人口、化学和幽门螺杆菌积极评估不同类型的胆结石和胆汁在胆囊切除术的随机样本伊朗胆石病的患者

文摘

背景。石头的发生在胆囊或胆总管和他们引起的症状和并发症称为胆石病。胆源性疾病从轻微的症状,非特异性的症状严重右象限腹痛。胆石类型的特点在伊朗人口尚未深入研究之前,有非常有限的研究在我国人口模式的石头类型,所以本研究的第一个同类研究的流行病学胆石类型在伊朗。石的化学成分信息将帮助管理和预防胆结石,在这项研究中,我们旨在做胆结石的化学成分分析包括胆固醇、胆红素、和钙。鉴于相互冲突的报告之间的关系幽门螺旋杆菌感染和胆石的形成,本研究旨在调查之间的关系幽门螺旋杆菌积极性伊朗胆石病的患者和胆汁标本的形成和类型的石头。方法。这项前瞻性研究回顾了196病人胆囊切除术对胆石病症状Shahid Beheshti说培训和研究医院附属于Yasuj医科大学2015年9月至2018年5月。化学分析胆石组件的使用比色法方法执行。微生物分析幽门螺旋杆菌完成现场吗幽门螺旋杆菌Ag)快速检测胆汁样品。胆汁的验证测试幽门螺旋杆菌快速的凳子,凳子Ag)测试和科恩Kappa统计分析是下完成的。结果。之间有重要关联的石头类型和年龄,石头的化学成分如钙、胆固醇、胆红素水平,和也幽门螺旋杆菌积极性和胆固醇和胆红素水平;然而,没有发现显著的协会之间的石头类型和性,幽门螺旋杆菌积极性和年龄、性别、石类型和钙水平。主要的胆汁和有效性测试与实质性协议根据科恩Kappa分析。最常见的药物使用质子泵抑制剂,非甾体类抗炎药物,抗高血压药物,口服避孕药。结论。这项研究表明,石的化学成分可以预测细菌的存在,没有幽门螺杆菌相关性,胆石的形成,和一些药物可能是胆结石的诱发因素。这项工作为进一步的研究提供了一个客观基础胆囊形成结石;与此同时,在胆囊结石的治疗和预防具有重要意义。试验注册。项目被发现按照道德原则和伊朗的国家规范和标准进行研究批准ID 2020.09.23 IR.YUMS.REC.1399.147和日期,和这个项目是实习论文获得的结果在普通外科专业,已注册的研究项目960159号副校长Yasuj大学的研究和技术发展的医学科学,Yasuj,伊朗,网址:https://ethics.research.ac.ir/EthicsProposalViewEn.php?id=160634。

1。背景

石头的发生在胆囊或胆总管和他们引起的症状和并发症称为胆石病。慢性胆囊炎胆囊结石或胆石病或症状胆囊长期机械或异常胆囊排空功能障碍。胆源性疾病从轻微的症状,非特异性的症状严重右象限腹痛。大多数患者复发性疼痛袭击(急性胆绞痛),但是当疼痛持续时间超过24小时,它需要紧急手术治疗(1,2]。

几个因素,如化学成分、结构、形态和微生物结果也出现不同的机制导致胆结石的形成(3,4]。胆结石形成的沉降过程中固体微粒解决底部的液体和形成沉淀物。主要的有机溶质胆汁中胆红素、胆盐、磷脂和胆固醇5]。胆结石的胆固醇含量分为3种类型是胆固醇结石(胆固醇含量≥70%),色素石头(胆固醇含量≤30%)和混合石头(≤30%胆固醇含量≤70%)6]。近百分之八十的胆结石是胆结石,20%是色素石头组成的胆红素和钙,两个组件存在于胆汁。胆红素钙盐形成的外表面具有高趋势胆固醇坚持,此外,有一个病灶的钙在几乎所有类型的胆结石(7]。

在1966年历史上第一次,考夫曼等人提出的作用细菌感染的发病机理色素胆结石(8];后来,在这方面建立了一些研究。纯胆结石的形成的主要元素是胆固醇饱和度和溶解度。因为它需要很长时间建立的胆结石,根深蒂固的细菌会被毁灭和死亡,所以没有孤立的日期(诱发细菌9]。脲酶的酶bacteria-induced石的形成起着重要的作用。这种酶水解尿素氨和碳酸氢。氨会造成pH值的增加,这将导致一种不溶性的钙的生成和降水。这种机制,上面所描述的那样,是一种常见的途径在不同类型的石头(7]。因此,细菌感染的发病机制是一个诱发因素胆结石(9]。另一个理论是,细菌产品的积累胆固醇的胆汁有助于成核,水解结合胆红素,和降水的不溶性有机钙盐(10]。

一些研究报道传染性病原体与胆结石的发病机制有关。聚合酶链反应(PCR)是由Swidsinski等人的识别细菌在胆结石。李等人发现大肠杆菌(大肠杆菌),假单胞菌胆结石形成的病原体[9]。幽门螺杆菌(幽门螺旋杆菌)是一个螺旋,微量需氧的革兰氏阴性细菌负责这种情况(4]。它生活在胃和有关急性和慢性胃炎、胃及十二指肠溃疡,胃和胰腺腺癌和淋巴瘤的胃mucosa-related淋巴组织(MALToma) [3,11,12]。的存在幽门螺旋杆菌在胃和疾病相关的情况进行了调查3];例如,在原发性硬化性胆管炎和原发性胆汁性肝硬化,幽门螺旋杆菌DNA检测在人类肝脏组织样本(9]。胆结石患者的胆囊粘膜,川口等人发现相似的微生物幽门螺旋杆菌1996年(13]。

胆石类型的特点在伊朗人口尚未深入研究之前,有非常有限的研究在我国人口模式的石头类型(14),因此本研究的第一个同类研究的流行病学胆石类型在伊朗。石的化学成分的信息将有助于管理和预防胆结石14),在这项研究中,我们旨在做胆结石的化学成分分析包括胆固醇、胆红素、和钙。鉴于相互冲突的报告之间的关系幽门螺旋杆菌感染和胆石的形成,本研究旨在调查之间的关系幽门螺旋杆菌积极性伊朗胆石病的患者和胆汁标本的形成和类型的石头。

2。材料和方法

这项前瞻性研究了共196名患者随机分配为胆囊切除术由于胆石病症状Shahid Beheshti说培训和研究医院附属于Yasuj大学医学科学2016年9月至2019年5月。排除标准是急性胆囊炎、胆管炎、胆管和肝肿瘤,克罗恩病,以前胃手术,怀孕,患者内镜逆行胰胆管造影(ERCP),那些使用抗生素胆囊切除术前4 - 6周,和病人不愿参加这项研究。所有方法都是按照指导方针和有关规定进行。从每个病人获得书面知情同意,研究协议的研究伦理委员会批准Yasuj大学医学院(批准文号:IR.YUMS.REC.1399.147)。

切除胆囊组织、胆汁和石头样本在腹腔镜胆囊切除术中胆囊切除术后立即放置在10%缓冲甲醛溶液并送往病理组织病理学实验室评估。组织学分析是使用hematoxylin-eosin染色完成的。

执行的胆石成分化学分析是使用比色法的方法,包括检查胆固醇、胆红素、和钙。该方法技术的特定物质的浓度是由测量其吸收样品颜色的形式的解决方案。物质本身或使用彩色产品通过化学反应产生有色溶液,然后用特定波长测量。胆石成分化学分析与比色法方法包括胆固醇、胆红素、考试和钙。胆固醇的比例在石器决定的类型胆石(15]。胆结石分为胆固醇石如果胆固醇含量> 70%,色素石头(黑色或棕色)如果胆固醇含量< 30%,混合石头如果胆固醇含量30 - 70% (6]。

在样本提取、胆结石洗,干燥的表面上,重到最近的0.1 g。后烘干至恒重(48小时37°C),石头又重了。胆结石或部分地面在臼。30毫克的胆石粉末被转移到15毫升玻璃管(15]。

胆固醇分析,10毫升乙醇添加,封闭的管子在50°C孵化10分钟完成胆固醇的溶解。站在室温下另一个10分钟后,管子是离心机在2000克10分钟。在未来,胆固醇水平的测量是使用比色法的方法完成的。化学反应的结果检查在500 nm波长(Cobas米拉+ S自动分析器,由罗氏公司提供)。这个分析是线性的,从0到10更易/ L (15]。

分析总胆红素,10毫克的胆石的一部分在一个玻璃管,200μΙ二甲亚砜(DMSO)补充道,和混合孵化了半小时。10微升的盐酸(HCl) (12 mol / L)补充道,和孵化脱离钙bilirubinate又持续了半个小时。然后,5毫克的乙二胺四乙酸(EDTA)添加到绑定自由钙,和100年μΙ氢氧化钠(1.2 mol / L)添加到实现中性ph化学反应的结果检查在546 nm波长(Cobas米拉+ S自动分析器,由罗氏公司)(15]。

分析钙、邻甲酚酞complexon (CPC)方法(非酶的比色法)使用。部分25毫克的胆石粉末被转移到一家50毫升容量瓶。5滴盐酸集中添加,一分钟后,1毫升的水了。这种混合物被用来分析钙。化学反应的结果是检验在波长577纳米(zy化学诊断有限公司德黑兰,伊朗;钙(CPC)16]。

一些技术用于诊断幽门螺旋杆菌感染,如组织病理学诊断、快速尿素酶试验(常规),微生物文化、聚合酶链反应(PCR),粪便抗原检测、血清学和尿素呼气试验(UBT)。明显,所有这些技术都有自己的缺点。经验丰富的活检病理学家和质量的两个基本要求,一个合适的组织病理学检查。不当活检,观测者因素,幽门螺旋杆菌密度及其分布,以及使用的染色剂类型可能会导致错误的结果。在临床实践中,最经常使用的技术是常规。然而,获得足够的灵敏度,应该有足够的细菌组成的负荷至少10⁵细菌。细菌培养被认为是一种明确的证明幽门螺旋杆菌感染,尽管文化和能力的敏感性测试实验室之间可能会有所不同(17]。PCR方法的局限性包括假阳性结果的倾向在一定程度上由于从非互补dna的检测幽门螺旋杆菌生物。这是特别重要的环境样品中可能包含先前未耕作的生物体或非幽门螺杆菌幽门螺杆菌spp。也可能出现假阴性的结果由于低数量的生物体或抑制剂的存在在样例(18]。血清学检测的最简单方法幽门螺旋杆菌感染通过检测循环抗体幽门螺旋杆菌。然而,它不能区分活跃和无症状的殖民,过去和现在幽门螺旋杆菌感染。UBT具有更高的敏感性和特异性,但其特异性降低当其他urease-producing人类肠道细菌存在。它还需要更多的昂贵和复杂设备(17]。粪便抗原检测幽门螺旋杆菌是一种快速、简单、无创、廉价的检测方法吗幽门螺旋杆菌感染。这个测试显示高灵敏度和特异性(19]。

在这项研究中,第一次,胆汁样品的微生物分析幽门螺旋杆菌完成现场吗幽门螺旋杆菌快速凳子Ag)测试。验证测试胆汁,幽门螺旋杆菌快速凳子Ag)测试所有患者的粪便样本完成相同的工具和方法。快速抗原检测方法是一种横向流色谱定性检测免疫测定幽门螺旋杆菌抗原。这个使用胶体金结合单克隆抗-幽门螺旋杆菌抗体和单克隆抗-幽门螺旋杆菌专门抗体检测幽门螺旋杆菌抗原存在于粪便或其他受感染病人的标本(美国圣地亚哥与原生物科技有限公司;产品目录号R0192C) [20.]。在这项研究中,这个测试是用于检测幽门螺旋杆菌胆汁和粪便样本。

短暂,收集的粪便样本病人手术前被送到实验室从手术病房;胆汁样品被收集在一个注射器在无菌条件下,被送往实验室进行分析时从手术室腹腔镜胆囊切除术。小凳子被转移到样品瓶稀释剂大力搅拌,两分钟后休息管,滴2 - 3滴左右的圆形窗口测试磁带。(相同的方法用于胆汁。)读了10分钟后在室温下孵化,和基于颜色的外观线条在盒式的中心窗口,两行,C(控制)和T(测试),表示积极的测试,只有一行在C显示阴性结果。淡颜色的线在T也被认为是积极的。

数据分析使用IBM为社会科学统计软件包(SPSS)统计窗口,22.0版本,软件(美国纽约阿蒙克的IBM公司)。描述性统计给出平均值±标准偏差(SD)、中值(最大值、最小值),数字(n)和百分比(%)。整合的数据正态分布是使用Kolmogorov-Smirnov测试评估。使用Mann-Whitney定量分析了独立的数据U测试。定性分析了独立的数据由卡方测试或雪的测试如果卡方测试条件不满足。科恩Kappa测试是用来测量两种方法之间的协议的程度(快速抗原检测胆汁和快速粪便抗原检测幽门螺旋杆菌)。< 0.05被接受为显著。

3所示。结果

一百九十六名患者进入研究,其中33(16.9%)是男性和163(83.1%)是女性。男性和女性组平均年龄为48.6±16.8,47.0±17.4,分别。最年轻和最古老的病人是19岁和90岁,分别。年龄和性别之间没有显著关联(值= 0.51)。最常见的药物使用质子泵抑制剂(ppi) (pantoprazole、唑和奥美拉唑)144年(73.4%),非甾体类抗炎药(非甾体抗炎药)或止痛药在87年(44.3%),抗高血压药物在43个(21.9%)和口服避孕药((ocp) 27 (13.7%)。

石类型如下:胆固醇结石31例(15.8%)患者中,混合石块在64名(32.6%)患者,和最常见的类型,101名(51.5%)患者的有颜色的石头。幽门螺旋杆菌是积极的47例(24.0%)患者6例(12.8%),13例(27.7%),28(59.6%)和胆固醇,混合,分别和色素石头(图1)。然而,没有明显关联幽门螺旋杆菌积极性和石头类型(值= 0.447)。

平均年龄在幽门螺旋杆菌艾滋病患者和幽门螺旋杆菌消极组为49.8±16.3,46.4±17.5年,分别。没有关联幽门螺旋杆菌积极性和年龄(值= 0.15)。

47岁的患者积极的结果幽门螺旋杆菌12(25.5%)和35例(74.4%)患者男性和女性,分别。之间没有明显联系幽门螺旋杆菌积极性和性(值= 0.06)。

47(23.9%)的196名患者积极根据抗原的快速测试,被定义为幽门螺旋杆菌胆汁,和149年艾滋病患者负根据抗原的快速测试和考虑幽门螺旋杆菌消极的胆汁。在幽门螺旋杆菌阳性组,迅速粪便抗原检测测试幽门螺旋杆菌在所有病人的粪便抗原(敏感性77%;95%可信区间(CI): 64.50 - -86.85%),和14误报警(FN);而在幽门螺旋杆菌负,135提出了负面结果(特异性100%;95%置信区间:97.30 - -100.00%),没有假阳性(FP),显示出实质性的协议(k指数= 0.822;置信区间:0.73—-0.91)。考虑到47例患者的61年积极的粪便抗原幽门螺旋杆菌根据胆汁的快速抗原检测阳性,阳性预测值(PPV)的粪便抗原测试为100%;考虑到135 -粪便抗原检测患者幽门螺旋杆菌胆汁消极,负面预测值(NPP)的粪便抗原检测为90.6% (95% CI: 85.89—-93.85%),和测试的准确性为92.86% (95% CI: 88.31—-96.04%),如表所示1。

平均年龄在不同的石头类型组如下:40.5±13.1年的胆固醇结石,混合石块,47.3±14.7年和49.3±19.4年(图着色的石头2)。有显著联系石类型和平均年龄(值= 0.047)。

男性和女性患者的数量根据石头的类型如表所示2。然而,没有明显关联石头类型和性(p值= 0.51),男女比例根据石头类型是4/27,9/55,20/81,分别显示了更多的男性比胆固醇色素石组及混合组。

所有病人的平均钙水平为13.7±6.0更易与L。平均钙水平三种类型的石头为8.5±2.7,11.9±4.8,16.4±6.0 L更易与胆固醇、混合,和色素石组,分别为(图3)。成对比较三组的石头类型显示它们之间的显著差异,所以有显著关联类型的石和钙水平(值< 0.05)(表3)。平均钙水平幽门螺旋杆菌艾滋病患者和幽门螺旋杆菌消极组为13.2±5.5,13.8±6.1更易/ L,分别。之间没有明显联系幽门螺旋杆菌积极性和钙水平(值= 0.71)。

所有病人的平均胆固醇水平为28.5±2.0更易与L。平均胆固醇水平在三种类型的石头为80.4±14.1,45.5±13.2,8.5±4.0 L更易与胆固醇、混合,和色素石组,分别为(图3)。两两比较三组的石头类型根据胆固醇水平如表所示3。平均胆固醇水平幽门螺旋杆菌艾滋病患者和幽门螺旋杆菌消极组为26.9±28.1,33.6±28.5更易/ L,分别。有一个显著的关联幽门螺旋杆菌积极性和胆固醇水平(值= 0.023)。

意味着所有的病人胆红素水平为54.3±25.9 mg / dL。平均胆红素水平三种类型的石头为10.9±12.8,42.6±13.3,75.0±6.7 mg / dL胆固醇,混合,分别和色素石组。成对比较三组的石头类型显示它们之间的显著差异,所以有显著关联类型的石头和胆红素水平(值< 0.05)(图3、表3)。胆红素水平幽门螺旋杆菌艾滋病患者和幽门螺旋杆菌消极组分别为59.8±26.6,52.6±25.5 mg / dL,分别。有一个显著的关联幽门螺旋杆菌积极性和胆红素水平(值= 0.026)。

4所示。讨论

亚洲人的胆结石患病率较低。在伊朗,许多因素影响这种疾病的患病率。在横断面研究由Farzaneh艾哈迈德·等人在伊朗,尸体的胆石病的患病率是6.3%(男性4.7%,女性8.6%),而且没有太多区别男性和女性,这结果是符合我们的结果没有明显的石头类型和性之间的联系(14]。事实上,我们的研究是第一个研究,在我国人口模式(年龄和性别)及其关联的化学类型和存在幽门螺旋杆菌胆汁。

在我们的研究中,我们发现石头之间没有显著的关联和性,但也有重要的石头类型和年龄之间的联系,和石头的化学成分如钙、胆固醇、胆红素。在这项研究中,我们并没有发现任何显著的存在之间的联系幽门螺旋杆菌和年龄、性别、石类型和钙水平,但也有重要的关系幽门螺旋杆菌积极性和胆固醇、胆红素水平。这意味着石的化学成分可以预测细菌的存在。这个结果可以与斯图尔特等人做了一项研究的结果,无论是化学成分还是石头外表预测存在的细菌和百分之七十三的颜料石头包含细菌产生beta-glucuronidase,粘液,磷脂酶,缓解形成结石的因素(21]。

而感染之间的关系和胆结石仍有争议,有一种说法,感染已被建议作为一个理由,尤其是对棕色色素石头。一些报告显示的存在,如幽门螺杆菌物种,胆汁,Flexispira芜菁,pullorum近年来在人类肝胆的系统。事实上,一些肝胆的疾病,如慢性胆囊炎的病因,原发性硬化性胆管炎,胆囊癌可能是感染的物种。的存在幽门螺旋杆菌DNA在胆结石可能建议幽门螺旋杆菌是一种本能stone-forming胆囊的一部分。顺便说一下,殖民的胆道幽门螺旋杆菌可能促使胆囊形成石头(9,11,22,23]。添加更多的,有一些研究之间没有联系幽门螺旋杆菌和肝胆的疾病,与上述报道积极的协会。我们研究的结果是兼容的结果研究发现之间并无相关性幽门螺旋杆菌积极性,形成结石24- - - - - -27]。

胆汁的验证测试幽门螺旋杆菌快速的凳子,凳子Ag)测试和科恩Kappa统计分析是下完成的。科恩建议Kappa结果解释如下:Kappa < 0:任何协议;Kappa在0.00和0.20之间:轻微的协议;Kappa在0.21和0.40之间:公平的协议;Kappa在0.41和0.60之间:温和的协议;Kappa在0.61和0.80之间:实质性的协议;Kappa在0.81和1.00之间,几乎完美的协议28]。我们的结果与两者之间的实质性的协议测试,是可以接受的。

据报道,一些药物使胆囊结石发病的机制不同,如雌激素、黄体酮,口服避孕药,安妥明,头孢曲松钠,octreotide,红霉素、氨苄青霉素、噻嗪类利尿剂,生长抑素类似物,环孢菌素、氨苯砜、抗凝治疗、麻醉和抗胆碱能药物(29日,30.]。在我们的研究中,PPI是最常见的药物使用。在其他的研究中,结果表明,短期PPI治疗减少胆囊能动性在健康的志愿者31日]。在我们的研究中,第二个最常见的药物使用非甾体类抗炎药。Minocha等人报道的数量之间没有显著差异科目长期服用非甾体抗炎药和那些没有服用非甾体消炎药根据胆结石32]。在我们的研究中,氢氯噻嗪用于9的43例(20.9%)和抗高血压药物。Leitzmann等人推测,噻嗪类利尿剂的使用会增加胆囊炎症状的风险(33]。在我们的研究中,(ocp被用于16.5%的女性。荟萃分析显示显著增加胆囊结石的形成中女性使用口服避孕药[34]。雌激素和孕激素都增加胆结石的风险。雌激素会增加胆固醇在肝脏,生产和孕激素会降低胆囊能动性(35]。

5。结论

总之,这项研究表明,石的化学成分可以预测细菌的存在,没有相关性幽门螺旋杆菌和胆石形成,有些药物可能是胆结石的诱发因素。这项工作为进一步的研究提供了一个客观基础胆囊形成结石;与此同时,在胆囊结石的治疗和预防具有重要意义。

缩写

DMSO溶液:	二甲亚砜
内镜逆行胰胆管造影:	内镜逆行胰胆管造影
大肠杆菌:	大肠杆菌
EDTA:	乙二胺四乙酸
FN:	假阴性
外交政策:	假阳性
幽门螺旋杆菌:	幽门螺杆菌
盐酸:	盐酸
MALToma:	淋巴瘤的胃mucosa-related淋巴组织
净现值:	消极的预测价值
非甾体抗炎药:	非甾体类抗炎药
n:	数量
中国共产党:	邻甲酚酞complexon
(ocp):	口服避孕药
聚合酶链反应:	聚合酶链反应
PPV:	阳性预测值
质子泵抑制剂:	质子泵抑制剂
常规:	快速尿素酶试验
SD:	标准偏差
SPSS:	社会科学统计软件包
TN:	真正的负
TP:	真阳性
UBT:	尿素呼气试验
百胜的:	Yasuj大学医学院。

数据可用性

和/或使用的数据集分析在当前研究可从相应的作者以合理的要求。

伦理批准

所有方法都是按照指导方针和有关规定进行。研究协议的研究伦理委员会批准Yasuj大学医学院(批准文号:IR.YUMS.REC.1399.147)。书面知情同意获得病人的参与和发表的病例报告和任何附带的图片。一份书面同意书供这个杂志的总编审查。

信息披露

本文的结果Amir阿巴斯Safaripour居住权的论文获得普通外科专业,已注册的研究项目。960159年副校长Yasuj大学的研究和技术发展的医学科学,Yasuj,伊朗。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

MBJ评估病人临床上,病人(主要的外科医生),和阅读和修改。AAS评估临床病人,帮助病人(cosurgeon)操作,读取和修改。SH评估病人临床,外科医生被病人,阅读和修改。MJYB评估临床病人,帮助病人(cosurgeon)运作,准备初稿,修改论文。阿米尔阿巴斯Safaripour和默罕默德花园Jahantab贡献同样工作。所有作者阅读和批准最终的手稿。

确认

所有作者表达他们的感谢病人请给同意这种情况下提出了。

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