LPA基因多态性和基因表达与冠状动脉疾病有关

文摘

我们的研究的目的是调查的影响LPA为CAD风险和Lp (a)基因多态性在中国汉族人群的病例对照研究。此外,我们进一步分析的影响LPA基因表达在等离子体水平的Lp (a)和CAD的风险。首先,五个snp (rs1367211, rs3127596, rs6415085、rs9347438 rs9364559)LPA基因是基因分型使用SEQUENOM Mass-ARRAY系统两组。其次,我们使用定量实时PCR检查mRNA的表达水平LPA92年基因32例和控制。结果表明,rs6415085-T等位基因的频率明显高于以防组比对照组( )。单不相关CAD风险( )。和例TT / TG基因型有显著较高的等离子体Lp (a)水平与那些rs6415085 GG基因型( )。此外,信使rna表达水平,以防组明显高于对照组( )。我们的研究证实,rs6415085与CAD和增加等离子体Lp (a)水平。和信使rna表达水平的增加LPA基因可能在CAD的发展机制。

1。介绍

CAD的发展是伴随着许多风险因素在许多研究[1,2]。在这些因素中,脂质水平是CAD的主要危险因素之一。因此,总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇(hdl - c),和其他几个传统危险因素常常被用于预测心血管疾病(CVD)的风险3,4]。研究新兴风险因素的协作,个人没有已知的心血管疾病,脂蛋白(a)、载脂蛋白B和ⅰ,或lipoprotein-associated磷脂酶A2质量风险评分包含总胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇导致轻微改善心血管疾病预测(5]。然而,的作用机制脂蛋白(a) [Lp (a)]在心血管风险和治疗Lp (a)的意义尚不清楚。

Lp (a)的结构是复杂的。是血浆脂蛋白组成的那些高胆固醇低密度脂蛋白胆固醇(LDL)颗粒与载脂蛋白B100和额外的蛋白质分子之一,载脂蛋白(a),连接通过二硫化物键(6]。此外,等离子体水平的Lp (a)受到遗传因素的影响。全基因组关联研究(GWAS)研究了r·克拉克显示LPA基因变异强烈与等离子体的水平增加有关Lp (a)和冠状动脉疾病的风险增加7]。

LPA位于6号染色体上q25-q26,编码的载脂蛋白(a)组件Lp (a)脂蛋白粒子。之间的关系的研究LPA和CAD风险和等离子Lp (a)水平,rs10455872和rs3798220强烈增加等离子体的Lp (a)水平,降低拷贝数LPA(确定的数量kringle IV-type 2重复),和一个小Lp (a)脂蛋白大小(7,8]。然而,另外三个位点(rs3127596、rs6415084 rs9364559)也与CAD的风险显著相关,和rs3127596 rs6415084也显著增加等离子体的Lp (a)水平。因此,我们的研究的目的是调查可能的联系LPA基因多态性和CAD风险在中国汉族人群的病例对照研究。此外,我们进一步分析的影响LPA在等离子体Lp (a)基因表达水平和CAD在中国汉族人口风险。

2。材料和方法

2.1。研究对象

收集92例和32控制遗传和信使rna表达水平分析。所有受试者中国汉族血统的吉林大学第一医院在2013年2月和2014年3月。CAD是由至少两个独立的诊断训练有素的医师基于以下标准。所有患者被冠状动脉与CAD计算机断层血管造影(SIEMNS Somatom定义 行螺旋CT)。CAD是定义在任何主要冠状动脉狭窄≥50%。nonatherosclerotic患者血管疾病、先天性心脏病、心肌病、瓣膜病、肾脏或肝脏疾病和癌症被排除在外。所有对照组心电图,胸透和血清分析。他们被归类为健康受试者根据正常体检结果加上缺乏个人或家庭的历史和原因怀疑CAD。

心血管风险因素的存在,包括糖尿病(空腹血糖≥7.0更易/ L,和/或使用降糖药物治疗,包括胰岛素),高血压,吸烟,从所有参与者。高血压的定义根据坐在血压140/90毫米汞柱越高,和/或受试者接受抗高血压药物治疗。在这项研究中,一个吸烟习惯被定义为每日摄入量(> 10根9]。

这项研究符合《赫尔辛基宣言》。所有的科目都书面知情同意在这项研究中,吉林大学的伦理委员会批准,中国长春。

2.2。实验室检查

在开始研究之前,所有的参与者接受了最初的筛选评估,包括病史、体征、12导心电图,脂质测量变量和新颖的危险因素。早上静脉血收集后一夜(8 - 12小时)快。血清/血浆样本冷冻和储存在分析之前−80°C。所有测量在一个中心实验室进行。

2.3。SNP选择、鉴定和基因分型

候选人单核苷酸多态性(snp) (rs3127596和rs9364559)是从GWAS研究选出来的。另外三个标记snp (rs1367211 rs6415085, rs9347438)选择从基因单核苷酸多态性在中国汉族人口(慢性乙肝)的人类基因组单体型图计划(第一阶段的数据库)。snp都局限于小的等位基因频率大于15% HAPMAP-CHB数据库(https://www.hapmap.org)。基因组DNA用于PCR扩增从全血中提取样本使用DNA提取工具包(豆类,中国)。引物的扩增和扩展AssayDesigner3.1所使用的软件。放大和扩展5个位点的引物序列LPA基因是我们以前所述10]。基因型被分配实时使用打字机4.0软件(Sequenom)。作为质量控制,5 - 10%的样本的基因复制。没有观察到的不一致。控制分布在每一个384孔板也是一致的。集群的情节是由信号的低和高质量的等位基因。

2.4。RNA隔离和量化

高质量的总RNA从人类分离外周血样本例和对照组与不同基因型在中国汉族人群中,和500 ng总RNA反向转录。LPA mrna被量化实时定量聚合酶链反应使用的5′核酸酶测定,ABI棱镜7300序列检测系统(应用生物系统公司,培育城市,CA)。寡核苷酸引物和TaqMan调查:5′-GGGACAAATAAATGGGCAGGT-3′, 5′-AATGAAGAGGATGCACAGAGAGG3′。相对基因表达水平计算( )[11]。

2.5。统计分析

数据表示为总额的百分比为分类变量,或平均数±标准差。统计分析的受试者与皮尔森的特点测试分类变量,如性别、吸烟、饮酒者,高血压,糖尿病和与学生的的连续变量以及年龄、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白胆固醇与正态分布。不同的团体和等位基因或基因型之间的联系LPA基因多态性进行了分析使用或Fisher精确检验。等离子体Lp (a)水平和mRNA的表达水平LPA基因非正态的分布数据,表示为M±问:单核苷酸多态性之间的关系和mRNA的表达水平LPA基因,rank-sum测试使用。SPSS 16.0被用于分析。

3所示。结果

3.1。参与者的特征

例和对照组的基线特征如表所示1。平均年龄没有显著性差异,性别、饮酒,糖尿病患病率,身体质量指数(BMI)、血清TG, TC水平在两组之间。与对照组相比,病例组有更多的吸烟者和患有高血压。此外,与对照组相比,案例组有更高水平的血清低密度脂蛋白,高密度脂蛋白胆固醇和Lp (a) ( )。

3.2。等位基因和基因型分析

5个位点的等位基因和基因型的分布在参与者表2。使用SPSS 16.0分析表明,等位基因的频率,以防rs6415085显著高于组比对照组( )。但是,没有差别的基因型频率rs6415085两组之间 )。此外,没有基因型和等位基因频率的差异,两组之间的其他四个单核苷酸多态性( )。

3.3。连锁不平衡(LD)分析

LD五单核苷酸多态性分析LPA分别基因在病例和控制,结果表明,rs1367211和rs6415085 ( ),rs1367211和rs9347438 ( ),和rs3127596 rs9364559 ( 紧LD(图)1)。单体型分析的结果表明,单不相关CAD风险( )。

3.4。的影响LPA单核苷酸多态性在血清Lp (a)水平在中国汉族人群

每个SNP检测协会与Lp (a)水平。从这个分析结果展示在表3。没有明显差异之间的血浆Lp (a)水平与不同基因型(例和对照组 )。但是,我们进一步分析的影响LPA单核苷酸多态性在血清Lp (a)水平和控制的情况下,分别。结果表明,患者TT / TG基因型有显著较高的等离子体Lp (a)水平与那些rs6415085 GG基因型( )。

3.5。实时rt - pcr分析识别的高表达水平LPACAD基因相关的风险

进一步的信使rna表达水平的比较LPA在两组基因(图2),信使rna表达水平,以防组明显高于对照组( )。

3.6。评估单核苷酸多态性的信使rna表达水平之间的联系LPA基因

我们使用定量实时聚合酶链反应(存在)的分析来评估单核苷酸多态性是否与表达水平有关LPA基因。数据显示没有明显SNPs和表达水平之间的联系LPA基因( )(表4)。

3.7。逻辑回归分析

如表所示5、老化、性别、糖尿病、高血压、吸烟、饮酒、TC, TG,低密度脂蛋白,高密度脂蛋白胆固醇,Lp (a),信使rna表达水平LPA基因,和五个snp是包含在多变量逻辑回归模型。结果表明,低密度脂蛋白胆固醇、吸烟、Lp (a)和高mRNA的表达水平LPA基因所有CAD的风险增加。但低密度是CAD的预测因素。

4所示。讨论

CAD的发病机制还不清楚。但是许多研究证明,遗传和环境因素之间的相互作用的主要因素是CAD的发展。除了环境因素如年龄、性别、不良行为,不良的饮食习惯,肥胖、血脂异常、高血压、糖尿病,GWAS研究已经确定了几个小说易感性位点CAD (12- - - - - -16]。但许多snp出现在基因组的非编码区域。因此,复杂的机制仍然不太为人所知。许多研究已经证实,单核苷酸多态性影响mRNA表达被称为表达式(eQTL)[数量性状17- - - - - -20.]。

在这项研究中,我们观察到T等位基因频率rs6415085在CAD患者增加。但是没有差异的基因型频率rs6415085两组之间。进一步LD的结果分析表明,rs1367211 rs6415085, rs1367211 rs9347438, rs3127596 LD和rs9364559紧。但单没有与CAD相关联的风险。此外,rs6415085 TT / TG基因型患者Lp (a)水平明显高于rs6415085 GG基因型。因此,结果表明,以上LPA基因可能是潜在的机制导致动脉粥样硬化和增加的Lp (a)水平。以上结果与之前的研究相一致(21- - - - - -23]。Rs10455872和rs3798220LPA基因被证明与血浆Lp (a)水平密切相关,CAD和减少拷贝数LPA(确定的数量kringle IV-type 2重复)和一个小Lp (a)脂蛋白大小(7,8]。

与此同时,我们发现LPA基因表达显著增加在CAD患者相比没有CAD。和CAD患者血浆Lp (a)水平高于健康人群。因此,这些结果进一步证实了Lp (a)水平之间的关系和CAD风险(24- - - - - -26]。

机制尼克里等人的研究表明,高血浆Lp (a)水平表现出较高的油脂的流行网站的斑块狭窄的罪魁祸首,更广泛的脂质弧,薄的患病率更高fibroatheroma [27]。因此,针对Lp (a)疗法的作用可以通过降低风险减少CAD CAD患者的脆弱的斑块特征。回归分析结果表明,等离子体Lp (a)和低密度脂蛋白水平与CAD相关联。结合以上结果,我们推测rs6415085 TT / TG基因型可以通过增加等离子体Lp (a)水平,提高CAD的风险。

但我们的研究结果表明,LPA mRNA表达水平没有显著增加患者rs6415085 TT / TG基因型。上面的结果主要是由于rs6415085基因内区变异在非编码区域LPA基因。在未来通过内含子和核研究的研究预计SNP的机制。

一个潜在的限制我们的研究主题的数量在我们的研究中,这可能会限制整个中国人口统计能力和泛化。然而,我们的研究结果是按照前的研究,提出了一个假定的影响LPA基因多态性与CAD相关的机制。此外,我们没有收集数据的治疗高脂血症,这可能影响基因型和脂质水平之间的关系。在进一步的研究中,我们应该收集更全面的关于治疗血管造影术和历史数据分析基因变异之间的联系,脂质水平,CAD严重性。

总之,我们的研究证实,T等位基因rs6415085与CAD和rs6415085 TT / TG基因型可能增加等离子体Lp (a)水平。和信使rna表达水平的增加LPA基因可能在CAD的发展机制。然而,包括更多的患者需要进一步的研究来证实这一研究获得的结果。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突的存在。

作者的贡献

Zi-Kai歌了这项工作。

确认

作者感谢所有参与者的支持和参与。特别感谢是由于肝脏病学部门的支持,转化医学研究所第一医院,吉林大学、长春、中国。

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