恶性黑色素瘤的分子皮肤病理学

摘要

目前，在恶性黑色素瘤(MM)的诊断中，免疫组化被认为是理所当然的。近年来，基因组学和蛋白质组学领域的大量进展使皮肤病理的分子诊断受益。灵敏的技术可用来检测特定的DNA和RNA序列的分子杂交。本文旨在更新分子细胞遗传学在MM诊断领域可用的辅助方法。细胞遗传学强调了非典型性黑素细胞肿瘤的发病机制，重点是在肿瘤起始步骤中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的激活。20 - 40%的MM家族有肿瘤抑制基因p16或CDKN2A突变。此外，MM中存在p16、p53、BRAF和cKIT的体细胞突变。对MM的全基因组扫描分析表明，与黑素细胞痣相关的基因呈正相关，但MM可能是由多种常见的低外显率基因引起的。分子皮肤病理学正在扩展，它在黑素细胞肿瘤评估的应用似乎在研究和诊断领域有前景。分子皮肤病理学可能会进入越来越多的诊断实验室。预期的效益应该是改善病人的管理。这一发展表明，需要在皮肤病理学家的培训要求和作用方面进行发展。

1.介绍

在某些情况下，在常规组织病理学中识别皮肤恶性黑色素瘤(MM)可能是一项具有挑战性的工作[1- - - - - -3.］.在客观标准的定义和无可争议的诊断共识的建立方面，一系列临床和组织病理学的限制阻碍了诊断过程。在过去的几十年里，免疫病理学的发展显著地将诊断程序从描述性形态学转移到分子组织病理学[4- - - - - -8］.免疫病理学有助于区分一些非典型黑素细胞肿瘤，并支持精确的MM分期[9- - - - - -18］.近年来，分子生物学和分子形态学在检测DNA、RNA和蛋白质中表达的致病突变方面取得了超越常规显微镜的进展。应用于MM的这种敏感程序有助于诊断、分类和结果预测，以及选择和监测治疗方法[19- - - - - -24］.值得注意的是，由于氨基酸替代而改变蛋白质的突变必须与发生在给定氨基酸中的突变和与沉默突变或多态性相对应的突变区分开来。

这篇论文的目的是回顾最近在分子皮肤病理学的见解，以阐明MM的发病机制和诊断。重点将是分子细胞遗传学，指的是染色体的分子结构和功能。所涉及的技术目前用于研究或诊断目的。

2.互补的取样方法

两种特殊的取样方法特别适用于分子皮肤病理学中的某些方法。

激光切割切割有助于在显微镜下分离局限的细胞群，试图根据形态学标准增加分离物的同质性[25，26］.

组织微阵列与一组有序的微小组织芯(直径约0.6 mm)相对应，这些组织芯是从各种标本中获得的，并包埋在单个石蜡块中。为了便于比较，免疫组化和一系列下游分子方法被方便地应用于组织微阵列[18，27］.例如，来自不同进展阶段的不同MM样本的组织微阵列被用来揭示不同的分子变化[27］.在这方面，组织微阵列上的免疫组化已经确定骨桥蛋白表达是MM侵袭初始阶段获得的第一个特征[27］.

3.分子形态学和生物学概览

３．１．原位杂交

原位杂交(ISH)提供了组织切片、单细胞或染色体扩散中特定DNA和RNA序列的形态学证明。ISH依靠带有标记的含有互补序列的单链或双链DNA或RNA序列，在适当的条件下与细胞DNA或RNA杂交，形成稳定的杂交体。ISH的最佳探针长度可使组织渗透最大化，杂交率高。它平均50-300个垒。

引物原位(PRINS)标记依赖于在组织切片上原位进行的引物介导的DNA合成。该技术首先在感兴趣的DNA区域附近退火一个寡核苷酸DNA引物。这种分子结构作为Tag聚合酶的引物，包含四个核苷酸dATP, dGTP, dCTP和标记的dUTP，可以方便地使用免疫组化显示。这些ISH和PRINS方法用于定位细胞和组织中的DNA序列和特定的mRNA，以及可视化染色体，允许间期细胞遗传学和特定mRNA的检测。因此，在新鲜和福尔马林固定的组织切片中，利用染色体特异性探针或寡核苷酸开发了HIS和PRINS方法，用于检测间期细胞核的数值和结构染色体畸变。

３.２．染色体G显带法

染色体G带(CGB)在显微镜下检测染色体的明显畸变[18，28］.从新鲜MM取样的细胞培养在中期有丝分裂象稳定。酶切后组织化学染色显示CGB。值得注意的是，细微的染色体畸变，包括点突变、小插入和缺失，以及离散重排，使用CGB方法不披露[24］.

３．３．鱼的方法

荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization, FISH)依靠荧光互补DNA探针杂交识别特定基因或DNA寡核苷酸[29］.该方法用于新鲜或福尔马林固定的组织切片，以及细胞核扩散和DNA微阵列。每个细胞核的斑点数表明了仔细检查的染色体位点的拷贝数。整个基因组的序列、着丝粒、端粒和特定的基因区域被方便地用作探针。易位是通过一个分裂成两部分的点，或者通过不同的荧光探针杂交每个易位基因来检测的。

FISH帮助识别突变的细胞，包括那些在表面上正常的皮肤距离MM的细胞[30.］.最近的FISH变种是通过多种方式开发的[24，31］.FISH允许检测MM中细微的染色体畸变，包括4个靶向基因，即CEP6, RREB1, MYB和CCND1 [32- - - - - -35］.

FISH方法的一个缺陷是在组织切片中部分包裹细胞核体积，导致染色体片段的技术遗漏。因此，必须仔细检查若干核，以确保可靠地评估探针的复制数[36］.

3．4．计算全息方法

比较基因组杂交技术(CGH)将来自黑素细胞肿瘤的DNA与来自同一患者正常参考组织的DNA进行比较。CGH方法使用新鲜或福尔马林固定的组织进行，非常方便。用不同荧光色素标记的DNA随后在正常中期染色体或DNA小点阵列上杂交[24］.资料以增加或减少副本号码表示[37］.CGH已经在MM中发现了一些基因组畸变和不平衡[38，但只有在肿瘤细胞中有足够的基因组畸变[31］.CGH主要用于研究环境[38，39有助于识别区分不同MM类型的基因组特征[40- - - - - -42］.值得注意的是，黑素细胞瘤Spitz naevi [43包含与单个11p增益相对应的基因畸变[19，38］.先天性黑素细胞痣的MM表现出与正常MM相当的CGH模式，而非典型结节(黑素细胞瘤)包含整个染色体的数量畸变，这只在少数MM中可见[44］.

3．5．基因微阵列方法

基因微阵列也被称为DNA芯片，它可以检查RNA和microRNA (miRNA)的表达，以及检测DNA突变和多态性[45- - - - - -47］.本方法适用于新鲜组织或福尔马林固定组织[47］.该过程包括在一个固体平台上固定特定的DNA序列，互补标记的DNA与之杂交。标记的DNA是从检测组织中提取的mRNA的逆转录得到的。固定化DNA与寡核苷酸或互补DNA相对应[24］.根据杂交过程，标记的点被仔细检查。多重数据的复杂性需要足够的统计分析和计算机化的数学模型。

在诊断性皮肤病理学中，基因芯片标记可用于MM和痣的分子分类[47］.在这样的筛选中，发现了36个不同的基因标记在黑色素细胞痣和MM之间。

3.6。PCR和RTP-CR方法

PCR(聚合酶链反应)底物对应于从新鲜或福尔马林固定的组织中提取的DNA或RNA(逆转录酶，RT-PCR)。该方法对应的是由温度循环变化驱动的化学反应，在短时间内导致目标DNA或RNA小片段的特定和指数级放大。PCR用于MM微转移瘤的鉴定[48]选用me20m、PLAB、SPP1、CAPG、CTSB等标记[24，26，49］.

与常规组织病理学相比，免疫组化提高了转移检测的敏感性10-45%，而mm相关标记基因的RT-PCR表达，如酪氨酸酶和Melan A-Mart-1，被报道提高了可疑隐匿转移的检测高达70% [24］.事实上，RT-PCR有望检测出1 / 10的MM细胞⁶－10⁷而免疫组化可能检测到1 / 10的MM细胞⁴－10⁵分析细胞(21］.然而，PCR检测淋巴结MM微转移的相关性受到了挑战，因为该发现明显缺乏预后价值[50］.事实上，除了识别前哨淋巴结内MM微转移外，还应评估转移的大小和位置[51］.因此，非显微方法在前哨淋巴结研究中的作用仍然值得怀疑。在此过程中，缺乏对疑似MM细胞的位置、大小和性质的组织病理学评估，并可能发生转移而误解结节痣细胞。使用高度特异性的方法只检测MM细胞，可以克服这一缺陷[52，但微转移的大小和位置仍未评估。

在进行ISH之前，可以对目标核酸序列进行原位pcr扩增。原位PCR是在细胞或组织上进行的，细胞或组织是固定的，并根据形态进行渗透，允许PCR探针进入必须扩增的核内序列。细胞悬液或组织切片用PCR试剂覆盖，用盖玻片密封，然后进行热循环。PCR产物的检测采用PCR探针(间接原位PCR)或直接检测PCR产物中的标记核苷酸(直接原位PCR)。

3.7。MLPA方法

多重连接依赖探针扩增(MLPA)是基于退火多达45个探针，每个探针由两个寡核苷酸组成，在一个特定的染色体区域相邻杂交[53］.除了靶向位点外，这两种寡核苷酸都含有通用PCR引物。此外，一个寡核苷酸包含一个所谓的填充序列，显示探针特定的长度。将杂交的邻近寡核苷酸连接后，用PCR引物扩增探针。由于填充序列，每个探针都有一个独特的长度，电泳可以方便地分离和定量PCR产物的数量，表明DNA拷贝数[24］.突变特异性MLPA在单一评估中结合了拷贝数检测和热点突变[54］.

3.8。HRMA方法

高分辨率熔化分析(HRMA)是基于DNA在高分辨率加热后的解离。该程序允许检测单碱基对序列的变化[55］.这种快速的方法可以检测热点突变，当至少5%的细胞背景显示野生型DNA时，可能识别出突变细胞[56］.

4.胚系和体细胞MM突变

与MM风险增加相关的多发性痣主要发生在p16或CDKN2A突变的家族中[57］.然而，在其他MM患者中寻找p16或CDKN2A突变并不具有临床相关性，因为检测到突变的概率很小[58］.家族性p16突变的患病率与亲属中mm的数量有关[57］.到目前为止，已经报道了超过30种不同的p16突变[58］.从全球来看，p16突变存在于超过2个MM的MM家族的25-40%中，而p16突变的比例在只有2个MM的MM家族中较低[59］.此外，多发性原发性MM患者更有可能发生p16突变[60］.

p16基因产生两种不同的多肽，即p16/INK4a和p14/ARF蛋白。它们都参与了细胞增殖周期的控制。根据外显子突变，p16和/或p14的功能发生改变。事实上，大多数MM与生殖系p16突变无关，尤其是在非家族性MM中。许多其他外显率较低的MM基因可能与MM有关。这些突变随着疾病的进展而增加[61］.多发性发育不良痣是MM风险和其他癌症易感性的标志[62］.因此MM很可能与其他肿瘤共享癌症基因，因为MM在家族癌症综合征中很常见。BRCA2和BRCA1突变的个体皮肤和眼睛MM的风险增加[63］.

皮肤MM的遗传畸变与特定表型相关[64］.值得注意的是，从黑素细胞到MM细胞的发展是由一系列形态变化和一系列目前已阐明的遗传畸变所支持的。有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路和PTEN/AKT通路都参与了黑素细胞的生长控制[65］.RAS和RAF基因体细胞突变后这些通路的激活可能代表黑素细胞痣发展的最初步骤之一[66］.7Q34染色体上的BRAF致癌基因通常在70%以上的mm中发生突变[67]，但这种突变在巨大的先天性黑素细胞痣中不存在[68］.多发性痣和BRAF突变的MM更常发生在年轻和间歇性阳光照射的部位[69］.相比之下，p53突变在慢粒恶性肿瘤或MM中更常见，这些患者长期暴露在阳光下，表现出明显的光化损伤[70］.在其他mm中发现了明显的体细胞基因突变，如在cKIT位点，特别是在粘膜、手掌和鞋底[71]，以及色素沉着的MM [15］.可能参与MM转移的基因包括参与MAPK通路的基因，如BRAF和RAS。针对BRAF和cKIT通路的MM新疗法呼吁对MM进行基因分型，以选择合适的患者[71- - - - - -76］.

蓝痣、斯皮茨黑素细胞瘤、先天性黑素细胞痣和葡萄膜MM不包含或很少包含BRAF突变[68］.相比之下，它们包含其他突变，如NRAS或HRAS基因[77］.此外，在葡萄膜MM和蓝痣中均发现了ras样域GNAQ体细胞突变[78］.与BRAF突变类似，RAS和GNAQ突变可能导致MAPK激活，并形成黑素细胞瘤变的替代途径[55］.即使所有这些突变似乎代表黑素细胞肿瘤发展的早期事件，它们不会导致黑素细胞向MM进展。

5.结论

大多数可用的分子方法在皮肤病理学目前仍然是基于研究的方法。在这种情况下，分子诊断对于预测MM的生物学行为显得越来越重要。与不良预后相关的新标志物已被报道。MM似乎是一种遗传异质性肿瘤，具有不同的风险表型和基因型。

利益冲突

作者声明没有利益冲突。

致谢

这项研究得到了Liège大学医院“科学研究基金会”的资助。没有使用其他资金来源来协助编写这份文件。作者感谢Ida Leclercq夫人出色的秘书协助。

参考文献

1. L. Brochez, E. Verhaeghe, E. grosshan等人，“临床可疑的色素皮肤病变的组织病理学诊断中的观察者间差异，”病理学杂志第196卷第1期4，页459-466,2002。视图:出版商的网站|谷歌学者
2. O. E. Dadzie, J. Goerig和J. Bhawan，“在皮肤中偶然出现的鼻灰质聚集物显微镜聚焦，”美国皮肤病理学杂志，第30卷，第2期1，第45-50页，2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
3. S. Lodha, S. Saggar, J. T. Celebi, and D. N. Silvers，“临床环境中疑难黑素细胞肿瘤的组织病理学诊断的不一致性”，皮肤病理学杂志第35期4，页349-352,2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
4. M. R. Nasr和O. El-Zammar，“pHH3, Ki-67和survivin在良性和恶性黑色素细胞病变中的免疫反应性的比较”美国皮肤病理学杂志，第30卷，第2期2，页117-122,2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
5. S. J. Ohsie, G. P. Sarantopoulos, A. J. Cochran, and S. W. Binder，“黑色素瘤的免疫组化特征”，皮肤病理学杂志第35期5，页433 - 444,2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
6. A. G. Abdou, M. A. Hammam, S. E. El-Farargy等人，“皮肤黑色素瘤中凝集素3表达的诊断和预后作用，”美国皮肤病理学杂志，第32卷，第2期8，第809-814页，2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
7. P. Quatresooz, C. Piérard-Franchimont, P. Paquet，和G. E. Piérard，“血管生成性快速生长黑色素瘤及其微转移”，欧洲皮肤病学杂志，第20卷，第2期。3, pp. 302-307, 2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
8. P. Quatresooz, M. A. Reginster, and G. E. Piérard，“恶性黑色素瘤微生态系统”。基质细胞表型的免疫组织病理学观察。审查。”实验与治疗医学，第2卷，第2期3, pp. 379-384, 2011。视图:出版商的网站|谷歌学者
9. S. R. Alonso, P. Ortiz, M. Pollán等，“皮肤恶性黑色素瘤的进展与不同的表达谱相关。一项基于组织微阵列的研究，”美国病理学杂志，第164卷，第164号1，页193 - 203,2004。视图:谷歌学者
10. N. Claessens, G. E. Piérard, C. Piérard-Franchimont, J. E. Arrese，和P. Quatresooz，“早期黑色素瘤微转移的免疫组化检测。与前哨淋巴结受累的关系”黑色素瘤研究，第15卷，第5期。2，页107-110,2005。视图:出版商的网站|谷歌学者
11. L. a . Fecher, S. D. Cummings, M. J. Keefe，和R. M. Alani，《黑色素瘤的分子分类》，临床肿瘤学杂志，第25卷，第2期12，页1606-1620,2007。视图:出版商的网站|谷歌学者
12. P. Quatresooz, G. E. Piérard, C. Piérard-Franchimont和Mosan研究组的色素肿瘤，“支持恶性黑色素瘤增殖分期的分子途径，”国际分子医学杂志，第24卷，第2期3, pp. 295-301, 2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
13. P. Quatresooz, C. Piérard-Franchimont, G. E. Piérard和Mosan研究组的色素肿瘤，“恶性黑色素瘤和皮肤黑色素细胞瘤之间的分子组织学诊断前沿，”肿瘤的报道第22卷第2期6, pp. 1263-1267, 2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
14. D. Vitoux, S. Mourah, D. Kerob等人，“黑色素瘤微转移前哨淋巴结中黑色素细胞分化抗原和血管生成生物标志物的高敏感多变量检测，”皮肤病学档案第145卷第1期10, pp. 1105-1113, 2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
15. J. M. Wu, H. Alvarez, P. García等，“黑色素瘤色素沉积与KIT改变密切相关，”美国皮肤病理学杂志第31卷第1期7，第619-625页，2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
16. B. N. Bernaba, P. I. Vogiatzis, S. W. Binder，和D. S. Cassarino，“黏性增生黑色素瘤的潜在有用标记:KBA.62, p-AKT和ezrin的分析，”美国皮肤病理学杂志第33卷第3期4, pp. 333 - 340,2011。视图:出版商的网站|谷歌学者
17. P. S. Nielsen, R. Riber-Hansen，和T. Steiniche，“Ki67/MART1和HMB45/MITF免疫组化双染色:黑素细胞病变的有前景的诊断工具，”美国皮肤病理学杂志第33卷第3期4, pp. 361 - 370,2011。视图:出版商的网站|谷歌学者
18. P. Quatresooz和G. E. Piérard，《恶性黑色素瘤:从细胞动力学到微转移》，美国临床皮肤病杂志，第12卷，第2期2，第77-86页，2011。视图:出版商的网站|谷歌学者
19. J. A. Carlson, J. S. Ross, A. Slominski等，“黑色素瘤的分子诊断”，美国皮肤病学会杂志号，第52卷。5，页743-775,2005。视图:出版商的网站|谷歌学者
20. K. K. Sra, M. Babb-Tarbox, S. Aboutalebi等人，“皮肤病的分子诊断”，皮肤病学档案，第141卷，第141期2，页225-241,2005。视图:出版商的网站|谷歌学者
21. J. A. Carlson, J. S. Ross和A. J. Slominski，“帮助诊断和预测黑色素瘤的皮肤病理学新技术，”在皮肤科诊所第27卷第2期1，第75-102页，2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
22. R. Lazova, B. E. Rothberg, D. Rimm，和G. Scott，“信号量7A受体丛蛋白C1在黑色素瘤转移过程中丢失”美国皮肤病理学杂志第31卷第1期2，页177-181,2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
23. W. A. M. Blokx, M. C. van Dijk，和D. J. Ruiter，“皮肤黑素细胞病变的分子细胞遗传学——诊断、预后和治疗方面”，组织病理学第56期1，页121 - 132,2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
24. O. E. Dadzie, M. Neat, A. Emley, J. Bhawan，和M. Mahalingam，“分子诊断学”。这是皮肤学的前沿领域，”美国皮肤病理学杂志，第33卷，第1-16页，2011。视图:出版商的网站|谷歌学者
25. O. E. Dadzie, S. Yang, A. Emley, M. Keady, J. Bhawan，和M. Mahalingam，“与原发性皮肤黑色素瘤相连的普通黑素细胞聚集物中的RAS和RAF突变:黑色素瘤形成的线索，”英国皮肤病杂志号，第160卷。2, pp. 368 - 375,2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
26. P. Uribe, I. I. Wistuba和S. Gonzalez，“常见和非典型黑素细胞痣和原发性皮肤黑素瘤的等位基因分型、微卫星不稳定性和braf突变分析”，美国皮肤病理学杂志第31卷第1期4, pp. 354-363, 2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
27. Zhou Y.， D. L. Dai . M. Martinka等，“骨桥蛋白表达与黑色素瘤侵袭的相关性”，皮肤病学调查杂志号，第124卷。5、2005年。视图:出版商的网站|谷歌学者
28. M. A. Carless和L. R. Griffiths，《黑色素瘤和非黑色素瘤皮肤癌的细胞遗传学》，实验医学与生物学进展，第624卷，第227-240页，2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
29. S. Gellrich, R. Ventura, M. Jones, S. Y. Tan, D. Y. Mason，“皮肤活检的免疫荧光和FISH分析”，美国皮肤病理学杂志第26卷第2期3，页242-247,2004。视图:出版商的网站|谷歌学者
30. B. C. Bastian, M. Kashani-Sabet, H. Hamm等人，“基因扩增特征肢端黑色素瘤，并允许检测周围皮肤中的隐匿性肿瘤细胞，”癌症研究，第60卷，第2期第7页，1968-1973,2000。视图:谷歌学者
31. M. Braun-falco, W. Schempp，和W. Weyers，《皮肤病理学中的分子诊断:什么有意义，什么没有意义》实验皮肤病学第18卷第2期1，第12-23页，2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
32. P. Gerami, S. S. Jewell, L. E. Morrison等人，“荧光原位杂交(FISH)在黑色素瘤诊断中的辅助诊断工具，”美国外科病理学杂志第33卷第3期8, pp. 1146-1156, 2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
33. A. L. Morey, R. Murali, S. W. McCarthy, G. J. Mann，和R. A. Scolyer，“四色荧光原位杂交诊断皮肤黑素细胞肿瘤”，病理号，第41卷。4, pp. 383-387, 2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
34. M. D. Newman, T. Lertsburapa, M. Mirzabeigi, M. Mafee, J. Guitart，和P. Gerami，“荧光原位杂交作为恶性黑色素瘤微分期的工具，”现代病理学第22卷第2期8，第989-995页，2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
35. M. D. Newman, M. Mirzabeigi，和P. Gerami，“染色体拷贝数的变化支持老年小粒性交界性黑色素瘤作为一种黑色素瘤亚型的分类，”现代病理学第22卷第2期9，第1258-1262页，2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
36. J. D. Lee, E. R. Unger, C. Gittenger, D. R. Lee, R. Hebert, and J. C. Maize，“黑素细胞病变1q12卫星III DNA的间期细胞遗传学分析:恶性组织学非整倍体增加”美国皮肤病理学杂志，第23卷，第2期。3，页176-180,2001。视图:出版商的网站|谷歌学者
37. J. W. M. Jeuken, S. H. E. Sprenger, P. Wesseling，《比较基因组杂交:实用指南》，分子病理诊断，第11卷，第5期。4，页193 - 203,2002。视图:出版商的网站|谷歌学者
38. B. C. Bastian, A. B. Olshen, P. E. LeBoit, D. Pinkel，“基于DNA拷贝数变化对黑素细胞肿瘤进行分类”，美国病理学杂志第163期5，页1765-1770,2003。视图:谷歌学者
39. J. Bauer和B. C. Bastian，“通过DNA拷贝数变化区分黑素细胞痣和黑色素瘤:比较基因组杂交作为一种研究和诊断工具”，皮肤治疗第19卷第2期1，页40-49,2006。视图:出版商的网站|谷歌学者
40. B. C. Bastian, A. B. Olshen, P. E. LeBoit, D. Pinkel，《基于DNA拷贝数变化对黑素细胞肿瘤进行分类》，美国病理学杂志第163期5，页1765-1770,2003。视图:谷歌学者
41. P. D. Da Forno, A. Fletcher, J. H. Pringle，和G. S. Saldanha，《理解spitzoid肿瘤:来自分子病理学的新见解》，英国皮肤病杂志第158卷第1期1，第4-14页，2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
42. M. J. Murphy, M. Jen, M. W. Chang, J. M. Grant-Kels, H. Makkar，“3个月婴儿先天性黑素细胞痣中发生的良性增生性结节的分子诊断”，美国皮肤病学会杂志，第59卷，第59期3，页518-523,2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
43. P. Quatresooz, C. Piérard-Franchimont，和G. E. Piérard，“突出黑色素细胞瘤的免疫组化特征，”肿瘤的报道第19卷第2期6, pp. 1367-1372, 2008。视图:谷歌学者
44. B. C. Bastian, J. Xiong, I. J. Frieden等，“先天性黑素细胞痣引起的肿瘤的遗传变化:结节增生与黑素瘤之间的差异”，美国病理学杂志号，第161卷。4，页1163-1169,2002。视图:谷歌学者
45. M. Kunz, S. M. Ibrahim, D. kozan, S. Scheid, H. J. Thiesen，和G. Gross，“DNA微阵列技术及其在皮肤病学中的应用”，实验皮肤病学，第13卷，第2期10，页593-606,2004。视图:出版商的网站|谷歌学者
46. K. Sellheyer和T. J. Belbin，“DNA微阵列:从结构基因组学到功能基因组学”。基因芯片在皮肤病学和皮肤病理学中的应用美国皮肤病学会杂志第51卷第1期5，页681-692,2004。视图:出版商的网站|谷歌学者
47. S. S. Koh, M. L. Opel, J. P. J. Wei等，“利用基因表达芯片标记和福尔马林固定和石蜡包被组织的黑色素瘤和痣的分子分类，”现代病理学第22卷第2期4，第538-546页，2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
48. H. Takeuchi, D. L. Morton, C. Kuo等，“黑色素瘤患者石蜡包埋前哨淋巴结分子分期的预后意义”，临床肿瘤学杂志第22卷第2期13, pp. 2671-2680, 2004。视图:出版商的网站|谷歌学者
49. B. Boone, M. V. Gele, J. Lambert, M. Haspeslagh，和L. Brochez，“RhoC在黑色素瘤生长和转移能力中的作用，”皮肤病理学杂志第36卷第2期6，第629-636页，2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
50. C. Tatlidil, W. S. Parkhill, C. a . Giacomantonio, W. L. Greer, S. F. Morris, and N. M. G. Walsh，“在黑色素瘤患者前哨淋巴结中检测酪氨酸酶mRNA并不是疾病短期复发的预测因子”现代病理学，第20卷，第2期。4，页427-434,2007。视图:出版商的网站|谷歌学者
51. R. A. Scolyer, R. Murali, S. W. McCarthy, J. F. Thompson，“黑色素瘤患者前哨淋巴结的病理检查”，诊断病理学研讨会，第25卷，第2期2，页100-111,2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
52. M. G. Cook和S. Di Palma，《黑色素瘤前哨淋巴结的病理学》，临床病理学杂志第61卷第1期8，第897-902页，2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
53. M. C. van Dijk, P. D. Rombout, S. H. boos - sprenger等人，“在福尔马林固定组织中检测染色体增益和损失的多重连接依赖探针扩增，”分子病理诊断第14卷第2期第1页，2005。视图:出版商的网站|谷歌学者
54. J. Rangel, M. Nosrati, S. P. L. Leong等，“RGS1在黑色素瘤进展中的新作用，”美国外科病理学杂志，第32卷，第2期8，第1207-1212页，2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
55. M. Erali, K. V. Voelkerding和C. T. Wittwer，“高分辨率熔解在临床检验医学中的应用”，实验与分子病理学第85卷第1期1，页50-58,2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
56. D. J. Bunyan, A. C. Skinner, E. J. Ashton等人，“基于mlpa的营养不良蛋白基因的同步多点突变和缺失分析”，分子生物技术第35期2，页135-140,2007。视图:出版商的网站|谷歌学者
57. D. T. Bishop, F. Demenais, A. M. Goldstein等，“黑色素瘤CDKN2A突变外外率的地理变异”，国家癌症研究所杂志，第94卷，第94期12，页894-903,2002。视图:谷歌学者
58. J. a . Newton Bishop和N. a . Gruis，“遗传学:对有黑色素瘤家族史的患者有什么建议?”在肿瘤学研讨会第34卷第3期6，页452-459,2007。视图:出版商的网站|谷歌学者
59. a . M. Goldstein, M. Chan, M. Harland等人，“与种系CDKN2A突变相关的特征:来自三个大陆的易患黑素瘤家族的基因组研究”医学遗传学杂志，第44卷，第5期。2，页99-106,2007。视图:出版商的网站|谷歌学者
60. P. Helsing, D. A. Nymoen, S. Ariansen等，“以人群为基础的CDKN2A和CDK4突变在多发性原发黑色素瘤患者中的患病率，”基因、染色体和癌症，第47卷，第47期。2，页175-184,2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
61. V.巴塔耶，《黑色素瘤的遗传流行病学》欧洲癌症杂志第39卷第3期10，第1341-1347页，2003。视图:出版商的网站|谷歌学者
62. A. Liede, B. Y. Karlan和S. A. Narod，“BRCA1或BRCA2生殖系突变男性携带者的癌症风险。文献综述，”临床肿瘤学杂志第22卷第2期4，页735-742,2004。视图:出版商的网站|谷歌学者
63. D. E. Freedberg, S. H. Rigas, J. Russak等，“p14ARF在人类黑色素瘤中的频繁p16独立失活，”国家癌症研究所杂志号，第100卷。11，第784-795页，2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
64. M. Singh, J. Lin, T. L. Hocker, H. Tsao，《黑色素瘤肿瘤发生的遗传学》，英国皮肤病杂志第158卷第1期1，第15-21页，2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
65. C. Dahl和P. Guldberg，《恶性黑色素瘤的基因组和表观基因组》，学院第115卷第1期10，页1161-1176,2007。视图:出版商的网站|谷歌学者
66. a·j·米勒和m·c·米姆，《黑素瘤》新英格兰医学杂志第355期1，第51-65页，2006。视图:出版商的网站|谷歌学者
67. H. Davies, G. R. Bignell, C. Cox等，“BRAF基因在人类癌症中的突变”，自然号，第417卷。6892页949-954,2002。视图:出版商的网站|谷歌学者
68. 吴东，王敏，王旭东等，“BRAF的缺失^V600E中国人群先天性巨大黑素细胞痣的突变美国皮肤病理学杂志第33卷第3期4, pp. 341-344, 2011。视图:出版商的网站|谷歌学者
69. J. L. Maldonado, J. Fridlyand, H. Patel等，“原发性黑色素瘤中BRAF突变的决定因素”，国家癌症研究所杂志， 2003年第97卷，第401-402页。视图:谷歌学者
70. N. M. Richmond-Sinclair, E. Lee, M. C. Cummings等，“皮肤黑色素瘤中P-MAPK、Brn-2、pRb、p53和p16免疫染色的组织学和流行病学相关性”，黑色素瘤研究第18卷第2期5，页336-345,2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
71. J. A. Curtin, K. Busam, D. Pinkel，和B. C. Bastian，“黑色素瘤不同亚型中KIT的体细胞激活”，临床肿瘤学杂志，第24卷，第2期26，第4340-4346页，2006。视图:出版商的网站|谷歌学者
72. J. Lutzky, J. Bauer，和B. C. Bastian，“具有K642E KIT突变的转移性黏膜黑色素瘤对伊马替尼的完全应答，剂量依赖，”色素细胞与黑色素瘤研究第21卷第2期4，页492-493,2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
73. G. Bollag, P. Hirth, J. Tsai等，“在braf突变型黑色素瘤中，RAF抑制剂的临床疗效需要广泛的靶标阻断，”自然，第467卷，第2期。7315, pp. 596-599, 2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
74. K. T. Flaherty, I. Puzanov, K. B. Kim等人，“转移性黑色素瘤中突变激活的BRAF抑制”，新英格兰医学杂志，第363卷，第2期。9，第809-819页，2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
75. J. N. Sondergaard, R. Nazarian, Q. Wang等人，“黑色素瘤细胞系与BRAF的差异敏感性^V600E特异性Raf抑制剂PLX4032突变，转化医学杂志， 2010年第8卷，第39条。视图:出版商的网站|谷歌学者
76. A. Viros, J. Fridlyand, J. Bauer等人，“通过整合遗传和形态学特征改进黑色素瘤分类，”《公共科学图书馆·医学》杂志上， vol. 5, article e120, 2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
77. N. Ichii-Nakato, M. Takata, S. Takayanagi等，“获得性痣和小型先天性痣BRAFV600E突变频率高，但中型先天性痣突变频率低，”皮肤病学调查杂志第126卷第1期9, pp. 2111-2118, 2006。视图:出版商的网站|谷歌学者
78. C. D. Van Raamsdonk, V. Bezrookove, G. Green等，“葡萄膜黑色素瘤和蓝痣中GNAQ的频繁体细胞突变”，自然，第457卷，第2期。729页，599-602,2009。视图:出版商的网站|谷歌学者

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