文摘

目标。本研究调查可能的肿瘤坏死因子之间的关联α-308 G / A,干扰素+ 874 A / T, il - 6 - 174 c / G, il - 10 - 1082 A / G和TGF-509 c / T多态性与hiv - 1感染,除了相关的多态性与临床标记艾滋病的进展,如水平的CD4 + / CD8 + T淋巴细胞和血浆病毒载量。方法。总共有216人感染了hiv - 1和抗逆转录病毒疗法(ART)和未感染对照组的294人进行了分析。结果。个人评价都是对总anti-HBc不利,anti-HCV,反t .螺旋体,anti-HTLV-1/2。多态性是通过PCR-RFLP识别。个人展示干扰素+ 874等位基因以及AA基因型更频繁的在hiv - 1感染组与对照组(),除了低水平的CD4 + T淋巴细胞。CD8 + T淋巴细胞数显著低于患者il - 10 - 1082 GG基因型。的TGF高-509 tt基因型与血浆病毒载量。结论。结果表明,干扰素+ 874一个等位基因的存在赋予hiv - 1感染的易感性和CD4 + T淋巴细胞数量的减少。此外,高血清水平的TGF相关联的基因型可能与血浆病毒载量的增加有关。

1。介绍

hiv - 1感染导致进行性下降外围CD4 + T淋巴细胞的数量,障碍在胸腺T细胞和抗原递呈细胞的数量和功能的变化,如树突状细胞和单核细胞(1,2]。

尽管大多数(70 - 80%)个人感染艾滋病毒发病经过多年的临床延迟,有大量的变异在不同的患者发病机理的过程中,有或没有治疗(3]。这个别间变化对病毒的易感性,进展从感染艾滋病,成功的传播,甚至在抗病毒治疗已归因于病毒的基因组成,环境因素,遗传变异的存在在多个宿主基因(4]。在这些宿主基因是基因编码细胞因子(5- - - - - -7]。这些可以功能分为促炎细胞因子(TNFα、il - 1、il - 6、干扰素γ,引发)和抗炎(il - 4、il - 10, IL-13 IL-1ra, TGFβ)类型和免疫反应的重要介质,函数被绑定到特定的受体,以应对各种刺激(8]。在hiv - 1的背景下,基因队列研究显示关联的几个单核苷酸多态性(snp)与不同的发展和变化对感染的易感性(9),包括基因编码分子参与吸附过程和病毒插入到宿主细胞(CCR5, CCR2,咆哮,SDF1),免疫反应的调节(肿瘤坏死因子,il - 10αMBL),病毒抗原识别的抗原表位的CD4 +和CD8 + T淋巴细胞(人类白细胞抗原或HLA)。

免疫原性的概要文件被广泛描述为重要因素与hiv - 1感染的易感性和演化,尤其是单核苷酸多态性(snp)在肿瘤坏死因子等细胞因子基因调节imune响应α,干扰素γ,TGFβ、il - 10、il - 6,但很少报道集中病人从巴西亚马逊地区,那里的人们有一种遗传背景由三个民族的混合。因此,本研究旨在评估肿瘤坏死因子的发生可能的协会α-308 g / A,干扰素γ+ 874 t / A, TGFβ-509 C / T, il - 10 - 1082 a / G和il - 6 - 174 G / C多态性与hiv - 1感染在巴西人居住在北部的国家艾滋病的进展及其影响实验室标记(CD4 + T淋巴细胞和血浆病毒载量)。

2。材料和方法

2.1。检查数量

216调查受试者感染hiv - 1(130名男性和86名女性),平均年龄的年,接受后续参考部门专门从事传染病和寄生虫病(Unidade de Referencia Especializada em Doencas Infecciosas e Parasitarias (URE-DIPE))位于贝伦的帕拉州的首都巴西,评估了从2008年到2010年。血清反应阳性的病人都是全国网络的一部分,CD4 +和CD8 + T细胞计数和血浆病毒载量,这是由巴西卫生部管理,接受抗逆转录病毒疗法(ART)。对照组是294年由健康的hiv - 1血清反应阴性的患者(191名男性和103名女性)的平均年龄年。个人从病人和对照组有相似的民族起源和hiv - 1感染的风险,居民在同一地理区域。在这两种人群,所有受试者的杂合的CCR5Δ32 [10]删除被排除在外,以避免偏见HIV-resistance授予这种突变。此外,在组患者,排除做是为了消除这种基因的可能性条件影响的值CD4 + / CD8 + T淋巴细胞计数和血浆病毒载量,使样本更均匀。这些数据收集从先前的研究在同一病人。本研究的研究伦理委员会批准若昂de Barros Barreto大学医院,和所有人同意参与这项研究签署知情同意的形式。

2.2。血清学、病毒载量和CD4 +和CD8 + T淋巴细胞计数

所有个人参与这项研究是测试的存在总anti-HBc (BioMerieux,里昂,法国),anti-HCV anti-T。螺旋体和anti-HTLV-1/2(邻位的临床诊断,新泽西,美国)抗体,和那些积极的任何标记被排除在外。病毒载量的量化是支DNA化验(bDNA)(美国马萨诸塞州拜耳公司)的最低检出限50 RNA拷贝/毫升。CD4 +和CD8 + T淋巴细胞计数进行了流式细胞仪(美国Becton和Dickinson FacsCount)使用FACSCountTM试剂immunomonitoring装备根据制造商建议的标准协议。

2.3。识别的多态性

DNA提取从整个使用Gentra外周血单核细胞系统Puregene DNA隔离设备(表达载体,明尼阿波利斯,美国)。放大的TNF的碎片α,干扰素γ,TGFβ、il - 6和il - 10基因是由聚合酶链反应(PCR)其次是多态性的识别使用限制片段长度多态性分析(RFLP)(表1)。随后,放大产品受到包含5在4%琼脂糖凝胶电泳μL SYBR安全DNA凝胶染色(10毫克/毫升)(美国明尼阿波利斯表达载体)。

2.4。统计分析

每个多态性的等位基因和基因型频率分布在感染和对照组被直接计算和估计使用卡方检验或确切概率法相比的情况下样本大小对于一个给定的基因型低于5。哈迪温伯格平衡测试使用卡方检验。基因型之间的关系和发展的标志(CD4 +, CD8 + T淋巴细胞和病毒载量)使用Mann-Whitney测试进行评估。5%的显著性水平()是采用统计分析使用软件BioEstat 5.0 v (11]。

3所示。结果

3.1。等位基因和基因型频率

观察和预期之间的偏差分析等位基因和基因型比例两组透露,人口都在哈迪温伯格平衡()为所有的多态性进行了研究。

在表2,这是表明TNF的等位基因和基因型的分布α、il - 10、il - 6、TGFβ基因这两个人群之间没有显著差异。然而,干扰素γ基因等位基因,与低血清水平相关的干扰素γ,纯合子的AA基因型与hiv - 1感染(和、职责)。比值比(或)显示,个人携带AA基因型的1.5倍的几率被感染了hiv - 1 (),以及一个等位基因的存在风险的1.3倍()。

3.2。基因型与协会的CD4 +和CD8 + T淋巴细胞水平

平均值的这种分析,最后三个CD4 +和CD8 + T淋巴细胞数量从每个被使用,是控制系统中访问全国网络的实验室检测CD4 + / CD8 + T淋巴细胞计数和病毒载量(Sistema de Controle de考试Laboratoriais da忠告Nacional de Contagem de Linfocitos TCD4 + / CD8 + e Carga病毒(SISCEL))。均值计算值之间没有显著差异的基因型il - 6、TNFα、il - 10和TGFβ基因(数据1和2)。然而,干扰素的运营商γTT基因型(图1(一))显著更高的CD4 + T淋巴细胞计数(586细胞/毫升)的载体相比,基因型AA(473细胞/毫升)和(424细胞/毫升)。

个人携带干扰素γTT基因型表现出更高水平的CD8 + T淋巴细胞(1118细胞/毫升)相比,基因型AA和(983和926个细胞/毫升,职责。),但没有统计学意义。个人携带il - 10 AG(1032细胞/毫升)和AA(955细胞/毫升)基因型的水平明显高于有CD8 + T淋巴细胞il - 10的GG基因型相比(744细胞/毫升)(图2 (d))。

3.3。基因型和血浆病毒载量

遵循相同的模式分析用于T淋巴细胞的水平,意味着去年3测量从每个人,不同基因型的病毒载量进行调查是否有血浆病毒载量的价值观和基因型之间的区别。在基因型频率分布差异血浆病毒载量价值观TGF基因型之间的明显不同β基因,转化生长因子βTT基因型与高病毒载量的值(图3 (e))。

4所示。讨论

基因的等位基因和基因型的分布评估在这项研究中显示独特的民族特征的变化,尽管一项研究由Kaur et al。12]在印度北部发现频率在目前所观察到的类似研究干扰素γ+ 874 t, TNFα-308年,il - 6 - 174 - c, il - 10 - 1082 g, TGFβ-509 t等位基因。然而,其他研究发现截然不同频率的il - 6 - 174 - c等位基因在澳大利亚7),il - 10 - 1082 g等位基因在西班牙13)和中国(14)和肿瘤坏死因子α-308年非洲人(一个等位基因15]。这些差异可能反映了不同人口模型、标准、方法,或用于研究样本大小。需要注意的是,亚马逊的遗传贡献人口特征分析了研究使用trihybrid模型,以47%的白种人,41%的土著居民,12%的非洲后裔(16),和不同于配置文件在其他的研究中,分析了由单一民族几乎完全形成。

在北美人感染hiv - 1 (17的频率),il - 10 - 1082 g, IL-4-33T,和il - 2 - 166 t等位基因只在非洲和拉美裔血统的人明显不同,表明一些多态性可能表明感染的易感性和发展不同的人群。大多数基因研究已经进行的高加索人(7,18- - - - - -21)和南非人口(15,22- - - - - -24]。在巴西,TNF的协会α观察-308年hiv - 1感染的易感性的等位基因;但是,与我们的研究中,这样做是在东南部地区和分析个人被诊断为艾滋病人巨细胞病毒视网膜炎的临床表现(25];另一项研究中,也进行了在同一地区,在地震和干扰素的基因多态性进行了调查γ患者的脂肪代谢障碍;然而,没有影响力的干扰素γ-874年一个等位基因被发现26]。

一些研究表明强有力的协会的干扰素γ-874 a / T多态性的病人感染了hiv - 1。有人建议,个人的纯合子的干扰素γ-874 / A基因型有一个更高的感染风险和发展为艾滋病27),类似的结果在这里找到。同样在韩国人,明显高于T等位基因的频率,与高水平的干扰素的生产γ被发现在对照组相比感染组(28]。多发性硬化病例感染艾滋病毒的人也与AA基因型(29日),这表明这个基因型可能影响这些感染者的临床恶化。

干扰素γT和产生的细胞因子激活NK细胞响应病原体入侵。这种细胞因子的生物学行为不同,包括免疫调节效应,激活巨噬细胞,抗菌和抗增殖活动(30.]。绑定的干扰素γ其受体激活STAT-1,进而结合转录因子,刺激mhc ii,蛋白激酶(PKR)和L核糖核酸酶表达。因此,干扰素的阻塞或失败γ信号通路带来更高的对感染的易感性,这表明干扰素的分泌γ可能是一个重要的效应功能的抑制hiv - 1和其他病毒感染(31日- - - - - -33]。在这项研究中,干扰素γ+ 874 tt基因型,与高干扰素γ生产,与相当高水平的CD4 + T淋巴细胞比其他两个基因型(AA)。Th1细胞分泌2,干扰素γ,肿瘤坏死因子α/β对胞内病原体直接免疫反应和刺激细胞免疫为主(34]。另外,干扰素γ扮演着一个很重要的角色,积极调控的基因编码mhc i,随后增加潜在的细胞毒性T淋巴细胞识别外国肽,从而促进诱导细胞免疫(35,36]。因此,高水平的干扰素γ刺激CD4 + T淋巴细胞的克隆扩张,促进维护响应过程中hiv - 1感染。

的影响和机制在hiv - 1的发病机制涉及il - 10的行动很有争议,建议与主机相关的因素,病毒,可能会导致这些结果和研究模型。几项研究表明,等位基因与低血清il - 10水平与hiv - 1感染的易感性增加,加速发展为艾滋病,尤其是在疾病的后期(6,37,38]。相比之下,其他研究表明等位基因的保护作用,与低水平的il - 10 (-1082 a和-592 a) (17,23]。Naicker等人证明了这些等位基因授予对艾滋病毒感染的易感性。在急性感染,低水平可以促进高水平以来保护作用可以促进抑制病毒复制的先天和适应免疫反应,但在慢性感染阶段,高水平的il - 10可能保护通过减少免疫激活和抑制艾滋病毒复制在巨噬细胞23]。在动物模型中,il - 10基因的删除或屏蔽的激活途径增加T细胞反应,导致发展的快速消除病毒和记忆T细胞的反应,并在病毒(39,40]。目前的研究发现,基因型与低水平的il - 10 (-1082 aa和AG)与CD8 + T淋巴细胞计数高于-1082 gg基因型。与我们的研究结果相似,Naicker et al。22]-592年发现基因型aa(低水平)与更大的大小反应特异性CD8 + T淋巴细胞,这表明等位基因变异可以影响疾病进展的速度通过调节血清水平和调节细胞毒性淋巴细胞的免疫反应。

在这项研究中,TGFβ-509 tt基因型与高生产水平的TGF有关β更频繁的血浆病毒载量水平较高的个体,尽管所有患者接受一种艺术疗法。众所周知,TGFβ刺激CTLA-4的表达,抑制生产[- 241]。CTLA-4 Treg细胞阳性的频率是增强患者的慢性感染hiv - 1,导致免疫功能障碍相关的病毒(42]。CTLA-4表达的增加与疾病进展标记,和体外阻塞CTLA-4 HIV-specific增加CD4 + T淋巴细胞的细胞功能(43]。此外,TGFβ可能会增加CCR5和趋化因子受体CXCR4的表达,从而增加hiv - 1感染的CD4 + T细胞的敏感性(44]。

因此,我们的结果可能表明,遗传标记的识别可能需要临床使用和分层的病人到新的免疫调节治疗。我们的研究结果表明,Th1 / Th2反应类型的优势将是理想保持免疫反应在hiv - 1感染发病机制,也会影响个体对这。我们的研究表明,基因型与高水平的干扰素γ可能有助于维护响应的CD4 + T淋巴细胞在主题艺术和TGF吗β抑制作用的开发和维护免疫反应会促进病毒复制导致的病毒载量水平增加。因此,未来的研究其他多态性分析,基因表达和血清水平将促进映射和识别疾病的候选基因。此外,最大的挑战之一,阻碍了疫苗的进一步发展个人间变异性在hiv - 1的免疫反应。

在巴西,对细胞因子的基因资料的病人感染了hiv - 1或对疾病进展的影响。因此,本研究有助于评估这些多态性及其影响的频率艾滋病毒感染的发展人口的生物标志物。然而,还需要更多的研究来补充这里给出的结果,以更好地了解所涉及的所有机制感染艾滋病的进展。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

作者感谢所有人参与了这项研究,以及成员LabVir参与收集样品。这部分工作是支持由巴西国家科学技术发展委员会(CNPq),研究生院长办公室(Pro-Reitoria de尽管e Pos-Graduacao (PROPESP / UFPA)),和研究支持和发展基金会(Fundacao de Apoio e Desenvolvimento da尽管(FADESP))。