老年妇女全胚性培养和单胚泡转移策略的可行性：回顾性分析

摘要

客观的．探讨≥35岁患者血糖培养和单胚性转移策略的可行性和临床结果。方法．回顾性分析≥35岁以上≥35岁的患者于2017年1月至2019年4月在温州医科大学第二附属医院的生殖中心进行。通过长期议定书进行卵巢过度刺激治疗的155例，并在收集单一（84例）或双（71例）胚泡转移。然后，患者进一步分为<38年。组和≥38岁。组，群体之间的实验室和临床结果进行了比较。结果．双胚性转移（DBT）组显示临床妊娠率较高，妊娠率较高，新生儿出生体重低于单胚性转移（SBT）组（）。然而，胚胎植入率，生物化学妊娠率，流产率，早产率和术语出生率之间没有统计学上显着的差异。为了， SBT显著降低了多胎妊娠率，增加了新生儿出生体重，但临床妊娠率没有显著降低。≥38岁。SBT与DBT在妊娠结局上无差异。Logistic回归分析显示，MII卵母细胞数与活产率呈正相关( ）并与流产率负相关（），建议老年卵巢储备的患者会在怀孕中获得更好的前景。怀孕的胎儿心脏击败的数量与活产率呈负相关（）并与早产率呈正相关（）。结论．全胚性培养和单胚性转移的策略是可行，安全，有效的老年卵巢储备患者，这将降低多重妊娠率。

1.介绍

目前，延迟生育的妇女比例迅速增加[1，2］．高龄产妇(≥35岁)与卵巢储备和卵母细胞能力下降有关[3.]，导致IVF / ICSI妊娠率的降低。虽然全胚性培养和单胚泡转移（SBT）的效率和安全性越来越受到了认可[4] 在，关于该协议的信息已经很少在老年女性（≥35年）中报道。在这项研究中，我们讨论了全胚性文化和SBT的可行性卵巢储备正常。

2.数据和方法

2.1。包含和排除标准

回顾性分析2017年1月至2019年4月在温州医科大学第二附属医院生殖中心接受卵巢过度刺激治疗的155例患者的临床资料。本研究纳入标准为(1) ，（2）在常规术前体检中没有IVF / ICSI的禁忌症（3），（4），（5）．排除标准为(1)丈夫有染色体异常、无精子症、严重少精子症、弱精子症;(2)子宫内膜异位症;(3)子宫腺肌症;(4)子宫内膜子宫肌瘤;(5)宫腔粘连;(6)子宫内膜息肉;(7)输卵管积水;(8)复发性流产;(9)染色体异常;(10)既往IVF/ICSI治疗失败>2次。

2．2．控制性卵巢过度刺激(COH):延长方案

将所有患者皮下注射加入促性腺激素释放激素激动剂（GNRH-A）3.75mg^rd.-5^TH.他们的月经周期的日子。35-38天后，对卵巢刺激进行了促性腺激素（GN）如重组卵泡刺激激素（RFSH，150-225 IU /日，Merck Serono有限公司）进行卵巢刺激。根据患者的年龄，AFC，BMI，B-FSH水平和卵泡数/尺寸调整剂量。一旦最大卵泡的直径达到12毫米，加入了高纯度人更年期促性腺激素（HP-HMG，0-150 IU /日，德国Merck Co.Ltd.，德国）。如果在10中仍然没有有利的卵泡^TH.COH的日子，治疗应取消。当有2-3个卵泡的直径大于16毫米或最大的直径时，在21:00处执行肌内注射人绒毛膜促性腺激素（HCG，10000IU，Lizhu Pharmaceutical Factory）（触发）。

2.3。卵母线检索和孵化过程

触发后34-36小时进行超声引导的经阴道卵母细胞检索。在卵母细胞检索后IVF / ICSI 4-6小时受到检索到的卵母细胞。然后，在4％o的混合物的加湿气体阶段，在37℃下在37℃下孵育胚胎₂，6％的co₂和90％n₂．16 ~ 18 h后对胚胎发育进行初步评估。受精后16-18 h，双极体和两个原核的存在可证实正常受精。在卵裂期的胚胎中测定卵裂球的数量、大小和碎片的比例。桑椹阶段的胚胎被压实的比例被评估。在5^TH.白天，胚泡形成。胚泡评分根据包括胚泡腔膨胀，密度，内部细胞块的膨胀阶段的膨胀阶段的形态进行分级，以及滴注胚芽的凝聚力以及生殖医学中的α科学家和胚胎科学家的共聚性，2011年）[5］．

2.4。胚胎转移和耐力支撑

根据美国生殖医学协会（ASRM）的指导方针[6](老年患者可移植两个囊胚，但最好移植一个质量较好的囊胚)，在b超指导下移植1 ~ 2个囊胚。移植胚胎的数量由医生和这对夫妇共同决定，取决于患者的意愿、之前的体外受精/ICSI周期的结果、可用的囊胚数量和胚胎质量。黄体期支持采用口服微粉黄体酮200mg / d (Utrogestan;Capsugel, Besins制造比利时，布鲁塞尔，比利时)和90毫克孕酮凝胶经阴道每日(Crinone;默克雪兰诺，赫特福德郡，英国)从卵母细胞提取的日子。

2.5。跟进

胚胎移植后12天测定血清hCG水平以确定妊娠。2周后临床妊娠定义为经阴道超声下有妊娠囊及胎儿心跳。另外，胚胎移植后45天hCG阳性未出现妊娠囊为生化妊娠。流产标准为妊娠20周前胚胎丢失，妊娠28 ~ 37周发生早产。妊娠37 - 42周为足月分娩。新生儿出生被认为是低重量的婴儿，而≥4000克是胎儿麦科瘤。

2．6．观察指标

比较两组患者的背景资料、临床和实验室指标、妊娠率。；；；；；；．

2.7。统计数据

采用SPSS 24.0统计软件进行数据分析。连续数据采用独立样本进行分析 -测试或Mann-Whitney测试。Chi-Square测试和Fisher的确切试验用于二分法变量的数据分析中。二项式逻辑回归和Hosmer-Lemeshow用于管理风险因素分析。在这项研究中，被认为是统计学上的差异。

结果

3．1．SBT组与DBT组比较

3.1.1。后台数据

本研究共纳入155个周期，其中单囊胚转移(SBT)组84例，双囊胚转移(DBT)组71例。两组患者的BMI、不孕症持续时间、受精、基线激素浓度、AFC差异均无统计学意义( ）。SBT组中的患者年龄比DBT集团更年轻（）（桌子1）。


	SBT（）	DBT（）	价值

年龄	36.8（35.7,38.6）	37.6（35.9,40.1）	0.019
不孕症持续时间（年）			0.472
BMI(公斤/米²）			0.773
亚洲秘书处			0.201
施肥方法（％）
试管婴儿	80.0 (67/84)	70.4（50/71）	0.125
ICSI	17.9（15/84）	21.1（15/71）	0.478
试管婴儿+ICSI	2.4（2/84）	8.5（6/71）	0.092
抗苗勒氏管激素(ng / mL)			0.568
基线性腺激素
LH (IU / L)			0.060
FSH (IU / L)			0.965
E2 (ng/mL)			0.665
P (nmol/L)	0.52 (0.37, 0.73)	0.51（0.4,0.68）	0.402

．

3．1．2．SBT和DBT的临床和实验室指标

触发日的子宫内膜厚度没有统计学差异，天数为GN，总GN的剂量，检出的卵母细胞数量，施肥率，D3上的可转移胚胎数，以及两组之间的D5上的可转移胚胎数。（），如表所示2．SBT集团显示出高质量的D5胚胎数量更高，D5上的优质胚胎率（），如表所示2．


	SBT（）	DBT（）	价值

Gn的日子			0.887
总Gn (IU)剂量			0.405
子宫内膜厚度（mm）			0.220
检索到的卵母细胞数量	9.25 12.5 (18)	12(8、15)	0.058
可转移D3胚胎的数量	5（3,7）	5（3,6）	0.063
MII卵母细胞数量	11.0 (8, 16)	10.0(8、13)	0.097
受精率(%)			0.488
D5胚胎的数量	4.0（3,5.8）	3.0（2,5）	0.102
优质D5胚胎数量s			0.007
优质D5胚胎率（％）			0.001

，．

3.1.3。SBT和DBT的妊娠结局

SBT组的临床妊娠率为46.4％，而DBT组在无统计差异的情况下为56.3％。流产率没有统计学差异，生物化学妊娠率，异位妊娠率，胚胎植入率，早期出生率，术语出生率，胎儿常规率，两组之间的低重量婴儿率。由于胚胎数转移的衰退，SBT组的多重妊娠率明显低于DBT组（0与22.5％），导致出生率较低（虽然没有统计差异），显着增加新生儿出生体重（），如表所示3.．


	SBT（）	DBT（）	价值

胎儿心跳数量	38.	55.	0.005
临床妊娠率(%)	46.4（39/84）	56.3（40/71）	0.219
化学妊娠率(%)	11.9（10/49）	14.9（7/47）	0.479
异位妊娠率（％）	2.6（1/39）	0.0（0/40）	0.990.
植入率(%)	45.2 (38/84)	43.7（62/142）	0.818
多重妊娠率（％）	0.0（0/39）	22.5 (9/40)	0.005
流产率（％）	18.0（7/39）	12.5（5/40）	0.500
早产率(%)	7.7（3/39）	20.0（8/40）	0.114
术语交货率（％）	71.8（28/39）	62.5 (25/40)	0.379
活产率（％）	37.0（31/84）	46.5（33/71）	0.228
低体重儿率(%)	6.5（2/31）	19.0 (8/42)	0.229
巨大胎儿率(%)	6.5（2/31）	4.7 (2/42)	0.787
新生儿出生体重（g）			0.034

，．

3.1.4。IVF / ICSI患者妊娠结局的危险因素

Logistic回归表明，流产的风险增加了母亲年龄（，或者：1.327,95％CI：1.01-1.75）。在调整触发日的子宫内膜厚度后，不孕岁和年龄，检索和胎儿心跳的卵母细胞的数量成为预测活产的独立因素（，OR: 1.18, 95% CI: 1.01-1.38和OR: 0.322, 95% CI: 0.11-0.95)，随着MII卵母细胞数量的增加，活产概率也随之增加。而胎儿心跳次数则产生相反的影响。调整BMI后，胎儿心跳次数是预测早产的危险因素( ，或者：7.16,95％CI：1.63-31.45），具有两次胎儿跳动的风险比单一的风险为7.16倍（表4）。


预测和响应变量	价值	或（95％CI）

生育
Hosmer-Lemeshow test	0.963
No. of MII oocytes	0.044	1.18（1.01-1.38）
No. of fetal heart beats	0.040	0.322（0.11-0.95）
流产
Hosmer-Lemeshow test	0.913
年龄	0.046	1.327（1.01-1.75）
No. of MII oocytes	0.049	0.844（0.71-0.999）
早产
Hosmer-Lemeshow test	0.874
No. of fetal heart beats	0.009	7.16 (1.63 - -31.45)
No. of D5 embryo	0.039	1.56（1.02-2.34）

，．

3.2。在不同年龄的老年妇女的SBT

上述研究表明，SBT组中的患者比DBT集团的患者更年轻，表明年轻患者更有可能接受SBT。因此，根据IVF / ICSI成功率的一个重要年龄节点，我们将患者分成<38年的组。和≥38yr。在不同年龄组内比较SBT和DBT的妊娠结局。

3.2.1。患者中的SBT与DBT。<38岁的患者。

共有98例35-38岁的患者。本研究包括在内，包括选择SBT的59名患者和具有DBT的其他39患者。不孕症持续时间，BMI，施肥方法，基线激素浓度和两组之间的AFC没有统计学差异（），如表所示5．


	SBT（）	DBT（）	价值

不孕症持续时间（年）			0.990.
BMI(公斤/米²）			0.614
亚洲秘书处			0.429
施肥方法(%)
试管婴儿	80.0 (46/59)	71.8（28/39）	0.487
ICSI	20.3 (12/59)	18.0（7/39）	0.770
试管婴儿+ICSI	1.7（1/59）	10.3（4/39）	0.080
基线性腺激素
LH (IU / L)			0.189
FSH (IU / L)			0.540
E2 (ng/mL)			0.524
P (nmol/L)			0.424

检索的卵母细胞的数量，MII卵母细胞，D5胚胎，高质量的D5胚胎以及SBT组中的优质D5胚胎的速率都高于DBT组（）。事实上，实验室结果较好的患者更可能选择SBT(表6）。


	SBT（）	DBT（）	价值

Gn的日子			0.720
总Gn (IU)剂量			0.578
子宫内膜厚度（mm）			0.784
检索到的卵母细胞数量	14.0（10,18）	12.0(8、14)	0.005
MII卵母细胞数量	12.0（9,17）	11.0（7,13）	0.027
受精率(%)			0.762
D5胚胎的数量	4.0 (7)	3.0（2,4）	0.019
优质D5胚胎数量			0.002
优质D5胚率(%)	75.0（60,100）	50.0 (0, 80)	0.001

，．

由于SBT组移植的胚胎数量较少，胎儿心跳次数明显低于DBT组，导致多胎妊娠率为0%，而DBT组为38.1%。多胎出生导致新生儿体重DBT组显著低于SBT组(表1)7）。


	SBT（）	DBT（）	价值

胎儿心跳数量	25.	33.	0.009
临床妊娠率(%)	44.1（26/59）	53.8 (21/39)	0.306
化学妊娠率(%)	25.7（9/35）	19.2（5/26）	0.552
异位妊娠率（％）	3.8（1/26）	0.0（0/21）	0.553
植入率(%)	44.1（26/59）	44.9（35/78）	0.770
多重妊娠率（％）	0.0（0/26）	38.1（8/21）	0.001
流产率（％）	15.4 (4/26)	9.5（2/21）	0.442
早产率(%)	14.3（3/21）	28.6（6/21）	0.135
术语交货率（％）	69.2（18/26）	61.9 (13/21)	0.598
活产率（％）	35.6（21/59）	48.7（19/39）	0.196
低体重儿率(%)	9.5（2/21）	35.0（7/20）	0.092
巨大胎儿率(%)	9.5（2/21）	0 (0/27)	0.186
新生儿出生体重（g）			0.019

，．

3.2.2。≥38岁患者的SBT与DBT。

收集了总共57个循环结果，其中包括25个SBT和32个DBT病例。不孕症持续时间，BMI，施肥方法，基线激素浓度和两组之间的AFC没有统计学差异（，表格8）。


	SBT（）	DBT（）	价值

不孕症持续时间（年）			0.409
BMI(公斤/米²）			0.858
亚洲秘书处			0.812
施肥方法(%)
试管婴儿	84.0（21/25）	71.9 (22/32)	0.187
ICSI	12.0（3/25）	25.0（8/32）	0.315
试管婴儿+ICSI	4.0（1/25）	6.3（2/32）	1
基线性腺激素
LH (IU / L)	3.24 (2.68, 5.07)	3.29（2.51,4.41）	0.318
FSH (IU / L)			0.740
E2 (ng/mL)			0.198
P (nmol/L)			0.827

，．

DBT组的子宫内膜厚度比触发日在SBT组的子宫内膜厚度，这可能更有利于胚胎植入并增加妊娠率。此外，在实验室指标中的两组之间没有差异，例如GN的日子，总GN的剂量，检索的卵母细胞的数量，MII卵母细胞的数量，肥育率，D5胚胎的施肥率，数量/速率，以及数量/优质D5胚胎的速率（），如表所示9．由于伴随着正常的卵巢储备，需要在进一步研究中持续更长的时间内收集更多案例。


	SBT（25例）	印度生物技术部(32例)	价值

Gn的日子			0.423
总Gn (IU)剂量			0.779
子宫内膜厚度（mm）			0.029
检索到的卵母细胞数量			0.476
MII卵母细胞数量			0.663
受精率(%)	83.0（68.5,96.5）	86.0（78,93.5）	0.158
D5胚胎的数量			0.424
优质D5胚胎数量			0.698
优质D5胚率(%)			0.060

，．

此外，SBT和DBT策略之间的怀孕结果没有差异（），尽管具有较厚的子宫内膜的DBT组。在这种情况下，SBT可以在老年患者中提供积极效果（表10.）。


	SBT（25例）	印度生物技术部(32例)	价值

胎儿心跳数量	13.	23.	0.194
临床妊娠率(%)	52.0 (13/25)	59.4（19/32）	0.578
化学妊娠率(%)	7.1 (1/14)	9.5（2/21）	1
异位妊娠率（％）	0 (0/13)	0.0 (0/19)	- - - - - -
植入率(%)	52.0 (13/25)	42.1（27/64）	0.403
多重妊娠率（％）	0.0（0/13）	5.3（1/19）	1
流产率（％）	23.1（3/13）	15.8（3/19）	0.666
早产率(%)	0 (0/13)	10.5（2/19）	0.502
术语交货率（％）	40.0（10/25）	37.5（12/32）	0.467
活产率（％）	40.0（10/25）	43.8（14/32）	0.794
低体重儿率(%)	0（0/10）	6.7（1/15）	1
巨大胎儿率(%)	10.0 (1/10)	6.7（1/15）	1
新生儿出生体重（g）	3125（2969,3362.5）	3250（2900,3650）	0.439

，．

4。讨论

近年来，辅助生殖技术（艺术品）的进展，特别是在胚胎培养和冷冻保存中，迅速提高，导致了活产率的提高。基于成功率的增加，从艺术实践中，从达到活生生的主要目标来优化孕产妇和新生儿安全性。同时，随着母体和新生儿发病率的增加，多次怀孕被认为是最重要的不良事件[7］．限制转移的胚胎的数量，特别是采用选修单胚胎转移（ESET）的做法，已被证明是降低多次怀孕风险的最有效的策略[8］．由于与先进产妇年龄相关的产科和新生儿并发症的高风险，ESET在接受艺术的老年妇女中特别有意义[9］．

目前，对于，没有治疗清楚地改善老化配子或胚胎的质量;因此，调整适当的胚胎转移策略是最有效的选择，以最大限度地提高妊娠率。可靠的胚胎选择策略是衡量IVF效率的态度（即，较低的流产率，较高的植入率和活力出生率）和安全（即较低的母体和新生儿并发症）。依次，单一嵌入式转移（SET）政策也最大限度地减少了多种妊娠的风险。

胃囊孵化技术的发展近年来迅速发展。在患有幼体患者的实践中（<35岁），与切割胚胎转移相比，胚泡转移改善了胚胎利率[10.]及活产率[11.]减少异位妊娠率[12.］．据报道，59％的好品质D3胚胎含有异常染色体，而只有35％的优质D5胚泡是非素水解的[13.］．研究甚至发现D3胚胎植入失败的80％〜90％可能导出高形态得分，但实际质量低[14.］．囊胚培养可能会消除具有较高形态学分数但发展潜力较低的D3胚胎[15.］．

然而，胚泡培养需要较高的实验室环境和技术[16.］．岁月的经历胚胎非洲倍性率的显着增加，在更年期之前，在40多岁时的30％基线产量增加到90％，[17.，18.］．具体而言，在43岁的女性中，产生染色体正常胚泡的可能性甚至低于5％[19.，20.］．对于老年妇女，全胚性孵化策略意味着零胚泡形成和胚胎转移取消的风险。这对老年夫妇挣扎有一个孩子来说是一个很大的打击。

零胚囊形成的风险表达了考虑全胚性培养的老年夫妇和临床医生的压力。与卵巢储备的年龄相关的下降不仅减少了胚泡植物的机会，而且还降低了胚胎植入和怀孕的速度[21.使得患者和医生很难考虑SBT。因此，SBT和DBT的临床疗效一直是研究热点。大多数研究只关注较年轻的患者(35岁以下)。很少有文献关注老年人的全胚泡培养和SBT ．据我们所知，老年患者单一胚泡转移（SBT）的可行性和结果仍然未知。在这项研究中，我们选择≥35岁的女性。具有正常的卵巢储备，并比较了SBT和DBT策略的实验室和临床结果。

我们的调查表明伴随着正常的卵巢储备，倾向于选择DBT随着患者的年龄而增加，并且流产的风险升起。此外，与SBT相比，DBT增加了妊娠率和活产率，也增加了多重妊娠率，低重量婴儿的比例以及早产的风险。妇女的年龄越来越高于SBT。也就是说，在我们的中心，更加夫妇更旨在转移两个胚泡而不是一个单一胚胎。Tannus等人的研究[22.]曾汲取不同的结论，即DBT的平均年龄与SBT相似。加拿大的研究表明，40％的IVF患者希望有多次怀孕[23.]，这可能与长期不孕的痛苦和反复不孕治疗失败的焦虑有关。但logistic回归分析显示，年龄是流产的危险因素，但在我们的研究中，DBT组与SBT组流产率无统计学差异。Tannus等在比较SBT和DBT的流产率时得出了相同的结论[22.］．

根据美国生殖医学协会（ASRM）发出的最新指南[6]老年患者可以选择两个胚泡转移，但是一个单一质量良好的胚泡是优选的。然而，许多研究表明，SBT和DBT之间的植入率没有统计学差异，但DBT可能会在增加活率时更好地行动[24.，25.］．无论是由年龄的分层，我们的研究都没有显示DBT组中植入或活产率的任何增加，但随着多种妊娠率的增加，提高了早产率的速度显着减少了新生儿的产量。荟萃分析为146,008例多次出生，表明多次怀孕与不良妊娠结果的高风险有关[26.］．此外，一些研究表明，在双胞胎妊娠期间超过50％的女性患有胎盘缺血性并发症[27.，这可能与年龄有关[28.，29.］．因此，仍然值得倡导在老年妇女中进行SBT以降低多种妊娠率。

然而，说服老年夫妇接受SBT仍然是一个挑战。只有不到四分之一的女性接受SBT [30.］．其中一个重要原因是患者认为双胚胎移植可以提高妊娠的成功率。作为专业的信息提供者，临床医生在决策过程中起着关键作用。因此，医生在决定移植多少胚胎之前，应该反复解释多胎妊娠对母婴健康的负面影响，甚至对老年夫妇家庭的经济压力。

结论

总之，我们的数据显示，在凭借正常的卵巢储备，DBT没有提高植入率或活产率，但通过多重妊娠率的增加，上升了早产递送速度，并显着降低了新生儿出生体重。所有胚泡培养的风险在这一定的老年妇女中都是安全和有效的。反过来，单一胚胎转移（集）政策最大限度地减少了多种妊娠的风险。因此，我们建议所有胚泡培养和单胚性转移的策略是可行，安全，有效的正常卵巢储备的老年患者。

数据可用性

稿件中提供所有数据。

利益冲突

作者声明他们没有利益冲突。

作者的贡献

Junzhao Zhao和Xiaosheng Lu贡献了相同的作者。

致谢

本研究得到浙江省自然科学基金（LQ17H040003号）的支持和中国浙江温州的重点科技创新团队基金会（美国专利号码C20170007）。

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