文摘

当归牡蛎纳街(AGN)最初是由超细研磨加工技术和热熔挤压(HME)。AGN的潜在的抗氧化剂和抗炎活动不同的流程进行比较,以及对人类的影响Kv1.3钾通道检测。超细powderization在AGN的过程中总酚和类黄酮含量显著增加,抗氧化活性以及DNA损伤的保护作用。相反,基于Soluplus AGN固体分散(AGN-SD)^®显示最高的抑制作用没有生产和人类Kv1.3通道。此外,AGN-SD抑制前列腺素E2的生产和细胞内活性氧诱导的mRNA表达一氧化氮合酶,cyclooxygenase-2,白介素1β,白介素6。总的来说,这些结果表明,超细powderization和固体分散形成通过HME可以显著提高AGN的生物活性。结果还表明,超细powderization和HME可能被开发和应用于制药行业。

1。介绍

活性氧(ROS)化学分子含氧。ROS形式作为天然氧气的正常新陈代谢的副产品,在细胞信号和体内平衡有重要的作用。ROS水平可以增加由于环境污染、辐射、化学物质、毒素、饮食习惯和身体压力。在这种情况下,由于抗氧化剂之间的不平衡和ROS,更高水平的自由基合成。合成过多的自由基会导致一些慢性衰老和退化性疾病,如冠心病、动脉粥样硬化、炎症、中风、糖尿病、癌症、哮喘、关节炎、和其他与年龄相关的疾病。此外,自由基可以通过启动诱导细胞损伤生物膜(多不饱和脂肪酸的过氧化反应1]。自由基是由人体的自然抗氧化防御系统回收如超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶。然而,内源性抗氧化剂无法完全删除所有自由基。因此,需要外源性抗氧化剂帮助人体降低抗氧化压力2]。炎症反应是一个复杂的生物过程和相关的许多慢性人类疾病包括癌症,糖尿病,心血管关节炎,自身免疫性疾病、神经退行性疾病(3]。巨噬细胞在炎症的过程中发挥了关键作用的先天免疫和适应性免疫的功能。激活巨噬细胞的细菌脂多糖(LPS)启动防御反应和炎症介质释放包括一氧化氮(NO)和前列腺素E2 (PGE2)和肿瘤坏死因子等促炎细胞因子-α(肿瘤坏死因子-α)、白介素1β(il - 1β)和白介素6 (il - 6)提高防守能力4]。等代的促炎介质没有和铂族元素₂诱导,诱导一氧化氮合酶(间接宾语)和cyclooxygenase-2 (cox - 2)的强烈参与炎症(5]。因此,抑制促炎介质和细胞因子与抗炎组件是一种有效的方法来治疗疾病。在最近的研究中,Kv1.3钾离子通道的药物目标发现了自身免疫性疾病的免疫调节和治疗效果的一些强有力的肽Kv1.3通道阻滞剂对自身免疫性疾病包括多发性硬化症、风湿性关节炎、1型糖尿病、和银屑病动物模型已经报道(6]。Kv1.3通道调节静止膜电位和Ca^{2 +}信号干扰效应记忆T细胞的增殖和活化,扮演一个主要参与自身免疫性疾病的发病机理7]。因此,更多的发现Kv1.3通道阻滞剂对药物开发是有意义的。

超细粉碎技术是一种有效的方法,使超细粉。在更小的微粒,核心材料很容易扩散到表面的粒子。因此,核心材料的释放粒子可以达到期望的控制水平的最优功效通过调节粒子特征(8]。几乎所有药物浓度的驱动力是通过生物膜,最终被吸收。出于这个原因,水溶性差的药物的疗效可以严重受限于穷人水溶性9]。制药热熔挤压(HME),不溶解的聚合物加工技术,目前研究增加水溶性差的活性药物成分的溶解度和生物利用度(api)在工业和学术界10]。HME过程中,api是嵌入到聚合物熔体在无定形状态分配和分散混合和扩散形成固体分散体。据报道,HME已经应用于生产植物药物的固体分散体(11]。聚乙烯醇caprolactam-polyvinyl acetate-polyethylene醇接枝共聚物(Soluplus®),一个新的热塑性聚合物,是一种两亲性分子,形成坚实的解决方案的设计和开发12]。在目前的研究中,超细研磨技术被用来减少颗粒大小,和HME被用来准备当归牡蛎Nakai固体分散体(AGN-SD)在聚合物基体。这项工作的目的是评估由超细粒径的影响减少powderization和固体分散形成HME抗氧化,抗炎,AGN的人工Kv1.3通道抑制活动。

2。材料和方法

2.1。材料和化学物质

四种不同处理AGN粉准备如前所述[13]。然后,这四种粉末在室温下与去离子水提取3次3 h。真空过滤后,上层清液集中支付的水提取物粗粉(WEC),水提取物的超细粉(WEU) HME粉(WEH)、水提取物和水提取物的AGN-SD(韦斯)。干样品称重和保存在冰箱里,直到进一步分析。2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH)、叔丁基羟基茴香醚(BHA), 2-deoxy-D-ribose,抗坏血酸,α生育酚、乙二胺四乙酸(EDTA), 3 - (2-pyridyl) 5、6-bis (4-phenyl-sulfonic酸)1,2,4-triazine (ferrozine)、丹宁酸、槲皮素、三氯乙酸(TCA),六水合氯化铝(AlCl₃h·6₂O)、Folin-Ciocalteu试剂、硝基蓝四唑(电视台),氯化铁,吩嗪methosulfate (PMS),β烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH), 1 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 3, 5-diphenylformazan (MTT)和有限合伙人(大肠杆菌0111:B4)购买的σ(圣路易斯,密苏里州,美国)。RPMI中1640和胎牛血清(的边后卫)从Gibco BRL获得(美国纽约大岛)。文化用品都来自BD猎鹰(BD,富兰克林湖,新泽西,美国)。

2.2。总酚和类黄酮含量的测定

得到四种不同提取物总酚含量是由Folin-Ciocalteu方法(14与一些细微的修改。总之,0.1毫升的样品或不同浓度的鞣酸与500年涨跌互现µL 10% Folin-Ciocalteu试剂。然后,反应是由增加400µL碳酸钠溶液(7.5%,w / v) 30分钟在室温条件下,混合物的吸光度为765 nm空白。总酚含量鞣酸被表示为毫克当量/ g使用基于校准曲线的方程。

估计总类黄酮含量,500年µL的样本(1毫克/毫升)是100年混合µL 10%的间变性大细胞淋巴瘤引起₃h·6₂啊,100µL 1 M醋酸钾,2.8毫升的去离子水和1.5毫升95%的乙醇。在室温下孵化了40分钟后,混合物的吸光度为415 nm空白。槲皮素被选为标准,槲皮素和数据被转换为毫克当量/ g。

2.3。还原能力测定

不同样品的还原能力能力决定根据辛格和Rajini[描述的方法15)做了一些调整。总之,反应混合物由1毫升的样品,2.5毫升的0.2米钠磷酸盐缓冲剂(pH值6.6),和2.5毫升的0.1%铁氰化钾。反应混合物在50°C孵化了30分钟。孵化后,体积2.5毫升的柠檬酸溶液(10%)被添加到混合物中,当时在3000转离心10分钟。上层的混合物(2.5毫升)混合同等体积的蒸馏水和0.5毫升的0.1%氯化铁溶液。吸光度是确定在700 nm的空白。抗坏血酸作为一个积极的控制。

2.4。超氧化物自由基清除实验

超氧化物自由基清除活性的不同样本以减少电视台根据之前报道的方法(16与一些细微的修改。反应混合物中含有1毫升的0.1米磷酸盐缓冲剂(pH值7.4),100年μNADH (468 Lμ100),μ电视台(150 Lμ米),20μ项目经理(60 Lμ米),and100μ每个样本的L。5分钟后在室温下孵化,对空白吸光度测量在560海里。没食子酸作为一个积极的控制。

2.5。金属螯合试验

金属螯合活性的不同样本测量使用先前描述的比色法(17]略微修改。总之,200年µ20 L的样本混合在一起µFeCl L 2毫米₂740年µL的甲醇。的反应是由添加40µL ferrozine 5毫米。10分钟后,溶液的吸光度对空白的决心在562海里。叔丁基羟基茴香醚和EDTA作为积极的控制。

2.6。DNA损伤保护试验

不同样本的DNA损伤防护能力分析中描述一个以前的报告18]。反应混合物包括4μ从原始264.7 L的DNA分离细胞,3μL(50毫米磷酸盐缓冲剂(pH值7.4),芬顿试剂(3μL 1毫米的摘要和4μL(0.1毫米H₂O₂),10μ每个样本的L。反应混合物在37°C孵化了30分钟。孵化后,通过添加5反应终止μ没食子酸的L。分析了DNA损伤1%琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色之后,可视化紫外线照射下使用凝胶Doc XR系统(Bio-Rad、大力神、钙、美国)。每个DNA带的光密度记录使用数量一个软件(Bio-Rad、大力神、钙、美国)。

2.7。细胞系,细胞培养

原始264.7老鼠巨噬细胞细胞系提供了美式文化集合(写明ATCC)(美国弗吉尼亚州马纳萨斯)。264.7原始细胞被镀成t 1640年RPMI - 75烧瓶和培养介质含有10% heat-inactivated青霉素、链霉素的边后卫和1%在37°C在湿润的气氛中95%的空气和5%的有限公司₂。

2.8。细胞生存能力分析

样品在原始264.7细胞的细胞毒性研究使用MTT试验。细胞被播种到96孔板的密度1×10⁵细胞/。孵化18 h后,细胞暴露在介质以及样品在不同浓度24 h。之后,媒体被仔细了,10µL (MTT方法在磷酸盐(5毫克/毫升)和90年µL FBS-free介质被添加到每个和孵化4 h在37°C。孵化后,彩色甲瓒晶体与200可溶性μL DMSO和量化的测量吸光度在490 nm使用酶联免疫吸附试验(ELISA)板读者。数据表示为控制光密度的百分比(OD)值为每个实验。

2.9。量化的没有和产生PGE2 LPS-Induced 264.7原始细胞

264.7原始细胞(1×10⁵细胞/)在96年被镀-细胞板和孵化18 h。中被移除,这些细胞被进一步孵化30分钟没有或不同浓度的样品。然后,他们与LPS刺激(1µ为额外的24 h g / mL)。接下来,100年整除μL细胞的培养基与100年涨跌互现μL格里斯试剂(1%磺胺naphthylethylenediamine盐酸盐在5%磷酸和0.1%)。5分钟后在室温下孵化,样品在550 nm的吸光度测量使用ELISA板读者。PGE2的水平是决定使用商用设备(恩佐生命科学、法明岱尔NY)根据制造商的指示。

2.10。逆转录-聚合酶链反应(rt - pcr)分析

264.7原始细胞被播种密度的5×10⁶细胞/在一夜之间6-well板。细胞与不同浓度的样品进行预处理与有限合伙人在孵化前30分钟(2μg / mL) 24 h。细胞总RNA分离试剂盒RNA隔离设备(美国表达载体,卡尔斯巴德,CA)。总RNA是reverse-transcribed cDNA用作cox - 2的模板PCR扩增,进气阀打开,TNF -α,il - 1β,il - 6, GAPDH: 5′-CACTACATCCTGACCCACTT-3′, 5′-ATGCTCCTGCTTGAGTATGT-3 cox - 2′, 5′-CCCTTCCGAAGTTTCTGGCAGCAG-3′, 5′-GGCTGTCAGAGCCTCGTGGCTTTGG-3伊诺′,5′-TTGACCTCAGCGCTGAGTTG-3′, 5′-CCTGTAGCCCACGTCGTAGC-3′TNF -α5′-TGGACGGACCCCAAAAGATG-3′, 5′-AGAAGGTGCTCATGTCCTCA-3 il - 1′β5′-GTTCTCTGGGAAATCGTGGA-3′, 5′-TGTACTCCAGGTAGCTATGG-3 il - 6′, 5′-CACTCACGGCAAATTCAACGGCA-3′, 5′-GACTCCACGACATACTCAGCAC-3 GAPDH′。PCR扩增分析了产品1%琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色之后,可视化紫外线照射下使用凝胶Doc XR系统(Bio-Rad、大力神、钙、美国)。

2.11。测定细胞内ROS

264.7原始细胞被镀在6-well盘子1×10的密度⁶细胞/ 2毫升培养基18 h和暴露于不同浓度的样品暴露在前30分钟2μ克/毫升有限合伙人。孵化24 h后,细胞治疗DCFH-DA (20μ在黑暗中M)为30分钟。然后,细胞被洗了三次与PBS 37°C和分离,用无菌细胞刮刀刮。细胞内活性氧测定通过流式细胞术(becton dickinson,富兰克林湖,新泽西,美国)的激发波长485 nm和发射波长535 nm)。

2.12。在卵母细胞的表达Kv1.3

cRNA被体外转录合成使用消息机器T7工具包(美国Ambion、奥斯汀、TX)和V和VI卵母细胞注入阶段手术与女性非洲爪蟾蜍光滑的(美国Nasco莫德斯托,CA)麻醉以0.17%三卡因methanesulphonate(σ,圣路易斯,密苏里州,美国)。注入卵母细胞保持在修改巴斯的解决方案包含88毫米氯化钠,氯化钾1毫米,0.4毫米CaCl, 0.33毫米Ca(没有₃)₂1毫米MgSO₄,2.4毫米NaHCO₃10毫米玫瑰(pH值7.4),50µg / mL硫酸庆大霉素在17°C。注射后的电流测量三到六天。

2.13。解决方案和电压钳记录从卵母细胞

正常的林格氏溶液含有96毫米氯化钠,氯化钾2毫米,1.8毫米CaCl₂1毫米MgCl₂,10毫米玫瑰(pH值7.4)被应用于卵母细胞连续灌注室,和解决方案交流3分钟内完成。10分钟后电流测量解决方案的交流在室温(20°C-23°C)与two-microelectrode电压钳放大器(美国华纳仪器,哈姆登,CT)。电极满心3 M氯化钾,2 - 4 MΩ阻力和1 - 2 MΩvoltage-recording电极和current-passing电极,分别。刺激和数据采集控制AD-DA转换器(数字1200,轴突工具)和pCLAMP软件(v5.1中,轴突仪器)。

2.14。统计分析

所有的测试进行了独立一式三份。数据表示为平均值±标准推导。单向方差分析(方差分析)是用来确定组间显著差异之后,邓肯的多个测试范围。组之间的差异被认为是重要的 。所有使用SPSS分析Windows 7版本20(美国SPSS Inc .,芝加哥,IL)。

3所示。结果

3.1。总酚和总类黄酮含量

表1显示了总酚和总类黄酮含量的水提取物的AGN与一个不同的过程。总酚含量WEC、WEU WEH,韦斯分别为25.94,36.33,22.05,和17.99毫克鞣酸等价物/ g,分别。在四个提取物、WEU含有最高浓度的黄酮类化合物槲皮素(6.77毫克当量/ g),这是紧随其后的是WEC(槲皮素5.55毫克当量/ g), WEH(槲皮素5.37毫克当量/ g),和韦斯(槲皮素4.74毫克当量/ g)。

3.2。抗氧化活性

WEU显示明显超氧化物自由基最强的清除作用与其他提取相比,在每个浓度(图1(一))。WEU回收65%以上的超氧化物自由基浓度时是700年μ克/毫升。然而,超氧化物自由基清除活性WEU明显低于没食子酸。WEH和韦斯表现出抑制高于WEC低浓度。的清除活动WEC WEH,韦斯在超氧化物自由基没有明显不同。

如图1 (b)韦斯显示,所有提取金属螯合活性最低。WEC韦斯并没有表现出明显不同的影响螯合亚铁离子在0.5和1毫克/毫升;然而,WEC的螯合效果明显强于WEH而增加的浓度。WEU显示,明显与其他提取相比,金属螯合活性最强。WEU螯合亚铁离子的浓度的98% 4毫克/毫升,这是相同的与EDTA的抑制。

所有提取显示浓度(图还原能力的活动1 (c))。WEU还原能力表现出明显强于其余提取所有的测试浓度,其次是WEH, WEC,韦斯。在所有WEU浓度分析,1000年μg / mL表现出最大减少功率比其余的浓度。然而,还原能力WEU能力低于抗坏血酸。

3.3。抗氧化活动和总酚含量之间的相关性

表2之间的相关分析显示抗氧化活动和总酚含量的水提取物的AGN有不同的过程。在这项研究中,相关分析表现出良好的总酚含量之间的相关性和超氧化物自由基清除活动(R²= 0.9631),金属螯合活性(R²= 0.7983),或减少权力活动(R²= 0.8965)。

3.4。DNA损伤的保护活动

AGN的保护作用的水提取物与铁的不同的流程^{2 +}/小时₂O₂全身的DNA损伤出现在电泳模式。如图2没有铁,DNA治疗^{2 +}/小时₂O₂显示明亮和宽带(巷1)琼脂糖凝胶电泳。之间的反应啊²•−和H₂O₂可以产生哦•在金属离子的存在。和哦•诱导DNA的氧化损伤。在这个结果中,DNA完全退化(巷2)治疗铁^{2 +}和H₂O₂。铁引起的DNA损伤^{2 +}/小时₂O₂减少的提取物(车道3、4、5、6)。在所有提取物、WEU显示最高的DNA损伤防护能力。

3.5。抗炎活性

细胞生存能力测试在不同浓度样品的线粒体减少MTT和表示为一个百分比的可行性对对照组,100%被认为是可行的。如图3(一个),264.7原始细胞治疗的可行性与韦斯明显高于其余提取物的浓度进行测试。细胞生存能力超过95%时,细胞治疗与韦斯。没有264.7 LPS-simulated原始细胞的生成以格里斯反应。没有内容在原始264.7细胞治疗显著韦斯是最低在每个浓度(图与其他提取相比3 (b))。韦斯显著抑制不生产了15.79%,52.87%,和74.88%的浓度100年,300年和500年μ分别g / mL。结果表明,韦斯抑制浓度的方式没有生产264.7 LPS-stimulated原始细胞。

如图3 (c)韦斯显示剂量依赖性抑制作用产生PGE2在LPS-simulated 264.7原始细胞。PGE2的生产被韦斯随着浓度显著下降。韦斯抑制500产生PGE2的浓度的65.62%μ克/毫升。rt - pcr进行评估的抑制活动韦斯在伊诺,cox - 2, il - 1β,il - 6 mRNA表达LPS-stimulated RAW264.7细胞。如图3 (d),进气阀打开,cox - 2, TNF -α,il - 1β在治疗后,il - 6表达增加与有限合伙人。韦斯明显抑制伊诺的表达,cox - 2, il - 1β264.7,il - 6浓度增加LPS-stimulated原始细胞。韦斯减少伊诺,cox - 2, il - 1β几乎相同的水平和il - 6表达,治疗没有LPS浓度达到500μ克/毫升。韦斯并不影响辅助基因表达,TNF - mRNA水平α没有抑制LPS-stimulated生下264.7细胞。

ROS水平LPS-induced 264.7原始细胞治疗与韦斯测量荧光探针DCFH-DA流式细胞仪系统。如数据所示3 (e)和3 (f)、低ROS水平被发现在控制细胞。然而,ROS水平显著增加,细胞治疗与有限合伙人。有限合伙人显然刺激了ROS生成。韦斯显著抑制ROS生成LPS-induced 264.7原始细胞。ROS水平降低了韦斯随着浓度增加,在500和ROS水平是最低的μ克/毫升。

3.6。抑制影响人类Kv1.3通道

AGN的水提取物的抑制效果不同的流程在人类Kv1.3通道电流呈现在图4(一)。1秒去极化的结果从持有60 + mV的潜力−80 mV在控制条件下,暴露在提取被表示为叠加Kv1.3当前的痕迹。在控制条件下,Kv1.3电流迅速激活,达到一个峰值。然后,Kv1.3电流慢慢灭活的去极化脉冲的维护。在WEC或WEU,电流的峰值振幅降低;然而,当前衰变的时间进程没有影响。韦斯WEH明显降低电流的峰值振幅和影响电流衰减的时间进程。100、300和500μg / mL韦斯峰电流降低40.2%±5.5%,55.4%±8.9%,分别为78.3±7.5%(图4 (b))。

4所示。讨论

酚类化合物和黄酮类化合物广泛分布于植物、蔬菜、水果和被认为是强大的在体外抗氧化剂由于他们捐赠氢或电子的能力,和他们形成稳定的自由基中间体(19]。在目前的研究中,WEU中总酚和类黄酮含量最高,其次是WEC, WEH,韦斯。超细粉的粒度明显小于粗粉。结果表明,减少粒度超细磨技术可能会增加水提取物中总酚和类黄酮含量的AGN。超细粉碎技术是一种技术,它是一个有用的工具制造超细粉具有良好的表面属性(可分散性和溶解性)、流动性、持水量、溶解度;此外,它可以增加溶解度和吸收的营养成分20.]。超细磨后,纤维矩阵改变或破坏,导致一些酚类化合物链接或嵌入矩阵被释放或暴露21]。尽管AGN的粒径也HME后显著降低,总酚和类黄酮含量WEH或韦斯比WEC显著降低。原因可能是HME摧毁了总酚和类黄酮含量AGN或减少萃取率。HME技术更有用的营养损失低于其他热处理技术。几个HME变量会影响完成产品的组成。其中包括原材料特点、混合和调节的原料,桶温度,压力,螺杆速度和含水率。复杂的条件往往有能力产生负面影响的生物活性化合物HME产品。例如,刀豆的多酚含量和抗氧化活性显著降低HME处理后(22]。同样,在大豆/玉米HME混合物,大大降低了总多酚和抗氧化活性观察(23]。饲料水分含量(12 - 18%)和桶温度(150°C - 175°C)导致总酚含量显著下降(24]。桶温度和水分含量高也可能引起酚类化合物脱羧,然后可以促进聚合酚类和单宁,导致减少可萃取性和抗氧化活性25,26]。

生成大量过氧化物自由基在体内多种代谢和生理过程(27]。我们已经了解到,超氧化物自由基的前身是单氧和羟基自由基和非常有害的一些细胞组件(28]。提取的超氧化物自由基清除能力是由PMS-NADH过氧化物生成系统并与没食子酸。过渡金属离子可以促进活性氧的生产,如氢氧自由基和过氧化物自由基,诱导氧化的不饱和脂质,促进氧化损伤(29日]。因此,金属螯合活性的标准来评价抗氧化剂的抗氧化活性。此外,还原能力也给潜在的有价值的信息,测试样本可以用作抗氧化剂代理,因为抗氧化剂减少服务代理和氧化结束正在进行的体内氧化反应系统(30.]。在所有的测试样品,WEU显示最好的效果在所有抗氧化分析包括超氧化物自由基清除实验,金属螯合试验,还原能力测定。在这项研究中,总酚含量与抗氧化活动表现出良好的相关性。这表明,总酚含量起到了决定性的作用在AGN的水提取物的抗氧化活动。基因组的稳定和正常的生命周期细胞DNA损伤的影响已与细胞周期调控,修复途径和细胞死亡机制(31日]。DNA完整性可以受多种因素影响,包括自发的细胞过程,如活性氧的生产。因此,DNA损伤防护活动通常是用来描述抗氧化功效。在DNA损伤保护试验,WEU还显示最强的保护能力对DNA损伤WEC紧随其后,WEH,韦斯。排名是相同的与总酚含量。

不,这是一个短暂的自由基,在调解过程中发挥作用等生物功能血管内稳态,神经传递,抗菌防御和抗肿瘤活动32]。然而,它已经表明,增加生产与炎性组织损伤的发病机制和一些其他疾病。我们现在研究MTT分析用来确定四个样品原始264.7细胞细胞毒性的影响。韦斯没有关系的生产的抑制作用与细胞毒性MTT试验评估。最好的没有抑制作用,鉴于noncytotoxicity的特点,韦斯被选为未来的研究。PGE2已被确定为主要的前列腺素在急性炎症和慢性疾病,如风湿性关节炎、炎症性肠病(33]。因此,PGE2代药理学的干扰被认为是一个途径来缓解很多疾病由巨噬细胞介导的激活(34]。在我们的研究中,韦斯有效地抑制产生PGE2 LPS-stimulated 264.7原始细胞。伊诺是激活巨噬细胞的转录表达的产物,是长期而深刻的生产没有的原因(35]。cox - 2是一种诱导酶,和超表达被认为是参与各种炎症性疾病的发病机理,血管生成和肿瘤细胞入侵(36]。伊诺和cox - 2的表达产生过量的没有和PGE2的生成37]。在目前的研究中,信使rna伊诺和cox - 2的表达被韦斯减毒治疗,这可能表明,韦斯抑制生产没有和PGE2的表达下调伊诺和cox - 2的表达水平。促炎细胞因子、肿瘤坏死因子-α、il - 6和il - 1β导致一些炎症相关疾病的发病机理。il - 6是一个关键的防御炎症细胞因子,il - 6生产和失调有关的发展各种自身免疫性炎症性疾病(38]。已经证实il - 1β可以增加几乎所有其他细胞因子的表达39]。

在这项研究中,我们发现,韦斯减毒的mRNA表达il - 6和il - 1β。然而,韦斯没有表现出对抑制肿瘤坏死因子-一个戏剧性的效果α表达式。多余的细胞内ROS可以增加ROS-sensitive通过激活炎症信号通路和下游转录因子,最终增加炎症的基因表达(40]。我们的研究结果表明,韦斯发挥了抗炎作用在LPS-stimulated巨噬细胞细胞抑制活性氧的生产。

在前面的研究中,Kv1.3阻滞剂肽毒素明显显示活动抑制T-cell-mediated炎症反应(41]。在这些研究的基础上,Kv1.3阻滞剂可能有炎症和自身免疫性疾病的治疗效果42]。在我们的研究中,水提取物的AGN Kv1.3拦截器上采取行动抑制Kv1.3频道,这可能是AGN显示抗炎活动的根本原因。Kv1.3渠道和炎症相关的信号通路相关的需要进一步研究。

5。结论

我们表明,超细的过程powderization AGN有效改善AGN的抗氧化活性提高的总酚和类黄酮含量和总增加超氧化物自由基清除,金属螯合,减少权力,和DNA损伤的保护活动。此外,固体分散体的形成AGN基于Soluplus®通过HME显著提高抗炎活动通过抑制生产的不,PGE2,细胞内ROS和表达下调的基因表达伊诺,cox - 2,促炎细胞因子il - 6和il - 1β。固体分散体的AGN基于Soluplus®也表现出更好的抑制作用在人类Kv1.3通道。目前的研究表明,超细powderization和固体分散形成通过HME AGN适用的方法来开发一个新的产品可以最大化药理效应。同时,它鼓励进一步发展和应用在超细powderization和HME过程。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项工作是由中国国家自然科学基金资助(81803772)、中国国家基础研究计划(973计划、2015 cb554400)和项目资助的中国博士后科学基金会(2017 m611126)。