政府的骨髓间充质干细胞衍生为肝脏:潜在拯救这种Elasticum小鼠模型(Abcc6^−−/)

文摘

这种elasticum (PXE)是一种遗传性异位矿化障碍丧失突变造成的ABCC6主要是肝脏中表达的基因。PXE目前还没有有效的治疗方法。在这项研究中,我们为骨髓间充质干细胞(msc)派生和评估的能力有助于肝脏再生,目的是拯救PXE表型。msc,从GFP-transgenic老鼠通过磁性细胞分离排序,显示肝分化、高潜力的表情Abcc6在文化。这些细胞被移植到肝脏还是出现缺陷Abcc6^−−/由intrasplenic注入小鼠部分肝切除术后的一天,当峰值的表达基质细胞衍生因子- 1 (SDF-1)在肝脏被观察到。荧光bioimaging分析表明,移植msc天1和7之间居住的地方到肝脏,和大量GFP-positive细胞被免疫荧光证实在肝脏。此外,增强观察移植效率与msc与趋化因子受体Cxcr4表达水平高,SDF-1受体。这些数据表明,纯化msc有能力区分成肝细胞系与PXE发病机理和可能导致的部分修正PXE表现型。

1。介绍

这种elasticum (PXE),经常改变生活和毁灭性的疾病,影响皮肤,眼睛,心血管系统和异位矿化(1,2]。PXE是由突变引起的ABCC6的基因,编码的一员C-family腺苷结合盒转运蛋白(3,4]。令人惊讶的是,这个基因似乎是表达主要在肝脏和肾脏,组织不影响临床PXE [5]。我们已经开发了一个Abcc6^−−/小鼠模型的有针对性的消融Abcc6基因(6]。这些老鼠概括人类PXE的病理特征,和作为一个优秀的模型系统研究pathomechanisms导致组织矿化的结果Abcc6失活,他们作为一个平台来评估不同治疗方法的疗效。最近,我们证明了PXE是一种代谢紊乱与肝脏的主要病理学和二次参与软组织的弹性纤维(7,8]。然而,精确的函数ABCC6蛋白质,造成的后果ABCC6突变在信使rna和蛋白质含量,pathomechanisms导致矿化的弹性纤维结构在很大程度上是未知的。目前,还没有治疗方法可用于这种疾病。

不同的治疗策略在临床试验中已经探讨了基于前沿基础研究肝脏代谢疾病。基因治疗和细胞治疗重叠的生物医学研究领域相似的组织再生治疗的目标。然而,相对较少的基因疗法的进展自1990年首次临床试验(9]。短暂的自然基因治疗和基因治疗与病毒载体的安全问题一直成为许多遗传疾病的有效治疗(10,11]。肝移植可能是一种有效治疗严重的肝脏疾病,但一些患者可以受益于这个过程由于捐献器官的短缺。此外,整个器官移植涉及大手术,是高度侵袭性,需要终生immunosupression。目前,细胞治疗与干细胞及其后代是一个有前途的新方法能够解决大部分未满足的医疗需求。围绕干细胞领域的巨大的兴奋是基于独特的这些细胞的生物学特性和他们的自我更新能力和再生组织和器官系统。具体来说,骨髓基质细胞是一个有吸引力的来源细胞基因治疗基因肝脏疾病,和他们的能力分化成肝细胞谱系已经证明之前(12,13]。细胞移植患者在几个温和肝脏代谢修正,如Crigler-Najjar综合症患者和晚期肝衰竭(14- - - - - -16]。因此,似乎PXE将合适的候选人疾病测试细胞疗法。

特此,我们初步评估一个干细胞为基础的治疗方法msc PXE的评估潜在的肝脏调整,目的是拯救PXE表型Abcc6^−−/老鼠,最终病人。

2。材料和方法

2.1。小鼠和细胞移植

免疫缺陷PXE小鼠模型(8),由传统的杂交Abcc6^−−/鼠标(6)完善的免疫缺陷Rag1^−−/C57BL / 6小鼠背景(应变:002216 f;杰克逊实验室,巴尔港,我),是用于这项研究。前不久闹老鼠麻醉和50%部分肝切除术(PHx)执行标准协议后希金斯和安德森(17]。管理的细胞,大约5×10⁵Cxcr4-MSCs或修改的msc在通道6(见下文),隔绝GFP-transgenic老鼠(C57BL / 6-Tg UBC-GFP;杰克逊实验室)作为供体细胞来源,被交到收件人老鼠肝脏intrasplenic PHx后在24小时内注射。老鼠被保持在无菌条件下,依照准则制度动物实验的动物保健和使用委员会托马斯杰弗逊大学。

2.2。骨髓中干细胞隔离和表征

磁性细胞分选的方法(mac)是利用获得所需的数量派生骨髓间充质干细胞(msc)所描述的制造商(Miltenyi研究,剑桥,MA)。短暂,还是GFP-transgenic小鼠和野生型老鼠msc被收获丰富了immunomagnetic分离策略使用鸡尾酒耗尽hematolymphoid血统的分化细胞的抗体(林),如细胞表达以下系抗原:CD5, CD45R, CD11b, Gr-1,经过,ter - 119。获得纯的干细胞,积极选择本来就抗体被mac进一步利用类型细胞。这些细胞保持在MSC介质包含MesenCult MSC基础培养基(干细胞技术,加拿大温哥华),20%的间充质干细胞刺激补充剂(干细胞技术)、青霉素100单位/毫升(表达载体,卡尔斯巴德,CA), 100年μg / mL链霉素(表达载体)和2.5μg / mL两性霉素B(表达载体)。培养基是改变每3天。鼠标msc通道6,确认为林⁻CD45⁻CD31⁻本来就⁺用作实验msc。

描述的细胞表面标记流仪分析,收获msc在4°C 30分钟孵化与鼠anti-mouse CD11b、CD45、CD105、CD106,本来,CD29,或MHC-1抗体(研发系统、明尼阿波利斯、MN),紧随其后的是30分钟孵化与APC-labeled兔子anti-rat IgG抗体(BD生物科学,圣何塞,CA)。细胞检查通过FACSCalibur流式细胞分析仪(Becton Dickinson,富兰克林湖,新泽西)和数据分析与Flowjo软件(树明星Inc .,亚什兰或)。

2.3。msc外生趋化因子受体Cxcr4表达转染和选择

msc在大约80% confluency转染pCMV6-Kan / Neo携带的全长cDNA鼠标趋化因子受体Cxcr4(位于马里兰州Rockville Origene,)使用Lipofectamine转染试剂(英杰公司)根据制造商的指示。MSC的转染细胞保持中、被选择通过G418 1500剂量μg / mL,转向500年的维持剂量μ在两周内g / mL。积极的转染细胞被称为Cxcr4-MSCs在后续实验。

2.4。在体外肝细胞分化

启动肝分化之前,MSC在通道5在定期维护到80 - 90%融合MSC培养基。肝分化引起的differentiation-inducing介质,由的DMEM(表达载体)补充10%的边后卫,10 ng / mL肝细胞生长因子(HGF) (PeproTech Inc,落基山,新泽西),10 ng / mL碱性纤维母细胞生长因子(bFGF) (PeproTech Inc .)和10 ng / mL制瘤素M(研发系统)。每3天中被改变,细胞培养了8天。

2.5。Immunofluoresence

分析差异化MSC的蛋白表达,细胞在常规MSC培养基或differentiation-inducing介质在4%多聚甲醛固定,然后permeabilized Triton x - 100在一天8 0.1%。老鼠反老鼠的细胞被孵化白蛋白(铝青铜)抗体(研发系统)或兔子anti-mouse细胞角蛋白(CK) -18抗体(罗福斯利公司),其次是孵化与第二抗体,德克萨斯红共轭anti-rabbit免疫球蛋白(分子探针,尤金,俄勒冈州)。DAPI用于核复染色。

检查存在的GFP阳性肝移植msc,道肝脏被移除,以4%的多聚甲醛固定,在蔗糖梯度处理,然后进行immunofluorescent分析。加工的肝脏都嵌入在10月Tissue-tec化合物(樱花Finetechnical有限公司,东京,日本),并存储在−80°C到使用。六个μ米厚的冻结部分肝脏与兔子孵化anti-GFP抗体(表达载体)。随后,部分与FITC染色山羊抗兔免疫球蛋白二次抗体(表达载体)。

2.6。rt - pcr和qPCR

检查肝脏中特定基因表达分化msc、总RNA提取培养常规msc或文化的差异化msc在第8天使用RNeasy迷你包(试剂盒、希尔登,德国)。RNA样本受到random-primed逆转录利用rt - pcr(表达载体)上标第一链合成系统。RT产品用于PCR反应放大鼠标CK-18,肝细胞的核因子b (HNF) 3Abcc6,肌动蛋白作为内部控制。分析Cxcr4的表达与pCMV6-Cxcr4质粒转染细胞,RNA隔离和逆转录过程和对列进行如上所述DNA消化。PCR进行放大鼠标趋化因子受体Cxcr4与Gapdh基因转染或untransfected细胞作为内部控制。

量化的百分比迁移GFP阳性msc qPCR进入肝脏,从均质提取的总DNA的道肝脏使用DNeasy工具包(试剂盒)。SYBR绿色PCR扩增的GFP执行7900年ABI棱镜ht序列检测系统(应用生物系统公司,培育城市,CA)使用赛博绿色PCR反应混合液(应用生物系统公司)。绿色荧光蛋白的数量⁺DNA在每个50 ng DNA样本量化和归一化白介素2 (IL)的DNA。目标基因的相对表达水平使用ΔΔCt方法计算。准备的标准曲线,从野生型老鼠就被掺入了基因组DNA序列稀释GFP-transgenic老鼠的基因组DNA。稀释GFP标准样本进行PCR扩增的GFP - 2,和每50 ng tissue-derived GFP转基因DNA的百分比计算。

2.7。ELISA对小鼠SDF-1

从小鼠血清样本收集PHx之前,在2小时,1天,3天,手术后7天。SDF-1小鼠血清水平的测定用鼠标SDF-1酶联免疫试剂盒(研发系统)根据制造商的指示。从小鼠肝脏样本收获手术后在指定时间点和使用均质机均质27针规里帕缓冲区(Sigma-Aldrich、圣路易斯、钼)补充与蛋白酶抑制剂鸡尾酒(完成,迷你;罗氏应用科学,印第安纳波利斯,在4°C)。混合物在12000转离心20分钟在4°C和上层的收集。SDF-1浓度在肝脏中提取了使用鼠标SDF-1酶联免疫试剂盒(研发系统)和归一化由BCA蛋白质测定总蛋白浓度测量工具(皮尔斯,罗克福德,IL)。

2.8。移民的决心在体外和在活的有机体内

在体外迁移进行了化验在48-well transwell使用与8 -聚碳酸酯膜μ米孔(Osmonics;利弗莫尔,CA)。经过不同浓度的鼠标重组SDF-1(研发系统)被添加到低,2.5×10³msc或Cxcr4-MSCs 30μL 0.5%的边后卫的DMEM放在transwell议会的上院。孵化后37°C和5%的公司₂4小时,膜的上表面轻轻刮去除nonmigrating细胞并与PBS洗。膜上的细胞在4%多聚甲醛固定15分钟,染色和染色。迁移细胞的数量是由在显微镜下计数每口井的3个随机领域在100 x放大。实验进行了一式三份。

评估在活的有机体内迁移能力的msc、荧光能被利用。小鼠移植msc与荧光染料标记,Vybrant做(分子探针,尤金或)监测在多个时间点(第一天,星期1,星期2,星期3)通过使用一个新Luminar XR实时成像系统(卡尺,马数据)激发过滤644 nm和排放过滤器665海里。

2.9。数据和统计分析

与学生进行了统计分析t以及。P值< 0.05被认为是具有统计学意义。

3所示。结果与讨论

3.1。MSC隔离和细胞表面抗原的概要文件

总从GFP-transgenic小鼠骨髓是通过清除medullar运河的股骨和胫骨26计针,和msc被磁性细胞分选提纯使用hematolymphoid小组系抗原抗体-选择然后抗体本来就积极的选择(见部分2)。流仪分析新孤立的细胞表明大约99%人口都GFP,本来就积极的(数据未显示)。细胞培养的MSC的媒介,通过融合当他们到达80%。显微镜下观察,细胞在早期通道(通道3)表现出一层薄薄的纺锤形状和成为大呈漩涡通道5(图模式1(一))。流动仪分析显示一个积极的直方图峰本来就和CD29,但正面和负面CD11b直方图的峰值,CD45、CD106观察细胞的通道3。直方图的峰值CD11b和CD45和负峰CD106消失在通道5(图1 (b))。这些观察表明两个种群的存在:造血干细胞(hsc)和msc、显著富集msc是获得在后续培养的细胞。msc已被证明是一个资源的肝分化,但没有msc的特定标记。因此,获得纯化的msc,可能需要进一步净化在体外文化选择使用由一群表面标记。

细胞通道3、5或7也分析了流式细胞仪的使用单克隆抗体免疫属性鼠标类MHC I . msc(通过3、5、7)源自相同的老鼠表达高水平的MHC类我黑色素瘤相比派生细胞(BL-TAC -控制)和老鼠纤维肉瘤细胞(MC57G,积极控制(图)2)。在文献中,有人建议,msc可能immunoprivileged MHC-incompatible个人之间,可以移植(18]。另一方面,有人建议,msc immunoprivileged并无内在联系,不能作为一个“万能供血者”免疫活性的MHC-mismatched接受者(19]。在我们的研究中,高表达MHC类我支持后者的可能性,建议调制的免疫反应可能是担忧,当这些细胞被录用在活的有机体内。

3.2。骨髓干细胞转化为肝细胞的分化潜力在体外

调查潜在的肝分化msc、纯化msc在通道6 8天在differentiation-inducing培养基培养,也就是说,包含10%胎牛血清的DMEM, 10 ng / mL HGF, 10 ng / mL bFGF, 10 ng / mL制瘤素m细胞形态学改变为他们成为扩展和大(图3(一个)上面板)。免疫荧光分析hepatocyte-specific蛋白的表达和证明CK-18分化细胞中表达和铝青铜是积极而不是在未分化的(图3(一个)、中间和底部面板)。hepatogenesis hnf CK-18,关键球员,通过rt - pcr分化细胞中表达,而消极的控制细胞培养的MSC培养基(图3 (b))。msc、维护differentiation-inducing中或在基础条件下,表达Abcc6信使rna在类似水平。

干细胞的分化过程需要一个特定的微环境。结果清楚地表明,孤立的鼠标msc能分化成肝细胞在体外条件中含有生长因子HGF bFGF和制瘤素M,已报告是肝脏发育和分化的重要组成部分[20.,21]。此外,我们的分化细胞的表达Abcc6基因,这是迷失在PXE及其表型可能需要恢复。这些数据提供关于干细胞生物学的关键信息,应该为再生医学的发展为肝脏疾病尤其是PXE一般。

3.3。骨髓干细胞的迁移能力

3.3.1。msc趋化因子受体Cxcr4表达和在体外迁移

msc在通道4与小鼠趋化因子受体Cxcr4表达载体转染由CMV启动子驱动,pCMV6-mCxcr4,然后选择用G418获得细胞稳定表达(Cxcr4-MSCs)。分析了Cxcr4-MSCs趋化因子受体Cxcr4的表达首先通过rt - pcr。高水平的观察趋化因子受体Cxcr4 mRNA在这些细胞低,几乎没有可检测水平在untransfected msc(图4)。

评价细胞迁移SDF-1,趋化因子受体Cxcr4的配体,我们检查了外源性超表达的趋化因子受体Cxcr4是否提高了msc的趋化性SDF-1梯度transwell迁移试验。趋化因子受体Cxcr4修改msc的细胞迁移对SDF-1存在剂量依赖的相关性模式(图5(一个))。特别,迁移细胞的数量显著增加的剂量30和60 ng / mL相比,没有添加SDF-1(图5 (b))。一些迁移的细胞被发现在untransfected msc与所有不同的剂量设置SDF-1(数据没有显示)。这些数据表明,超表达的趋化因子受体Cxcr4增强了应对SDF-1 msc诱导趋化作用的能力。

3.3.2。的水平SDF-1部分肝切除术后肝脏和血清

调查部分肝切除术是如何影响的水平SDF-1在肝脏组织或血液中,我们首先确定颞SDF-1 mRNA的表达在切除肝脏肝定量rt - pcr。SDF-1在第一天增加了2倍以上,然后逐渐达到基线水平下降部分hepatecomy在第七天(图6 (c))。使用总肝蛋白质提取,ELISA显示显著增加切除肝脏肝在第一天然后SDF-1很快返回到基线水平在一天3和7部分肝切除术后(图6 (d)),与变化在mRNA水平一致。相反,SDF-1以ELISA的血清水平下降在2和24小时,然后回到基线180小时(7天)(图6 (b))。

3.3.3。归航的对肝脏移植msc

在免疫缺陷的部分肝切除术后24小时Abcc6^−−/小鼠模型,Abcc6^−−/;Rag1^−−/,Cxcr4-MSCs或修改的msc被intrasplenic注入管理。移植的小鼠监测DiD-labeled msc的迁移对肝脏的生活新Luminar XR成像系统。确实是一个允许细胞的荧光示踪成像在独特的颜色标记检测的机器。做了标记发现了msc在肝脏和脾脏移植后第一天和第七天(图7(一))。GFP-positive msc在第七天的存在证实了肝脏immunofluoresence使用anti-GFP抗体(图7 (b))。此外,量化迁移细胞的百分比,基因组DNA在第七天收获的肝脏中分离,qPCR。使用连续稀释GFP DNA样本作为标准,平均百分比GFP-positive Cxcr4-MSCs在肝脏是0.22%,而0.15%在肝脏与msc没有趋化因子受体Cxcr4转染小鼠移植(数据没有显示)。

趋化因子受体Cxcr4及其配体之间的相互作用SDF-1据报道,归航msc在组织中发挥着重要作用(22]。受伤的器官细胞高表达SDF-1,导致海拔本地化SDF-1水平,和SDF-1新兵msc的梯度损伤部位通过趋化现象的吸引力SDF-1与趋化因子受体Cxcr4相互作用[23,24]。因此,趋化因子受体Cxcr4最近用于提高自导和移植的干细胞通过增加细胞入侵响应SDF-1 [23]。在这项研究中,当地的表达SDF-1被PHx,吸引了msc诱导,尤其是Cxcr4-MSCs切除肝脏肝。SDF-1浓度增加肝脏所示,但减少血液中SDF-1, PHx在24小时后,在哪个时间点,我们交付了细胞。小鼠模型的心肌梗死,艾伯特等人报道,SDF-1表达增加peri-infarct区,但其血清水平减少梗死后,与我们的结果一致(22]。这种梯度SDF-1可能导致招聘的循环祖细胞表达趋化因子受体Cxcr4切除肝脏肝(图8)。

4所示。结论

我们的研究的目的是评估潜在的msc分化成肝细胞和为他们设置的有效招聘肝脏部分肝切除术。我们交付intrasplenically林⁻Sca1⁺msc从Abcc6^{+ / +}绿色荧光蛋白⁺老鼠和确定供体细胞GFP在肝脏的存在。我们确认向hepatocytic血统msc分化的能力在体外通过检查肝特定基因表达在信使rna和蛋白质水平,包括Abcc6基因的表达。我们也观察到归航SDF-1,和超表达的趋化因子受体Cxcr4导致大量额外增加供体细胞迁移在体外和在活的有机体内研究。肝脏移植msc驻留在收件人至少10天。

在过去的几十年里,许多研究利用骨骨髓来源的细胞的细胞移植治疗各种疾病的动物模型。报道的治疗效果是可变的,这可能与移植细胞的细胞类型和数量的差异,细胞移植和障碍模型选择的时机和方法。Aurich等人证明的功能接受肝脏移植细胞在14周后管理人类骨髓msc通过intrasplenic注射用免疫缺陷^−−// Rag2^−−/小鼠模型,故障的NK细胞和成熟的B细胞和T细胞耗竭[25]。长期存在的移植细胞受体肝脏的背景可能取决于接受者老鼠和移植msc,这需要进一步的长期研究。

免疫排斥反应是一个潜在的细胞移植治疗的患者的问题。克服免疫排斥,或避免它,干细胞必须是来自收件人或同卵双胞胎,或干细胞必须改造的方式规避免疫反应。目前,似乎是最有前途的方法需要使用胚胎干细胞与接受者的DNA的DNA所取代,因此成为“自我”,所谓的“治疗性克隆”(26]。

总之,这些数据表明,纯化msc有能力分化成肝细胞系和归巢到肝脏。SDF-1之间的交互和趋化因子受体Cxcr4可能是一个关键机制来招募msc肝靶向和再生,和进一步的研究将定义最优条件维护和传播msc在靶器官,如肝脏PXE。

缩写

PXE:	这种elasticum
msc:	间充质干细胞
SDF-1:	基质细胞衍生因子1
趋化因子受体Cxcr4:	科学家趋化因子受体4
肝星状细胞:	造血干细胞
PHx:	部分肝切除术。

利益冲突

作者没有利益冲突。

确认

作者感谢王殿和伯大尼Reutemann技术援助。这项研究是由美国国立卫生研究院/ NIAMS赠款K08AR057099 (QJ)和R01AR28450(居)。

引用

1. 李问:问:江、大肠Pfendner a . Varadi和j . Uitto”这种elasticum:临床表型,分子遗传学和假定的pathomechanisms”实验皮肤病学,18卷,不。1、1 - 11,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. k . h . Neldner”这种elasticum。”在皮肤科诊所》第六卷,没有。1、1 - 159、1988页。视图:谷歌学术搜索
3. f . Ringpfeil m·g . Lebwohl a . m . global和j . Uitto”这种elasticum: MRP6突变基因编码一种跨膜磷酸腺苷磁带(ABC),“美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷97,不。11日,第6006 - 6001页,2000年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. 卑尔根a . a . b . a . s . Plomp e·j·舒尔曼et al .,“突变ABCC6造成这种elasticum,”自然遗传学,25卷,不。2、228 - 231年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. y松崎,a . Nakano问:j .江l . Pulkkinen和j . Uitto“修复ABCC6基因的表达,”皮肤病学研究杂志》上,卷125,不。5,900 - 905年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. 江j . f . Klement y松崎,问:j . et al .,“Abcc6基因的靶向消融导致异位成矿的结缔组织,”分子和细胞生物学,25卷,不。18日,第8310 - 8299页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. 问:江,m . Endo f . Dibra k . Wang和j . Uitto”这种elasticum是一种代谢性疾病,”皮肤病学研究杂志》上,卷129,不。2、348 - 354年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. 问:江,r·奥尔登堡s Otsuru a . e . Grand-Pierre e·m·霍维兹和j . Uitto Parabiotic Abcc6异质的配对^−−// Rag1^−−/小鼠和野生型同行停止异位矿化在小鼠模型的这种elasticum,”美国病理学杂志》,卷176,不。4、1855 - 1862年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. k·w·卡尔弗和k·w·卡尔弗,“测量临床基因治疗研究的成功,”分子医学今天,卷2,不。6,234 - 236年,1996页。视图:谷歌学术搜索
10. r . Gardlik r . Palffy j . Hodosy j .卢卡奇j . Turňa和p . Celec“向量和运载系统在基因疗法,”医学科学监控,11卷,不。4,RA110-RA121, 2005页。视图:谷歌学术搜索
11. n . b .伍兹诉Bottero m·施密特c·冯·Kalle和i . m . Verma“基因疗法:治疗性基因引起淋巴瘤,”自然,卷440,不。7088,1123年,页2006。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. t . k .郭s . p .挂c . h .壮族et al .,“干细胞治疗肝脏疾病:参数管理使用骨髓间充质干细胞的成功,”胃肠病学,卷134,不。7、2111年e3, 2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. p . a . Lysy d . Campard手中,m . Najimi和e·m·索“干细胞肝组织修复:当前的知识和观点,“世界胃肠病学杂志》上,14卷,不。6,864 - 875年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. 美国Ellor、t . Shupe和b·彼得森“干细胞治疗遗传性代谢疾病的肝脏,”实验血液学,36卷,不。6,716 - 725年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. p . a . Lysy m . Najimi x Stephenne, a . Bourgois f .手中和e·m·索”肝细胞移植Crigler-Najjar综合症类型我:更新和观点,“世界胃肠病学杂志》上,14卷,不。22日,第3470 - 3464页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. a·j·马塔斯·d·e·r·萨瑟兰,m . w . Steffes”肝细胞移植代谢缺陷:降低血浆胆红素的耿氏老鼠,”科学,卷192,不。4242年,第894 - 892页,1976年。视图:谷歌学术搜索
17. 通用希金斯和r·m·安德森”实验病理学的肝脏。即恢复白老鼠的肝脏部分surgerical切除后,“病理档案,12卷,不。2、186 - 202年,1931页。视图:谷歌学术搜索
18. k·勒布朗,c . Tammik k . Rosendahl e . Zetterberg和o . Ringden”HLA表达和分化和未分化的间充质干细胞的免疫特性,”实验血液学没有,卷。31日。10日,890 - 896年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. n . Eliopoulos j·史塔哥,l·勒s Pommey和j·阿斯“同种异体骨髓基质细胞免疫类MHC I -和类II-mismatched收件人拒绝了老鼠,”血,卷106,不。13日,4057 - 4065年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. 吉田k . Ishii y, y Akechi et al .,“肝人类骨骨髓来源间充质干细胞的分化tetracycline-regulated肝细胞的核因子3β”,肝脏病学,48卷,不。2、597 - 606年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. 徐x l .史l .毛b . y . et al .,“优化有效的定向分化培养基区分小鼠骨髓间充质干细胞向肝细胞在体外,”细胞生物学国际,32卷,不。8,959 - 965年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. j·d·阿博特y黄、刘r·希d·s·克劳斯和f·j·佐丹奴基质细胞衍生因子- 1α扮演了一个关键的角色在心肌梗死后心脏干细胞招聘但不足以诱导归航没有受伤的,”循环,卷110,不。21日,第3305 - 3300页,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. j·m·卡普和g s愣Teo间充质干细胞归巢:魔鬼在于细节,”细胞干细胞,4卷,不。3、206 - 216年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. z Cheng l . Ou x周et al .,“定向迁移的间充质干细胞心肌梗塞与趋化因子受体CXCR4基因改良,提高心脏的性能,”分子治疗,16卷,不。3、571 - 579年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. Aurich, l·p·穆勒h . Aurich et al .,“功能集成的肝细胞来源于人类间充质干细胞在小鼠肝脏,”肠道卷,56号3、405 - 415年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. 美国Kadereit和a . Trounson”未分化的多能干细胞的体外免疫原性(PSC)和派生的血统,”在免疫病理研讨会,33卷,不。6,551 - 562年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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