文摘
儿童川崎病(KD)对静脉注射免疫球蛋白(丙种球蛋白)的冠状动脉病变发生率更高(CAL)。尽管Purinergic P2Y12受体之间的关系(P2RY12)多态性,KD遗传易感性,和卡尔并发症被证明了,很少有研究评估P2RY12多态性之间的关系和丙种球蛋白抵抗患者KD。我们招募了148名患者KD丙种球蛋白阻力和611年与丙种球蛋白灵敏度和选五个P2RY12多态性:rs9859538, rs1491974, rs7637803 rs6809699, rs2046934。患者之间的显著差异的基因型分布只是观察rs6809699 > C多态性(AC与AA:调整后的优势比(或)= 0.48,95%可信区间(CI) = 0.27 - -0.84, ;AC / CC与AA:调整或= 0.47,95% CI -0.83 = 0.27, )。在调整了年龄和性别,rs6809699 C等位基因的携带者或丙种球蛋白灵敏度0.44到0.49 (AC与AA:调整或= 0.48,95%可信区间(CI) = 0.27 - -0.84, ;AC / CC与AA:调整或= 0.47,95% CI -0.83 = 0.27, )rs6809699 AA基因型的航空公司相比,表明这个SNP的保护作用与丙种球蛋白阻力。此外,五个人防护多态性经历了一个显著降低丙种球蛋白阻力比个人三个保护多态性(调整或= 0.27,95% CI -0.57 = 0.13, )。我们的研究结果表明,P2RY12 rs6809699多态性可以作为生物标志物预测IVIG阻力KD的病人。
1。介绍
川崎病(KD)是一种急性、自限性的血管炎的病因不明,主要发生在婴儿和儿童(1]。KD导致冠状动脉动脉瘤在大约25%的未经处理的情况下(2]。研究表明,即使没有卡尔KD的急性期,仍有患动脉内皮功能障碍的风险,增加了血管硬化,降低心肌储备能力在青少年和成人患者(3,4]。目前,KD已成为最常见的儿童获得心脏病,KD的发病率逐渐增加,特别是不完整KD的发病率逐渐增加,这就不利于这种疾病的早期诊断5]。静脉注射免疫球蛋白(丙种球蛋白)加上阿司匹林治疗KD可以减少卡路里的发病率从15 - 25%到5% (6]。尽管使用大剂量丙种球蛋白显著降低卡路里的发生率,10%到20%的KD患儿仍停止响应丙种球蛋白和卡尔的发病率较高7]。预测KD病人的抗早丙种球蛋白,采取适当的措施尽快预防或治疗,是减少卡路里和改善预后具有重要意义。
KD与免疫和遗传易感性有关。近年来,随着全基因组关联分析的应用,许多研究表明,丙种球蛋白停止响应之间的相关性和遗传多态性(8- - - - - -11]。FcyR和ITPKC通路相关的基因都已经被广泛地研究过了(12,13]。研究表明,Fc受体介导抗炎效果和calcium-mediated T细胞激活不响应丙种球蛋白。srethna等人的研究有一定的指导意义的预测和治疗丙种球蛋白停止响应KD (14]。Onouchi et al。15)可以成功和可靠地证明了协会的功能snp ITPKC和CASP3易感性KD,发现这些snp合作影响的严重性KD日本人口。
Purinergic P2Y12受体(P2RY12)属于G-protein-coupled受体家族。P2RY12调节血小板激活和聚集和血栓栓塞的治疗是一个潜在的目标和其他凝血病(16- - - - - -18]。许多研究表明P2RY12可能是氯吡格雷和阿司匹林抵抗的保护性因素19,20.]。正如我们前面描述的(21),P2RY12: rs7637803 TT基因型变体增加冠状动脉动脉瘤的风险KD病人在中国南方的人口。然而,没有研究关注P2RY12多态性之间的连接和IVIG阻力KD。因此,在目前的研究中,我们选择了五个单核苷酸多态性(snp) P2RY12调查单核苷酸多态性和丙种球蛋白阻力之间的关系在川崎病的患者。
2。材料和方法
2.1。研究人群
在最近的研究中,KD例和健康对照组都局限于华人汉族无关个体。总共有759例KD患者招募主要来自美国儿科心脏病广州市妇女儿童医疗中心的2012年1月和2017年1月之间。KD的所有病例分类主要根据指南诊断、治疗和长期管理规定的KD美国心脏协会在2004年(22]。所有受试者签署书面知情同意提供他们的父母。本研究机构审查委员会批准的广州市妇女儿童医疗中心(gzr2015 - 099)。
2.2。SNP基因分型结果选择和
我们选择了五个snp (rs9859538 G >, rs1491974 > G, rs7637803 C > T, rs6809699 C >,和rs2046934 G >)P2RY12基因。样本收集与基因组DNA提取的指令工具包(Tiangen,北京)。使用核酸DNA定量量词。与TaqMan试剂P2RY12多态性的基因分型。高质量的DNA样本基因分型使用Taqman实时PCR方法(美国应用生物系统公司,培育城市,CA)。我们执行Taqman实时聚合酶链反应(PCR)测定这些单核苷酸多态性基因型(23]。此外,10%的样本是随机选择,重复和再现性和谐的100%。
2.3。统计分析
每个SNP基因型频率以及人口统计学变量比较KD之间使用卡方测试用例和控制。或者和95%可信区间(CI)被无条件的逻辑回归分析计算,调整年龄和性别。基因型频率在控制每个SNP检测偏离哈迪温伯格平衡(HWE)使用拟合优度χ2测试。我们预定0.2假阳性报告(FPRP)阈值和概率选择了一个先验概率0.1检测或0.67(保护作用)。统计分析过程一直在前面描述的(21]。
3所示。结果
3.1。人口特征
表1显示了KD的人口学特征情况下,丙种球蛋白治疗耐药或敏感。丙种球蛋白抵抗被诊断出基于诊断、治疗,和川崎病的长期管理:科学声明卫生专业人员从2017年美国心脏协会(2]。KD发达复发的患者或持续发热至少36小时的丙种球蛋白输注后,表示丙种球蛋白抗。平均年龄(±标准差(SD)是28.2±24.4个月(范围1 - 116个月)对KD患者抗丙种球蛋白治疗和26.58±21.86个月(范围1 - 156个月)对KD丙种球蛋白治疗患者敏感。短暂,没有观察到显著差异的年龄(28.2±24.4和26.58±21.86, )或性别( )KD患者之间敏感或耐丙种球蛋白治疗。KD的65.54%患者抗丙种球蛋白治疗是男性,而男性的比例是68.09%,KD丙种球蛋白治疗患者敏感。女性的比例分别为34.46%和31.91%,分别。
3.2。P2Y12之间的关联基因多态性和丙种球蛋白阻力
P2RY12多态性基因型分布的川崎病的患者丙种球蛋白阻力和丙种球蛋白灵敏度表所示2。没有明显的由于HWE每个SNP基因型的频率(rs9859538 G >,rs1491974 > G,rs7637803 C > T,/ rs6809699 > C,rs2046934 G >)。我们选择rs9859538 G >, rs1491974 G >, rs7637803 C > T, rs6809699 C >, rs2046934 >克P2RY12川崎病,以确定是否有任何关系患者丙种球蛋白阻力和丙种球蛋白的敏感性。5研究snp的显著差异之间的基因型分布IVIG阻力和丙种球蛋白敏感性KD病人只是观察rs6809699 > C多态性( )。在调整了年龄和性别,rs6809699 C等位基因的携带者有优势比0.49(或0.44)丙种球蛋白敏感性(AC与AA:调整或= 0.48,95%可信区间(CI) = 0.27 - -0.84, ;AC / CC与AA:调整或= 0.47,95% CI -0.83 = 0.27, )rs6809699 AA基因型的航空公司相比,表明这个SNP的保护作用与丙种球蛋白阻力。然而,没有发现关联的四个剩余的多态性。虽然五个snp的保护性基因型相结合,我们发现4 - 5保护患者基因型患者经历了显著降低丙种球蛋白阻力相比只有0 - 3保护基因型(调整或= 0.27,95% CI -0.57 = 0.13, )。
3.3。分层分析
我们进一步探索之间的关联P2RY12 rs6809699 > C基因多态性和保护性基因型的KD IVIG抵抗患者按年龄和性别分层分析(表3)。rs6809699 CC基因型相比,CA / AA基因型的保护作用更主要≤60个月的儿童年龄(调整或= 0.42,95% CI -0.76 = 0.23, )和男性(调整或= 0.39,95% CI -0.81 = 0.19, )。此外,综合分析表明,5保护性基因型患者共同减少KD丙种球蛋白电阻≤60个月的儿童年龄(调整或= 0.22,95% CI -0.52 = 0.10, )和男性(调整或= 0.27,95% CI -0.69 = 0.11, )。
4所示。讨论
在当前患者病例对照研究148 KD丙种球蛋白阻力和611 KD丙种球蛋白敏感患者,我们验证P2RY12 rs6809699 > C基因多态性与IVIG阻力KD的病人。我们所知,这是第一个研究调查P2RY12基因多态性和丙种球蛋白阻力之间的关系在中国南部KD的孩子。
丙种球蛋白管理的急性期的疗效KD众所周知,减少冠状动脉畸形的患病率(24]。大约10%到20%的KD开发复发的患者或持续发热至少36小时的丙种球蛋白输注后,表示作为耐丙种球蛋白(25]。许多研究表明患者对初始丙种球蛋白的风险增加发展中冠状动脉异常(26,27]。丙种球蛋白的免疫学基础抵抗是未知的;然而,很可能宿主遗传因素,比如Fcγ受体多态性,扮演一个角色在抵抗丙种球蛋白(2]。翁et al。8)表明,il - 1 b - 511 TT和IL-1B-31 CC基因型,或TC / TC diplotype,可能与初始IVIG阻力有关台湾KD患儿。豪尔et al。112]表明,FCGR轨迹可能会影响理解免疫激活KD发病机理和静脉注射免疫球蛋白反应的机理。Shrestha et al。12,14]证明了FcyR IIIB-NA1基因多态性与丙种球蛋白阻力有关。Onouchi et al。28)发现这些snp合作影响IVIG响应日本的人口。
丙种球蛋白管理的急性期的疗效KD众所周知,减少冠状动脉畸形的患病率(2]。因为阿司匹林具有重要的抗炎和抗血小板活动,它已被用于治疗KD很多年了。在温和的但不是大型或巨型动脉瘤,患者可能结合氯吡格雷与阿司匹林治疗ADP-mediated血小板激活(2]。purinergic受体P2RY12临床目标在心血管和脑血管疾病,自抑制血小板P2RY12防止ADP-induced血小板聚集,从而降低血栓形成的风险(29日]。许多研究表明,五个snp (rs9859538 G >, rs1491974 > G, rs7637803 C > T, rs6809699 C >,和rs2046934 G >)P2RY12基因与阿司匹林和氯吡格雷抵抗心脏病和增加冠状动脉动脉瘤在川崎病的风险。Karazhanova et al。19)发现了一个协会之间的H2 P2RY12基因单体型,在冠状动脉疾病患者阿司匹林抵抗。李等人。20.]表明,rs2046934 C等位基因可能是氯吡格雷抵抗的保护性因素,rs2046934作为一个变化的P2RY12基因检查,发现在氯吡格雷治疗有助于个人间的变化。陆et al。21]发现rs7637803 TT基因型变体增加在川崎病冠状动脉动脉瘤的风险在中国南方人口,rs7637803基因型可能是用作生物标志物预测KD患者的冠状动脉动脉瘤的发生。Zhang et al。30.]发现rs6809699微小等位基因可以预测流血后st段抬高心肌梗死患者经皮冠状动脉介入。帖木儿et al。31日)表明,rs9859538被发现与高残余血小板反应性;rs9859538的微小等位基因与增加2倍有均≥20%花生四烯酸acid-stimulated,二磷酸腺苷(10≥70%μ米)刺激最大血小板聚集。丙种球蛋白,阿司匹林和氯吡格雷是三个主要的药物治疗KD。然而,由于五P2RY12基因的单核苷酸多态性与阿司匹林和氯吡格雷抵抗,基于此背景下,我们调查了五个单核苷酸多态性是否P2RY12多态性之间的关系和IVIG阻力KD的病人。
一项研究由我们研究小组专注于与KD P2RY12多态性遗传易感性之间的关系和冠状动脉动脉瘤(CAA)并发症21]。研究发现,rs7637803显著增加CAA KD患者的风险。此外,患者对初始丙种球蛋白被发现在发展中创新艺人经纪公司的风险增加。因此,我们考虑是否存在KD病人P2RY12多态性和丙种球蛋白阻力之间的关系。目前的研究包括KD群体的情况下,包括148 KD丙种球蛋白抵抗患者和611 KD丙种球蛋白敏感患者从中国南方人口。P2RY12多态性被选为研究主题,我们证实P2RY12 rs6809699 > C基因多态性与IVIG阻力KD的病人。然而,没有发现关联的四个剩余的多态性。未来的研究应该采用更大的样本量,以进一步验证我们的发现。
KD通常是一种与年龄相关的疾病,影响幼儿年龄≤60个月。此外,该病的发病率在男性比女性为1.5比1。2 (2]。然而,为什么川崎病更容易发生在5岁以下的儿童仍然未知。在我们的研究中,与rs6809699 CC基因型相比,CA / AA基因型的保护作用更主要≤60个月的儿童年龄和男性,此外,综合分析表明,5保护基因型患者共同减少KD IVIG电阻≤60个月的儿童年龄和男性,这可能是川崎病的一个原因是不太常见的儿童年龄超过60个月的发生率以及为什么女性比男性少。测试可能减弱的力量> 60个月的年龄范围,表明rs6809699 CA / AA基因型变体没有减少风险的IVIG阻力超过60个月的婴儿。
本研究有几个局限性。虽然这项研究是第一次调查在中国南方,应该承认许多局限性。首先,尽管当前的研究的样本量大,是不够由于发病率低丙种球蛋白在KD情况下抵抗。因此,需要有大量的样本多中心研究证实P2RY12之间的相关性和IVIG阻力KD的病人。第二,我们只调整年龄和性别的逻辑回归分析和无法收集和控制其他因素,如家族遗传因素的影响和诞生的历史。未来的研究有更大的样本量和功能性试验应该进行确认这一研究获得的结果。第三,我们所知除了P2RY12基因多态性,还有许多其他基因和nongenetic因素影响IVIG阻力川崎病人的风险。然而,在我们目前的研究中,我们只研究了相关性P2RY12川崎患者的基因多态性和丙种球蛋白阻力,不涉及其他基因。因此,目前尚不清楚P2RY12基因影响IVIG阻力川崎病人与其他基因。在未来的研究中,我们计划研究川崎患者的其他基因和丙种球蛋白阻力之间的关系,进一步探索P2RY12单核苷酸多态性是否与相关基因IVIG阻力川崎的病人。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
Zhouping王、徐Yufen和华中周贡献同样这项工作。周益春,H.Z., and Z.L. performed the research study and collected the data; Z.J. and X.G. analyzed the data; X.G. designed the research study; Z.W., Y.W., and W.L. wrote the paper; P.H. and L.Z. prepared all the tables. All the authors reviewed the manuscript and approved the final draft. All authors contributed significantly to this work.
确认
作者要感谢广州的临床生物资源库的妇女和儿童的医疗中心提供的所有临床样本。本研究在广东省自然科学基金的支持下,中国(批准号2016 a030313836);中国的广东科技项目(批准号2017 a030223003);广东省中医药科研基金、中国(批准号20162112和20162112);中国广州市科技计划项目(批准号。201607010011,201707010270,201707010270,201904010486);广州卫生和卫生科技项目、中国(批准号20191 a011021和20191 a011033);广州儿科研究所/广州市妇女儿童医疗中心(格兰特gcp - 2019 - 003号,叫喊声- 2019 - 050,和叫喊声- 2019 - 003)。