文摘

这被认为是premetastatic利基(中性粒细胞)中扮演着一个关键的角色在促进骨转移的乳腺癌细胞。组织工程支架提供一个有利的环境,促进骨生成可能模仿骨premetastatic利基市场(bpmn)。在这项研究中,人类间充质干细胞(hMSCs)被播种到设计聚已酸内酯/ nanohydroxyapatite (PCL-nHA)支架成骨分化。随后,coculture系统用于建立培养乳腺癌细胞的组织工程bpmn, hMSCs, osteoid-formed PCL-nHA支架。之后,迁移试验被用来调查mda - mb - 231的招聘,MCF-7, mda - mb - 453细胞bpmn的上层清液。癌症干细胞(CSC)这些迁移细胞的性质进行了流式细胞术。我们的研究结果表明,碱性磷酸酶(ALP)的mRNA表达水平,Osterix, runt-related转录因子2 (Runx2)和α1型胶原(COL1A1) PCL-nHA支架相比,大大增加了PCL支架在第11天,18岁和32岁。CXCL12的表达在这些bpmn在coculturing逐渐增加时间,它可能是一个可行的bpmn的标志。此外,迁移分析结果显示,高成熟的bpmn共同导致了外建立一个更有利的癌症入侵网站。乳腺癌干细胞的族群(BCSCs)更有可能迁移到肥沃的bpmn。 The proportion of BCSCs in metastatic MDA-MB-231, MCF-7, and MDA-MB-453 cells were increased by approximately 63.47%, 149.48%, and 127.60%. The current study demonstrated that a designed tissue engineering scaffold can provide a novel method to create a bone-mimicking environment that serves as a useable platform to recapitulate the BPMNs and help interrogate the scheme of bone metastasis by breast cancer.

1。介绍

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤诊断在世界范围内,有近281550例浸润性乳腺癌的诊断和大约有43600人死于乳腺癌在美国2021年(1]。癌细胞骨转移,肺,肝脏和脑组织总是导致乳腺癌预后差(2]。大约有75%的患者将开发晚期恶性肿瘤骨转移(3]。骨转移发展的四个步骤的过程假设是殖民秩序,生存和休眠,复活和发展,和经济增长在二级网站,这解释了遥远的癌细胞迁移的机制(4]。因此,癌症细胞优先生长的微环境选择器官,和转移只发生在适当的转移性细胞植入一个合适的微环境。这个微环境被定义为premetastatic利基(中性粒细胞)5]。炎症免疫细胞、基质细胞、细胞外基质(ECM), tumor-secreted液,和利基归航因素应该提供合适的微环境,促进肿瘤细胞入侵,附着力,和增长5- - - - - -7]。因此,乳腺癌细胞转移的骨头并不是一个随机过程,而是受局部微环境的影响,这决定了肿瘤细胞入侵和殖民倾向的二级网站(2,4]。

仿生策略被用来概括骨微环境研究乳腺癌的转移(8,9]。支架被用来模仿这些二级网站的地形和机械性能在体外(10]。人性化的骨头在免疫缺陷主机允许解剖的一些机制在乳腺癌骨转移过程(11]。Thibaudeau等人建立了一个人性化的异种移植物模型的小鼠宿主可以有效地应用于靶组织的调查乳腺癌癌症骨转移在体内(12]。进一步研究调查了毁灭性影响乳腺癌细胞的骨基质转移造成的传播使用体外三维多孔聚氨酯泡沫(13]。组织工程骨已经被完全用于评估生存和休眠,复活和发展,和增长人性化的转移性乳腺癌细胞的网站(9,14,15]。然而,由于缺乏一个合适的在体外和在活的有机体内骨premetastatic利基市场(bpmn),很少有研究报道了入侵和殖民的过程当乳腺癌细胞迁移到辅助网站。

其他生物材料的方法被用来模拟BPMN体内细胞迁移和检测应用程序。首先,组织工程骨是集成到一个小鼠模型的转移性乳腺癌转移作为目标利基传播(16]。后来的研究表明,premetastatic外微环境构建通过骨组织工程能够捕捉转移性细胞(17,18]。谢伊等人也表明,植入支架模仿一个中性粒细胞可以用来捕获和检测早期自导转移性乳腺癌细胞体内(19,20.]。scaffold-captured肿瘤细胞被发现更激进的高流动性,这意味着更大的侵袭性的细胞(21,22]。招聘的早期转移性细胞植入支架降低了肿瘤负荷典型的转移地点和改善针对疾病的生存8]。而植入支架用于这些之前调查简化类似premetastatic利基,缺少几个关键组件,如肿瘤相关成纤维细胞、免疫细胞、内皮细胞、可溶性因子,和ECM,削弱了这些尝试能够提供一个更全面的观点来理解肿瘤细胞迁移的驱动因素6,23]。越来越多的证据表明人性化使用组织工程支架制作方法的适用性模拟骨组织微环境和繁殖转移殖民源自人类乳腺癌[24,25]。太阳等人证明CXCL12帮助招募乳腺癌细胞骨转移性网站(26]。据报道,抑制CXCL12-CXCR4交互可以显著降低乳腺癌细胞的转移二级网站(27]。CXCL12 / CXCR4相互作用打开了一个有针对性的癌症治疗的新方法通过中和CXCL12和趋化因子受体CXCR4 (28]。

目前的研究向前移动一步,旨在建立一个组织工程BPMN使用osteoid-formed脚手架评估乳腺癌细胞的迁移行为。在这项研究中,3 d打印技术被用来制造osteoid-formed脚手架。作为一个新兴的加法制造技术,三维(3 d)印刷已经显示出巨大的希望在制造人工组织支架孔隙和渠道结构(29日]。3 d印制生物可降解的高分子支架上可以提供个人多孔和网络微环境细胞附着和骨组织再生30.]。此外,PCL,可生物降解和生物相容性材料,已被广泛研究开发成骨分化支架或植入物在骨和软骨组织工程31日- - - - - -33]。在最近的研究中,我们假设人性化bpmn会有优越的遥远的骨转移性网站吸引乳腺癌细胞体外。为此,一个体外人性化BPMN捏造调查乳腺癌细胞的迁移。bpmn富含CXCL12 coculture系统是由包含乳腺癌细胞,hMSCs, osteoid-formed PCL-nHA支架。这个工程BPMN可以提供一种新的工具的详细调查乳腺癌细胞的迁移。

2。材料和方法

2.1。脚手架的设计和制造

PCL-nHA支架直径11毫米,1.6毫米高的设计和印刷分层技术。每个纤维的直径和间距在每一层共500名μm。每一层充满了0°的脚手架设计模式/ 60°、120°方向来创建一个多孔结构(图1(一))。简而言之,商用PCL(平均45000 Mn)和nano-HA粉(< 200海里)从Sigma-Aldrich购买(美国Sigma-Aldrich)和混合的物理混合之前进一步挤压作为一个可打印灯丝(其它地方描述的那样34,35]。包含15 wt %的复合丝nHA制造了一个挤出机(英国Noztek Pro, Noztek)在80°C。PCL-nHA支架是由使用熔融沉积造型(FDM)系统(Flash打造梦想家,中国),3 d印刷的方法之一,因为它很简单和成本效益,大多数研究的PCL支架制造关注FDM印刷过程(33,36]。在这项研究中,PCL脚手架没有nHA作为对照组。

2.2。支架的特点

PCL-nHA支架的几何形状是由金相显微镜评估(LV100ND、尼康、日本)和扫描电镜(SEM) (SU8020、日立、日本)。干样本第一次气急败坏的黄金样品导电。SEM图像拍摄的梁强度5 kV和用于估计支架的微观结构形态。热重分析(TGA)是用来确定的内容nHA PCL-nHA支架。实验上进行了TGA Q500(美国TA) 30 - 700°C的温度范围。样本从室温加热到700°C的升温速率在惰性环境中10°C /分钟。每个复合长丝的nHA加载效率评估在700°C。

2.3。播种的支架

人类间充质干细胞(hMSCs)从Cyagen购买(Cyagen,中国)。生产的指令后,媒体hMSCs培养在增长,其中包含杜尔贝科修改鹰的介质(DMEM)(美国热费希尔科学Gibco)补充10%的边后卫(美国热费希尔科学Gibco)和1%青霉素链霉素(美国热费希尔科学表达载体)在湿润的气氛中5%的有限公司₂和使用对数增长的阶段。然后,支架被播种 hMSC细胞用1毫升吸量器沿着印刷struts(埃普多夫,德国)。细胞被允许附加了30分钟。之后,梗塞部位的支架被转移到一个新的48-well文化为细胞培养板。最后,支架被随机分为三组的细胞生存能力分析、骨生成试验,建立人性化的bpmn。细胞生存能力分析,梗塞部位支架在增长媒体培养。对于其他两个实验,梗塞部位支架首次在媒体发展培养。在第四天,媒体增长取代商业成骨分化媒体工具,从Cyagen购买(Cyagen huxma - 90021,中国);成骨分化媒体每3天刷新。细胞播种之前,PCL-nHA支架是用75%乙醇消毒24 h,用无菌水冲洗,一夜之间暴露于紫外线,沉浸在磷酸盐(PBS)(美国热费希尔科学Gibco) 37°C公司5%₂24 h。

2.4。细胞生存能力

PCL-nHA的hMSCs支架的可行性评估使用现场/死工具包(美国Biovision)。总之,经过24小时的文化与种子细胞,用PBS样本洗两次。然后,500年μl(稀释染料溶液添加到每个好,其次是20分钟的孵化。生活(绿色)和死(红色)与倒置荧光显微镜观察细胞(IX73、奥林巴斯、日本)中描述的一项研究[33]。PCL支架没有nHA作为对照组。

MTT细胞增殖试验设备(美国Sigma-Aldrich)被用来评估的扩散hMSCs支架,后提供的协议中描述的制造商和先前的研究[37,38]。后1、3、7天的细胞培养、文化媒体取代了400年μl MTT试剂。48-well板块包含PCL-nHA支架和细胞培养在5%的股份有限公司₂在37°C 6 h。紫水晶是随着500年μl (DMSO(美国Sigma-Aldrich)和吸光度测量使用标570海里(Bio-Rad实验室,Inc .)、美国)。

2.5。基因表达的成骨的标记

成骨诱导持续了42天,进一步评估成骨的生物标志物的表达水平。梗塞部位支架在媒体增长首次培养4天之前所描述的细胞增殖。因此,文化总时间梗塞部位PCL-nHA支架46天。成骨的基因的表达水平在第11天,18岁和32是衡量TaqMan probe-based rt - pcr(美国应用生物系统公司ABI 7500棱镜)报道其他地方(37,39]。简而言之,所有骨性支架细胞溶解使用试剂盒(美国热费希尔科学表达载体);高容量RNA-to-cDNA工具包(美国应用生物系统公司,热费希尔科学)被用来合成互补,和成骨基因的mRNA水平高山(Hs01029144_m1) Osterix (Hs01866874_s1) Runx2 (Hs00231692_m1)和COL1A1 (Hs00164004_m1)测定相对于GAPDH (Hs99999905_m1)根据制造商的指示。所有数据归一化到mRNA水平相应的标记在骨性PCL支架没有nHA 11天。TaqMan引物和探针从应用生物系统公司购买(美国应用生物系统公司,热费希尔科学)。

2.6。bpmn Coculture建立的系统

在目前的研究中,建立了组织工程bpmn的coculturing osteoid-formed PCL-nHA支架,乳腺癌细胞,hMSCs coculture系统(图所示2)。三个乳腺癌细胞株mda - mb - 231, MCF-7,和mda - mb - 453,从希伯来文名字获得文化集合(BNCC,中国)。所有的乳腺癌细胞和hMSCs在DMEM培养补充10%的边后卫和1%青霉素链霉素在湿润的气氛中5%的有限公司₂和使用对数增长的阶段。coculture系统建立了通过使用不同尺寸的细胞培养插入(12-well板块文化插入和24-well板插入)。简单,经过46天的成骨分化,osteoid-formed PCL-nHA支架被播种到中间插入(12-well板文化插入)。乳腺癌细胞系被播种到下议院(12-well板)的密度 /毫升,1毫升的体积。hMSCs被播种到上部插入(24-well板文化插入)的密度 / 100μl。然后coculture系统37°C和5%孵化有限公司₂2毫升的文化媒体,包含DMEM、5%的边后卫,和1%的青霉素链霉素,改变媒体每隔一天。由于细胞生长,插入与乳腺癌细胞和hMSCs取代新鲜梗塞部位插入每三天。bpmn在成熟的不同阶段,收获在0.5天,1,2,3,5,7。插入和钱伯斯在这项研究中都是购自他一一Bio-One(他一一Bio-One,德国)。

2.7。ELISA

的表达中CXCL12 BPMN上层清液由ELISA检测根据制造商的指示。bpmn是收获和洗两次用PBS。后来,利基市场转入12-well文化板块2毫升的血清DMEM培养基的24 h孵化产生浮层。的osteoid-formed PCL-nHA支架没有coculture系统治疗作为对照组。商用CXCL12 ELISA试剂盒购自Abcam(英国Abcam)。

2.8。乳腺癌细胞迁移的分析

Transwell化验是用来调查乳腺癌细胞的招募BPMN上层清液。三个乳腺癌细胞株mda - mb - 231 - GFP, MCF-7-GFP,和mda - mb - 453 - GFP,不断表达绿色荧光蛋白(GFP),从希伯来文名字获得文化集合(BNCC,中国),在DMEM培养penicillin-streptomycin补充的边后卫为10%和1%。Transwell渗透细胞培养与8插入μm毛孔(他一一Bio-One、德国)被用于迁移化验。总之,乳腺癌细胞被播种到12-well板的上表面细胞培养密度插入 / 400μl。45分钟的细胞在无血清DMEM培养,确保附件。bpmn都转移到12-well文化板块2毫升的血清DMEM媒体的24小时的孵化生成上层清液用于降低Transwell室。类似地,osteoid-formed PCL-nHA支架没有coculture系统治疗沉浸在2毫升5%血清DMEM媒体有限公司₂在37°C 24 h作为空白对照组。最后,梗塞部位插入被转移到Transwell室含1.1毫升的bpmn的上层清液迁移分析。24 h后,乳腺癌细胞迁移的人数统计上中心,降低中心,离开中心,中心,中间低Transwell中心室使用荧光显微镜(日本奥林巴斯)。移民数量在每个字段是精心计算分辨率荧光显微镜下(40 x)。这五个领域的平均数量被定义为迁移数。

2.9。流式细胞术

调查的分组人口比例与转移性癌症干细胞(CSC)属性较低的细胞克隆Transwell室,建立的bpmn在第七天coculture系统被用于这些癌细胞的特征描述的其他地方(40,41]。迁移后24 h, mda - mb - 231和mda - mb - 453肿瘤细胞被收集并沾共轭反人类的ALDH1A1-FITC(英国Abcam)和MCF-7癌细胞沾CD44-PerCP-Cyanine 5.5和CD24-PE(美国BioLegend)抗体对冰在黑暗中30分钟根据制造商的协议。然后,流式细胞术分析的样本使用NovoCyte 2060 r(美国汽车)。正常培养乳腺癌细胞在这项研究作为对照组。

2.10。统计分析

所有结果从至少三个独立的实验。给出的数据 。统计学意义是评估使用单向方差分析(方差分析)。当方差分析显示组间的显著差异,评估统计学意义 和 。

3所示。结果

3.1。支架的特点

印刷PCL-nHA支架具有定义良好的内部几何和连通孔隙对应设计模型如图1(一)。通过扫描电镜的图像显示出均匀分布的nHA粉在PCL-nHA丝(图1 (b))。金相显微镜图像表明,struts的支架有一个均匀分布的结构(图1 (c))。总共 wt % ( )nHA被证实存在于PCL-nHA复合长丝通过TGA分析(图1 (d))。

3.2。细胞培养和成骨分化PCL-nHA支架

生活/死化验结果建议的可行性hMSCs在PCL(图3(一个))和PCL-nHA(图3 (b)支架没有不同的细胞后播种。PCL-nHA支架上的hMSC细胞增殖培养后被一个MTT试验验证,3和7天,如图3 (c)。样品与nHA显示细胞数高于PCL支架。值得注意的是,有显著的差异在天3和7相比,PCL支架( )。此外,PCL-nHA内细胞生长支架是大幅度增加逐渐随着时间( )。

检测基因表达的高山,Osterix Runx2, COL1A1成骨细胞标记,TaqMan probe-based rt - pcr检测的标记为成骨分化进行hMSCs培养PCL-nHA支架在11天,18岁,32(图4)。高山的表达、Osterix Runx2, COL1A1显示显著差异( ,相比PCL脚手架)连接细胞天18 - 32。高山的mRNA水平达到了18天的最高点(图4(一))。Osterix的表达水平和Runx2 PCL-nHA支架逐渐增加随着时间的推移,18日,32天,水平明显高于对照组(图4 (b))。COL1A1大幅度增加在PCL-nHA支架后32天的孵化与hMSCs成骨分化媒体( )。

3.3。表达水平的CXCL12骨Premetastatic利基

三个乳腺癌细胞系参与coculture系统调查提出coculture时间是否介导bpmn的形成。的表达中CXCL12 bpmn收获从coculture系统逐渐随着时间的增加,达到最高点在7天(图5)。然而,没有明显区别每天5和7组在所有类型的乳腺癌细胞。类似的结果也获得0和0.5组。值得注意的是,CXCL12显著增加5天后coculture相比,第三天集团( )。此外,mda - mb - 231细胞提升更高的CXCL12表达水平在bpmn在乳腺癌细胞系中,尤其是MCF-7细胞相比,天2和5。

3.4。乳腺癌细胞喜欢更高的成熟度Premetastatic利基

的招聘选择乳腺癌细胞的BPMN上层清液恰逢coculture时间osteoid-formed PCL-nHA支架。如图6经过7天的coculture孵化,bpmn最高吸引转移性乳腺癌细胞的能力。从天0.5 5,移民数量在每个BPMN上层清液显著增加相比,他们的祖先( )。然而,没有显著差异之间的迁移数量5和7天组。mda - mb - 231细胞显示最高的移民数量在每个bpmn MCF-7相比,在成熟的不同阶段和mda - mb - 453细胞。

3.5。癌症干细胞迁移细胞的特征

评估bpmn能否促进BCSCs迁移,流式细胞仪是用于ALDH1A1-FITC-stained或CD44-PerCP-Cyanine 5.5 / CD24-PE-stained乳腺癌细胞从低Transwell钱伯斯获得。MCF-7,转移性mda - mb - 231和mda - mb - 453细胞表明的分组人口BCSCs ALDH1A1的高表达⁺和CD44⁺/ CD24^{- - - - - -}增加与对照组相比,表示图吗7(一)。这一发现表明,迁移的细胞表达这些基因在更高水平增强肿瘤发生的潜力。此外,这些数据显示,BCSCs转移性mda - mb - 231, MCF-7,和mda - mb - 453细胞增长了大约63.47%,149.48%,和127.60%,分别比控制( )(图7 (b))。这些结果表明,bpmn可能是一个积极的利基BCSCs招聘的。

4所示。讨论

工程一个人性化的中性粒细胞提供能够识别关键因素如炎性免疫细胞,分泌的因素,液,ECM,传递细胞导致转移性细胞的入侵和殖民的二级网站,可以进一步发展作为诊断和治疗平台(5]。提出了组织工程骨概括乳腺癌骨转移的发展(13,18),前列腺癌(42],造血干细胞/癌细胞[43]。尽管如此,这些之前调查中使用的支架简化类似于中性粒细胞,然而缺少几个关键组件,如肿瘤相关成纤维细胞、免疫细胞、内皮细胞和可溶性因子,降低了这些尝试能够提供一个更全面的观点来理解肿瘤细胞迁移的驱动因素6,23]。因此,关键的挑战是正确模拟premetastatic外微环境中建模的物理、机械和生物属性(13]。

进一步研究的工程师一个合适的BPMN在乳腺癌骨转移,在当前的研究中,一个osteoid-formed PCL-nHA脚手架由3 d印刷制作。PCL FDA批准的药物释放,伤口敷料,缝合钉和其他临床应用(36,37]。3 d打印的PCL和内部连接支架孔隙结构被广泛应用于骨组织工程由于其生物降解性、无毒性、生物相容性和高弹性(33,36,44,45]。然而,PCL形成弱键与新形成的骨沉积(46]。为了解决这个问题,HA加入PCL-HA复合形式,具有更好的生物相容性,生物活性,比单独PCL osteoconductivity [34,37,46- - - - - -49]。

bpmn与建立了不同期限coculturing乳腺癌细胞,hMSCs, osteoid-formed PCL-nHA支架在这项研究中。刘等人证实,cancer-derived分泌因素诱发的动员和招聘几个细胞群附属机构网站,包括骨骨髓来源的细胞和监管/抑制免疫细胞。后来,bpmn经历了一系列的分子和细胞变化形成metastatic-designated网站,从而支持肿瘤结算在一个遥远的器官,促进癌细胞殖民6]。在这项研究中,bpmn的成熟只是CXCL12表达水平的评估。最近的一项研究表明,CXCL12促进招聘VEGFR1 CXCR4-overexpressing癌细胞的扩散⁺和CD11b⁺BMDCs到premetastatic外微环境(50]。这种现象与之前的研究是相一致的转移性肿瘤细胞高表达的趋化因子受体CXCR4迁移到一个转移地方CXCL12浓度也很高(51]。许多其他研究也证实,CXCL12转移网站可以促进癌细胞的归航的骨骼、大脑、肝脏和肺(52- - - - - -54]。在我们目前的研究中,CXCL12的表达在bpmn coculture时间增加。然而,经过5天的coculture CXCL12的表达在bpmn相比没有明显的变化与天7(图3)。这个结果暗示bpmn的成熟改变了仅略coculture 5天后。因此,CXCL12可能是一个有用的生物标志物bpmn的成熟。然而,多种细胞因子发挥着至关重要的作用在bpmn的形成6]。例如,骨桥蛋白(55,56),TGF -β(57,58)和基质金属蛋白酶(59,60)被证明能促进bpmn的形成和促进乳腺癌的骨转移的发生。因此,一个完整的和正确的生物标志物bpmn在未来需要讨论。

的招聘选择乳腺癌细胞系表明一个更成熟的BPMN有助于创建一个合适的地点为细胞迁移。在这项研究中,不同的bpmn的乳腺癌细胞迁移可分为三个阶段。在最初的阶段(天0 - 0.5),转移性细胞的数量略有改变,和乳腺癌细胞大多是被osteoid-formed PCL-nHA支架由于coculture时间的短缺。在0.5 - 5天,5 - 7天的时间,细胞因子和自导因素不断释放,和转移性细胞的数量随着时间的推移逐渐增加,这是符合CXCL12的表达水平。结果表明,人性化的中性粒细胞吸引转移性细胞提供一个有用的平台。

越来越多的证据表明,二者的存在导致恶性肿瘤复发和转移(61年- - - - - -63年]。ALDH⁺和CD44⁺/ CD24^{- - - - - -}是常见的乳腺癌干细胞的标志(41,64年- - - - - -66年]。在最近的研究中,流式细胞仪分析显示,癌症干细胞特性的细胞迁移的乳腺癌细胞明显高于对照组( )。这一结果表明,人性化的bpmn癌症干细胞更容易陷阱。布什内尔等人也报告说,scaffold-captured更激进的体外肿瘤细胞,展示了更高水平的迁移和入侵,更大比例的癌症干细胞比原发肿瘤(21]。随后的研究表明,这些植入物对癌症干细胞的吸引能力更可能依赖于免疫细胞(22]。然而,除了炎性免疫细胞,组织工程bpmn富含CXCL12确认具体归航因素发挥了至关重要的作用在乳腺癌细胞的招募。

最近的证据表明,组织工程中性粒细胞可能会提供一个新策略对乳腺癌的早期发现19]。然而,这些平台的功效是低于外来体检测(67年)和循环肿瘤细胞(CTC)枚举68年,69年]。BPMN战略转移检测的优点包括敏感性和特异性(5]。液是异构和显示在健康的病人(高70年]。此外,ctc的存在意味着转移的风险,但并不意味着存在一个合适的微环境细胞殖民在选定的器官6,69年]。Aguado等人审核材料和生物修改用作招聘功能植入设备和检测转移性细胞(5]。然而,创建一个网站的整体安全转移性细胞回家需要评估在临床试验中。除此之外,还有缺乏机制启示在分子和细胞组件在这个人工微环境。此外,这个组织工程BPMN招募转移性乳腺癌细胞,抑制premetastatic利基的形成和衰减转移进展体内需要未来的研究。

5。结论

我们的结果主要证据,人性化的bpmn可能为细胞迁移提供了一个合适的地点在体外。在这个工作中,bpmn与建立了不同期限coculturing类骨质形成PCL-nHA支架,hMSCs和乳腺癌细胞。我们证明CXCL12的表达在bpmn在coculturing时间逐渐增加。此外,迁移试验结果表明,高成熟的bpmn共同导致了外建立一个更有利的癌症入侵网站。BCSCs的族群更容易迁移到肥沃的bpmn。总的来说,这项工作的结果提供了一个新颖的方法来创建一个人性化的BPMN来概括bone-mimicking转移性网站,帮助审问乳腺癌骨转移的方案。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。