文摘

看看hhv - 6不孕的可能是一个原因,研究人员观察了18个男人和十个女人曾解释关键生育和怀孕前至少有一个。hhv - 6 DNA被发现不育和肥沃的外周血单核细胞(PBMC)(分别为12 - 14%);子宫内膜上皮细胞从4/10(40%)的不孕妇女hhv - 6阳性DNA;这个病毒DNA不是肥沃的妇女的子宫内膜中找到。子宫内膜上皮细胞培养时,它们产生病毒早期和晚期蛋白质,暗示一种传染性病毒的存在。子宫内膜hhv - 6感染创造了一个异常的NK细胞和细胞因子,导致子宫域不是有利的概念,根据研究结果。以证实这些发现,研究额外的肥沃,贫瘠的女性应该做的。精液样本取自18人参观了政府综合医院托尔的不育系,因为他们有生育问题与他们的合作伙伴。疱疹病毒DNA被发现精子的肥沃,不育男性患者症状罕见的实例。此外,研究人员必须研究病毒性疾病在男性不育的作用。

1。介绍

经过一年的无保护的性交,15%到20%的夫妇在欧洲国家面临不育。在大约33%的不孕的情况下,男性和女性的因素存在,高达49.5%,这取决于病毒DNA检测技术利用的公平性。人类疱疹病毒6β(hhv - 6)是一种对人类巨细胞病毒疱疹病毒有很强的联系。首先隔离hhv - 6从外周血淋巴细胞(PBL)获得淋巴组织混乱的病人。T淋巴细胞的细胞趋向性尤为显著,曾被称为人类B-lymph热带病毒(HBLV)。HHV-6A遗传和HHV-6B是两个截然不同的病毒株。hhv - 6是HHV-7相关疱疹病毒,在较小程度上,人类巨细胞病毒()血巨细胞病毒。hhv - 6已被确定为一个诱发运营商疹亚原子(红疹),一个普通的年轻疹,据。hhv - 6疾病是最常见的在生命的头两年。hhv - 6与免疫抑制细胞依靠,尽管明显临床疾病是罕见的成人。 HHV-6 has been linked to a variety of human diseases, including multiple sclerosis (MS); however, the significance of these associations is unclear [1,2]。HHV6细胞表面受体的发现,以及遗传组的确认HHV-6A and-6B,是最近发现的亚原子HHV6科学。CD46 hhv - 6细胞受体的发现,提供了另一个洞察hhv - 6细胞趋向性。此外,体外hhv - 6之间的伙伴关系和其他病毒,特别是人类免疫缺陷病毒,体内的情况及其意义,以及一些hhv - 6 trans-activating限制蛋白,研究了。hhv - 6仍在探索的临床表现,除了被视为重要的病原体之间的移植受者(被越来越多的即将到来的临床测试),它的作用集中感官系统疾病越来越明显(3- - - - - -5]。最后,我们提供了一个示意图描述hhv - 6的许多治疗选项。hhv - 6的临床表现的职业人已经占领了很大一部分上当前文学的病毒。复活的受益人的应变、外部疾病因素的压力,和再感染不同应变都是可能性。骨髓移植人群,一小部分人已确定与间质性肺炎由病毒引起的,它通常是与单位对宿主疾病(GVHD)在无症状的不育个体的精液6]。

2。材料和方法

2.1。临床样本

十八岁男性去了热交换器生殖中心托尔,安得拉邦(从2017年1月至2017年12月),由于夫妇生殖问题,提供样品(1毫升)来验证hhv - 6和12血清样本检测疱疹病毒的抗体。每个病人给他们通知允许当前考试的目的。没有临床症状的HSV感染的人参加了这项研究,并没有发现明显的不孕的原因。他们都是无菌的,原因未知。个人与任何潜在的疾病,如糖尿病,可能影响生育能力被排除在研究之外。

十个女性患者咽鼓管开放测试和子宫内膜样本采集(7- - - - - -9]。研究的参与者必须在28岁之间,36,有正常的月经周期(20-32天)和体重指数为17.5到25.5公斤/米²。月经周期的分泌阶段计划(13到27天)。组织样本中获得HEPES-supplemented杜尔贝科调整鹰中/火腿F-12 (DMEM / F-12)。

2.2。道德声明

从每个病人得到书面同意,道德伦理委员会的批准获得的医疗中心。

所有涉及人体受试者的研究需要收购研究伦理批准。之前可以招募研究对象或数据收集可以开始,这个必须获得批准。

2.3。统计分析

收集到的数据进行了分析与SPSS软件版本15。数据被表示为平均数±标准差。两组之间的差异的变量疱疹(+)已经与疱疹(−)已经使用学生的比较t以及。

2.4。精液和血液分析

精子数,通常被称为一个精液分析,决定了一个男人的精子的数量和质量和精液。厚,白色的液体排放从一个男人的阴茎在他的性高潮被称为精子(高潮)。射精是这个过程的术语。精子的基因material-carrying细胞在一个男人的身体。当精子与卵子结合的一个女人,一个胚胎(早期发展的一个胎儿)组成。

自慰在无菌容器是用来收集精子样本后48 - 72小时的性禁欲。1小时内收集,样品进行评估,并在2小时内的收集、样本处理进行DNA提取。计算机辅助精子分析用于分析18岁男性病人的精子浓度和能动性,根据第四版的指南。观察eosin-thiazine-stained methanol-fixed光学显微镜下的新鲜精液涂片和评估根据严格的克鲁格标准被用来评估精子形态。上述所有条件相匹配的精液标本被认为是正常的。异常的存在大量的白细胞没有表明样本是不正常的。所有精液精子样本与一个或多个异常值被认为是异常(10- - - - - -14]。

2.5。PCR扩增反应和提取精液DNA样本

分子实验室的核心工具包括DNA提取和聚合酶链反应(PCR)。这个概述涵盖大量的物理和化学过程中提取DNA的为了获得足够数量的高质量的DNA。PCR可以用于增加DNA样本。

为了避免污染,PCR测试准备工作都做在一个“洁净室”(没有post-PCR DNA产品)层流罩下。每个新鲜精液样本离心收集后30分钟在13000 rpm。精子颗粒是保存在原始埃普多夫管,和沉淀(精液)转移到一个新鲜的。在发生精液PCR测试,使用DNA DNA样本收集与液体隔离精液工具包(试剂盒;猫没有:57704)根据制造商的指示。所有参与者的精子发生和精液的液体检测hhv - 6使用PCR和DNA的存在适当的组引物(表1)。在2%或3%琼脂糖凝胶凝胶矩阵,根据PCR结果的大小,然后用一个摄影紫外线透照器被用来检查PCR的结果。最后,以证实最初的扩增结果,疱疹6 PCR产物直接测序分析(图完成1)。使用QIAquick PCR产品纯化PCR净化设备(黔瓦伦西亚,CA),然后筛选了与水(7]。DNA序列被上传他们审查确定核糖体数据库项目网站(2]。

3所示。结果与讨论

3.1。hhv - 6在妇女的临床标本

hhv - 6的全血定量PCR DNA测试是最可行的方法找出如果有人染色体整合hhv - 6 (ciHHV-6)。如果数量大于500000拷贝/毫升没有急性疾病,人有ciHHV-6。

在目前的临床研究,十原发不孕症原因不明的过去没有怀孕的女性或病理变量比较14个大的女性至少一个先前的成功怀孕。表1显示两组之间没有显著差异,除了增加少量雄性不育(雌二醇水平 ;学生的t以及)。雌二醇水平在一个特定的水平可能表明激素抑制follicle-animating激素(FSH)的生产,有丰富的担忧。孕激素在体内的数量并没有改变。表2总结每一个临床病例的结果基于hhv - 6感染是否在场。在一个个人PBMCs, hhv - 6 DNA检测。令人惊讶的是,hhv - 6病毒DNA被发现在44%的PCOS妇女的子宫内膜上皮细胞,而不是控制女性的细胞( ;费舍尔正确测试)。同样,不局限于DNA和HHV-6A hhv - 6感染主要不孕妇女的子宫内膜上皮细胞,根据基质细胞通过上皮细胞纯化(表中恢复过来2)。因为hhv - 6动态疾病是一组常见的不孕妇女,寻找标记大幅差异,基于hhv - 6感染(表3和4)。hhv - 6阳性不孕妇女有雌二醇水平大于hhv - 6负不孕妇女( )(见表3为进一步的信息)。雌二醇违规行为可能影响hhv - 6感染,基于关系的发现。hhv - 6感染的距离与雌二醇维度( ;R2: 0.89;斯皮尔曼关系)。没有临床指标两者之间不同的配偶(表3)。当我们看子宫免疫属性状态,我们看见一个子宫内膜的变化(e) NK的监舍表型和细胞因子水平。hhv - 6阳性不孕妇女CD56posCD16neg eNK细胞(8.06)低于hhv - 6负不孕妇女(23.82)( )(有关更多信息,请参见表4)。CD56bright和HHV-6A CD56dim eNK细胞分布不同的积极的和消极的不孕妇女,积极与hhv - 6不孕妇女(3.72)减少CD56bright和CD56dim比hhv - 6 - eNK细胞无子女的女性(13.68)( )(有关更多信息,请参见表4)。虽然没有差别的CD3 +淋巴细胞在两组之间,有一个数量的差异CD14 +单核细胞( )。细胞因子的子宫冲洗方面提出了另一个例子在hhv - 6正面和负面的不孕妇女(3- - - - - -6]。

作为一个人类不育的可能的环境原因,病毒感染已经连接。虽然没有单一的病毒已经被证实引起女性不孕,疱疹病毒尤其是男性不育有关。在我们的研究中,此外,从不孕妇女子宫内膜上皮细胞表现出高病毒载量(每单元4份病毒DNA);没有发现HHV-6A感染在基质细胞或PBMC,排除hhv - 6基因在染色体整合的可能性。

疱疹病毒的频率在正常和不正常精子样本如表所示4。根据标准的第四版,9的18精子样本划分为正常(normozoospermia)。HHV6病毒DNA被发现在6(33.3%)的正常精子样本(表3)。在18岁男性患者异常zoospermia,病毒DNA被发现(表5)。样本进一步分为六oligozoospermic五asthenozoospermic三oligoasthenozoospermic,四个teratozoospermic子组在这一组。在异常的精液样本,HHV6病毒DNA被发现在4(22.22%),8例(44.44%),2例(11.11%),3例(16.67%),3(16.67%)(表5)。没有明显统计学差异的存在每个疱疹病毒和每个异常的分组,根据统计分析。至少疱疹病毒家族的一个成员,病毒DNA聚合酶链反应在16个(88.88%)被发现的18总精液样本(表5)。病毒DNA分析的结果表明,hhv - 6提供的所有18个样品出现在16人(88.88%)。先前的研究观察总精子样本病毒DNA的频率。

病毒感染的平均精子计数和能动性和没有感染精液样本如表所示4。hhv - 6感染后平均精子数量没有影响意味着精子数。Kapranos等人发现HHV1感染与精子数目和活性的降低。先前的研究显示没有联系hhv - 6 +和HSV-6−DNA和可怜的精子数,运动性或不孕。

3.2。正常和异常的精液的区别

统计分析揭示了疱疹病毒的存在没有联系和随后的样本分类为正常或异常的精液,表明病毒的存在似乎并没有产生重大影响精液的定性或定量的特性。正常和异常的精子都几乎相同数量的病毒DNA。hhv - 6,相反,似乎是更常见的在oligozoospermic精子asthenozoospermic精子,但差异无统计学意义。

3.3。PCR结果和基因测序

在所有三种类型的样本,包括男性和女性,凝胶的PCR结果显示六个乐队在PCR扩增子2-globin基因碎片315 kb(图1),通过适当的引物序列表5。图1显示7乐队U38 PCR扩增的基因片段在右边,用积极控制乐队在467个基点。后PCR的hhv - 6病毒隔离男性(两种)和女性样本,近似大小的DNA带生产。所有病毒分离反应的基因2-globin(315个基点)和U38(467个基点)的两个基因的目标。在当前multi-PCR技术,2-globin适度反映。

4所示。结论

最后,第一次病毒性疾病引起的任何的七个单纯疱疹病毒被发现在正常和病理精液样本,表明两组病毒性疾病的几率比较高。单纯疱疹是疑似微生物影响精子参数和生育能力。总的来说,我们的数据暗示hhv - 6感染在男性和女性都可能导致原发性不孕。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

这项工作是支持的塔伊夫大学的研究人员,支持项目没有。塔伊夫大学TURSP-2020/311塔伊夫,沙特阿拉伯。