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树突细胞密度与角膜基质浅神经丛特性,眼部表面疾病指数和血清维生素D在蒸发干眼病
文摘
干眼病(d)已经发展成为一个主要公共卫生问题与眼部不适和疼痛与d负责重要的发病率相关。然而,etiopathological因素与d相关的眼部疼痛不是很好理解。基于当前IVCM研究调查了角膜树突细胞密度之间的关系(论证),角膜基质浅神经丛(SBNP)特性,和血清维生素D和蒸发干眼的症状(爱德)。这项研究包括年龄和性别匹配的52埃德患者和43石南的控制。OSDI得分显著增加(低端)不适之间观察到埃德(中位数,20.8)和控制(平均4.2)军团。同样,增加以便观察埃德(值,48.1细胞/毫米之间2)患者和控制(中位数,5.6细胞/毫米2)。显著降低SBNP特性(角膜神经纤维长度、纤维密度、纤维宽度、总分支密度,神经分支密度,和纤维区)患者在埃德OSDI得分> 23。之间的正相关是观察和OSDI不适DCD计划内部氧化物(;)和SBNP特性。逆之间的相关性观察维生素D和OSDI评分(;),以便与树突过程(;)。研究结果表明,DCD计划SBNP特性,和维生素D与埃德症状。
1。介绍
干眼病(d)是眼睛的常见疾病之一,世界范围内大约有5.5% - -33.7%的患病率(1]。由于其高患病率是公共卫生关注的重要的经济负担。d的特点包括不适,视觉干扰,泪膜不稳定与潜在损害眼表面。它是伴随着增加泪液膜渗透性和眼表面的炎症2]。有广泛的兴趣了解疾病防治和开发新的治疗方法引起的眼部发病率,尤其是与d相关的疼痛和不适。此外,在d患者标准治疗策略的一个子集未能缓解症状(3,4]。尽管知识可以在d的病理生理机制,缺乏实质性的理解与相关性症状的发病机理及其体内协会与其他临床结果。眼部不适或疼痛的来源在d不能仅仅解释为泪膜指标显示症状的其他因素在因果关系中的作用。疼痛与干眼已被描述为神经性疼痛(5- - - - - -7)和有新兴报告关于功能失调的眼部躯体感觉神经包括基质浅神经丛在眼部疼痛8]。
体内共焦显微镜(IVCM)已被广泛用于图像在细胞水平上角膜在眼科临床实践和研究。IVCM用于研究角膜疾病,如扩张,角膜炎,d,营养不良9]。可见角膜神经上皮细胞,内皮细胞,免疫细胞在不同的眼一直在证明IVCM和系统性疾病(8- - - - - -11]。IVCM的病因学研究提供有价值的见解d,并允许纵向成像和量化细胞树突细胞和基质浅神经丛等形态变化在病人的角膜。研究表明增加角膜患者树突状细胞密度d [12- - - - - -14];然而,它的相关性d症状仍有待调查。角膜神经形态学的变化在圆锥形角膜(已报告15)和干眼包括那些与系统性疾病如慢性偏头痛,风湿性关节炎,慢性移植物抗宿主病,干燥综合症(16- - - - - -19]。
多种病因包括自身免疫性疾病、老化、药物、屈光手术,习惯,饮食和环境因素都与干眼的病理生理学20.]。最近,维生素D,脂溶性的激素原的能力调节钙稳态和免疫反应,与D[有关21,22]。此外,也有越来越多的证据表明关于维生素D的潜在作用在慢性疼痛23- - - - - -25]。与角膜神经密度和角膜神经形态相似,有缺乏证据关于维生素D和D症状的作用。因此,在当前的研究中干眼症状的严重程度之间的关系(疼痛和/或不适),角膜树突细胞密度、角膜基质浅神经丛的特性,和血清维生素D的决心。
2。材料和方法
2.1。研究人群
这项研究是Narayana Nethralaya医院的伦理委员会批准,依法执行《赫尔辛基宣言》的指导方针。研究对象的知情同意是入学时获得的。横断面研究的主题调查症状严重程度之间的关系(疼痛或不适)和角膜树突细胞密度和角膜基质浅神经丛变化使用体内共焦显微镜(IVCM)蒸发干眼病(爱德)从患者选择向角膜诊所行长Narayana Nethralaya班加罗尔,印度。共有52例(23雄性和雌性29日)提交给我们的诊所与埃德是包含在蒸发干眼的症状(爱德)组和43个健康志愿受试者组成对照组。
彻底病史引起排除任何其他眼部和系统性疾病,视力之后,折射,详细的裂隙灯、眼底评估,和d进行了调查。所有的测试温度和湿度的环境条件下进行。悬滴1%荧光素的荧光素染色带(ContaCare眼科和诊断,印度)是灌输的死胡同结膜测量泪膜破裂时间(TBUT)秒,角膜和结膜上皮染色,如果存在。Schirmer执行的测试没有麻醉使用无菌Schirmer strips-Whatman滤纸(5×35毫米2,ContaCare眼科和诊断、印度)。Schirmer条被放置在较低的结膜囊外侧和中间三分之二,交界处没有灌输麻醉。所有患者坐在闭着眼睛休息。睑板腺状态检查使用红外meibography(眼睛,位于德国)和得分是基于每个眼睑睑板腺的损失(26]。患者眼部疼痛或不适分级使用眼部表面疾病指数(OSDI)问卷和总OSDI分数进一步分为不适,vision-related分量表(27]。基于OSDI分数,症状的严重程度可以分类为正常(OSDI得分的经历),轻度(13-22 OSDI分数),中等(23-32 OSDI分数),或严重(OSDI得分33 - 100)[28]。分数OSDI干眼的症状,患者正常Schirmer的测试值,低TBUT被归类为埃德。对照组包括年龄匹配的健康志愿者Schirmer的测试值> 10毫米和TBUT > 5秒,没有干眼病和其他眼部疾病的症状。排除标准包括使用隐形眼镜,药物过敏或眼部或系统性疾病的存在与干燥综合征等眼部症状,风湿性关节炎,糖尿病。患者疾病包括泪腺(先天性alacrimia,史蒂夫·约翰逊综合征)和盖子障碍包括临床明显睑板腺功能障碍以及患者使用局部药物也被排除在外。
2.2。体内共焦显微镜
IVCM成像是使用罗斯托克角膜执行模块/海德堡视网膜层析x射线摄影机ll (RCM /荷尔蒙替代疗法会,海德堡工程GmBH Dossenheim,德国)(7]。设备使用一个二极管激光器的波长670纳米。proparacaine滴0.5%被用来使麻醉前的角膜手术。研究对象被要求专注在一个遥远的目标等,使考试中央角膜。中央角膜扫描在一个区域所需的深度。下降0.5%后莫西沙星被灌输的过程。图像采集时间大约是2分钟的眼,和所有的患者经历过任何视觉症状或角膜并发症由于这次考试。双眼包括基于IVCM调查埃德队列的科目,只有一只眼睛(右)是包括对照组。
2.3。角膜基质浅神经丛和树突细胞密度评估
一名有经验的蒙面观察者选择的五个代表IVCM帧角膜基质浅神经和树突细胞图像分析为基础。基质浅神经丛的图像从角膜(图的中心1(一))被评估为每个主题和整个图像帧的400×400微米2被用于分析。神经纤维的定量分析进行了使用自动CCMetrics软件,版本1.0(英国曼彻斯特大学)29日- - - - - -33]。量化的参数如图1 (b)包括角膜神经纤维密度(CNFD),每平方毫米的总数主要神经;角膜神经纤维长度(CNFL),所有神经纤维的总长度和分支(每平方毫米毫米);角膜神经分支密度(CNBD)数量的分支来自主要的神经干每平方毫米;总分支密度(CTBD),每平方毫米分支点的总数;神经纤维区(CNFA)和总神经纤维面积每平方毫米;和角膜神经纤维宽度(CNFW),平均每平方毫米(神经纤维宽度29日- - - - - -31日]。树突状细胞(细胞/毫米2利用细胞计数量化软件(海德堡工程GmbH)通过识别明亮的个人树状的结构与细胞组织在每个图像的水平基底上皮或基质浅神经丛(34]。细胞被包括在评估双方的细胞图像的重叠与框架的边缘。明亮的细胞体和没有树突过程或扩展也确认(图2)。图像分析了由两个盲观察员和平均的值是用于统计分析。
(一)
(b)
(c)
(一)
(b)
2.4。测量血清维生素D
从外周静脉血血清分离利用BD真空采血管®+塑料血清管(美国新泽西州BD)。总维生素D-25(哦)-血清维生素D被直接测量竞争化学发光酶联免疫测定(Euroimmun, Medizinische Labordiagnostika AG)、德国),检测25 (OH)维生素D2和D3。根据制造商的说明进行了测量。
2.5。统计分析
所有统计分析MedCalc®version 12.5 (MedCalc软件投资兴建,比利时)和GraphPad Prism 6.0 (GraphPad软件公司,拉霍亚,CA,美国)。Shapiro-Wilk正常测试是为了检查数据集的分布后,斯皮尔曼相关系数分析和Mann-Whitney测试被用于进一步的分析。被认为是具有统计学意义。数据被表示为均值±SEM和中值范围。
3所示。结果
参数如TBUT、眼部表面疾病指数,角膜树突细胞密度(论证),和角膜基质浅神经丛特性进行了测量和分析在43(43眼)健康控制和52(104眼)患者。研究对象是年龄和性别匹配。控制之间的年龄(平均41年;22 - 78年)和埃德(平均44.5年;范围19 - 73岁)组没有显著不同。性别分布(男/女)之间的控制和埃德群14米/ 29 23 f和m / 29 f,分别。TBUT显著低于埃德受试者相比,控制(表1(a))。总OSDI分数包括不适——和vision-related OSDI分量表观察明显高于埃德队列(表1(a))。逆之间的相关性观察TBUT总OSDI评分(;)和不适- (;)和vision-related OSDI内部氧化物(;)。
| (一) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 爱德:蒸发干眼病;OSDI:眼部表面疾病指数;TBUT:眼泪解体;DCs:树突细胞;CNFL:角膜神经纤维长度;CNFD:角膜神经纤维密度;CNFW:角膜神经纤维宽度;CTBD:角膜总分支密度;CNBD:角膜神经分支密度;CNFA:角膜神经纤维区域; ns: not statistically significant;值相对于控件(Mann-Whitney测试)。 |
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| (b) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 爱德:蒸发干眼病;OSDI:眼部表面疾病指数;CNFL:角膜神经纤维长度;CNFD:角膜神经纤维密度;CNFW:角膜神经纤维宽度;CTBD:角膜总分支密度;CNBD:角膜神经分支密度;CNFA:角膜神经纤维区域;ns:不具有统计学意义;值相对于控件(Mann-Whitney测试);#
值相比EDE-OSDI得分< 23 (Mann-Whitney测试)。 |
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IVCM调查显示角膜树突状细胞(dc)的存在在埃德(图2)。基于图像分析显示显著增加角膜树突状细胞(DC)密度和子集(DCs和没有树突过程)眼中的埃德病人相比,对照组(表1(a))。分析基质浅神经丛的特征(如表中列出1(一))从IVCM学习小组之间的图像显示无显著差异。然而,显著降低神经功能,如神经纤维长度、分支点,和神经分支的数量在埃德患者严重OSDI分数(OSDI得分> 23)相比,埃德患者轻度或正常OSDI分数(OSDI评分< 23)和控制(表1(b))。此外,一些主要的神经和神经纤维宽度显著降低在埃德患者严重OSDI得分相比,控制(表1(b))。OSDI分数,特别是疼痛或discomfort-related次生氧化皮,表现出正相关,总角膜DC密度,以及DCs与密度和爱德患者(表中没有树突过程2)。然而,之间没有相关性观察OSDI总分和vision-related OSDI次生氧化皮和角膜树突细胞密度在埃德病人(表2)。同样,没有观察到协会之间的各种基质浅神经丛的特性和OSDI分数和埃德(表子量表分数2)。然而,一个重要的角膜直流密度之间的联系(总,有或没有树突过程)和各种基质浅神经丛特征埃德队列也观察到如表所示3。此外,在很多场合DCs之间的近距离的观察神经纤维埃德病人(图3)。
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| OSDI:眼部表面疾病指数;DCs:树突细胞;CNFL:角膜神经纤维长度;CNFD:角膜神经纤维密度;CNFW:角膜神经纤维宽度;CTBD:角膜总分支密度;CNBD:角膜神经分支密度;CNFA:角膜神经纤维区域;:斯皮尔曼相关系数。 |
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| OSDI:眼部表面疾病指数;DCs:树突细胞;CNFL:角膜神经纤维长度;CNFD:角膜神经纤维密度;CNFW:角膜神经纤维宽度;CTBD:角膜总分支密度;CNBD:角膜神经分支密度;CNFA:角膜神经纤维区域;:斯皮尔曼相关系数。 |
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(一)
(b)
(c)
(d)
此外,血清维生素D状况和各种参数之间的关系研究也调查了。中位数在埃德组血清维生素D水平()是16.4 ng / mL(范围5.8 - -61.9 ng / mL)。分析了逆相关性血清维生素D水平和OSDI scores-total和不适,vision-related分量表(表4)。角膜的密度与树突过程DCs显示血清维生素D的逆相关埃德病人(表4)。然而,之间没有关联观察血清维生素D和角膜直流总密度,DCs没有树突过程,或基质浅神经丛特性在埃德队列(表中4)。
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| OSDI:眼部表面疾病指数;DCs:树突细胞;CNFL:角膜神经纤维长度;CNFD:角膜神经纤维密度;CNFW:角膜神经纤维宽度;CTBD:角膜总分支密度;CNBD:角膜神经分支密度;CNFA:角膜神经纤维区域;-斯皮尔曼相关系数。 |
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4所示。讨论
眼部疼痛和不适的持久性的一个子集后d患者标准治疗策略以及缺乏泪膜指标来预测这个人口构成重大挑战在d的管理。因此必须确定诊断模式,可以准确地预测病人的症状可能没有解决与传统疗法或可能需要额外的食物或环境干预措施以及局部治疗以确保有利的预后。IVCM用于研究架构干眼的角膜和其他眼部条件可以提供额外的预测信息,如角膜DCD计划和SBNP特性改变的d。在我们的研究中,我们观察到一个重要的关联OSDI成绩尤其是低端与角膜以便不适。尽管缺乏相关性降低SBNP特性和OSDI埃德病人,我们观察到明显降低在埃德严重OSDI患者的一个子集。此外,一个显著不同的论证和SBNP特性之间的相关性也观察到。这些观察表明DCD计划和SBNP形态学的变化观察到埃德症状。
基质浅神经丛报告揭示了矛盾的结果。Benitez-Del-Castillo等人明显下降干眼患者的神经密度(19),类似于我们所观察到的在当前的研究中。类似的观察是在其他研究干眼关于慢性偏头痛和慢性移植物抗宿主病(16,17]。Hocal等人报道,然而没有区别在基质浅神经密度而张等人证明了干眼患者的角膜神经密度增加(35,36]。观察到的变化可能是由于潜在的疾病的影响。最近的一份报告显示出积极的变化之间的相关性在基质浅神经形态学特征(CNFL下降、CNFD CNBD)和疼痛患者的糖尿病神经病变(37]。同样,在我们目前的研究中我们也观察到在各种神经功能明显降低埃德患者严重症状,因此建议使用角膜神经的形态学特征的预测埃德病人疼痛的存在。本协会是必要的机械基础来验证这一观点。神经性疼痛感觉迟钝和干眼患者的痛觉过敏等可以是由于周边敏感神经元或损坏的游离神经末梢,表面的上皮细胞之间互相交叉和暴露于环境和/或炎症刺激。炎症的存在也被发现,直接和间接地影响周围神经导致的结构和功能改变痛觉过敏(38]。另一方面兴奋的神经纤维可以分泌神经肽进而引发神经源性炎症反应。
树突状细胞的作用在调制的痛觉过敏和痛苦之前研究[39,40]。树突细胞在免疫调节中发挥作用,抗原表达和可能影响疼痛通路对辅助T细胞通过他们的影响。研究描述了一个可能的角色角膜树突细胞的干眼病的发病机理,角膜结膜炎新铸的卢比,角膜移植因为移植物排异[41,42]。炎症病理显示树突状细胞的数量增加角膜(43]。林等人证明了增加前基质和激活树突状细胞的上皮细胞树突细胞记录的存在更多的树突角膜中心(44]。在我们的研究的大幅度增加,角膜树突状细胞中观察到埃德病人被发现有积极的协会与OSDI discomfort-related子量表的分数而不是vision-related OSDI分数。目前的研究也报道一个微分角膜树突细胞和爱德SBNP特性之间的联系。Tuisku等人证明了改变基质角膜神经和的存在增加了干眼患者的抗原呈递细胞。他们建议这些变化负责的病人经历了感觉迟钝,干眼病。在他们的研究中,然而,他们并没有描述树突细胞密度之间的联系和角膜神经的变化(45]。我们建议增加炎症细胞和基质浅神经丛的相关变化可能负责眼部不适,病人在我们的队列。此外,树突状细胞的数量增加近距离观察基质浅神经患者的严重症状。是否DC-mediated炎症或物理刺激的神经或神经生理学变化负责疼痛在这些患者需要确定。因此,这个偶然的观察需要进一步调查。
维生素D及其在干眼病的发病机理中的作用已被许多最近的研究出版物的主题。协会研究表明维生素D缺乏与D [21,22,25]。在当前的研究中我们观察到一个强大的逆相关性OSDI分数和埃德队列中维生素D水平。早期的报告提出了维生素D缺乏与神经痛和慢性疼痛23,25]。缺乏维生素D展品抗炎和免疫调节特性及其导致的炎症或免疫介导干燥的眼睛。除了它对泪膜的影响指数,维生素D水平对眼部疼痛或不适的影响还没有被详细探讨。维生素D可以影响症状的严重程度由调节痛觉调节神经内稳态和炎症反应。确切的机制将维生素D对疼痛仍然是难以捉摸的;然而一些理论被提出。5 -羟色胺可使慢性疼痛反应患者被发现高d [46)和维生素D是影响合成5 -羟色胺(47]表明维生素D痛觉过敏的作用。研究表明,维生素D降低一氧化氮的生产,疼痛的神经递质,从而调节疼痛48,49]。发现了维生素D及其受体激动剂抑制成熟和诱导树突状细胞导致逮捕了炎症过程(50]。低维生素D水平与提高DCs与树突过程(成熟phenotyple)在我们的群支持当前的理解关于维生素D对DCs的免疫调节作用。维生素D也调节各种炎性细胞因子的表达在不同的细胞,包括角膜上皮细胞(51]充实维生素d的抗炎和免疫调节功能我们的观察表明,增加角膜树突细胞密度及其潜在影响基质浅神经丛特性可以在爱德导致症状的严重程度。此外,维生素D水平低可能会导致严重的症状,直接影响痛觉神经纤维和/或间接通过DCs缺乏负调节激活/迁移和炎症反应。然而,一个更详细的机械的调查来验证它是必要的。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
确认
这项研究是由斯瓦米Nethralaya基础。作者Rayaz马利克博士扩展他们的感激之情,曼彻斯特大学,英国CCMetrics角膜神经纤维量化软件。作者还要感谢Abhijit Sinha-Roy博士,Narayana Nethralaya基金会,班加罗尔,印度为援助与统计分析。
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