协会的热空气与胃癌的诊断和预后及其对胃癌细胞的增殖的影响

文摘

背景。长非编码RNA (lncRNAs)是一组非编码RNA的长度超过200元。他们已经被确认为重要的诊断和预后分子对许多癌症和发挥重要作用在癌症的发展。然而,他们的临床价值和角色在胃癌(GC)尚不清楚。方法。热空气在54个GC组织的表达水平及其与相邻nontumor组织从GC以最小的胃炎患者和24正常粘膜或作为健康对照组测定中存在。热空气在人类GC细胞系的表达水平和正常胃上皮细胞系也评估中存在。GC的潜在水平之间的关系组织和临床病理的特点进行了分析。此外,接受者操作特征(ROC)曲线构造。此外,这个lncRNA和总生存期(OS)之间的相关性进行了分析。核转染用于沉默热空气在GC细胞的表达。细胞增殖和细胞周期分析是用来确定热空气对GC细胞生长的影响。进行免疫印迹检测P53、P21, Bcl2蛋白质。结果。热空气的表达水平显著调节GC组织和细胞系。增加热空气与肿瘤分化、淋巴结和远处转移,临床阶段。此外,ROC曲线下的面积(AUC)是0.8416 (95% CI = 0.7661 ~ 0.9170, P < 0.0001)。敏感性和特异性分别为87.04%和66.67,分别。热空气之间的关系表达式和总生存期(OS)在统计学上意义重大。风险比为2.681,95%可信区间的比例是1.370到5.248。此外,可拆卸的GC的热空气可以抑制细胞生长和细胞周期分布的影响。和可拆卸的热空气可以提高P21和P53的蛋白质含量。结论。目前的研究表明,热空气GC组织中高度表达,可以作为一个潜在的诊断和预后的生物标志物GC。,热空气提升GC细胞增殖。

1。介绍

胃癌(GC)是最常见的一种恶性疾病和癌症死亡的第三大原因。尽管伟大的进步在诊断和治疗GC, GC患者仍有不良预后因肿瘤复发和转移1]。因此,迫切需要更好地理解GC的分子发病机制,以确定新的生物标志物和有效治疗的目标。GC是多因素的结果,包括环境和遗传因素。然而,GC发病机制的分子和细胞机制尚不清楚。

长非编码RNA (lncRNAs)是小说类的非编码RNA长度> 200元,但没有编码能力。在过去的几十年里,lncRNAs被视为“转录噪音。“尽管如此,越来越多的证据表明,lncRNAs在参与许多细胞过程,如干细胞多能性、细胞生长和凋亡,和人类疾病发病机理2- - - - - -5]。lncRNA扮演关键角色的失调的起始和发展癌症。lncRNAs可以调节肿瘤细胞的生长和凋亡以及癌症进展和转移。和他们可能合适的潜在诊断癌症生物标志物和治疗目标(6- - - - - -10]。越来越多的研究表明,一些lncRNAs GC[的发病机制11- - - - - -13]。集群的lncRNA HOXA反义RNA2 GC (HOXA-AS2)是调节,调节HOXA-AS2可以促进胃癌扩散(14];lnc01614明显高于在GC组织,促进GC[的发生和发展15];一个pseudogene-derived lncRNA SFTA1P GC组织明显下调,和SFTA1P可以抑制细胞增殖,迁移和入侵胃癌(16]。,此外,lncRNAs NEAT1 UCA1 CASC15等等被证明是与GC [17- - - - - -22]。

在这项研究中,我们表明,热空气调节在GC组织和细胞。热空气GC可以促进细胞增殖。因此,热空气功能作为癌基因和GC的发病机制中起着重要的作用。

2。材料和方法

2.1。患者样本

54 GC组织样本和匹配相邻正常组织取自病人进行了手术切除第二中南大学湘雅医院(长沙,中国)和台州人民医院(江苏,中国),2014年1月至2017年12月。手术切除后,立即组织样本snap-frozen在液态氮,然后储存在液氮进行进一步分析。肿瘤样本按照世界卫生组织(世卫组织)诊断系统,由两位病理学家不知道患者数据。没有管理术前放疗或化疗。书面知情同意收集所有的病人。本研究机构伦理委员会批准第二中南大学湘雅医院(长沙,中国)和台州人民医院(江苏、中国)

2.2。细胞培养

四个人类GC细胞株AGS mgc - 803,国网公司- 7901,bgc - 823,和一个正常的胃上皮细胞系GES-1来自医学研究中心,湘雅第二医院,中南大学,中国。细胞培养在RPMI -1640 (Gibco的边后卫,热科学、沃尔瑟姆)补充10%胎牛血清(Gibco的边后卫,热科学)。细胞培养在湿润孵化器在37°C公司为5%₂。

2.3。细胞转染

小干扰rna转染成核与热空气或控制GC细胞利用Lipofectamine 2000根据制造商的指示。核与热空气从GenePharma购买(江苏,中国)。

2.4。RNA提取和存在化验

从组织或细胞总RNA分离用试剂盒试剂(表达载体)。然后,使用反转录RNA是reverse-transcribed cDNA工具包(WI Promega有限公司麦迪逊,美国)。的mRNA水平检测SYBR预混料Taq(豆类、大连中国)。GAPDH是作为内生控制。所有的定量实时PCR检测罗氏进行检测系统(罗氏应用科学)。分析的存在结果比较阈值周期(Ct)方法,然后转换成褶皱的变化。所有的实验都至少执行了三遍。

2.5。细胞增殖和细胞周期

大约5×10⁴GC在24-well盘子然后转染细胞被镀mir - 148 a模仿或抑制剂或si-HOTAIR或消极的控制。24后,48。和72 h,细胞数量被发现通过使用Z1库尔特计数器细胞和粒子计数器(美国贝克曼库尔特,富勒顿,CA)。细胞周期分析,GC细胞被播种与si-HOTAIR 6-well盘子然后转染。48小时后,转染细胞被固定在70%乙醇在4°C 24 h和沾propidium碘(Beytime,北京)。流式细胞仪细胞周期分布评估(BD流式细胞仪石中剑,美国)。

2.6。免疫印迹分析

细胞细胞溶解使用1×十二烷基硫酸钠缓冲区。蛋白质浓度检测用BCA蛋白质化验设备。30.μg蛋白sds - page和转移到聚偏二氟乙烯膜隔开。膜是孵化与抗体特定P21, P53、Bcl2或GAPDH(细胞信号技术)在一夜之间在4°C。然后,这些墨迹孵化了HRP-conjugated二级抗体2 h和通过使用增强化学发光检测(细胞信号技术)。

2.7。统计分析

所有统计分析是由使用SPSS 21.0和prism 11.0软件。并给出了数据均值±SD和由学生的t检验。热空气表达与临床病理参数之间的关系由卡方检验。kaplan meier和生存曲线估计的方法。P < 0.05被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。热空气调节在GC组织和细胞

我们首先确定了热空气的表达水平在GC组织和邻近非癌组织来自54个病人。这些患者的一般临床特征见表1。一个相邻的非癌组织的表达水平被定义为1。我们比较了热空气在其他组织的表达水平。如图1(一),热空气在GC组织中表达的调节与相邻的非癌组织。此外,我们定义了热空气的表达水平> 1.40(相邻的非癌组织的平均水平+ SD)高表达。我们分析了热空气和临床病理参数之间的关系用卡方检验。结果表明,热空气与肿瘤分化表达呈正相关,淋巴结和远处转移,临床阶段(表1)。我们也分析了热空气的表达水平与这些参数通过单变量分析和多变量分析。结果还表明,有一个伟大的团体之间热空气的表达差异与不同的肿瘤分化、淋巴结和远处转移。然后,我们发现热空气的表达水平在四个人类GC细胞系(AGS, mgc - 803,国网公司- 7901,bgc - 823)和正常胃上皮细胞系(GES-1)。结果表明,热空气表达高GC细胞相比,GES-1细胞(图1 (b))。

3.2。热空气是一个潜在的诊断和预后标记

在GC确定热空气的诊断价值,我们比较相邻nontumor GC组织和组织之间的区别从中华民国曲线基于截止(1.40)。ROC曲线下的面积(AUC)是0.8416 (95% CI = 0.7661 ~ 0.9170, P < 0.0001,图2(一个))。敏感性和特异性分别为87.04%和66.67,分别。热空气之间的关系表达式和患者总生存期被kaplan meier分析评估。结果表明,较高的热空气表达与一个贫穷的总生存期(p < 0.001,图2 (b))。风险比为2.681,95%可信区间的比例是1.370到5.248。总的来说,这些数据表明,热空气在GC更高组织和细胞,可能是一个潜在的诊断和预后生物标记为GC。

3.3。热空气促进GC细胞增殖

确定热空气在GC细胞增殖的影响,我们利用热空气核的沉默的表情在国网公司- 7901和AGS(图3(一个))。结果表明,热空气的siRNA表现出更高的可拆卸的效率在国网公司- 7901和AGS细胞。所以,这是申请热空气沉默在接下来的实验。细胞增殖检测显示,击倒的热空气抑制细胞增殖率在国网公司- 7901和AGS细胞(图3 (b))。此外,细胞周期分析发现抑制热空气可能会改变细胞周期分布。如图3 (c)击倒,热空气G0-G1诱导细胞周期阻滞,随后导致相当大的减少细胞s阶段和显著增加的百分比在G0 / g1期细胞比例国网公司- 7901和AGS细胞。此外,我们发现热空气第21页的影响,P53、Bcl2蛋白表达,发现击倒的热空气可以提高蛋白质含量P21和P53在国网公司(图- 7901细胞3 (d))。因此,这些数据表明,热空气促进GC细胞增殖。

4所示。讨论

胃癌(GC)是癌症相关死亡的最常见原因之一。尽管先进的诊断和治疗技术,诊断为先进的GC的生存率仍然不满意(1]。因此,更好的理解GC的发病机制对于诊断和治疗是至关重要的。

长非编码RNA (lncRNAs)是一组非编码RNA,大于200核苷酸蛋白质编码功能没有明显(1,2]。最近,lncRNAs小说已成为监管机构在癌症的发生和发展。和特异表达lncRNAs也可以作为潜在的癌症诊断和预后的生物标志物(6,10- - - - - -12]。热空气被报道为几位癌症的癌基因23- - - - - -28]。之前的研究表明,热空气上升在肺癌、乳腺癌、肝癌等与转移和预后不良。此外,热空气促进增殖、生存、入侵、转移、耐药癌细胞(29日- - - - - -31日]。在目前的研究中,我们发现,热空气调节在GC组织和细胞。此外,较高的热空气表达与肿瘤分化、淋巴结和远处转移,临床阶段。同时,我们相比的区别GC组织和邻近nontumor组织从中华民国。热空气对诊断的敏感性和特异性分别为87.04%和66.67,分别。和热空气表达较高的患者更糟糕的生存。这些发现表明,调节热空气可能参与肿瘤发生GC,它可能是一个良好的诊断和预后的生物标志物为GC。

lncRNAs可以作为癌基因或肿瘤抑制,癌症导致致癌作用。例如,击倒的热空气可以显著抑制细胞增殖HepG2细胞和表达下调的蛋白表达水平两个扩散标记Ki67和增殖细胞核抗原(PCNA)。此外,抑制热空气诱发G0 / G1周期阻滞增加p27和减少细胞周期蛋白D1 (32]。在我们的研究中,我们证明了热空气可以促进GC细胞增殖和改变细胞周期分布。因此,我们的数据显示,热空气可能作为癌基因GC和促进发展。

总之,我们表明,热空气调节在GC和促进细胞增殖。因此,我们的研究结果揭示了热空气参与GC的发病机理。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者没有宣布任何利益冲突。

确认

我们感谢罗李登辉在第二中南大学湘雅医院收集组织样本。这项工作是由泰州市人民医院的基础。

引用

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