生的相对量控制(U6)。褶皱的表情变化使用方程计算(13]。实时PCR是使用超级执行真正的预混料+ (sybr绿色)提供的工具包(TIANGEN、生物科技、北京)。反应混合物包含10µL 2 x超级真实的预混料+ 1µL的底漆,1µ反向引物,5的Lµ0.4 L的cDNA、50 x火箭参考染料,和2.6 RNase-free水。放大miRNA146a和U6进行单独的PCR管。

2.2。统计分析

临床数据被记录在一份报告形式。这些数据表和分析使用计算机程序SPSS(社会科学统计软件包)版本16 (SPSS Inc .)、芝加哥)获得以下。

数据的描述性统计计算的形式(1)平均值和标准偏差(±SD)定量数据;(2)定性数据的频率和分布。

统计不同组之间比较,差异显著性测试使用的测试:(1)学生的以及和Mann-Whitney测试,用于比较两组均值参数和非参数定量数据,分别;(2)方差分析测试(值),用于比较的两组以上的定量数据;(3)执行的分类数据组间比较采用Fisher精确检验(场效应晶体管);(4)相关系数,用来发现变量之间的关系。

3所示。结果

所有的参与者被皮肤科医生检查和诊断。我组的平均年龄为39.9±16.9岁,第二组为42.4±14.1年,是控件(44.6±17.82年);男性的比例是55%,第二组我和组为60.0%,对照组()。牛皮癣的患者有家族史是我组30%,15%在第二组()。组我意味着疾病持续时间为2.9±1.2年,而集团ΙΙ8±5.6年()。PASI评分治疗前后的平均值为26.5±3.8,9.7±2.9,分别在我(组),而在第二组中则为25.7±2.8,8.3±1.9,分别为()。

miR146a血液水平的患者明显高于控制(表2和图1)。miRNA146a治疗前后的平均水平是22.6±3.3俄文,16.3±1.7俄文相应()在我组,17.3±1.3,14.0±1.3俄文相应(组ΙΙ(表中)3和图2)。

前miR146a水平之间没有显著正相关治疗和年龄和所有患者(PASI评分,值= 0.269)(,值= 0.107),分别。而miR146a之间有显著的正相关和疾病持续时间(,值= 0.03)(表4和图3)。

4所示。讨论

Taganov et al。6)报道,microRNA146a / b (miR146a / b)是诱导对脂多糖(LPS)和促炎介质miR146a感应是由NF -κb他们还发现miR146a / b目标是TNF receptor-associated因子6 (TRAF6)和il - 1 receptor-associated激酶1 (IRAK1)基因和得出结论,miR146在微调先天免疫反应中发挥作用,负面的反馈,TRAF6和IRAK1差别包括对这些基因。最近主要观察涉及一个新的角色microrna是他们的能力来判断药物的疗效。这些发现引发了microrna的药物基因组学领域的(14]。

先前的研究显示,大多数的组织microrna在体液中发现。循环在血清microrna的被假定为疾病预测可靠的生物标志物诊断和严重程度的评估。在正常情况下,血清microrna释放主要来自血液细胞,而在患病的情况下,microrna表达谱是不同的,取决于类型和性质的疾病(15]。

本研究的结果表明,银屑病患者有增加miR146a的血液水平高于对照组。这是在协议与其他研究的结果(16- - - - - -18]。miR146a参与银屑病的发病机制可能是通过调节巨噬细胞的功能(19),树突细胞(20.],Th1细胞[6),T reg细胞(21[],Th17细胞22]。夏et al。16)报道,增加miR146a受损功能未能压制的表达IRAK1以银屑病皮肤损伤,从而诱导IL-17持久性。

在当前的研究中,miR146a水平与甲氨蝶呤治疗后显著下降;这是在赞同的结果Pivarcsi et al。17];他们发现anti-TNF-alpha治疗,服用依那西普和甲氨蝶呤改变银屑病患者血清microrna的水平。这可能是由于甲氨蝶呤在表皮细胞DNA合成的影响,也由于其免疫抑制作用激活T细胞,控制牛皮癣(23]。

也有患者miR146a水平下降NB-UVB在这项研究中;这是按照古等人的结果。24]。这是由于NB-UVB导致细胞周期阻滞的影响,T细胞凋亡,细胞凋亡在DNA损伤如上所述,表示“状态”等。25和顾et al。24]。

PASI评分之间没有显著正相关,microrna与PASI评分之间的相关性的水平虽然有显著正相关疾病之间的持续时间和miR146a的水平。这是在协议的结果夏et al。16];这可能是由于相关并发症包括高血压、动脉粥样硬化和糖尿病。

5。结论

总之,我们已经表明miR146a后续治疗的重要血液水平的变化与甲氨蝶呤和NB-UVB光疗,显示相当大的角色这些分子治疗的疾病。对治疗的反应的早期预测使用信使rna是一种有效的个人药物治疗的机会,因此可以防止副作用通过减少成本。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

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