文摘

β-Carbolines (βCs)属于天然生物碱的家庭,来自9 h-pyrido (3、4 b)吲哚,也称为norharmane (Hnor)。知道的重要性β家庭Cs生物碱在生物过程中,全面结合研究报道四Ag) (I)的化合物含有配体Hnor counteranions不同,即没有3−,克罗4−,男朋友4−,PF6−,与人血清白蛋白(HSA)作为模型蛋白。不同的方法如紫外、荧光光谱、圆二色性(CD)和分子对接研究被用于这一目的。荧光结果建立绑定的现象Ag (Hnor)复合物HSA可以推导出静态猝灭机制。结果显示重要的绑定倾向使用Ag对HSA (I)的化合物。的角色绑定的counteranion Ag) (I)的化合物HSA似乎是非凡的。化合物(克罗4−)和(不3−)被发现最有效的绑定对HSA男朋友相比4−和PF6−。圆二色性(CD)研究明确表示,构象HSA的二级结构的变化引起的Ag) (I)的化合物的存在。此外,αHSA的螺旋结构被发现变成了β片状的结构。有趣的是,(克罗4−)和(不3−)化合物被发现产生最大量HSA的二级结构的变化。这项研究的结果可能有助于理解蛋白质的倾向参与神经系统疾病(如阿尔茨海默病和帕金森疾病)接受类似的过渡的Ag -β咔啉化合物。

1。介绍

银应用的历史,从它的使用在硬币和珠宝。女人喜欢用各种小饰品的银色装饰自己,但它是不为人知的一面,那这种金属可以是一个很好的metallotherapeutic代理。在人体内,银(Ag)不是作为一个内生金属和展品毒性相对较低。Ag)与多种配体配位化合物(I)氮,磷,和/或硫供体原子在药用大型应用程序和分析化学1,2]。具体来说,抗菌和抗真菌的行为(Ag) (I)的化合物是众所周知的3- - - - - -7]。银化合物的性质,如溶解度、光稳定性、生物活性,可以修改通过改变有机配体的数量和类型(1- - - - - -7]。此外,在最近的过去,Ag) (I)的化合物也被报道显示抗癌活性和显示活动与临床化疗药物(顺铂)8- - - - - -11]。

人血清白蛋白(HSA)负责大约60%的血浆蛋白在人类和负责近80%的血液的渗透压,它在药物代谢中起着重要的作用和功效12]。各种药物结合可逆血清白蛋白和其他组件,因此功能作为航空公司(13]。血清白蛋白是增加许多药物的溶解度在等离子体和调节细胞的交付在活的有机体内和在体外(14- - - - - -16]。因此,它是相关研究的候选药物的相互作用的蛋白质。

Norharmane 9 h-pyrido (3、4 b)吲哚,属于一种生物碱,而非传统的配体,家庭β-carbolines (βCs)。分子可以作为协调配体,一个H-bonding供体/受体,也可能采取行动π- - - - - -π叠加;所有这些属性可能在协同行动。的化学结构示意图norharmane包括在图中1。


图1
配位体的结构9 h-pyrido (3、4 b)吲哚(Hnor)和四个使用Ag) (I)的化合物。

β-Carbolines存在于许多植物、节肢动物和昆虫。从内部,这些生物碱合成色氨酸或tryptophan-like吲哚胺和尿液中还发现,血浆、血小板(∼0.1海里),在哺乳动物。有趣的是,饮酒和吸烟后,β咔啉浓度增加至1.0∼海里。这也是众所周知,一些β咔啉衍生物在光激励诱导染色体损害在哺乳动物细胞和可能解除病毒和细菌(17]。此外,取代芳香β-carbolines可能进入大脑跨越血脑屏障(BBB)和可能会被特定的酶转化成甲基衍生物,如甲基转移酶。一些β9-dimethyl -carbolines像2日—β-carbolines展出线粒体损伤导致神经毒性,而9-methyl-harmine有神经保护作用。β咔啉化合物也被认为是减少所谓的tau蛋白的磷酸化形式的表达,强有力地在多个阿尔茨海默疾病相关网站(17- - - - - -20.]。

在先前的研究中,我们已经表明,化合物的成分(Ag) (Hnor)2](阴离子)显示显著的抗癌活性阴离子,也就是说,没有3−,克罗4−,男朋友4−,PF6−,克罗4−化合物被甚至与顺铂在两个不同的癌症细胞系(21]。探索行动的可能的分子机制,我们决定进行一项研究的蛋白质绑定的四个银化合物(1 - 4)与Hnor不同离子领域通过改变counteranions,即使用3−,克罗4−,男朋友4−,PF6。HSA被选为模型蛋白结合研究。光谱技术、紫外、荧光光谱和圆二色性(CD)技术已被选定。最后,Ag) (I)的化合物的相互作用的蛋白质进行了研究使用分子建模。

2。实验部分

2.1。起始原料和合成

AgNO3,AgClO4,AgBF4,AgPF6、DL-tryptophan和甲醛是从Sigma-Aldrich购买的。人血清白蛋白(HSA);美国≥99%,σ)是脂肪酸自由和球蛋白免费,从σ购买,作为收到。我们合成了四个Ag) (I)的化合物如之前所述[21]。其他标准实验室化学物质被用作可用。对蛋白质折叠的研究主要是在缓冲进行稀释水解决方案,以避免损失的蛋白质聚集现象。股票的解决方案HSA (300µ米)和Ag) (I)的化合物的混合物也准备了二甲亚砜(5%)DMSO溶液和95%磷酸盐缓冲剂(20毫米)的pH值7.4(即。,远高于HSA的等电点,pH值4.7;因此,蛋白质具有净负电荷pH值)。电导率溶液中研究了通过使用一个Accumet AB30费舍尔科学电导计甲醇溶液在室温下的化合物。

2.2。蛋白结合研究

HSA的样品准备在20毫米磷酸盐缓冲剂(pH值7.4),而银复合物(1毫米)股票的解决方案准备在DMSO和进一步稀释20毫米磷酸盐缓冲剂达到所需的浓度。在所有的样品,最后DMSO溶液的浓度不超过1%。HSA的浓度测定用比尔-朗伯定律的摩尔消光系数36500米−1·厘米−1在280纳米。研究在HSA的结构性变化(Ag) (I) (Hnor)2](阴离子)化合物,紫外吸收光谱测定,通过变化(Ag) (I)的浓度(Hnor)2](阴离子)化合物,同时保持HSA的浓度不变。紫外吸收光谱,从240纳米到320纳米,被记录在一个优秀的λ45分光光度计25°C。用石英比色皿1厘米的路径长度的测量。荧光测量进行日立荧光谱仪(模型F 7000)配备了电脑。荧光光谱收集25°C的路径长度细胞1厘米。使用的狭缝宽度与蛋白质浓度的5 5海里µm .激发波长用于蛋白质是295海里。

CD进行测量Jasco分光偏振计(模型j - 815)配备了微机。仪器校准D-10-camphorsulfonic酸。所有的CD测量进行25°C与恒温控制的细胞支架,连接到Neslab rte - 110水浴的精度±0.1°C。收集光谱扫描速度为0.2 nm /分钟和1 s的响应时间。每个光谱作为三个扫描的平均值。远紫外CD光谱测定蛋白质浓度的20倍µM路径长度为1厘米。

所有的光谱记录后平衡反应混合物的5分钟。

2.3。分子对接

执行的刚性分子对接研究使用十六进制8.0.0软件(22),这是一个互动的分子图形程序计算和显示可能的对接模式的蛋白质。十六进制8.0.0执行蛋白质对接使用球面极坐标傅里叶相关性(23]。十六进制8.0.0需要配体和受体在PDB格式作为输入。用于对接的参数包括以下:相关类型:形状;FFT模式:3 d;网格尺寸:0.6;受体范围:180;配体范围:180;捻度范围:360;和距离范围:40。化合物的坐标1和2被从其晶体结构作为.cif文件并转换为使用汞PDB格式的软件。Te晶体结构的人类血清白蛋白(h9z PDB ID: 1)从蛋白质数据银行下载(http://www.rcsb.org./pdb)。可视化的最低能量有利停靠姿势一直使用发现Studio 4.1(执行24]和PyMOL [25]。

3所示。结果与讨论

3.1。一般观察和合成

合成的四个Ag) (I)的化合物,即[Ag (Hnor)2(克罗4)(1),[Ag (Hnor)2)(不3)(2),[Ag (Hnor)2(MeCN)] (PF6)(3),[Ag (Hnor)2](男朋友4)(4),是通过溶解开始Ag)盐和Hnor乙腈(比1:2);他们是根据程序报告的一些我们以前21]。甲醇溶液中电导率的研究(1 - 5毫米)表明,化合物表现为1:1电解质。鉴于Ag)的已知的动力学不稳定性(我),假设Hnor配体可以使分离和副Ag)离子,在解决方案,但平均来说,他们主要是协调。配位体的结构示意图和使用Ag) (I)的化合物是描绘在图1。

3.2。HSA绑定的研究

生物活性小分子之间的相互作用和蛋白质受体在药物发现过程中是一个基本步骤。获得全面的蛋白质之间的相互作用与化学物质起着至关重要的作用在一些疾病的病因。protein-drug中间产品参与管理各种生化现象在正常和病变细胞都扮演着一个重要的角色在代谢治疗化合物和他们的运输26,27]。

3.2.1之上。紫外吸收的研究

绑定的候选药物与生物分子的倾向是第一个使用紫外线技术研究。累积吸收三种芳香族氨基酸残基的吸收峰产生280海里的人血清白蛋白(HSA) (28]。图2显示了HSA的紫外吸收光谱(Ag) (I)的缺失和存在(Hnor)2]克罗4。其他3个化合物(化合物的行为2 - 4)非常相似,这些数据呈现在图S1(见补充材料)。


图2
紫外吸收光谱差异HSA (5µ米)。这些光谱代表化合物1在1的影响µ米和3µM浓度。(差光谱HSA-Ag获得的化合物光谱- Ag复合光谱)。

与随之而来的Ag) (I)的化合物的浓度增加,HSA的吸光度增加,,向长波长变化观察;Ag) (I)的化合物给一个明确的模式与弱紫外可见光谱吸光度在更高浓度之间的295和320海里,归因于Hnor配体”。“深刻的增强紫外吸光度(hyperchromism)与红移(增色效应)7海里(1),5纳米(2),5纳米(3),6 nm (4)的光谱是暗示Ag)之间的加合物的形成/中间体化合物(I)和保险公司。HSA是已知的作为一个重要的细胞外的抗氧化剂,这抗氧化剂属性驻留在一个自由cysteine-derived redox-active硫醇(sh)组(即。,Cys34),这可以发生在减少或氧化形式。Ag)(我)被一个柔软的路易斯酸,其化合物是已知的具有较高的亲和力对sulfur-ligand对供体原子氮原子和温和的亲和力。然而,绑定Ag) (I)对蛋氨酸(遇到)/组氨酸二硫化(他)残留和桥梁,和氮原子,如deprotonated肽氮、亚胺、吲哚氮,也不能完全排除(29日,30.]。然而,这些化合物1 - 4相当稳定的解决方案。

HSA的不同光谱证实,构象变化HSA将绑定(图Ag) (I)的化合物3和图S2在补充材料)。然而,绑定的变化程度/模式表现出化合物HSA的光谱可能与counteranions的影响有关。阴离子可能促进蛋白质的微环境的变化,暴露目标的子域名的蛋白质来帮助或增强金属中心的选择性,也就是说,Ag)(我)。阴离子的影响研究与分子对接的帮助下,进一步了解他们的角色。阴离子的可能作用计算模型研究部分中讨论。然而,Ag) (I)的化合物的分离是一个主要关注的问题,我们也研究过,发现相当稳定复杂Ag) (I) -Hnor协会。沈et al。31日]研究了Ag)之间的交互+单独与HSA的。当我们比较这些Ag)化合物与Ag)的结果+孤独,银化合物表现出显著值得绑定倾向与Ag)+一个人。在下一阶段,目的是获取更多信息的绑定模式与HSA Ag) (I)的化合物,溶液荧光进行了研究。


图3
HSA的荧光发射光谱(5µ米)在不同浓度的[Ag) (I) (Hnor)2]克罗4。曲线1到10对应化合物浓度0,0.5、1、1.5、2、3、4、5,7.5,10µM,分别,当兴奋在295海里。
3.2.2。发光研究

金属化合物和蛋白质之间的相互作用已被广泛研究,利用荧光光谱(32- - - - - -34]。HSA的发光反应,添加不同浓度的Ag) (I)的化合物,研究了在20毫米磷酸盐缓冲剂通过使用一个发射滴定实验。初步开始发光研究的四个Ag)化合物1 - 4早些时候报道了我们中的一些人(21]。在290 nm激发所有四个化合物导致一个强大的发光乐队在370纳米左右。配体的荧光研究“Hnor”以及免费的银盐,”AgNO3”,还研究了在相同条件下比较独立的实体的影响,两者的结合。激发态在295 nm,荧光强度约340纳米是反映色氨酸残基的微环境的变化(35]。令人鼓舞的是,HSA大大减少被发现的发光的存在增加的浓度(Ag) (I) (Hnor)2]克罗4,如图4。在图S3,类似的数据给出化合物2 - 4对阴离子变异,只有边际差异。


图4
HSA荧光猝灭的Stern-Volmer情节(Ag) (I) (Hnor)2]克罗4在295纳米。插图:情节的日志(F 0−F)/F日志(复杂)的函数。

逐渐减少观察HSA的发光Ag) (I)的化合物的浓度增加显示显著的最大发射波长红移的酪氨酸酪氨酸和色氨酸(Trp)残留7海里(1),5纳米(2),4海里(3),4海里(4),这表明HSA的构象改变极性的降低酪氨酸和Trp残留物和疏水性增加。连续、渐进的Ag) (I)的化合物导致HSA的荧光强度进一步降低,这也是表明Ag)之间的强相互作用(I)的化合物和保险公司。荧光的因素与淬火可以联系在一起,例如,激发态反应,能量转移,分子重组,碰撞淬火和/或复合形成极化子(36,37]。因此,这些分子相互作用的结果执行向静态猝灭,包括建立一个基态荧光团和冷却器之间的加合物。静态绑定过程中淬火的参与可以确定的帮助下分析了双分子的猝灭常数的值(K问)。的值K问高于2.0×1010米−1·年代−1反映了淬火是静态的(38- - - - - -40]。

Ag)化合物与HSA的交互是量化;Stern-Volmer方程已经被使用(41]: 在哪里 和 稳态荧光强度在冷却器的缺失和存在在340 nm,分别。 是Stern-Volmer猝灭常数, 代表双分子的猝灭常数, 荧光团的生命周期在没有饮料,然后呢 是饮料的浓度(即。Ag复合)。通过计算淬火速率常数, ,一个可以区分静态猝灭和动态猝灭,这是评估通过以下方程:

τ(零)的价值, ,为生物聚合物是10−8年代。(33]Stern-Volmer猝灭常数 的荧光滴定Ag) (I)的化合物在HSA的解决方案是计算之间的线性关系 和[Ag)(我)(Hnor)2]克罗4(图5),列入表中1。在图S4,类似的数据给出化合物2 - 4,证实了上述的观察。

(一)
(一)
(b)
(b)
图5
HSA的荧光发射光谱(5µ米)在不同浓度的(a) (Ag) (I) (Hnor)2]克罗4复合1+额外KClO4和(b) (Ag) (I) (Hnor)2)没有3复合2+额外KClO4对应化合物浓度的1.0,2.0,4.0,7.5,和10µM,分别,当兴奋在295海里。
表1
Stern-Volmer猝灭常数和双分子的猝灭速率常数的交互HSA和四个Ag) (I) Hnor化合物。

因此,这些数据确定静态猝灭的交互与HSA Ag) (I)的化合物,通过计算值 。自由和约束分子之间的平衡,当小分子结合独立高分子一组类似的网站,确定了修改Stern-Volmer方程(42]: 在哪里 和 结合常数和结合位点的数量,分别。的一块 与 被用来确定的价值 和 (插入图5)。几个部队,如静电、氢键、范德华疲软,疏水,和空间联系,可以认为负责白蛋白之间的交互和Ag)的化合物。绑定的值不变, ,被用来计算标准自由能变化ΔG°HSA结合的配体,通过使用关系(42]:

的值K,n,ΔG(绑定)展示在表1。所有估计的值n大约1,表示只有一个主要结合位点的存在HSA目前Ag) (I)的化合物。

互动的程度与HSA Ag) (I)的化合物被发现的顺序1(克罗4−)>2(没有3−)>4(男朋友4−)>3(PF6−),它可以关联到counteranions的影响的差异。因此,化合物1(克罗4−),2(没有3−)表现出明显高于绑定对HSA亲和力,相比其他两个化合物。

因为众所周知,HSA是单体的,物种三域分类,别构蛋白只有一个免费的半胱氨酸,Cys34, Ag) (I)离子选择性地结合在这个网站,因为它有很强的偏好S-donor原子。可以假定counteranions也促进了微环境变化和可能导致的子域名Cys34 HSA的曝光和促进半胱氨酸的硫原子坐标的Ag) (I)的化合物。然而,已知的亲和力Ag) (I)的残留和二硫桥和氮原子HSA的协调这些网站完全不容忽视。支持这一假设观察到蛋白质的微环境变化的程度要高得多的额外的克罗4−也没有3−阴离子(见下文),同意的趋势(表绑定参数1);因此,一个更深远的影响在Ag) (I)的化合物及其HSA交互。

3.3。添加额外的阴离子的影响

考虑到抗癌活性最高,也最重要HSA交互发生在硝酸高氯酸盐和盐的情况下,它是决定添加额外的高氯酸盐(硝酸)所有病例和研究对亲和力的影响。所以,我们进行了两组实验,研究了具有约束力的倾向与HSA Ag) (I)的化合物。在一个实验中,额外的克罗4−阴离子中添加1:4比,相比Ag)化合物。在第二个实验中,我们使用额外的硝酸盐与Ag) (I)的化合物。给出了数据的细节6和7,非常相似的细节对于其他3化合物提出了数字S5和S6在补充材料。


图6
Stern-Volmer情节(HSA荧光猝灭的1)[Ag)(我)(Hnor)2]克罗4和(2)[Ag)(我)(Hnor)2)没有3额外KClO4了解3在295纳米。

图7
远紫外CD光谱HSA-compound系统(HSA = 20µ米)在不同浓度的[Ag) (I) (Hnor)2]克罗4复杂。曲线从1到6对应化合物浓度0,20、40、60、80和100毫米。

确定只有阴离子的作用(即。,没有Ag)和Hnor),我们也KClO使用4了解3和研究他们的储蓄帐户绑定变量通过添加大量的阴离子浓度最大的实验中使用。我们发现KClO之外的4了解3HSA,只有发生了HSA结构的干扰可以忽略不计。因此,这些阴离子(ClO的效果4−了解3−)HSA构象的影响相比,可以忽略Ag)化合物和Ag) +其他阴离子化合物HSA构象。额外的负离子+化合物滴定时,获得的结果确实显示一个指数增加亲和力Ag) (I)的化合物。

这些发现可以归因于增强曝光HSA的半胱氨酸硫原子,最有可能重要的静电效应造成的额外的阴离子。这种行为是指示性的增加HSA的微环境的变化,从而使更多的绑定Ag) (I)中心的协调HSA结合位点。

结合强度是评价通过计算Stern-Volmer常数(Ksv),一个结合位点的数量(n(Δ)和吉布斯自由能G);(表2)。应该注意的是,克罗的影响4−是相当高的,而没有3−和男朋友4−相互展览几乎类似的效果,而PF6−阴离子结束时显示一个小的效果。然而,与这四种阴离子的大小无相关性。

表2
参数的交互HSA和Ag) (I)的化合物添加额外的离子,即克罗4 −也没有3 −。

阴离子的影响也进行了分析的基础上,结合常数(K)研究绑定关联。结合常数的值表现出一个充满活力的存在增加额外的阴离子特别是与克罗4−也没有3−相比,复合物的结果1和2。在配合物1和2,额外的克罗4−显示显著增加亲和力比额外的没有3−从表明显2(K值)。这个指数级的增加104说了很多关于阴离子的作用较强的亲和力与HSA的银化合物。绑定Ag) (I)的化合物的顺序与HSA上额外的离子被发现1>2>4>3。因此,很明显,结合位点的数量(n在添加额外的阴离子)增加。

3.4。绑定和构象变化的圆二色性

CD光谱是一种理想的蛋白质的构象变化监测技术。如图8,免费的CD谱HSA(1号线)展览两个消极的乐队在208 nm和222 nm紫外线区域,归因于n- - - - - -π 转移的肽键,积极的椭圆率在193 nm,的特点αHSA的螺旋结构(43]。CD通常允许几乎所有的二级结构变异、获取信息等α螺旋,β表,β结果,随机线圈结构。所有这些结构提供起源的不同形式和程度的远紫外区域。修改的椭圆率在222 nm (−MRE222)方便观察和量化方法的变化α螺旋的内容(44]。CD光谱中记录的存在和缺乏各种Ag) (I)的化合物的浓度呈现在图8。其他三个化合物的类似CD曲线如图S8,因为他们表现出类似的行为。

(一)
(一)
(b)
(b)
图8
绑定的化合物(a)1和(b)2在不同HSA的结合位点。

millidegree CD信号,表示,获得190 - 250 nm波长范围,是转化为平均残渣椭圆率(绝笔,θ),使用下面的转换: 在哪里 在millidegree CD,氨基酸残基的数量(585)是由吗n”,l“是路径长度(厘米), 物质的量浓度。绝笔的单位为度·厘米2·dmol−1。

的α螺旋的内容自由和结合HSA绝笔的计算值在222 nm,使用下面的方程(43,45]:

随着浓度的Ag) (I)的化合物,CD信号展品椭圆率显著变化,这一变化证实了化合物与HSA的绑定的骨干(光谱2 - 6,图8)。事实上随着浓度的化合物的椭圆率减少。然而,在高浓度的银化合物,二级结构的转换(例如,α螺旋,β观察表)。

结果确认化合物结合主多肽链的氨基酸残基在HSA,扭曲其氢键网络。有趣的是,减少α螺旋内容表明大量的微环境的变化HSA的多肽链,这增加了一些疏水区域的接触,以前淹没。蛋白质的微环境的变化被发现的情况下更加明显1(克罗4−),2(没有3−),相对于其他两种化合物(表3)。所有研究的结果证实荧光和紫外研究的结果。

表3
Ag) (I)的化合物的影响α蛋白质HSA的螺旋结构(模型)的百分数表示α螺旋的性格。
3.5。分子对接

提供进一步的互动和深入洞察HSA的化合物1和2,分子对接技术来了解更多关于在分子目标HSA的结合位点。从晶体蛋白的三维结构,众所周知,HSA由三个同源域,组装成一个心形的分子,表示I, II, III:我(残留1 - 195),二世(196 - 383),三世(384 - 585)。化合物的主要地区1结合位点HSA位于疏水腔的子域活动花絮和iii a, I和II相应网站,分别和色氨酸残基(trp - 214)子域名HSA的花絮。大的疏水空腔的子域名花絮(I)的结合位点,以适应化合物1存在,而复合2第三优先似乎绑定的网站。最低能源停靠模式(图9(一个))表明,复合1主要是位于HSA的子域名活动花絮,形成大量的疏水性联系人(π-σ,π- - - - - -π堆放,π烷基)与GLN196 HIS242、LYS199 LYS195, CYS200, CYS245, CYS245残留的疏水结合位点花絮(图10 ())。此外,还大量的氢键和特定的静电作用形成的化合物1观察(表4)。

(一)
(一)
(b)
(b)
图9
(一)分子对接模型化合物1(坚持表示)位于子域名的疏水口袋HSA的花絮;(b)的分子对接模型化合物2(坚持表示)位于子域名的IB HSA的疏水口袋。
(一)
(一)
(b)
(b)
图10
共价相互作用的化合物(a)1和(b)2在子域活动花絮和HSA的IB,分别。
表4
共价化合物的相互作用1与HSA绑定网站活动花絮。

由此产生的对接模式(图9 (b))表明,复合2位于子域IA和IB,形成各种共价相互作用,如氢键、静电和疏水结合腔内残留。表中给出了详细描述5(图10 (b))。这些共价相互作用形成的化合物1和2由疏水接触,额外的稳定也借助于氢键和静电作用结合位点的极地残留腔。之前已经观察到(46,47),氢键和静电作用降低了亲水性和疏水性增加compounds-HSA系统稳定。的相对结合能对接结构被发现−−344.74和326.31焦每摩尔1和2,分别。分子对接的结果研究表明,疏水力量主导Ag)之间的相互作用与HSA的化合物。值得注意的是,绑定的化合物1和2不同的网站可以在很大程度上与离子球的差异有关。

表5
共价化合物的相互作用2第三与HSA结合位点。

找出反离子的影响在HSA绑定,我们还执行个人的对接反离子(硝酸根离子和高氯酸盐离子)与HSA(图S9)。最低能源停靠姿势,硝酸和高氯酸盐离子在外部环境结合位点的花絮和iii a域,分别。这些阴离子形成静电和其他共价相互作用在这些领域,这可能是负责微环境变化或蛋白质的构象变化。所以存在硝酸盐和高氯酸盐离子的复杂可能促进或提高了绑定倾向(见表S1和S2在补充材料),同样明显的是绑定常量值的阴离子的存在。因此,它具有影响力的作用在生物分子结合。这个观察证实了重要作用的阴离子与生物分子的交互模式。

4所示。结束语

β-Carbolines主题穿过血脑膜(BBM)和被抑制的磷酸化形式τ蛋白(9]。这些禁忌的基本特性研究对于任何新的化合物来治疗疾病,如阿尔茨海默氏症。光谱光度测量的方法被用来研究之间的交互HSA和目前Ag) (I)的化合物。所有Ag) (I)的化合物对HSA显示强大的亲和力。额外的高氯酸盐和硝酸盐阴离子被发现在绑定的研究中,确定了更高的约束力的倾向与counteranions ClO Ag) (I)的化合物4−也没有3−。温和HSA绑定在男朋友的情况下4−和PF6−盐可以通过添加额外的阴离子,增强即克洛4−也没有3−。结果显示重要作用的阴离子Ag-HSA绑定,甚至显示绑定一个指数增加倾向Ag) (I)的化合物。这种亲和力归因于增加曝光的Ag-binding HSA的子域,由于静电和疏水相互作用。Hnor的存在,尽管是一个不稳定的配体,对绑定HSA似乎是重要的。阴离子的影响进一步验证由分子建模研究证实与我们的研究结果具有约束力的研究和确定阴离子在绑定HSA发挥重要的作用。

缩写

保险公司: 人血清白蛋白
CD: 圆二色性
半胱氨酸: 半胱氨酸
满足: 蛋氨酸
Hnor: 9 h-pyrido (3、4 b)吲哚(norharmane)。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

阿里Alsalme和莱斯艾哈迈德汗了同样的工作。

确认

作者扩展他们的感谢院长以来在沙特国王大学科研资助这项工作通过研究小组rg - 1438 - 006。

补充材料

图S1: HSA没有紫外吸收光谱的影响和存在的化合物1 - 4;浓度(HSA) = 5 m图S2:紫外线吸收的差异HSA(紫外吸收光谱的差异是通过HSA-Ag化合物光谱- Ag复合光谱)。图S3: HSA的荧光发射光谱(5 米)在不同浓度的化合物2,3,4;曲线从1到10对应化合物浓度0,0.5、1、1.5、2、3、4、5,7.5,10µM,分别,当兴奋在295海里。图S4: Stern-Volmer情节的淬火HSA荧光化合物2,3,4在295纳米。插图:情节的日志(F0- - - - - -F)/F日志(复杂)的函数。图S5: HSA的荧光发射光谱(5 米)在不同浓度的化合物1 - 4,相应的化合物浓度为0,1,2,4,7.5,10µ米的额外KClO4分别在1:4比,当兴奋在295海里。图S6: HSA的荧光发射光谱(5 米)在不同浓度的化合物1 - 4,相应的化合物浓度为0,1,2,4,7.5,10µM添加额外的了解3分别在1:4比,当兴奋在295海里。图S7: CD光谱HSA-compound系统(HSA = 20 米)在不同浓度的化合物2,3,4;曲线从1到6对应化合物浓度0,20、40、60、80和100毫米。图S8: Ag)复合物吸收光谱,1:克洛4(红色线)和2:没有3(黑线)的1.0毫米的解决方案。图S9:分子对接模型HSA的阴离子的存在。表S1:硝酸根离子与HSA的共价相互作用。表S2:共价相互作用与HSA的高氯酸盐离子。(补充材料)