文摘
背景。尽管之间的因果关系幽门螺杆菌感染和胃癌的发展牢固确立,致病性的确切性质的因素幽门螺旋杆菌特征,使胃瘤形成仍是不完全的。我们调查了之间的关系幽门螺旋杆菌毒力基因型和疾病特征明显的群体组成的109人幽门螺旋杆菌从胃活组织检查来自病人的隔离。方法。的流行基因型进行PCR和临床组织病理学相关参数。结果。的关系巴布A2和巴布B和负面的冰A1积极作为单个基因型和基因型的发展情况下,GC是统计学意义( )。的cagE,cag一个,冰A1患者被发现更常见的GC与其他组相比。的关系的存在冰A1和发展的案例来GC是统计学意义( ),但巴布A2和巴布B等位基因并不在这些患者中发现。这些明显的负关联仍静态显著( 和0.005)。结论。我们的结果显示感染的发病率升高幽门螺旋杆菌菌株携带毒力基因型遗传多样性高。这突出识别基因变异的重要性的早期检测毒性基因型。
1。介绍
全球胃癌仍是一个普遍的疾病预后不良。幽门螺杆菌在胃致癌作用中起着重要的作用。幽门螺旋杆菌殖民导致慢性胃炎,患上了萎缩性胃炎,肠上皮化生,发育不良,最终胃癌。筛查、治疗和预防的幽门螺旋杆菌殖民可以降低胃癌的发病率(1]。其他干预措施可能得到类似的结果,尽管规模较小的大小,包括促进健康的生活方式包括饮食措施、不吸烟、酒精摄入量低,和足够的体力活动(2]。此外,越来越多的证据表明,宿主因素,包括基因组成,也是致癌的重要决定因素幽门螺旋杆菌感染(3]。殖民的幽门螺旋杆菌与慢性胃炎有关,因为它可以触发暴发性炎症反应从而导致病理条件如胃癌和消化性溃疡疾病(4]。因此临床需要存在分层幽门螺旋杆菌来华的病人对他们的发展倾向幽门螺旋杆菌有关的病理;尤其是对GC这感觉是一个紧迫的问题。的重要性幽门螺旋杆菌毒性因素明显的严重临床结果与细菌阳性犹豫细胞毒性(真空吸尘器一个)和cytotoxin-associated基因(cag一个)抗原(5]。然而,这两个毒力因素不足以解释的不同临床表现的病理协会幽门螺旋杆菌感染(6,7]。一个潜在的幽门螺旋杆菌重要的毒力因子可能解释这种差异在临床结果是cag致病性岛(cag-PAI)。的cag一个基因是一个标记的存在cag-PAI大约40 kb,其存在与更严重的临床结果(8,9]。把IV型分泌系统cag一个蛋白质在胃上皮细胞,磷酸化。当发生修改时,cag一个影响各种细胞过程和信号转导途径,如中断的紧张和附着连接导致促炎和促有丝分裂的反应:影响(8,10]。六个cag-PAI基因之一cagE位于cag-PAI的右半部分,一直显示诱导分泌白介素- 8 (IL),从感染宿主上皮细胞11,12]。
另一个假定的毒力因子冰一个基因有两个主要的等位基因变异,冰A1和冰A2。的表达iceA1调节接触幽门螺旋杆菌与人类上皮细胞和可能与消化性溃疡疾病(16,17]。血型抗原绑定adhesin (巴布一个),一个78 KDa babA2外膜蛋白质编码的基因,结合刘易斯b抗原和ABO血型抗原(18,19]。虽然三巴布等位基因已确定(巴布A1,巴布A2,巴布B),只巴布A2基因产物功能活跃(20.]。研究西方人群的存在有关巴布A2基因与胃癌19,21]。本研究的目的是评估的基因型幽门螺旋杆菌菌株感染慢性胃炎患者的评价普遍存在的几个基因编码毒力因素。
2。材料和方法
这项研究是区域医学研究伦理委员会批准的自由大学医学2016年7月19日(1311/28772号)和所有病人为本研究提供了书面知情同意。
本研究协议符合伦理指南1975年赫尔辛基宣言的反映在一个机构的事先批准的人类研究委员会。
2.1。患者、菌株和种植
我们组由109年临床分离株幽门螺杆菌;49(45%)是女性和60岁男性(55%)。
男性患者(性别比例F / M: 0.82),平均年龄的病人的隔离了 年。幽门螺旋杆菌分离采用胃活检的患者出现胃炎、消化性溃疡、胃癌。病人没有接触到抗菌药物进行内窥镜检查前至少一个星期。集合后,胃活检样本均质和培养到布鲁氏菌琼脂取代5%的羊血和抗生素(万古霉素、两性霉素B和甲氧苄氨嘧啶)。文化板块在孵化微量需氧的条件下,37°C和高湿度为5 - 7天。生物被确定为幽门螺旋杆菌根据菌落形态、革兰氏染色法和积极的氧化酶,过氧化氢酶和脲酶测试。
2.2。从文化中提取DNA
基因组DNA的总幽门螺旋杆菌分离提取使用QiAamp DNA迷你包(试剂盒、希尔登,德国)根据制造商的协议和存储在−20°C到使用。
2.3。基因检测
在这项研究中,利用PCR检测幽门螺旋杆菌具体的ureC确认所代表的文化基因善意的幽门螺旋杆菌隔离,相同的技术来建立存在与否cagE,cag一个,冰A1,冰A2巴布A2,巴布B基因。
所有底漆集是从发表文学(列在表选出来的1)。进行了PCR反应体积的50μ1.5 L包含10更易与L Tris-HCl,更易与L MgCl20.2更易/ L的每个deoxynucleotide 25 pmol每个引物,和2.5单位的聚合酶(Geneone,德国)22,23]。使用热循环仪程序包括以下步骤:初始变性在94°C 3分钟之后35周期30秒的94°C(变性);30秒58°Ccag一个和全球语言监测机构米(24];30秒53°CcagE;48°C巴布A2;49°C巴布B;57°C冰A1;和48°C和冰A2所有退火步骤,其次是30秒在72°C(扩展步骤);和最后一个扩展在72°C(3分钟步25]。
2.4。统计分析
数据分析SPSS 16版。确切概率法或卡方检验被用于分类数据的分析。一个< 0.05被认为是具有统计学意义的价值。
3所示。结果
3.1。描述病人的队列和孤立的研究样本
总共有109幽门螺旋杆菌样本孤立从最初的359年活组织检查包含在本研究(产生一个明显的感染率为30.4%),其中60例(55%)来自男性患者和49(45%)隔离来自女性患者(性别比例F / M: 0.82)。病人的平均年龄在内窥镜检查 年。从109年建立患者幽门螺旋杆菌感染,81名患者出现nonulcer消化不良,19消化性溃疡患者消化不良,患者和9 GC(印戒细胞癌(罢工))。之间没有显著差异的平均年龄和性别,没有溃疡患者和癌症。我们得出结论,我们组将使分析之间的联系幽门螺旋杆菌毒力因素和临床表现。
3.2。毒性的存在因素是常见的临床队列
pcr扩增的显示cagE,巴布A2,巴布B阳性菌株的患病率分别为55.9%,71.7%,和61.3%在我们的队列,而cag一个,冰A1,冰A2分别检测到,70.6%,42.2%,13.2%的患者纳入本研究(表吗2)。因此,毒力因素选择本研究通常在我们的病人群体,让统计分析发现,他们的关系对疾病的表现。
3.3。具体的幽门螺旋杆菌毒力因素显示趋势是积极的还是消极的与病人的临床表现
在我们研究的频率cagE艾滋病隔离来自nonulcer消化不良患者,消化性溃疡消化不良,或GC患者为49.4%,68.4%,和88.9%,分别,但这明显正相关与更严重的疾病没有达到统计学意义( )。的巴布A2基因型检测到74%,84.2%,和0%的NUD的隔离,布丁,GC的病人。的百分比巴布A2−基因型在GC病人明显高于cag一个+基因型( )。
同样的比例巴布B+NUD和手的情况下,是65.4%和63.1%,分别但对于隔离患者从GC(0%),统计学意义(这个明显的负相关 )。相反的患病率冰A2观察等位基因在前脚NUD患者(13.6%)和(15.8%)和GC患者(0%),但没有明显的协会之间的观察冰A2基因型和GC ( )。同样,在这项研究的分布冰A1和临床结果进行了分析统计和观察到的频率冰A1艾滋病隔离在NUD、布丁和GC患者为35.8%,42.1%,和100%,分别。的关系的存在冰A1和用例胃癌的发展是统计学意义( )。
虽然cag一个等位基因在NUD(65.4%)例和手患者(78.9%)和GC病人(100%)没有显著关联cag一个和胃的结果( )。全面概述所有毒性因素研究及其链接到特定的临床表现是通过表2。
从我们的数据,很明显cagE,cag一个,冰A1更常见的胃癌患者比其他病人群体,而巴布A2和巴布B等位基因缺失患者的GC。
3.4。结合不同的毒力因素允许病人的分层组对患者分层
我们检查了八个不同的组合分析的基础上巴布A2,巴布B,冰A1基因型患者(正面和负面)为一个单一的基因型(表3)。我们可以确定这些基因型和临床结果之间的关联。基因型频率分布的组合幽门螺旋杆菌显示的关系巴布A2和巴布B和负面的冰A1积极的基因型和例胃癌的发展是统计学意义( )患者人群。但是没有显著关联其他基因型组合和胃癌()。
明显的缺乏巴布A2和巴布B等位基因GC患者提出,然而,希望更大规模的研究可以建立这些等位基因指导病人管理的有效性。
4所示。讨论
各种研究已经观察到大量发病率的差异和/或胃十二指肠疾病的严重程度相关幽门螺旋杆菌可根据不同地理区域(26]。虽然许多因素可能导致这些差异,一个明显的因素是不同的流行株的致病性标记分配(27]。假定的virulence-associated基因的临床意义幽门螺旋杆菌和地理区域仍存在争议。其他因素影响的萎缩和癌症风险的存在感染可能与感染发生时,其他环境因素、宿主遗传变异(28]。尤其是单核苷酸多态性基因影响细菌处理通过模式识别受体似乎参与,进一步加强主机风险因素之间的联系,幽门螺旋杆菌发病率和癌症(29日]。在目前的研究中我们利用这种情况研究选择毒性的基因之间的关系幽门螺旋杆菌和临床状态。显然我们的结果支持了这样的观点,即进一步的研究旨在建立的负面预测价值的存在巴布A2和巴布B等位基因GC发展是必要的。
的cagE是一种致病性生物标志物的幽门螺旋杆菌。先前的研究表明,的调查cagE世界各地的流行是不同的(30.]。一般的重要性cagE是最好的说明了其高频GC病人证明了研究表现在患者群体来自印度(100%)、土耳其(81.8%)和泰国(93.8%)(31日]。然而,普遍的cagE基因在这项研究中仅为55.9%,与上述国家的结果明显不同(32]。在目前的研究中cagE阳性分离株是从消化性溃疡稍微在隔离中发现消化不良(手)患者(68.4%),但这一发现的潜在意义,如果有,还有待建立。的患病率cag一个基因在我们组是70.6%,类似于西方国家的局势(山冈et al ., 2002),但明显低于观察在东亚国家cag一个出现在超过90%的情况下(32]。就像cagE,cag一个阳性分离富集在样本来自消化性溃疡消化不良患者,尽管没有统计学意义的方式。然而,我们的研究结果支持先前的研究32吴](et al ., 2003),应该是有趣的在我们数据的荟萃分析包括毒性基因在这方面。我们的结果表明的患病率冰A1和冰A2基因分离是42.2%和13.2%,分别。这些结果与以前的研究显示一致冰A1基因是流行在日本,韩国,荷兰患者(13)(Ito et al ., 2000;Shiota et al ., 2013);相反的冰A2等位基因是主要在美国和哥伦比亚。在我们的群体中,关系的存在冰A1和用例胃癌的发展是统计学意义( )。但我们的数据表明没有明显关联冰A2用手或NUD相比和GC。然而,几项研究已经报道了不同的结果,冰A2基因被发现在这些研究主要基因型(Aghdam et al ., 2014;Biernat et al ., 2014)。
的巴布一个是一种介质对胃细胞的幽门螺旋杆菌(33]。最近的分析巴布A2作为一种毒性标志的有效性产生了矛盾的数据巴布A2表达在预测临床结果,这是最有可能依赖的地理起源幽门螺旋杆菌菌株。先前的研究调查在葡萄牙,泰国,印度人口显示巴布A2不是一个标记为消化性溃疡疾病或胃癌(12,26,34]。然而,几项研究已经报道来自土耳其和德国(分离到的不同的结果26,35]。我们的研究表明,巴布A2虽然很普遍,“能降低开发GC倾向,因而减少致癌有关幽门螺旋杆菌。类似的结果有关巴布B。
我们的结果显示的关系巴布A2和巴布B和负面的冰A1积极的基因型和例胃癌的发展在统计学上意义重大。还需要进一步的研究来确定的功能巴布A2和巴布B及其与疾病关系的结果,是否这些等位基因的存在表明细菌的存在对GC可能带来进展。
信息披露
这项研究没有得到具体拨款资助机构在公众,商业,或非营利部门。
的利益冲突
作者证明他们没有利益冲突的报告。
确认
作者要感谢Marand分支,伊斯兰自由大学和伊拉斯谟MC癌症研究所,伊拉斯姆斯大学鹿特丹,荷兰的支持本研究。