成年小鼠心肌和成年人心球中前体细胞分泌外泌体的超微结构证据

摘要

尽管只有少数移植细胞持续存在，但细胞治疗的有益效果的证明在活的有机体内提示分泌因子可能是这种治疗的有效成分。这种所谓的旁分泌假说是由观察结果支持的，即由祖细胞制约的培养基含有促进血管生成和细胞保护作用的生长因子。半悬浮培养的心脏祖细胞形成球状簇(心球)，向邻近细胞传递旁分泌信号。旁分泌的一个关键成分是外泌体，外泌体是一种膜泡，储存在细胞内的内体室中，当这些结构与细胞质膜融合时被分泌。外泌体已被确定为骨髓CD34促血管生成作用的活性成分⁺小鼠干细胞及胚胎和小鼠梗死心脏胚胎间充质干细胞的再生作用。在这里，我们提供了小鼠心肌和人心肌中的祖细胞外出分泌物的电子显微镜。外泌体作为祖细胞递送的帕拉卡碱信号的有吸引力的载体。它们可以存储为“现成”产品。因此，外泌体具有在再生医学中避免用于治疗应用的可活细胞的许多限制。

1.介绍

心肌梗死和随之而来的心力衰竭是西方国家死亡的主要原因。梗塞引起心肌细胞大量丧失，由疤痕组织代替。为了补偿失去的收缩细胞，剩余的心肌细胞会发生肥大和心脏重塑。从长远来看，这些适应性机制是有害的，最终导致充血性心力衰竭。心脏移植仍然是慢性心力衰竭的最终治疗方法;然而，这种方法受到供体器官短缺、移植物排斥反应和终身免疫抑制需求的限制。

在过去的十年中，细胞移植已被评估为心力衰竭的新方法。早期研究报道，将成年小鼠骨髓（BM）造血干细胞（HSCs）注入梗死的小鼠心脏分化为心肌细胞和改善的心脏功能[1］.这篇报道引发了广泛的热情，骨髓细胞移植作为一种潜在的修复心碎的方法。随后的几项研究未能证实造血干细胞转分化为心肌细胞的能力[2，3.］.然而，这些阴性结果并没有阻止自体骨髓干细胞移植用于心脏再生的临床研究的开展[4- - - - - -9］.多种类型的干细胞和祖细胞，包括胚胎干细胞(ESCs)、成体骨骼肌成肌细胞、成体骨髓基质干细胞来源的单核细胞、纯化的骨髓基质干细胞来源的亚群(如c-kit)⁺和CD133⁺）和BM或脂肪衍生的间充质干细胞（MSCs）已被评估为心脏细胞疗法的细胞来源[10.，11.］.

细胞治疗心脏再生的随机、对照临床试验启动近十年后，必须认识到，结果一直不一致，心肌梗死(MI)患者心功能的整体改善一直是适度的[12.- - - - - -14.］.细胞移植的最佳时机、剂量、传递技术、作用机制、患者选择、细胞保留和移植后细胞存活尚不清楚。此外，老年患者和晚期心血管疾病或合并症患者的细胞功能受损限制了自体细胞移植[15.］.因此，未解决的悖论在动物模型中细胞疗法的强劲益处和患者中的适度效果之间存在。

成人骨髓细胞向心肌细胞的转分化尚未在人类中得到证实。细胞疗法最初被认为是一种为受伤心脏提供新细胞的方法，能够恢复疤痕区域的收缩功能，细胞疗法的生物学原理已逐步转向由移植细胞介导的邻近细胞的有益作用，可能包括内源性再生机制的刺激。越来越多的证据表明，细胞治疗，无论是成肌细胞还是BM细胞，可能通过增加梗死区域的细胞质量，从而减少心室重构，并通过防止缺血梗死周围区的心肌细胞死亡而发挥作用。第二种机制涉及分泌因子，被称为“旁分泌假说”。移植细胞分泌的生长因子和细胞因子激活内源性细胞内信号通路，可能提高内源性细胞的存活率和形成新的血管[16.- - - - - -18.］.

2.表达干细胞表面标记的成体心脏干细胞(CSCs)

成人心肌是一种高度有组织的组织，其组织包含多种细胞类型，包括心肌细胞，内皮细胞，血管平滑肌细胞，多种类型的间质细胞和细胞外基质（ECM），其形成心血管单元[19.］.间质细胞包括位于干细胞利基内的心脏族茎干和祖细胞（CSC）[20.］.这些耐药物含有特定的ECM组分，支持细胞，神经和血管。几个群体已经孤立和特征善意的来自啮齿动物和人类的成年人CSCs [21.- - - - - -29.］.用于鉴定CSC群体的分子标记包括其他组织中，特别是造血干细胞上表达的细胞表面表位，如c-kit (CD117;干细胞因子受体)和干细胞抗原-1 (Sca-1)。至少，已经描述了五个表面上不同的CSCs群体[30.］.这些群体是否代表CSC的不同实体或不同的CSC的单一实体的激活状态仍然不明确。同样，CSC的起源尚未明确地建立。在这方面，我们和其他人表明，BM衍生的细胞可以在受损心脏中获得干细胞性质[31.，32.］.

已经推测，来自心脏本身的细胞可以是用于修复该器官的逻辑候选细胞源，因为这些细胞可能本质上被编程以支持心脏细胞存活和功能。在MI的动物模型中，注射体外扩大的CSCs与功能改善有关[21.- - - - - -27.］.然而，需要使用其他细胞来源的CSC的直接比较，以识别最有效的细胞类型。最近，已经开发了基于成人细胞重编程（诱导多能干细胞; IP）的新方法[33.］.虽然非常有前途，但这些策略仍然与潜在的安全问题有关。对这些方式的讨论超出了目前工作的范围（感兴趣的读者被称为其他地方发布的良好评论[34.]）。

3.心球(CSs)和心球衍生细胞(cdc)

最早见于神经干细胞(神经球)[35.“球形”已经被认为是 - 或命名，至少是茎的特征。然而，球形可能不仅可以从细胞增殖中产生，而且可以分别来自细胞聚集，因此分别是克隆或非紧张的。克隆球的比例随着培养皿中的细胞密度降低而增加[36.］.

首先由Messina等人描述[37.，“心球”(CSs)是自组装的球形细胞簇，由心脏外植体在原代生长获得离体组织文化。CSs在聚d -赖氨酸的半悬浮培养中生长。他们代表了最好的体外CSC利基环境的模型[38.］.当未分化细胞在CS核心增殖时，心脏委托细胞在外围生长。我们已经从成人心房附肢的细胞生长中生成了CSs(图)1）．细胞生长表达MSC表面标记物(CD13⁺，CD73.⁺和CD105⁺)，但不包括造血标记物(CD45^-）．符合以前的研究[25.，37.[我们已经证明了在人CSS中表达心脏特异性基因，例如肌钙蛋白I（图2）．CSs放置在一个新的培养皿中分解并产生单层cs来源的细胞(cdc)，形成第二代CSs。疾病预防控制中心可扩展为纤维连接蛋白上的单层膜(图)1）．先前的研究[25.，39.报道，CDCS是克隆源性的并且具有多线性分化潜力。相比之下，啮齿动物最近的研究质疑CSS的概念作为具有心肌源性潜力的干细胞来源[40］.这项研究表明，自发跳动的CSs可能是由心脏外植体细胞生长中心肌组织的残余造成的。尽管存在这个问题，与注射载体或成年正常人真皮成纤维细胞的小鼠相比，疾病预防控制中心已显示在心肌梗死后3周的SCID褐黄色小鼠中改善左心室射血分数(LVEF) [25.］.这些有益的作用与增加血管形成和减少细胞凋亡有关[41.］.

自体C-套件⁺，分化谱系阴性(Lin^-最近，CSCs和cdc都已在初步临床研究中进行了测试。这两个CSC治疗心脏修复的临床试验将在下一节简要讨论。

4.自体CSCs治疗缺血性心脏病的临床研究

自体CSCs治疗缺血性心脏病的第一个临床试验是缺血性心肌病患者干细胞输注试验(SCIPIO)(注册于ClinicalTrials.gov，编号NCT00474461) [42.］.该阶段1临床试验测试自体C-套件⁺林/^-用于治疗缺血性心脏病造成的心力衰竭的CSC。在该试验的A阶段，在冠状动脉旁路接枝（CABG）之前，在MI之后减少的LVEF（≤40％）的患者在治疗和对照组中均载。在B期，患者随机分配给治疗或对照组。通过颅内输注在手术后113天（SE 4）的颅内输注施用自体CSC。十六名患者被分配给治疗组和七个对照组。没有报道无细胞治疗相关的不良反应。在14例CSC治疗的患者中分析，LVEF在输注后4个月内注入38.5％（SE 2.8）之前从30.3％（SE 1.9）增加到）．相反，在七个对照患者中，在相应的时间间隔内，LVEF在CABG后8个月后4个月内的相应时间间隔（30.1％[SE 2.4]，在CABG 8个月内）。在1年学习的八个治疗患者中，LVEF增加了12.3个LVEF单元[SE 2.1]与基线（）．这些结果表明了自体C-kit的颅内输注⁺林/^-CSCS可以增强MI后心力衰竭患者的LV收缩功能。在完成心脏磁共振成像（MRI）的七名治疗患者中，在4个月内从32.6g（SE 6.3）从32.6g（SE 1.7; 24％）降低了梗塞尺寸。)和9.8 g (SE 3.5;30%) (）．由于对照组缺乏MRI数据，这种瘢痕的减少很难解释。

前瞻性，随机的心脏椎间影子衍生的自体干细胞逆转心室功能障碍（CADUCESUS）试验（注册为ClincoricTrials.gov，NCT00893360）评估了LVEF减少的患者的自体CDC（= 25-45％;平均基线值= 39％; [SD 12]）AMI后2-4周[43.］.17名患者接受CDC和8名患者随机分配给对照组。从子宫内膜活组织检查标本生长的自体CDC被注入MI后1.5-3个月内的梗塞相关动脉。活组织检查样品在36天内产生规定的细胞剂量（SD 6）。在6个月内，没有患者在任一组中发育心脏肿瘤或主要不良心脏事件。与一个对照相比，CDC组中的四名患者（24％）具有严重的不良事件（13％;）．MRI分析显示瘢痕质量减少28％，6个月，42％（)， 6个月时可活心脏重量增加13.0 g (），区域收缩力更大（-11.8％，与-8.5％;)、局部收缩期壁增厚(）在CDC组与对照组进行比较。最终舒张性体积，末端 - 收缩量和LVEF的变化在6个月内没有差异。这些结果表明，Intoraconary输注自体C-kit⁺林/^-心肌梗死后的CSCs或cdc是安全的，可能是有益的。目前正在计划进行更大规模的临床试验，以测试这些方法的有效性。

5.移植细胞旁分泌效应

基于人特异性细胞的数量相对于毛细血管密度和心肌活力的总体增加，Chimenti等。［41.]估计，直接祖细胞分化定量地占人类cdc移植到SCID小鼠梗死心脏的观察效果的20% - 50%。相反，这些效应的很大一部分似乎可归因于内源性细胞。体外，人成人cdc条件培养的培养基可防止缺氧条件下新生大鼠心室肌细胞凋亡，同时促进人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的血管生成。体内，人CDCs分泌肝细胞生长因子-1（HGF-1），胰岛素样生长因子-1（IGF-1），以及移植到MI的同一SCID小鼠模型中时的血管内皮生长因子（VEGF）显示诱导组织再生并改善功能。将CDC注射到PERI-IMARCT区中增加了灭火因子Akt的表达，细胞凋亡降低，毛细密度增加。尽管在本研究中没有直接测量心肌灌注，但毛细密度的增加是一致的，血管生成在功能性改善中的作用一致。这些发现被解释为CDC超过直接再生菌落植物曲线的证据。在另一个研究中，唐等人。［44.]报道了大鼠c-kit分泌旁分泌因子的有益作用⁺在MI后4周通过颅内输注提供CSC。尽管在细胞治疗组的某些心中未发现植入的供体细胞，但与对照组相比，瘢痕区域减少，心脏输出增加。用C-kit注射的心脏血小细胞，血管和内源性心脏祖细胞的数量增加⁺即使在没有观察到植入细胞的情况下，CSC也是如此。Smits等人。［45.]显示，在心肌梗死后3个月，将人心脏祖细胞注射到心肌梗死小鼠心脏中可以减少心脏重塑，尽管事实上在这个时间点只有3-4%的注射细胞可以在心脏中发现。总之，这些发现表明CSCs释放的因子可能介导持续的有益作用，包括血管生成和改善心肌细胞存活。在这方面，疾病预防控制中心已被证明会分泌一些生长因子[41.]和microRNAs (miRNAs) [46.]调节相邻细胞中的细胞内信号传导途径。通过减少细胞凋亡和梗塞大小，证明了ESC或MSCs的培养媒体通过ESC或MSCs调节，以改善缺血后的心肌功能体外和在活的有机体内［47.- - - - - -49.］.另外类型的间质细胞包括常规心脏免疫细胞[50.还可以有助于细胞因子和生长因子分泌到它们的微环境中。总的来说，这些研究表明祖细胞的旁静脉作用是细胞疗法的中心机制。这种概念意味着心脏再生治疗方法中的细胞移植的可分配作用[17.］.

6.微粒和外来体

尽管交付的细胞存活时间很短，但细胞治疗的有益效果的证明，以及观察到的由祖细胞制约的培养基的营养效应，表明分泌的因子可能是细胞治疗心脏再生的有效成分，如前所述。细胞通过释放的分子如短肽、蛋白质、核苷酸和脂类与邻近细胞的表面受体结合进行交流。此外，真核细胞通过在细胞外环境中释放微粒子和外泌体相互交流。微粒子是一种直径100-1000纳米的球形结构的异质群体，由质膜出芽(外胞作用)释放出来，作为表达亲代细胞特异性抗原的磷脂囊泡[51.］.在一些疾病情况下，如炎症和自身免疫性疾病、动脉粥样硬化和癌症，循环中的微粒会增加。与微粒不同的是，外泌体是直径40-100 nm的膜泡，由内吞作用形成，这一过程涉及到外泌体内的质膜蛋白的隔离。外泌体储存在细胞内的内体室中，当这些多泡结构与细胞质膜融合时分泌[52.- - - - - -55.］.

外泌体在其表面显示出广谱的生物活性物质，并携带一组浓缩的蛋白质、脂质，甚至是被其他细胞吸收并调节其功能的核酸[54.- - - - - -56.］.一些外泌体膜蛋白被蛋白酶切割，产生的片段可能作为靶细胞中细胞表面受体的配体。外泌体也可以通过与靶细胞融合而非选择性地转移外泌体蛋白和RNA。它们由许多细胞类型释放，包括树突状细胞、肥大细胞、B细胞和T细胞、血小板、神经元、肿瘤细胞和间充质干细胞。

外泌体不携带随机排列的细胞内蛋白质，而是一组从质膜、内吞途径和胞质溶胶中提取的特定蛋白质，只有少量来自其他细胞内间隔的蛋白质[53.，56.］.大多数外肌肉含有四苯胺（CD81，CD63和CD9），其在细胞渗透，侵袭和融合事件中起重要作用，以及多猪体分子（Alix，Tsg101和Clathrin），热休克蛋白70（Hsp70）和兔子调节外来对接和膜融合[57.］.外泌体还包含膜层蛋白、代谢酶、核糖体蛋白、信号转导分子、粘附分子、atp酶、细胞骨架和泛素分子、生长因子、细胞因子、mRNA和microRNA (miRNA)分子[53.，56.，58.］.外出蛋白质和RNA数据库（Exocarta）可在http://exocarta.ludwig.edu.au/．除了来自多种细胞类型的外泌体共享的分子外泌体还携带来自亲代细胞类型的特定蛋白质。研究表明，外泌体携带的mrna可以在靶细胞中翻译成蛋白质，这表明外泌体可以作为遗传信息的载体。esc来源的微泡已被证明通过mRNA转移和蛋白质传递重新编程造血祖细胞[59.］.miRNA家族可以通过外泌体选择性地分泌到细胞外环境中[60.］.树突状细胞释放外泌体，依赖于树突状细胞激活的状态，外泌体负载不同的miRNA [61.］.这些外来熔化与靶细胞，从而转移可以在这些细胞中抑制mRNA的miRNA。因此，外泌体可以通过在细胞之间转移特异性miRNA分子来调节表观遗传效应。

外泌体的生物学效应是细胞类型特异性的，反映了它们的分子组成。最近，Sahoo等人[62.]报道了人CD34来源的外泌体的血管生成作用⁺BM干细胞在分离内皮细胞和血管生长的鼠模型中。这些外泌体富含含有常规原麦芽糖。相反，衍生自CD34耗尽的BM细胞的外泌体缺乏血管生成活性。在一些体外和在活的有机体内测定，来自CD34的外来体⁺细胞似乎比细胞本身更有效，可能是由于外泌体在培养中的持久性。Vrijsen等人[63.据报道，外来介导人胎儿心脏祖细胞调节培养基的血管生成活性体外．Timmers等人。［49.结果显示，如上所述，在猪缺血/再灌注模型中，注入esc来源的MSCs条件培养基可减少梗死面积，改善心功能。条件培养基内的外泌体显示含有活性成分[64.］.赖等人[65.]发现MSCs分泌的外泌体在小鼠中类似地降低心肌缺血/再灌注损伤。

在心外生物系统中，外泌体被证明会分泌影响神经元存活的突触核蛋白[66.]， 或者α来自极化的人视网膜色素上皮的B晶体蛋白，对邻近细胞提供神经保护[67.，只是举几个例子。总之，外泌体作为生物信号和信息在细胞间交换的载体，介导细胞激活、表型变化和细胞功能的重编程。外泌体和微粒子代表了一种跨细胞递送系统，它扩展了受体细胞有限的转录组和蛋白质组，并在细胞之间建立了一个通信网络[51.］.

7.心血管祖细胞外出分泌的超微结构证据

由于疾病预防控制中心向受损心肌传递有益的旁分泌信号[41.]并且由于外来物被鉴定为CD34的旁静脉效应的活性成分⁺肝星状细胞(62.]或msc [64.，65.]在梗死的心中，我们研究了CSC和人类CSS是否分泌外来体。数字3.显示了小鼠成体心脏和成人CS中干细胞龛内祖细胞的透射电子显微照片体外．祖细胞在两种情况下表现出类似的超微结构外观。在这里，我们还提供了小鼠成年心脏和人CSS中祖细胞的前哨和微肠池分泌的超微结构证据（图4）．微泡(≈直径200纳米)具有电子密度的含量。通过大小和超微结构外观，外泌体可以与微泡、凋亡小体和其他类型的膜泡区分开来。外泌体和微囊泡似乎是参与成人心脏异细胞通讯的重要机制[68.]，尤其是在电信带之间[69.居民祖细胞[68.，70］.我们中的一些人最近表明外虫物从心肌梗死边界区的鸟束中出现[71]，一致于Neoangi发生中该分泌组分的潜在作用;然而，未进行定量分析。

透射电子显微照片表明Exosome摄取的心肌细胞在成年小鼠心脏中显示为图5．心肌细胞似乎在具有薄细胞质过程的细胞表面上包围外来，然后将外泌体掺入心肌细胞中。然而，这种初步观察需要在更多的样品中分析。通过人CSCs和CSS分泌的外泌体的分子含量和功能活性也仍然是特征。另外，未答复的问题涉及在正常和缺血条件下进行外出分泌物的变化。

8.外泌体的治疗潜力

外泌体可能规避许多与使用复制细胞作为治疗剂相关的许多障碍，例如复制细胞随时间以不受控制的方式增加的风险或不管患者的临床需求如何施加持续的生物活性。此外，许多自体干细胞疗法需要离体细胞膨胀，因此治疗产品的制备可能需要几周时间。此外，来自老年患者的自体细胞再生潜力有限[15.]，而异基因细胞通常会被免疫系统排斥(骨髓间充质干细胞可能除外，它介导免疫调节作用[72]）。外泌体的假设优势在于，尽管这仍有待证实，但可能可以使用来自年轻，健康个体的同种异体细胞来进行它们的生产。由于包括主要组织相容性复合物（MHC）分子的膜衍生蛋白质的含量较低，因此外泌体比其亲本细胞少于其亲本细胞。然而，这可能取决于父母细胞类型。由于树突细胞分泌的外泌体可以转移MHC II类分子并刺激免疫细胞[73，它们已经在癌症患者身上进行了临床试验[74- - - - - -76］.疾病预防控制中心已被证明表达MHC I类分子，而不是II类分子[77因此，可以假设CDCs分泌的外索体缺乏MHC II类。如果CSS或CDC分泌的外泌体的同种异体性，则可以忽略不计，因此可以基于来自年轻，健康供体的外来体来发展“现成的”治疗。显然，与细胞移植相比，无细胞产品提供了许多优点。无细胞产品可以在剂量和生物活性方面标准化和测试。在-20℃下没有可能在-20℃下储存外来运动6个月，其生化活动没有损失[64.］.重要的是，外泌体已被证明可以保护其内容物不被降解在活的有机体内［58.，78[从而潜在地防止与小细胞因子，生长因子，转录因子和RNA等小可溶性分子相关的一些问题，这些问题迅速降解。培养物中外泌体的耐久性允许通过收集从培养基中收集高剂量的外泌体，其中外泌体在时间内分泌出来[62.］.用于支持大规模的外部生产的可缩放系统，已经描述了[64.］.因此，外泌体作为一种治疗药物表现出一些有吸引力的特征。另一方面，也应考虑到潜在的限制。例如，外泌体包含生物活性分子的混合物，其中一些似乎具有有益作用，而其他一些在某些条件下可能具有有害作用(如促炎)。外泌体是否优于血管生成药物或纯化的、重组的生长因子和其他多肽，在无细胞的组织再生方法的背景下，仍有待观察。

9.结论

CSS代表A.体外该模型概述了心脏中CSCs和其他细胞之间的细胞-细胞相互作用的几个方面。外泌体可能是心脏祖细胞相互交流并向邻近细胞传递旁分泌信号的关键机制。在这里，我们首次提供了成年小鼠心脏和人类CSs中前体细胞分泌外泌体的超微结构证据体外．早期的研究已经证明了由造血干细胞和间充质干细胞分泌的外泌体在心肌梗死动物模型中的有益作用。这些研究表明外泌体作为一种无细胞的心脏再生治疗产品可能具有主要优势。

作者的贡献

L. Barile和M. Gherghiceanu对这项工作做出了同样的贡献。

致谢

瑞士国民科学基金会的支持，塞西亚奥古斯塔基金会，梅斯基金会Sergio Mantegazza，以及“每拉里卡卡Sulla Trasfusione e Sui Trapianti”（Lugano）的“Fondazione”是感激的。

参考文献

1. D. Orlic, J. Kajstura, S. Chimenti等，“骨髓细胞再生梗死心肌”，自然第410卷6829页，701-705页，2001。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
2. L. B. Balsam, A. J. Wagers, J. L. Christensen, T. Kofidis, I. L. Weissmann, R. C. Robbins，“造血干细胞在缺血心肌中采用成熟的造血命运”，自然，第428卷，第2期。第2页，第2 - 3页，2004。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
3. C. E. Murry, M. H. Soonpaa, H. Reinecke等，“在心肌梗死中造血干细胞不转分化为心肌细胞”，自然，第428卷，第2期。6983，PP。664-668，2004。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
4. C. Stamm, B. Westphal, H. D. Kleine et al，“自体骨髓干细胞移植用于心肌再生”，《柳叶刀》，第361卷，第2期。9351，第45-46页，2003。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
5. K. C. Wollert, G. P. Meyer, J. Lotz等，“心肌梗死后冠状动脉内自体骨髓细胞移植:BOOST随机对照临床试验，”《柳叶刀》，第364卷，no. 2《中国科学院院刊》，2004年第4期。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
6. V.Schächinger，S.Erbs，A.Elsässer等，“急性心肌梗死中的”Intracoronary骨髓衍生的祖细胞“，”新英格兰医学杂志第355期12，pp。1210-1221,2006。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
7. B. Assmus，J. Honold，V.Schächinger等，“心肌梗死后祖细胞的经核细胞移植”，“新英格兰医学杂志第355期12，页1222-1232,2006。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
8. S.Janssens，C. Dubois，J.Bogaert等，“ST段抬高心肌梗死患者的”自体骨髓源性干细胞转移：双盲，随机对照试验“《柳叶刀》，第367卷，第2期。9505页，113 - 121,2006。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
9. K. Lunde，S. Soleheim，S.Aakhus等，“急性心肌梗死中的单核骨骨髓细胞的”Intracoronary注入单核骨髓细胞“新英格兰医学杂志第355期12，PP。1199-1209,2006。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
10. E. Forte, I. Chimenti, L. Barile等，“心脏细胞治疗:下一代(再)”，干细胞评论和报告，卷。7，pp。1018-1030，2011。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
11. E. Chavakis，M. Koyanagi和S. Dimmeler，“增强心脏修复的细胞疗法的结果：从长凳到床边的进展，”循环号，第121卷。2, pp. 325-335, 2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
12. a . Abdel-Latif, R. Bolli, I. M. Tleyjeh et al，“成体骨髓源性细胞用于心脏修复:系统综述和荟萃分析，”内科学档案，卷。167，没有。10，pp。989-997，2007。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
13. K.C.Wollert和H. Drexler，“细胞疗法治疗冠心病：批判性评估，”自然评论心脏病学，卷。7，不。4，pp。204-215，2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
14. D. M. Leistner，U.Fischer-Rasokat，J. Honold等，“急性心肌梗死中祖细胞的移植和再生增强（TopCare-AMI）：最终的5年结果表明长期安全和疗效，”心脏病学临床研究号，第100卷。10, pp. 925-934, 2011。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
15. S. Dimmeler和A. Leri，“衰老和疾病作为细胞疗法疗效的调节剂”，循环研究第102卷第1期11，页1319-1330,2008。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
16. H. Ebelt，M.Jungblut，Y. Zhang等，“细胞心肌成形术：改善左心室功能与肿瘤活性细胞因子的释放相关，”干细胞，卷。25，不。1，pp。236-244,2007。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
17. K. R. Vrijsena, S. A. J. Chamuleaua, W. A. Noorta, P. A. Doevendansa, J. P. G. Sluijtera，“干细胞治疗终末期心力衰竭:细胞的不可或缺的作用?”器官移植中的目前意见第14卷第2期5，pp。560-565,2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
18. “成人干细胞信号转导与治疗中的旁分泌机制”，中国生物医学工程学报，2018,34(3):454 - 454。循环研究，卷。103，没有。11，pp。1204-1219，2008。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
19. S. Ausoni和S. Sartore，“心血管单元作为疾病和再生的动态参与者，”分子医学的趋势，第15卷，第5期。12，第543-552页，2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
20. K.Urbanek，D.肉鼬，M. Rota等，“成人小鼠心脏的干细胞龛，”美国国家科学院的诉讼程序，卷。103，没有。24，pp。9226-9231,2006。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
21. A. P. Beltrami, L. Barlucchi, D. Torella等，“成体心脏干细胞是多能的，支持心肌再生，”细胞，第114卷，第2期。6，第763-776页，2003。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
22. H. Oh, S. B. Bradfute, T. D. Gallardo等，“成年心肌的心脏祖细胞:梗死后的归巢、分化和融合”，美国国家科学院的诉讼程序号，第100卷。21，pp。12313-12318,2003。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
23. H.C.C.OTT，T. Matthiesen，J.Brechtken等，“成年人心脏作为干细胞的源：修复胚胎祖细胞的策略，”自然临床实践心血管医学， vol. 4, supplement 1, pp. S27-S39, 2007。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
24. C. Bearzi, M. Rota, T. Hosoda等人，“人类心脏干细胞”，美国国家科学院的诉讼程序，第104卷，第104号35, pp. 14068-14073, 2007。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
25. R. R. Smith, L. Barile, H. C. Cho等，“经皮心肌内膜活检标本中心肌来源细胞的再生潜力扩大”，循环第115卷第1期7，页896-908,2007。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
26. A. Linke, P. Müller, D. Nurzynska等人，“狗心脏中的干细胞是自我更新的，克隆的，多功能和再生梗死心肌，改善心脏功能，”美国国家科学院的诉讼程序第102卷第1期25，pp。8966-8971,2005。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
27. A. M. Smits，P.Van Vliet，C.H. Hez等人，“人心肌细胞祖细胞分化为功能性成熟心肌细胞：研究人体心脏生理学和病理生理学的体外模型，”自然的协议，第4卷，第4期。2，页232-243,2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
28. L. Barile，I. Chimenti，R.Gaetani等，“心脏干细胞：心肌再生的分离，膨胀和实验用途，”自然临床实践心血管医学，卷。4，补充1，PP。S9-S14，2007。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
29. L. Barile，E. Messina，A.Giacomello和E.Marbán，“内源性心脏干细胞”，心血管疾病的进展，第50卷，第5期。1，pp。31-48,2007。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
30. G. M. Ellison, V. Galuppo, C. Vicinanza等人，“心脏干细胞和祖细胞鉴定:同一细胞的不同标记?”生命科学前沿，卷。2，pp。641-652，2010。视图:谷歌学术搜索
31. L. Barile，F. Cerisoli，G.Frati等，“骨髓衍生的细胞可以在受损的心脏中获得心脏干细胞性质，”细胞与分子医学杂志，第15卷，第5期。1，pp。63-71，2011。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
32. S. S. Fazel, L. Chen, D. Angoulvant等，“激活c-kit对于动员修复性骨髓祖细胞对心脏损伤的反应是必要的。”美国实验生物学学会联合会杂志第22卷第2期3, pp. 930-940, 2008。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
33. L. W.Van Laake，L.Qian，P. cheng等，“基于记者的诱导多能干细胞和胚胎干细胞衍生心脏祖子引发剂的”记者“分离揭示了有限的基因表达方差，”循环研究，第107卷，第2期3, pp. 340-347, 2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
34. Y. Yoshida和S. Yamanaka，《诱导多能干细胞:心脏再生的来源》分子和细胞心脏病学杂志，第50卷，第5期。2, pp. 327-332, 2011。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
35. B. A. Reynolds和S.Weiss，“来自成人哺乳动物中枢神经系统的分离细胞的神经元和星形胶质细胞的产生”，科学号，第255卷。第5052页1707-1710页，1992年。视图:谷歌学术搜索
36. E. Pastrana, V. Silva-Vargas，和F. Doetsch，“睁大眼睛:作为干细胞试验的球形形成的批判性评论，”细胞干细胞，第8卷，第2期5, pp. 486-498, 2011。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
37. E.MESSINA，L. DE ANGELIS，G.FRATI等，“来自人和鼠心脏的成人心脏干细胞的分离和扩展”循环研究，卷。95，没有。9，pp。911-921,2004。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
38. T. S. Li, K. Cheng, S. T. Lee等人，“心肌球再现了一个富含干细胞和细胞基质相互作用的小生境样微环境，使其增强的心肌修复功能合理化，”干细胞第28卷第2期11, pp. 2088-2098, 2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
39. D. R. Davis，Y. Zhang，R. R. Smith等，“从心肌组织验证培养心脏祖细胞的心脏晶间法”，“普罗斯一体，第4卷，第4期。9、Article ID e7195, 2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
40. D. C. Andersen, P. Andersen, M. Schneider, H. B. Jensen, S. P. Sheikh，“小鼠”心球“不是具有心肌生成潜能的干细胞来源”，干细胞，卷。27，不。7，pp。1571-1581,2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
41. I. Chimenti，R.R.Smith，T.Si等，“直接再生的相对作用与人体心脏源衍生细胞移植到梗死小鼠中的相对作用。”循环研究，卷。106，没有。5，pp。971-980,2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
42. R. Bolli, a . R. Chugh, D. D'Amario等人，“缺血性心肌病患者的心脏干细胞(SCIPIO):随机1期试验的初步结果，”《柳叶刀》，卷。378，没有。9806，PP。1847-1857，2011年。视图:谷歌学术搜索
43. R. R. Makkar，R.R.R.Smith，K. Cheng等，“心肌梗死后心脏再生的”颅内心脏椎间影子衍生的细胞（Caduceus）：前瞻性，随机阶段1试验“《柳叶刀》，第379卷，no. 22012年。视图:谷歌学术搜索
44. X. L. Tang，G. Rokosh，S.K.Sanganalmath等，“心脏祖细胞的Intracoronary施用减轻了30天梗死的大鼠左心室功能障碍”循环号，第121卷。2，页293 - 305,2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
45. A. M. Smits，L. W.Van Laake，K. Den Ouden等，“人心肌细胞祖细胞移植保留了梗死的小鼠心肌的长期功能”心血管研究，卷。83，没有。3，pp。527-535,2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
46. E. Kizana, E. Cingolani和E. Marbán，“哺乳动物心脏细胞中载体表达的调控rna的非细胞自主效应”，基因治疗，卷。16，不。9，pp。1163-1168，2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
47. P. R.Crisostomo，A.M. Abarbanell，M. Wang，T. Lahm，Y. Wang和D.R.Meldrum，“胚胎干细胞通过Paracrine行动衰减手术全球缺血后的心肌功能障碍和炎症”美国生理学杂志第295卷第2期4, pp. H1726-H1735, 2008。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
48. M. Gnecchi, H. He, N. Noiseux等，“支持旁分泌假说的证据，akt修饰间充质干细胞介导的心脏保护和功能改善，”美国实验生物学学会联合会杂志，第20卷，第2期。6，pp。661-669,2006。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
49. L. Timmers, S. K. Lim, F. Arslan et al.，“人间充质干细胞条件培养基降低心肌梗死面积”，干细胞研究，卷。1，不。2，pp。129-137,2008。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
50. F.Bönner，N.Borg，S. Burghoff和J. Schrader，“常核心脏免疫细胞和缺血性损伤后厄核苷酸酶CD39和CD73的表达”，“普罗斯一体，卷。7，2012年物品ID e34730,2012。视图:谷歌学术搜索
51. S. F. D. Dause和C. Weber，“微粒：新型通信网络的主角为细胞间信息交换，”循环研究，第107卷，第2期9，pp。1047-1057，2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
52. C. Théry，“外泌体:分泌囊泡和细胞间通讯”，F1000生物学报告，卷。3，不。1，2011年第15条。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
53. C. Théry, S. Amigorena, G. Raposo和A. Clayton，“从细胞培养上清液和生物液体中分离和鉴定外泌体”，细胞生物学的当前方案，卷。3，2006年第22款。视图:谷歌学术搜索
54. S. Mathivanan, H. Ji和R. J. Simpson，“外泌体:细胞间通讯中重要的细胞外细胞器”，蛋白质组学学报，第73卷，第2期10，页1907-1920,2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
55. P. J.Quesenberry和J. M. Altiotta，“细胞表型切换和微铅，”高级药物送货评论，卷。62，没有。12，PP。1141-1148，2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
56. S. Mathivanan和R. J. Simpson，“Exocarta：外泌体蛋白和RNA的汇编”，蛋白质组学，第9卷，第5期。21, pp. 4997 - 5000,2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
57. M. Ostrowski，N.B.Carmo，S.Krumeich等，“Rab27a和Rab27b控制外出分泌途径的不同步骤”自然细胞生物学，卷。12，不。1，pp。19-3013，2010。视图:谷歌学术搜索
58. H. Valadi，K.Ekström，A.Bossios，M.Sjöstrand，J.J. Lee和J.O.Lötvall，Exosome介导的MRNA和MicroRNA的转移是细胞之间的新型遗传交换机制，“自然细胞生物学，第9卷，第5期。6，pp。654-659,2007。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
59. J. Ratajczak, K. miiekus, M. Kucia等人，“胚胎干细胞衍生的微泡重组造血祖细胞:mRNA水平转移和蛋白质传递的证据，”白血病，第20卷，第2期。5，页847-856,2006。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
60. K.H.Hshima，K.inoue，A.Fijiwara等，“Let-7 microRNA家族通过转移性胃癌细胞中的外来体系选择性地分泌到细胞外环境中，”普罗斯一体，第5卷，第5期。10、文章编号e13247, 2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
61. A. Montecalvo, A. T. Larregina, W. J. Shufesky等，“通过外泌体在小鼠树突状细胞间转移功能性microrna的机制”，血液，第119卷，第2期。3，第756-766页，2012。视图:谷歌学术搜索
62. S. Sahoo，E.Klychko，T. Thorne等，“来自人类CD34的外泌体⁺干细胞介导它们的致胰腺癌活性，“循环研究，卷。109，pp。724-728，2011。视图:谷歌学术搜索
63. K. R. Vrijsen, J. P. G. Sluijter, M. W. L. Schuchardt等，“心肌细胞前体细胞来源的外泌体刺激内皮细胞的迁移，”细胞与分子医学杂志第14卷第2期5, pp. 1064-1070, 2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
64. R.C.Lai，T. S. Chen和S.K.IMIN，“间充质干细胞外出组：一种新型干细胞的心血管疾病治疗，”再生医学，卷。6，不。4，PP。481-492，2011。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
65. R.C.Lai，F.Arslan，M.M. Lee等，“Exosome由MSC分泌，减少了心肌缺血/再灌注损伤，”干细胞研究，第4卷，第4期。3，页214-222,2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
66. E. Emmanouilidou, K. Melachroinou, T. Roumeliotis et al.，“细胞产生的α-synuclein通过外泌体以钙依赖性方式分泌，并影响神经元生存率，“神经科学杂志，卷。30，没有。20，pp。6838-6851,2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
67. P. G. Sreekumar，R. Kannan，M. Kitamura等，“αB晶体通过偏振的人视网膜颜料上皮细胞在外泌体内分泌，并为相邻细胞提供神经保护剂“普罗斯一体，第5卷，第5期。10，2010年e12578。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
68. M.gherghiceanu和L.M.Popescu，“心脏直视 - 他们的交叉点和功能含义”细胞组织研究，第348卷，第2期。2，页265-279,2012。视图:谷歌学术搜索
69. L. M. Popescu和M. S. Fauseone-Pellegrini，“鸟束 - 一种偶然的案例：来自Cajal（ICC）的间质细胞，通过间质Cajal样细胞（ICLC）到鸟束，”细胞与分子医学杂志第14卷第2期4, pp. 729-740, 2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
70. M. Gherghiceanu和L. M. Popescu，“心外膜干细胞环境中的心肌细胞前体和端粒细胞:电子显微镜图像”，细胞与分子医学杂志第14卷第2期4，pp。871-877，2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
71. C. G.Manole，V.Cismaşiu，M.Gerghiceanu和L.M.Popescu，“实验性急性心肌梗死：缩减涉及新血管生成”，“细胞与分子医学杂志，第15卷，第5期。11，pp。2284-2296，2011。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
72. H. Yagi, A. Soto-Gutierrez, B. Parekkadan等人，“间充质干细胞:免疫调节和归巢机制”，细胞移植第19卷第2期6-7，页667-679,2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
73. L. Zitvogel，A. Regnault，A. lozier等，“使用新的细胞免疫疫苗消除已建立的鼠肿瘤：树突细胞衍生的外泌体”自然医学，第4卷，第4期。5，pp。594-600,1998。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
74. B. Escudier, T. Dorval, N. Chaput等，“自体树突状细胞(DC)衍生的外泌体用于转移性黑色素瘤患者的疫苗接种:第一阶段1临床试验的结果，”转化医学杂志， 2005年第3卷第10条。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
75. M. A.Morse，J.Arst，T. Osada等，“我的阶段患有先进的非小细胞肺癌患者的型号组织免疫疗法，”转化医学杂志， 2005年第3卷第9条。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
76. S. Dai，D. Wei，Z.Wu等，“I阶段I的自体腹水衍生的外泌体与GM-CSF进行结直肠癌，”分子治疗，卷。16，不。4，pp。782-790，2008。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
77. K. Malliaras，T.S.LI，D.Luthringer等，“同种异体细胞治疗在梗死的大鼠中移植错配型心脏源细胞的安全性和有效性，”循环， 2012年，第125卷，第100-112页。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
78. N.Chaput和C.Théry，“外来物质：免疫特性和潜在的临床实施”在免疫病理研讨会，卷。33，不。5，PP。419-440，2011。视图:出版商网站|谷歌学术搜索

版权

版权所有©2012 Lucio Barile et al。这是一篇发布在知识共享署名许可协议，允许在任何媒介上不受限制地使用、传播和复制，但必须正确引用原作。