表达和细胞分布韩国仁荷和INHB之前和之后在体外培养猪卵母细胞从毛囊分离不同的大小

文摘

Cumulus-oocyte-complexes (COCs)收集小(< 3毫米),中等(3 - 5毫米),和大猪卵泡(> 5毫米),和韩国仁荷INHB表达和细胞定位进行了研究。发展主管(BCB +) COCs培养44 h。信使rna样本被孤立的之前和之后在体外收集到的卵泡卵母细胞的成熟(IVM)不同大小RQ-PCR化验。韩国仁荷和INHB蛋白分布在卵母细胞被共焦显微镜观察。韩国仁荷mRNA表达增加大型相比中小卵泡的卵母细胞在IVM (),小卵泡的卵母细胞在IVM ()。在IVM INHB表达式没有不同,但IHNB mRNA水平逐渐提高从大卵泡卵母细胞在IVM ()。表示在IVM韩国仁荷没有不同;然而,在大卵泡卵母细胞的蛋白质是分布在细胞质的外围地区;小卵泡的卵母细胞在整个细胞质。IVM之后,韩国仁荷强烈表达了小卵泡的卵母细胞和分布式尤其是透明带(ZP)。同样,前后IVM INHB蛋白高度表达的小卵泡卵母细胞和细胞质内。总之,异烟肼可认为是猪卵母细胞质量的一个标志。

1。介绍

到目前为止,卵母细胞发育能力在体外,进行成熟、受精和达到囊胚阶段,显著不同在活的有机体内情况(1]。虽然在体外试着模仿培养(IVC)条件在活的有机体内环境、成熟配子截然不同的潜力。虽然效率在体外猪卵母细胞的成熟(IVM)已得到改进,仍然存在问题异常雄性原核形成和增加多精入卵率(2]。它被接受,哺乳动物卵母细胞需要核和胞质成熟达到发展能力(3- - - - - -5]。因此,优化猪,印度河流域文明系统的确定可能的差异基因表达谱和/或编码蛋白质的细胞分布在印度河流域文明的高利息。

一些内在和外在因素与猪卵母细胞的成熟能力达到MII期(5,6]。为了确定卵母细胞的发育能力许多作者使用测试灿烂甲酚蓝(BCB)因为其简单性和可靠性相对于许多物种。测试的目的是评估活动glucose-6-phosphate脱氢酶(G6PDH)磷酸戊糖途径的关键酶,产生ribose-5-phosphate erythrose-4-phosphate,和NADPH用于核苷酸合成、芳香族氨基酸合成,分别在还原生物合成。未成熟的卵母细胞,需要更高的能量补充,成为发展主管将酶与成熟卵母细胞的浓度更高。这将导致减少G6PDH BCB斑在这个细胞导致无色细胞质(细胞称为BCB⁻)。另一方面,完全成熟卵母细胞浓度较低的G6PDH不足以降低细胞质的污点导致蓝彩色化(细胞称为BCB⁺)。

此外,人们发现卵泡大小的因素之一是与基因编码蛋白质的表达负责成熟和受精的卵母细胞。这是太阳et al。(2001)所示7],滤泡大小产生不影响卵母细胞的减数分裂恢复的恢复小卵泡,但它极大地影响了猪卵母细胞的发育潜能。此外,Antosik et al。8]分析mrna的表达透明带糖蛋白;pZP1、pZP2 pZP3, pZP3α;整合蛋白ITGB1 ITGB2和pZP3 ITGB2猪卵母细胞的蛋白质,分离出不同大小的毛囊。他们发现mrna的微分表达式模式和编码的蛋白质,负责受精在猪身上,与滤泡大小有关。因此,COCs已从不同的毛囊的能力可能有所不同。抑制素,描述也随着性腺的糖蛋白激素,属于转化生长因子β(TGFB)总科和参与垂体FSH分泌(9]。抑制素存在于两种形式,每个α亚基组成和共价与两种不同的子单元,分别称为抑制素βa (INHBA)和抑制素βb (INHBB)。卵巢颗粒细胞的基因编码表达异烟肼。他们的表达谱影响的一个例子是一个复发的主要标志和残留卵巢颗粒细胞癌(10]。此外,突变韩国仁荷是卵巢功能早衰的主要原因(POF)和其他卵巢功能异常(11- - - - - -13]。此外,帕里什et al。14]相比20种不同基因的表达小鼠卵泡卵泡增长负责在活的有机体内和培养在体外。他们显示表达式INHBA以及表达式的TGF总科的其他成员,包括TGFB和BMP15表达下调在体外培养毛囊相比在活的有机体内。

然而,只有少数报告标明表达式可用卵母细胞的异烟肼。这样一个表达式可能表明他们的作用不仅在folliculogenesis还在卵子发生TGFB总科蛋白质参与关键步骤的卵母细胞发育能力的增长和成就15,16]。考虑到所有的这些数据,本研究的目的是分析韩国仁荷和INHB mrna的表达以及其编码蛋白的分布不同大小的猪卵母细胞从毛囊中恢复过来之前和之后IVM。

2。材料和方法

2.1。动物

共有46 postpuberal杂交长白猪国债,平均年龄155天(范围140 - 170天),平均重量100公斤(95 - 120公斤)被用于这项研究。实验被当地伦理委员会批准。

2.2。猪卵巢和COCs的集合

卵巢和生殖道后立即恢复国债屠宰和运输20分钟内实验室在0.9% NaCl 38°C。卵泡大小被分为三个类别:小(< 3毫米),中等(3 - 5毫米),和大使用卡尺(> 5毫米)。

20克的毛囊被打开个人刺穿针连接到5毫升注射器无菌培养皿中。恢复cumulus-oocyte复合物(COCs)洗了三次修改PBS,补充了36μ50 g / mL丙酮酸,μg / mL庆大霉素和0.5毫克/毫升牛血清白蛋白(BSA;Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)。他们选择一个倒置的蔡司显微镜下(Axiovert 35,吕贝克,德国),统计,和形态学评估特殊护理,使用建议的规模登上金榜et al ., (2009) (17]。只有COCs年级我同质卵质和制服和紧凑的积云细胞被认为是用于实验的后续步骤。

2.3。评估卵母细胞发育能力的灿烂甲酚蓝(BCB)测试

在种植之前,COCs洗两次修改杜尔贝科PBS (DPBSm Sigma-Aldrich),补充了50个国际单位/毫升青霉素,50μg / mL链霉素(Sigma-Aldrich), 0.4% (w / v) BSA,丙酮酸0.34毫米和5.5毫米葡萄糖(DPBSm)。然后,COCs服用26μM灿烂甲酚蓝(BCB;Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)稀释在DPBSm 38.5°C,低于5%股份有限公司₂在空气中了90分钟。治疗后,卵母细胞被转移到DPBSm,洗两次。在清洗过程中,卵母细胞在倒置显微镜下检查,分为有彩色蓝(BCB)⁺)或剩余无色(BCB)⁻)。只有BCB⁺卵母细胞,完成他们的增长阶段,可能已经达到了发展的能力,被用于实验。

2.4。在体外成熟的猪COCs

所选BCB⁺COCs培养在NunclonΔ4菜(Nunc、GmbH是一家有限公司公斤,德国)在500年μL标准的猪在体外成熟(IVM)介质(tcm - 199与厄尔的盐,和l谷氨酰胺,Gibco BRL生活技术,大岛,纽约,美国)补充2.2毫克/毫升碳酸氢钠(Nacalai Tesque, Inc .,京都,日本),0.1毫克/毫升丙酮酸钠(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国),10毫克/毫升BSA (Sigma-Aldrich), 0.1毫克/毫升半胱氨酸(Sigma-Aldrich), 10% (v / v)猪卵泡液,过滤和促性腺激素补充剂的最终浓度2.5国际单位/毫升人类绒毛膜促性腺激素(hCG;Ayerst实验室,Inc .,费城,宾夕法尼亚州,美国)和2.5国际单位/毫升马绒毛膜促性腺激素(心电图;Intervet,惠特比,加拿大)。井满是矿物油叠加和细胞培养为44小时38°C下5%的股份有限公司₂在空气中。COCs孵化了牛睾丸透明质酸酶(蓝芽;Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)2分钟38.5°C到单独的积云细胞。这些细胞被涡流卵母细胞。积云卵母细胞游离是用于进一步分析。

2.5。共焦显微镜观察

卵母细胞分离从小型、中型和大型毛囊(每张幻灯片)。卵母细胞在PBS和0.2%与2.5%多聚甲醛固定Triton-X 100 30分钟在室温下(RT)和洗了三次在PBS / PVP (0.2%)。为了阻止非特异性结合,样本孵化与3% BSA在PBS + 0.1%渐变20 30分钟在rt,卵母细胞培养12小时在4°C山羊多克隆抗体anti-INHA (Ab, sc - 22048)或兔多克隆anti-INHB (Ab, sc - 50288)从圣克鲁斯生物技术(圣克鲁斯、钙、美国),稀释1:500年在PBS / 1.5% BSA渐变20 / 0.1%。与PBS / 0.1%渐变20几个洗后,样品与山羊多克隆anti-INHA Ab孵化1小时在RT与异硫氰酸荧光素(FITC)共轭抗体免疫球蛋白Ab,生产的兔子,在PBS稀释1:200 / 0.1%渐变20。样品与兔多克隆anti-INHB Ab孵化1小时在RT水晶tetramethylrhodamine异硫氰酸酯(TRITC)共轭anti-rabbit免疫球蛋白Ab,生产的山羊,和稀释1:200年PBS渐变20 / 0.1%。在PBS渐变20 / 0.1%,洗后不变色的卵母细胞被安装在玻片下降,510年共焦系统LSN卡尔蔡司显微镜下观察,Axiovert 200米。FITC很兴奋与氩激光,488 nm和排放成像通过505 - 530纳米过滤器。TRITC很兴奋与氩激光543 nm和排放成像通过565 - 615纳米过滤器。

2.6。基因表达分析

总RNA BCB隔绝⁺从大(收集卵母细胞)、中()、小卵泡(IVM之前和之后)使用一个RNeasy迷你列试剂盒GmbH(希尔登,德国)。RNA样本处理DNAse我为了净化DNA样本污染,和质量检查的微通道电泳使用安捷伦生物分析仪(安捷伦科技公司,帕洛阿尔托,CA)。RNA样本resuspended 20μL RNase-free水和reverse-transcribed互补。实时定量PCR扩增反应进行了AB 7500 HT实时PCR系统(应用生物系统公司)使用通用PCR反应混合液(罗氏,曼海姆,德国)。所有反应都表现在20μL卷6 pmol正向和反向引物和探针(表4 pmol1)。韩国仁荷和INHB表达式,研究了使用引物探针(猫。不。04687604001,猫。不。04687574001,分别地。,Roche, Mannheim, Germany) according to the manufacturer’s instructions. All reactions were executed in triplicates. In case of the negative control cDNA was not added. All primers used in the experiment were designed in the way that primers cover ends of two neighbour exons. In that case there was no need of performing reverse transcription control.

韩国仁荷的相对表达水平和INHB记录在每个样本被标准化的内部标准glyceraldehyde-3-phosphate脱氢酶(GAPDH)。为了确保颗粒细胞没有污染的卵母细胞,我们演示了细胞色素P450芳香化酶(cat的缺失。不。69 - 04688686001),罗氏,德国曼海姆)成绩单RT和RQ-PCR。

这两个管家基因GAPDH和β肌动蛋白(猫。不。119 - 04693531001和猫。不。44 - 04688040001,分别地。,Roche, Mannheim, Germany) were amplified as the reference for mRNA quantification.

为了量化在卵母细胞特定的基因表达,特定的卵母细胞信使rna的表达水平在每个样本相对于GAPDH和计算β肌动蛋白用描述的方法。表达GAPDH和β肌动蛋白mrna测量互补dna样本中孤立的卵母细胞。所有反应都是应用于至少五副本。测定基因表达是基于方法根据罗氏公司技术指导。

2.7。统计分析

双向方差分析其次是图基期末测验是用来比较的结果实时PCR反应。被认为是显著的差异,,。4.0版本的软件程序GraphPad棱镜(美国GraphPadSoftware,圣地亚哥,CA)是用于统计计算。

3所示。结果

几个韩国仁荷和INHB mrna的表达谱的差异以及编码蛋白质的定位和/或细胞分布观察卵泡的卵母细胞收集不同的大小。使用RQ-PCR分析我们发现增加韩国仁荷mRNA的表达相比,从大卵泡卵母细胞分离从中小卵泡卵母细胞在IVM (),(图1(一))。当IVM卵母细胞进行了分析之后,更高韩国仁荷mRNA水平揭示了从大中型卵泡卵母细胞分离(),(图1 (b))。相反,没有修改之前观察到IVM INHB mRNA表达谱之间的卵子从卵泡的大小(数据中恢复过来1 (c)和1 (d))。IVM之后,逐步增加mRNA的表达在卵母细胞与卵泡大小:大>中>小卵泡(,,职责。)(图1 (d))。

共焦显微镜观测显示没有韩国仁荷卵母细胞内蛋白表达的差异分离不同大小卵泡。然而,在从大型卵泡卵母细胞在IVM之前,韩国仁荷的蛋白质是卵母细胞分布在外围区域的膜,而在从中小卵泡卵母细胞韩国仁荷的蛋白质明显细胞质染色(数字2(一个),2 (b),2 (c))。IVM之后,韩国仁荷的蛋白质表现强劲透明带表达式从所有卵泡卵母细胞(数字2 (d),2 (e),2 (f))。此外,在增加表达式透明带小卵泡的卵母细胞(图2 (f))。IVM之前,INHB蛋白表达高于在收集到的小卵泡卵母细胞(图3 (c))。INHB是分布在细胞质中,而不是在透明带所有卵泡的卵母细胞类(数据3(一个),3 (b),3 (c))。有增加INHB蛋白表达在IVM后从大卵泡卵母细胞相比之前IVM(图3 (d))。总的来说,最高的表达INHB在卵母细胞被发现从小卵泡(图中恢复过来3 (f))。此外,一个明显的胞质分布INHB指出在所有卵泡卵母细胞组(数据3 (d),3 (e),3 (f))。消极的控制没有执行主要抗体蛋白质(数据调查4(一)和4 (b))。

4所示。讨论

猪模型成功地应用在许多领域医学包括组织工程、心血管疾病、皮肤生理学、生物学和生殖(看过的18])。由于猪卵母细胞的良好可用性,它们在分子水平上的研究越来越感兴趣的生殖过程。

显然在几项研究表明,哺乳动物卵母细胞的成熟能力在分子水平上调控基因的表达和编码的蛋白质,和负责有丝分裂或减数分裂进步和形态学变化19- - - - - -22]。基因属于TGFB总科是重要的监管机构;他们也被称为“检查站卵母细胞成熟的潜力”23]。韩国仁荷和INHB TGFB家族的成员,建议调节卵母细胞成熟的重要阶段在活的有机体内和在体外(24- - - - - -26]。然而,几个因素的影响,例如,卵泡大小和/或在体外培养,韩国仁荷和INHB mRNA表达谱或编码蛋白质猪卵母细胞内的分布,还不完全清楚。我们的研究旨在检查卵泡大小和印度河流域文明的角色韩国仁荷和INHB基因的表达和各自的蛋白质的表达。

它已被证明在许多物种的滤泡大小与卵母细胞的发育能力。尽管在卵母细胞直径差异跨物种的定义中使用小,介质,和大卵母细胞应用的作者,一般假设仍然是一致的。牛卵母细胞是一个很好的例子,这样的情况在群体分化是不一样的,但是作者认为毛囊更高的含有更多的发展主管卵母细胞直径(27,28]。这一趋势是保存在许多其他物种包括骆驼,狗,猪29日,30.]。

滤泡大小有影响几个基因的表达谱在卵母细胞成熟和受精,也(8,31日,32]。灿烂et al。33]研究基因的作用TGFB总科,包括韩国仁荷,在牛卵泡液与卵泡的生长。他们发现,每一个阶段的卵泡增长与韩国仁荷蛋白的表达有关。此外,FSH刺激效应是指出在研究基因。这可能意味着韩国仁荷可能代表一个标记的表达谱和预后因子的卵泡生长和发育。这些观察结果被Jyotsna和Medhamurthy部分证明34]。他们分析了雌二醇和孕激素浓度的变化在水牛牛卵泡periovulatory发展和增加表达韩国仁荷的优势卵泡的颗粒细胞。尽管只有一些关于异烟肼公布的数据表达和卵泡的生长,这两个实验的论文表明,卵泡的生长可能由韩国仁荷和upregulation卵泡发展是伴随着更高的抑制素的表达谱。同样,我们的研究揭示了重大变化韩国仁荷和INHB mRNA表达谱从猪卵泡卵母细胞收集不同的大小。考虑所有这些结果,这可能表明,异烟肼可视为参与猪卵泡生长的重要因素。记录以来的几项研究增加受精的卵母细胞和成熟能力恢复主要从大型毛囊(8,31日),我们的研究结果也表明,他表达谱可能认为代表不仅猪卵泡生长的一个标志,也是一种重要的遗传卵母细胞质量的指标。与异烟肼mRNA表达谱,我们观察到的一个相反的效果韩国仁荷和INHB蛋白质表达和分布与卵泡的大小。这两个蛋白的表达增加检测小卵泡的卵母细胞恢复。这种效应可以解释不同的转录和转译监管机制的存在和/或异烟肼的mrna转录后的修改。

虽然只有一项研究描述了异烟肼的角色在细胞周期的调控,影响其他基因和编码的蛋白质在实现一个完整的成熟卵母细胞是公认的35,36]。Cyert和柯式(37)使用非洲爪蟾蜍卵母细胞作为实验模型来研究强积金的激活和磷酸化pre-MPF及其参与调节细胞周期的进展。他们表明,异烟肼,pre-MPF抑制剂,有一个功能类似于蛋白质磷酸酶。因此,pre-MPF发生通过机制的激活的蛋白质磷酸化。异烟肼的激活也由另一种蛋白质,叫做蛋白质phosphatase-1。建议一个强积金upregulation异烟肼是必要的激活可能是第一步的一种机制,导致细胞周期调控和进展。从细胞周期控制系统是一个主要的机制与哺乳动物卵母细胞的成熟潜力,我们调查了韩国仁荷和INHB猪卵母细胞成熟前后的表达谱在体外。大幅增加韩国仁荷mRNA的表达已观察到在卵母细胞成熟过程;然而,INHB mRNA表达不受影响。另一方面,韩国仁荷和INHB蛋白的表达在IVM后卵母细胞显著增加。这个观察点的存在异烟肼表达的转录后的调控。

INHB蛋白质总是分布在IVM前后猪卵母细胞的细胞质中。反对,韩国仁荷的蛋白质位于细胞质外围区域的卵母细胞在IVM之前,而在成熟的蛋白质明显染色的显示透明带。增加韩国仁荷的表情透明带在IVM可能表明其作为一个重要的性腺的糖蛋白。然而,韩国仁荷在卵母细胞成熟的关键功能和oocyte-sperm交互需要进一步的实验证实。

5。结论

我们的研究证明了微分异烟肼mRNA表达谱和分销猪卵母细胞内蛋白质编码的过程中在体外成熟。此外,滤泡大小之间的关系,卵母细胞的成熟和异烟肼表达分析显示。据推测异烟肼是一个重要的因素参与卵泡的生长过程和猪卵母细胞成熟。

承认

本研究通过赠款NN 308 588040号(2011/03 / N / NZ4/00305)和0233 / IP1/2011/71从波兰外交部“IuventusPlus”科学研究和高等教育。

引用

1. r .沼泽和戴y”,成熟的猪卵母细胞在体内和体外,”繁殖58卷,第104 - 91页,2001年。视图:谷歌学术搜索
2. t . Nagai”,提高牛和猪卵母细胞体外成熟系统”Theriogenology,55卷,不。6,1291 - 1301年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. r . l . Krisher“卵母细胞质量发展的影响,”动物科学杂志》,卷82,不。13日,114 - 123年,2004页。视图:谷歌学术搜索
4. l·r·马丁斯c . b . Ponchirolli s l·贝尔f . c . Landim-Alvarenga m·d·洛佩斯,“分析体外成熟卵母细胞的核成熟发情和非繁殖bitch(婊子)”动物繁殖,3卷,不。1,49-54,2006页。视图:谷歌学术搜索
5. y元,r . l . Krisher,“猪卵母细胞的体外成熟(IVM),“分子生物学方法卷,825年,第198 - 183页,2012年。视图:谷歌学术搜索
6. b . Kempisty m .登上金榜d Bukowska et al .,“卵子发生的调节机制,folliculogenesis和受精猪,”Medycyna Weterynaryjna,卷67,不。5,299 - 303年,2011页。视图:谷歌学术搜索
7. 问:y太阳,l .赖发出巨响,r·s·普莱瑟和h . Schatten”胞质变化与核成熟的猪卵母细胞和早期胚胎发育潜力:促性腺激素的影响,积云细胞,滤泡大小,和抑制蛋白质合成,“分子繁殖和发展卷,59号2、192 - 198年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. p . Antosik b . Kempisty d Bukowska et al .,“滤泡大小与选择的分子的转录和蛋白质水平负责发育期的英国国债的卵母细胞的受精能力,”杂志的繁衍和发展,55卷,不。6,588 - 593年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. “w . j . Bremner抑制素:从假设到临床应用,”《新英格兰医学杂志》上,卷321,不。12日,第827 - 826页,1989年。视图:谷歌学术搜索
10. 美国Worbs:大家,d .娃et al .,”表达的抑制素、苯丙酸诺龙子单元(t1, -betaA和-betaB)在正常和致癌的子宫内膜组织:可能的免疫组织化学分化标记,”肿瘤的报道,17卷,不。1,第104 - 97页,2007。视图:谷歌学术搜索
11. n . Suzumori s a穿,苦,“卵巢功能早衰的候选基因,”当前药物化学,14卷,不。3、353 - 357年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. m·迈尔斯b·s·麦德·m·m·Matzuk和s . a .穿”失去了抑制素α解开oocyte-granulosa细胞动力学和扰乱了产后folliculogenesis,”发育生物学,卷334,不。2、458 - 467年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. j . Hanrieder a . Nyakas t Naessen, j . Bergquist”蛋白质组学分析人类的卵泡液使用另一种自下而上的方法,”蛋白质组研究期刊》的研究,7卷,不。1,第449 - 443页,2008。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. e·m·帕里什a . Siletz m .徐t·k·伍德拉夫l·d·谢伊,“基因表达在老鼠体内卵泡发育与海藻酸体外培养系统,”繁殖,卷142,不。2、309 - 318年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. 和l . j . r . b . Gilchrist Ritter,”参与的差异TGFB总科的信号通路调节猪和小鼠积云细胞扩张,”Reprduction,卷142,不。5,647 - 657年,2011页。视图:谷歌学术搜索
16. r . a . Dragovic l . j . Ritter s . j .舒尔茨et al .,“Oocyte-secreted因子激活SMAD 2/3信号使鼠标积云细胞扩张的开始,“生物的繁殖,卷76,不。5,848 - 857年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. m .登上金榜,b . Kempisty, p . Antosik et al .,“猪卵母细胞的形态与透明带糖蛋白记录内容,“生殖生物学,9卷,不。1,第85 - 79页,2009。视图:谷歌学术搜索
18. j·k·Lunney,“猪基因组学、生物医学模型的进步”国际生物科学杂志》上,3卷,不。3、179 - 184年,2007页。视图:谷歌学术搜索
19. t·楚、i Dufort和m . a . Sirard”影响卵巢刺激在牛卵母细胞的基因表达,“Theriogenology,卷77,不。9日,第1938 - 1928页,2012年。视图:谷歌学术搜索
20. y元,m·b·惠勒和r . l . Krisher”扰乱了氧化还原内稳态,异常的氧化还原基因表达在猪卵母细胞有助于减少发展能力,”生物的繁殖,卷87,不。4 p。78年,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. f . Cillo t . Brevini s Antonini a . Paffoni g .情景不禁啜泣和f .格拉斯科”之间的联系人类卵母细胞发育能力和积云一些基因的表达水平,”繁殖,卷134,不。5,645 - 650年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. h .邵c . Ma x Zhang et al .,“极光B调节轴双极性在脊椎动物卵母细胞减数分裂,”细胞周期,11卷,不。14日,第2680 - 2672页,2012年。视图:谷歌学术搜索
23. v . m .登上金榜b . Kempisty m . Woźna et al .,“GDF9微分表达式,TGFB1 TGFB2和TGFB3猪卵母细胞从毛囊分离不同大小的之前和之后的文化在体外”,Acta Veterinaria Hungarica,卷61,不。1,第178 - 170页,2013。视图:谷歌学术搜索
24. a . k . Nagaraja b·s·麦德s Rajanahally et al .,“缺陷gonadotropin-dependent卵巢folliculogenesis和颗粒细胞基因表达inhibin-deficient老鼠,”内分泌学,卷151,不。10日,4994 - 5006年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. n . Suzumori s a穿,苦,“卵巢功能早衰的候选基因,”当前药物化学,14卷,不。3、353 - 357年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. c . l . Chang t·h·王,s . g . Horng h . m .吴h . s . Wang和y . k .宋子文,“卵泡液中抑制素B的浓度:与卵母细胞成熟和胚胎发展,”人类生殖,17卷,不。7,1724 - 1728年,2002页。视图:谷歌学术搜索
27. p .朗·莫纳亨d . rizo m·p·博兰和戈登,“卵泡大小对牛卵母细胞质量的影响和发展能力成熟后,受精,体外和文化,“分子繁殖和发展,37卷,不。1,48-53,1994页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. p .索道起重机和m . a . Sirard卵母细胞和卵泡形态为牛卵母细胞发育能力确定特征,“分子繁殖和发展第41卷。。1,54 - 62年,1995页。视图:谷歌学术搜索
29. h . Khatir a Anouassi, a . Tibary”滤泡大小对卵母细胞体外发育能力和生存能力的胚胎转移后单峰骆驼(Camelus dromedarius),“动物繁殖科学,卷99,不。3 - 4、413 - 420年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. n Songsasen d . e .称,“施主卵泡的大小,但不是生殖周期阶段或季节性影响国内狗卵母细胞减数分裂能力的选择,”分子繁殖和发展,卷72,不。1,第119 - 113页,2005。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. m . Machatkova k Krausova、大肠Jokesova和m . Tomanek“牛卵母细胞的发育能力:影响卵泡大小和卵泡波在体外胚胎生产的阶段,”Theriogenology,卷61,不。2 - 3、329 - 335年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. m·a·Bagg m . b . Nottle d·t·阿姆斯特朗和c g . Grupen”在青春期前的卵泡大小和卵母细胞发育能力之间的关系和成人猪,”生殖、生育和发展,19卷,不。7,797 - 803年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. c .灿烂,n, p . Groome和p·g .骑士,“牛卵泡发育与发散activin-A变化有关,inhibin-A——卵泡——卵泡和过分生长的相对丰度不同过分生长亚型在卵泡液,”内分泌学杂志》,卷188,不。2、215 - 225年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. r . Jyotsna和r . Medhamurthy”诱导排卵的标准化和验证模型系统在布法罗牛:periovulatory卵泡描述基因表达的变化,“动物繁殖科学,卷113,不。1 - 4、71 - 81年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. b . Kempisty m . Wozna h . Piotrowska et al .,”基因的表达编码透明带糖蛋白犬cumulus-oocyte复合物体外培养在媒体补充孕酮和雌二醇,”Theriogenology,卷77,不。3、684 - 693年,2012页。视图:谷歌学术搜索
36. b . Kempisty p . Antosik d Bukowska et al .,“评估在猪卵母细胞透明带糖蛋白和整合素记录内容,“生殖生物学,9卷,不。1,第78 - 71页,2009。视图:谷歌学术搜索
37. m . s . Cyert和m·w·柯式“体外强积金的监管活动,”细胞,53卷,不。2、185 - 195年,1988页。视图:谷歌学术搜索

版权

版权©2012 Bartosz Kempisty等。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。