横向比较研究的维达尔的性能测试和诊断伤寒的Typhidot免疫测定喀麦隆的西部地区

文摘

背景。基于维达尔的诊断伤寒幻灯片凝集试验仍然是一个发展中国家的主要障碍,由于不同的感知价值的维达尔试验在确定临床决策。我们进行了一项研究,评估的诊断性能维达尔试验和Typhidot免疫测定患者疑似伤寒Menoua部门,喀麦隆的西部地区。方法。血液和粪便样本收集从558年的发热患者的基础上,对伤寒的怀疑。这些病人参加Menoua的三个地区卫生服务部门2018年4月至2019年9月。这些患者临床症状暗示伤寒是由他们的顾问。血清用于Typhidot快速的维达尔幻灯片凝集试验和免疫测定测试基于制造商的指导方针。发烧+积极coproculture复合参考伤寒沙门氏菌和甲型副伤寒沙门氏菌被用来作为参考。敏感性、特异性和预测价值的正面和负面测试计算以及科恩kappa的两次测试之间的协议。结果。的558名患者,12.90%阳性参考方法,维达尔幻灯片凝集试验阳性为57.17%,而15.59%是Typhidot-IgM阳性。整体的敏感性、特异性和预测价值的正面和负面测试是80.56%,94.03%,66.6%,97.03%,Typhidot-IgM和94.44%,48.35%,21.32%,98.33%,维达尔幻灯片凝集试验,分别。科恩kappa估计分别为0.1660(0.121 - -0.211)和0.386(0.312 - -0.460)维达尔试验和Typhidot协议的观察,免疫测定为53.6%和76.16%。结论。维达尔试验被发现有一个较低的预测价值诊断伤寒的设置。然而,Typhidot测试,虽然更好,并不理想。诊断伤寒应该依靠足够的临床怀疑和积极Typhidot测试提高伤寒的临床管理在我们的设置。

1。背景

伤寒肠热病引起的伤寒沙门氏菌和甲型副伤寒沙门氏菌仍然是一个主要的负担在发展中国家由于不同的认知价值的维达尔试验在确定临床决策。伤寒的负担,在世界范围内,表明,它会导致每年1660万新感染和600000人死亡(1]。然而,伤寒的发病率降至10/100,000人口/年在发达国家由于生活水平改善,适当的卫生和环境卫生,和更好的医疗系统,但发病率仍较高,100/100,000人口/年,在欠发达国家2]。一个关键挑战的有效控制伤寒与可怜的诊断。诊断伤寒的临床设置复杂,因为重叠的症状与其他常见的感染,如疟疾、登革热、和病毒性肠炎3- - - - - -5]。适当的诊断,试验具有良好的诊断性能,特别是在儿童发热性疾病(6,7),具有十分重要的意义。此外,滥用抗生素在临床的基础上通过automedication使得诊断困难(8]。的黄金标准的诊断伤寒肠热病血培养,但是这个测试不仅灵敏度很差在临床的设置也是耗时和昂贵的病人和诊所在远程设置文化设施可能不总是可用的和人口是穷人9]。这样设置的主要诊断是基于维达尔幻灯片凝集试验难以解释几个原因:大,感染之间的时滞和生产的抗体,和坚持的目标抗体治疗后长与活动性疾病相关性很低(10,11]。管稀释技术可以量化的具体的抗体,和效价的变化可以指示活动性疾病,但它并不是很容易理解。很多研究表明Typhidot测试,一个合理的选择基于抗体的检测对常见外膜制备生产伤寒沙门氏菌和甲型副伤寒沙门氏菌更好的性能特征。然而,变化的敏感性和特异性诊断伤寒肠热病成人和儿童也被指出[12- - - - - -14]。化验出好的结果在早期感染68 - 95%的敏感性和特异性(75 - 95%15,16]。增加的负面预测价值是非常重要的在流行地区17]。世界卫生组织推荐的伤寒抗体快速检测(18)和一些研究评估了Typhidot能力检测抗体显示敏感性和特异性的变化(15在不同的设置。虽然比较研究依赖于不完美的黄金标准的使用测试,复合参考建议来提高诊断价值,但未能达成协议的组合可以形成一个好的综合参考标准层等。19]。在这项研究中,我们进行了评估的诊断性能维达尔和Typhidot测试的综合参考了发烧的组合(≥37.50摄氏度),3 - 7天或更多,和积极的凳子文化测试伤寒沙门氏菌和/或甲型副伤寒结合一个或多个以下临床症状:持续头痛、腹部不适、呕吐和恶心。这种组合的选择是基于测试的可行性和独立条件的疾病,虽然不太特定的,是采取措施,排除其他常见发热性疾病如疟疾和呼吸道感染。这样做是为了找到一个本地策略更好地诊断伤寒。

2。方法

2.1。研究区和期

Menoua部门,喀麦隆的六个部门的西部地区,占地面积1380公里²;它分为六个细分(图1)如下:Dschang, Santchou、Nkong-Ni Penka-Michel Fokoue, Fongo-Tongo。海拔范围从600年到800年通过Dschang Santchou 1500 m和Djuititsa海拔2200米。该部门的平均降雨量1717.7毫米,和温度范围从13.6°C到25.35°C。4在每五indigene实践生存和/或小农农业、和最重要的食品包括卷心菜、胡萝卜、洋葱、玉米、香蕉、番茄、车前草、和豆类。在2005年,该部门有总人口285764。这个部门是Dschang的首都。

本研究从2018年4月到2019年9月进行的。

2.2。研究设计和人口

这是一个医院,横断面研究发热患者疑似伤寒。这些患者热(温度> 37.5°C包含)或报道发热在过去三天。符合条件的患者同意学习过程被召集来,由于独特的学习代码。这段代码是重复而不是病人的姓名或缩写在所有样本中收集这个研究的背景。报名表由研究密码保护和维护员工没有与后续相关研究过程。问卷包含人口和临床数据和已知的危险因素是每个参与者的管理。

2.3。测定方法

2.3.1。血液样本集合

的帮助下无菌注射器和针头,大约2 - 3毫升的血液收集每个参与者到达实验室。这是由训练有素的实验室技术人员独立的研究小组。

2.3.2。维达尔幻灯片凝集试验测试程序

定性幻灯片凝集试验进行了使用发热患者抗原包伤寒沙门氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌(TYDAL维达尔抗原对幻灯片和管测试,西班牙)。这个测试是用来确定抗和患者血清中抗体。收集血液离心机使用细菌实验室离心机(Andreas Hettich GmbH & Co . KG, 78532 Tuttlingen,德国)5000转5分钟。的决心沙门氏菌通过幻灯片凝集抗体,一滴伤寒沙门氏菌O和H抗原一滴血清在幻灯片上添加了卡,在100 rpm一分钟旋转,记录为反应性或不反应的。

2.3.3。测试程序的Typhidot测试(Typhidot(免疫测定)^®马来西亚Biodiagnostic)

Typhidot IgG、IgM快速检测设备检测免疫球蛋白g和IgM抗体伤寒杆菌和美国甲型副伤寒色彩通过视觉的发展。重组O和H抗原和反人类的免疫球蛋白和反人类的IgM抗体是人体全血中用于检测特定的抗体,血清或血浆标本。病人的血清样本添加到样品在测试面板,和特定的免疫球蛋白和/或IgM抗体,如果存在,绑定到重组O和H抗原结合彩色粒子在样品台上。作为标本沿地带迁移通过毛细管作用和膜与试剂,将捕获复杂的反人类的免疫球蛋白和/或反人类的IgM固定在检测区。

静脉血液收集病人怀疑有沙门氏菌感染(约2 - 3毫升)。血液标本被在5000转离心5分钟使用实验室离心机(Andreas Hettich GmbH & Co . KG, 78532 Tuttlingen,德国)。使用提供的吸管,一滴血清添加到测试在测试磁带跟着一滴缓冲区。15分钟的设置被允许跨膜迁移和显色结果窗口。

2.3.4。结果的解释

15分钟后,测试结果如下。被认为是免疫球蛋白和IgM阳性结果如果一个红色乐队出现在控制窗口(C)和其他两名红乐队在免疫球蛋白和IgM窗口,分别。树荫下的颜色可能会有所不同从粉红色到紫色但表明积极的结果即使有微弱的线根据制造商的建议。IgM被认为是积极的,当一个红色乐队出现在控制窗口(C)和IgM窗口,而积极的免疫球蛋白被认为是当一个红乐队出现在控制区域(C)和免疫球蛋白窗口。负面结果被红色的外观表示只有在控制窗口。测试试验被认为是无效的,如果控制线并没有出现。

2.3.5。粪便样本收集和Coproculture

大约3到4 g的新鲜粪便收集的发热病人coproculture测试经过短暂的培训如何使用无菌广口收集样本和透明的容器。评估员提供给每个参与者。集合后,粪便在3毫升生理盐水混合,和1毫升的这剂稀释9毫升刚做好的亚硒酸F肉汤(Oxoid CM0395B和LP0121A)在37°C到prelabelled管和孵化24小时耗氧的细菌培养箱(实验室孵化器、dnp - 9052 - 1、中场设备&科学,英格兰)放大的细菌生长。从3毫升生理盐水循环的培养液是条纹SSA琼脂(美国L: S-Biotech)和MacConkey琼脂(Microxpress^®、印度)和孵化24小时对菌落的生长。24小时后,一个循环完整的细菌培养孵化管亚硒酸包含文化多尝试进入Salmonella-Shigella琼脂(SSA)板块。盘子被仔细检查特点的殖民地的存在普罗透斯spp。大肠杆菌、沙门氏菌spp。枸橼酸杆菌属spp。、志贺氏杆菌spp。,克雷伯氏菌spp。,沙雷氏菌属spp。怀疑殖民地多尝试Salmonella-Shigella琼脂为进一步识别和确认使用API 20 e画廊(bioMerieux、法国)。技术人员执行coproculture被蒙蔽维达尔和Typhidot测试的过程和结果。

2.3.6。测试结果分类

维达尔试验结果分为积极或消极的基于的幻灯片反应病人的血清。程序后,如果病人血清反应,指出作为一个积极的测试结果。如果血清是不反应的,指出作为一个负面测试结果。得到严格执行,过程和分类研究中参与者的总数。

Typhidot免疫分析法测试结果是由免疫球蛋白和IgM积极性基于制造商的指导方针。这条指导原则的基础上,积极IgM IgM +免疫球蛋白和/或被认为是明确诊断伤寒。本研究的目的,积极的免疫球蛋白阳性参考没有考虑“仅仅”测试,因为它只能反映过去的接触也因为测试没有定量的价值。

参考测试coproculture阳性伤寒沙门氏菌/甲型副伤寒和热史(≥37.50摄氏度)以上3 - 7天内包括医院访问的一天。其他nontyphoidal沙门氏菌虽然确定了,没有构成一个积极的测试。他们因此认为负面的参考方法。一个积极的伤寒沙门氏菌甲型副伤寒/coproculture和发烧由腋窝温度> 37.5 C或报道发烧或更多被认为是3 - 7天内参照。我们包含了这些标准,以避免频谱偏差尽可能考虑到频谱的疾病严重程度可能存在卫生设施和病人暴露于抗生素的可能性之前去医院。

2.3.7。统计分析

我们计算了样本量的基础上发布的列线图Carley et al ., 2003年。基于灵敏度的计算图表情节在α= 0.05,我们估计的样本量使用以下标准:伤寒患病率为15%,估计95%的置信界限,1型误差为0.05。我们获得了估计有558名患者的样本。

本研究的主要结果的测试精度和预测价值的积极和负面测试维达尔幻灯片凝集试验和Typhidot免疫测定。次要结果比较等性能特征的敏感性,特异性,可能性比率之间的正面和负面测试维达尔和Typhidot测试在我们的设置。接收机操作曲线下的面积被用来估计维达尔的诊断准确性和Typhidot测试,而敏感性,特异性,预测值计算基于标准的公式。回归分析是用来评估风险因素研究伤寒的人口。所有数据都记录在一个预先设计的问卷设计在转移之前Epi Info GraphPad棱镜8.0.2 (GraphPad软件2019年,加利福尼亚州)进行进一步处理。一个所有的比较值< 0.05被认为是显著的。

3所示。结果

3.1。社会人口特征的受访者

我们登记共有558名患者呈现症状和体征提示研究伤寒的网站(表1)。大多数的参与者是女性,占总样本的67.38% (376/558)。大多数参与者的年龄范围(11- - - - - -20.)年(219/558,39.27%)和学生。学生根据职业,受访者都更多的代表(47.67% (n= 266),其次是在私营部门工作的参与者(25.80% (n= 144))。然后,我们有家庭主妇占21.68% (n= 121)的示例,最后公务员代表只有4.83% (n= 27)人口总数的研究。

基于教育水平,大约一半的研究对象有一个中等水平的教育(54.48%),其次是那些获得高等教育水平(31.18%),然后被那些只有初级教育水平(13.97%)。至少代表的是那些从不去学校(0.17%)。已婚人士更代表(56.27%),紧随其后的是那些单(37.27%),而寡妇代表最小(6.45%)(表1)。

3.2。分布的研究人群的流行伤寒

患者根据性别的分布显示了显著差异( )之间的男性和女性人群,男性更感染(18.1%)比女性(10.4%)。婚姻状况也显示了显著差异( ),未婚人口和伤寒的患病率较高(19.2%)。无论是下列因素:年龄,职业,或教育水平与伤寒(表相关联2)。

3.3。研究对象的临床症状和体征

在这项研究中,我们记录临床症状和体征所表达的研究参与者。我们估计这些体征和症状的频率,计算获得的相对风险伤寒症状和表中的数据3。观察,发热患者腹痛有超过2.5 x伤寒的风险相比,仅是发热。其他症状没有伤寒发热患者的风险增加。

3.4。维达尔和伤寒Typhidot测试诊断

我们发现有趣的对比维达尔和Typhidot测试诊断伤寒的能力相对于参考测试(表4)。整体的敏感性、特异性和预测价值的正面和负面测试是80.56%,94.03%,66.6%,和97.03%,分别为Typhidot-IgM和94.44%,48.35%,21.32%,和98.33%,维达尔凝集试验。科恩kappa估计分别为0.386(0.312 - -0.460)和0.1660 (0.121 - -0.211)Typhidot免疫测定和维达尔试验,分别。的观察,百分比agreementsfor Typhidot免疫测定是维达尔试验(表的76.16%和53.76%4)。

3.5。患病率研究伤寒的人口

的558名参与者在这项研究中,319例阳性伤寒基于抗体效价的维达尔试验1:80年“O”和“H”抗原被作为分界点值表明最近伤寒感染患病率为57.17%。相反,42.83% (n= 239)负了伤寒症维达尔时用作诊断工具。有趣的是,伤寒的患病率为15.59% (n = 87)基于Typhidot-IgM和接近12.90% (n = 72)的基础上,参考测试。在表5,我们总结患病率的差异估计这两个概念测试和基准测试。

如图所示,估计伤寒的患病率的差异是重要的( )比较三种诊断方法。最可能的估计真实的患病率估计得到的参考方法。

4所示。讨论

伤寒构成的一个发展中国家的发病率和死亡率的主要原因,由于不同的认知价值的维达尔试验在确定临床决策。这种疾病的临床诊断仍然是困难的,因为其症状类似于疟疾和许多其它疾病(3,21]。实验室确诊的感染已经依靠廉价的幻灯片凝集测试,他们的缺点导致假阳性检测结果的出现,它的大小取决于风土性的疾病。其他测试如Typhidot免疫测定和Tubex维达尔稀释测试确实存在,但并没有进行研究,以了解他们的价值的诊断伤寒在我们的设置。在最近的研究中,我们比较的性能维达尔幻灯片凝集试验和Typhidot试验的病人怀疑伤寒喀麦隆西部地区。

我们的研究显示差异维达尔幻灯片凝集的性能测试和Typhidot测试。相对于参考,维达尔试验的敏感性为0.9444(0.8657 - -0.9782)和0.4835(0.4394 - -0.5279)的特异性,而Typhidot测定灵敏度为0.8056(0.6997 - -0.8805),0.9403(0.9156 - -0.9581)的特异性。我们的研究结果表明,维达尔试验相比Typhidot测试表现很差。事实上,维达尔试验的结果表明,正确识别大约一半的患者与伤寒细菌感染,而只有6%的未受感染的病人将错误分类为伤寒;与此同时,他们未受感染。同时,维达尔试验确定94%的发热病人怀疑伤寒是积极的,而只有80%的患者积极Typhidot免疫测定。然而,只有五分之一的发热病人怀疑伤寒与积极的维达尔试验结果真正的疾病(PPV = 21.3%),两个在每三个疑似为伤寒发热病人有积极Typhidot测试真正的疾病(PPV = 66.7%)。这种低精度的维达尔试验相比Typhidot测试可以从接触交叉反应抗原结果除了发热性感染伤寒沙门氏菌。的确,伤寒沙门氏菌股票与其他nontyphoidal O和H抗原沙门氏菌肠杆菌科,以及一些寄生虫等恶性疟原虫(22,23),导致假阳性结果的概率增加。尽管一些参数之间的差距,我们获得类似的估计预测值的负面测试维达尔和Typhidot测试(分别为98.3%和97.0%)。这表明这两个测试有能力排除怀疑发热患者的疾病在人群中。

维达尔试验参数获得在目前研究显示一些通用模式与先前的研究,高灵敏度,低的预测价值的积极测试,和高负面测试的预测价值。例如,在研究Muthaiyan [24)和合作者,他们报道敏感性为88.5%(95%置信区间CI: -97.42(69.82)),特异性为81.56%(95%置信区间CI: -87.58(74.16)),阳性预测值46.94%(95%置信区间CI: -61.720(32.54))和阴性预测值为97.46%(95%置信区间:92.74—-99.44)维达尔凝集试验。在2016年一个类似的研究在印度24],作者报道的敏感性为80.77%(95%置信区间CI: -97.42(60.64)),特异性为78.01%(95%置信区间CI: -84.54(70.22)),阳性预测值40.38%(95%置信区间CI: -54.90(27.01))和阴性预测值为95.65%(95%置信区间CI: 90.14 - -98.56 ()))。Sherwal et al。25)也报道的敏感性为74%,特异性为83%,阳性预测值为87.5%。拉赫曼et al。26)获得的灵敏度为81.8%,特异性为69.2%,阳性预测值为45.6%。这种模式通常表明,维达尔幻灯片凝集试验,虽然高度敏感,不能用于排除疾病的那些积极的结果。此外,高预测价值的负面测试结果表明,该测试可以排除疾病的病人,有负面测试结果。最后,测试了一个糟糕的协议由低科恩kappa值表示。

流行已被证明在不同地区不同的喀麦隆。例如,它被发现8.70% Bamenda(西北)27喀麦隆在布埃亚],21%,西南地区(28),2.5%通过Nsutebu et al。29日在Tiko、杜阿拉、雅温德(沿海和中部地区,分别)。我们估计还不到在类似的研究中获得的患病率在尼日利亚(30.]。几个原因如样本大小的差异,风险因素和环境条件可以解释这些患病率之间的差距。虽然不同,但它不太可能,伤寒的性能参数测试的模式在目前的研究中使用可能会改变从一个地区到另一个地方,虽然性能参数的大小可能会有所不同。在目前的研究中,5例证实伤寒的参考测试-维达尔和Typhidot-IgM测试。这些观察,尽管数量很少,可能源于早期抽样前抗体成为一项研究在血液检测报告(31日]。此外,Andualem等人发现两例这类研究比较维达尔幻灯片凝集试验对血培养(作为参考32]。虽然不频繁,这一观点也可能占假阴性结果的指标测试伤寒immunodiagnostics的比较研究。延迟产生抗体在疾病早期可能这个观察的主要决定因素。类似的观察了最近在血清学测试用于检测接触COVID-19病毒(33]。

我们的研究有一些局限性。首先,血液文化已经被认定为参考标准测试来评估诊断伤寒的性能测试。然而,也有与测试相关的问题。它首先是一个侵入性程序(34),已经证明具有较低的敏感度,即使没有接触抗生素(19]。此外,获得充足的血液从组织如儿童是具有挑战性的。这些使使用这样的测试挑战在我们的设置。我们使用积极的凳子上文化的综合参考和发热大于或等于37.5°C或发烧的历史过去三到七天。这也不是理想的参考但代表了最佳组合在我们当地的情况下由于其实用性。寻找一个完美的综合参考诊断比较肯定是仍然有办法即使新兴技术(34]。其次,我们没有办法检查抗生素暴露历史数据。我们也没有收集临床药物过度治疗这些病人的处方数据量化,并因此可能影响治疗的实践在我们的诊断精度估计。这也许可能有一个小的影响我们的结果进行解释时应特别谨慎。

5。结论

我们比较的诊断性能维达尔幻灯片对coproculture凝集试验和Typhidot-IgM试验,和下面的结果:Typhidot免疫测定的敏感性为80.56%,特异性为94.03%,阳性预测值为66.67%,阴性预测值为97.03%。维达尔幻灯片凝集试验的敏感性为94.44%,特异性为48.35%,阳性预测值为21.32%,阴性预测值为98.33%。Typhidot是一个更好的选择比维达尔试验在诊断伤寒。维达尔试验只有排除了5个伤寒疑似病人检测呈阳性,而不是两三个Typhidot免疫分析法检测呈阳性。我们的研究结果表明,维达尔幻灯片凝集试验,在当前配置中,没有伤寒的临床益处确认在喀麦隆等流行地区。

缩写

免疫球蛋白:	免疫球蛋白G
IgM:	免疫球蛋白M
SSA:	Salmonella-Shigella琼脂。

数据可用性

数据集和/或分析数据及材料在当前研究可从相应的作者在合理的请求。

伦理批准

伦理批准获得国家伦理委员会的涉及人体受试者的研究(CNERSH)(没有。2019/11/56 / CE / CNERSH / SP),喀麦隆雅温得。研究授权也来自所有地区Menoua部门负责人和主管不同的医院,采样和数据收集。研究授权也是Dschang大学颁发。

同意

潜在的信息发布的匿名数据包括自愿的过程中在信息表。所有参与者知道和同意出版的数据在这个手稿。收集数据和样本后才获得了知情同意从每个志愿者和监护人。所有病人提供书面知情同意前研究过程。那些不能写被study-independent个人协助。同意表格翻译和翻译成法语。使用的信息表和同意书是伦理委员会认可的副本。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

CBT和目标设计研究。KO、LSF和MSN进行采样和实验室分析。KO和TFT执行统计分析。所有作者参与的书面批准的最终版本的手稿。

确认

作者要感谢所有参与者牺牲自己的时间和捐献的血液和粪便样本研究。他们还特别感谢医生和实验室技术人员不同的医院的贡献。

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