发光铱Complex-Peptide混合动力车(IPHs)疗法的癌症:设计和合成IPHs检测癌细胞和感应Necrosis-Type细胞死亡

文摘

死亡受体DR4和DR5)提供有吸引力的癌症治疗的目标因为癌症可以诱导细胞死亡死后凋亡信号绑定的配体,如肿瘤坏死factor-related凋亡诱导配体(TRAIL)与死亡受体。Cyclometalated铱(III)复合物等前沿空中管制官红外(tpy)₃(tpy = 2 - (4-tolyl)吡啶)拥有一个C₃对称的结构线索和表现出优异的发光性能。因此,cyclometalated红外复合物携带DR-binding肽的主题将是有效的跟踪模拟检测肿瘤细胞并诱导细胞死亡。在这项研究中,我们报告的设计和合成C₃对称和发光红外complex-peptide混合动力车(IPHs),具有环肽已绑定DR5报道。结果27 MHz石英晶体微量天平(药物)的测量和IPHs DR5 costaining实验IPHs anti-DR5抗体,表明IPHs结合DR5并接受内化到细胞质,可能通过内吞作用。也发现IPHs诱发慢这些癌细胞的细胞死亡以类似的方式DR5的表达水平。这些结果表明,IPHs可能会提供一个有前途的工具如人工发光模仿死亡配体开发新型抗癌药物检测和杀死癌细胞。

1。介绍

死亡受体(DRs)往往是过表达在肿瘤细胞的细胞膜和绑定与死亡配体如肿瘤坏死factor-related凋亡诱导配体(TRAIL)发出细胞外在凋亡信号(1]。包括五类,TRAIL受体血浆membrane-expressed TRAIL-R1 (DR4) TRAIL-R2 (DR5) TRAIL-R3 (DcR1) TRAIL-R4 (DcR2)和可溶性受体,osteoprotegerin(功能)。DR4和DR5包含死域(DD)转换,因此命名为死亡受体凋亡信号,而DcR1 DcR2无法诱导细胞死亡和被视为诱饵受体(1- - - - - -7]。小路是一个C₃对称的蛋白质,包括三个单体的单位,结合三个DRs [8,9]。在绑定博士的小道,TRAIL-DR集群设置death-inducing信号复杂(盘)其细胞质死域(DD)和新兵适配器蛋白质(FADD)通过death-effector域(d)。信号激活procaspase-8 caspase-8然后caspase-3为了坚持执行多种基质细胞死亡(10]。的nonsignaling DcR1不包含细胞质DD, DcR2非常类似于死亡受体但包含一个截短形式的弟弟。因此,DcR1和DcR2都无法组装阀瓣(4- - - - - -6]。

因为死亡受体在各种类型的癌细胞中,小道能够选择性地诱导细胞凋亡的细胞毒性较低的肿瘤细胞在正常细胞(11- - - - - -19]。因此,死亡受体已经被设想为承诺目标肿瘤细胞的治疗和成像。迄今为止,只有有限的例子人工死亡受体绑定有报告就像功能。代表性的例子包括DR5绑定肽(20.- - - - - -26网站),锌结合肽的小道(RNSCWSKD筛选从小道(227 - 234))(27),和小分子跟踪模仿(bioymifi) [28]。

与此同时,cyclometalated铱(Ir (III))复合物等前沿空中管制官红外(tpy)₃1(tpy = 2 - (4-tolyl)吡啶)(图1)吸引越来越多的关注的成像工具学习额外的细胞内事件,除了有机发光二极管(oled)如磷光发射器29日- - - - - -33),因为他们的重要生理条件下稳定和优秀的物理属性(31日,33- - - - - -39]。这种类型的红外复杂的类似物已被广泛应用于氧传感器(40,41),化学传感器(42- - - - - -47生物系统[],发光探针48- - - - - -66年]。这些优势源自high-luminescence量子收益率,发光寿命长(τ∼µ,可以消除短暂的自体荧光(τ∼ns)在细胞成像、生物样品和重要的斯托克斯位移,减少自灭的过程(29日- - - - - -39]。我们之前报道的一些例子红外复合物可以功能化蓝色绿色∼∼红色和白色发射器(67年- - - - - -71年],pH传感器[68年- - - - - -70年],敏化[68年- - - - - -70年癌细胞,细胞死亡的诱导物(68年- - - - - -70年]。最近,我们已经报道了Ir复合物(2 f和3得了)在阳离子肽(通常,H₂N-KKGG -)(图1)作为诱导物和探测器Jurkat细胞死亡的细胞(人类T-lymphoma细胞系)72年- - - - - -74年]。这些结果表明,红外复合物为癌症的诊断和治疗潜在的代理和相关疾病,甚至细胞死亡过程的机械的研究。

因为cyclometalated铱(Ir (III))复合物等前沿空中管制官红外(tpy)₃1拥有一个C₃对称的结构像小道(图2),这是推测,这些复合物可以模仿痕迹的好支架。在这个手稿,我们设计和合成一些新的报告C₃对称tris-cyclometalated红外复合物环肽(图2)[20.- - - - - -22),据报道能够绑定DR5选择性染色和诱导细胞死亡的癌细胞。Ir复合物4- - - - - -6被我们(特定选择的替代反应合成的报道75年)和连续耦合反应与环肽(20.- - - - - -22]。由于较低的溶解度4在水里,Ser-Gly-Ser-Gly (SGSG)被插入N肽部分的终点站5 - 6改善他们的溶解度。结果27 MHz石英晶体微量天平(药物)DR5的测量5和6和costaining Jurkat细胞实验5和anti-DR5抗体5和6绑定到DR5在不同站点anti-DR5识别网站的抗体。Jurkat等一些癌症细胞系细胞K562细胞,Molt-4细胞被染色5为发光显微观察,表明红外复合物表现出绿色的发光点局部细胞内。此外,它被发现5诱导细胞死亡Jurkat细胞比通过更慢2 c - d(5要求几乎24小时引起相当大的细胞死亡,2摄氏度,二维,3,和3 c诱导细胞死亡几个小时)。绑定的5肿瘤细胞及其细胞毒性对癌细胞依赖于DR5表达水平的癌细胞。进一步的研究表明,细胞死亡引起的5是坏死的类型。有趣的是,治疗癌症的细胞5然后用anti-DR5抗体降低Jurkat细胞的细胞膜染色水平anti-DR5抗体,表明DR5经历与内吞作用在绑定5。此外,发现DR5从细胞质到细胞膜上的细胞膜或复制附加孵化后6 h。最后,检测Jurkat牛血液中细胞飙升。我们所知,5的第一个例子是人工发光死亡配体检测肿瘤细胞,诱发他们的necrosis-type细胞死亡。

2。实验部分

2.1。一般信息

所有试剂和溶剂从商业供应商和购买使用前未经纯化,除非另有注明。5-dimethyl-2-thiazolyl MTT (3 - (4) 2, 5-diphenyl-2H溴化四唑)从Dojindo购买。Z-VAD-FMK (Z-Val-Ala-Asp(当地)fluoromethylketone)购买的肽。Necrostatin-1和IM-54从恩佐购买生命科学。Anti-DR5抗体[DR5-01-1](藻红蛋白)(ab55863)从Abcam购买。跟踪/ Apo2L(人类重组),氯喹二磷酸、盐酸维拉帕米,和盐酸nicardipine和光纯买来kouichi化学工业。寡霉素复杂从开曼群岛化工有限公司购买,奎尼丁4-aminopyridine从TCI购买。挺(羰基氰化物3-chlorophenylhydrazone)和bafilomycin A1和盐酸阿米洛利从Sigma-Aldrich购买。Propidium碘和南₃买来Nacalai Tesque。膜联蛋白V-Cy3从BioVision购买,公司准备用去离子的水溶液和蒸馏水。紫外光谱被记录在JASCO v - 550分光光度计,配有温度控制器单元25±0.1°C。发射光谱被记录在JASCO fp - 6200和fp - 6500光谱仪。红外光谱被记录在一个优秀的傅立叶变换红外分光光度计(Spectrum100)。¹H NMR (300 MHz)光谱被记录在一个JEOL总是300光谱仪。四甲基硅烷(TMS)被用来作为一个内部参考¹在CDCl H测量₃和CD₃-propionic-2 OD和3 -(三甲基硅烷基),2,3,3 -d₄酸(TSP)钠盐被用作外部参考¹在D。H核磁共振测量₂o .质谱测量进行JEOL JMS-SX102A和瓦里安TQ-FT。发光成像研究进行使用荧光显微镜(日本基恩士Biorevo, bz - 9000)。薄层色谱法(TLC)和硅胶柱色谱法进行了使用默克艺术。5554(硅胶)薄层色谱板和富士Silysia化学fl - 100 d,分别。高效液相色谱实验使用一个系统组成的两个pu - 980智能高效液相色谱泵(JASCO、日本),uv - 970智能紫外可见检测器(JASCO) Rheodine喷射器(模型没有。7125年),和一个Chromatopak C-R6A(日本岛津公司、日本)。分析高效液相色谱法,Senshu Pak Pegasil ODS柱(Senshu科学有限公司)(4.6φ×使用250毫米,07051001)。制备高效液相色谱,Senshu Pak Pegasil ODS SP100列(Senshu科学有限公司)(20φ×250毫米,1302014 g)使用。冻干法与冷冻干燥器中脱了FD-5N (EYELA)。

2.2。红外复合物的合成和肽单位

红外复合物1和7:根据我们之前报道这些配合物被合成过程(75年]。

红外复杂8:红外复杂的解决方案7(50毫克,0.06更易)、DIEA (190µ1.08 L,更易与),PyBOP(283毫克,0.54更易)蒸馏DMF(3毫升)在室温下搅拌10分钟,,β丙氨酸乙酯(84毫克,0.54更易)补充道。整个解决方案是激起了18 h和集中在减少压力。剩下的残渣与CHCl提取₃/小时₂啊,干了Na₂所以₄集中在降低的压力下,通过硅胶柱层析法纯化。(己烷:AcOEt = 2: 3→1: 2→1: 4→1: 6)获得红外复杂8作为一个黄色固体。这个红外复杂(30毫克,0.026更易)和5米LiOH(25毫克,1.06更易)在H₂O /四氢呋喃(1/1,9毫升)搅拌频率为60°C 17 h,然后2 N盐酸(pH = 1)添加形成沉淀。沉淀过滤,用H₂O给红外复杂8作为一个黄色的固体(26个毫克,41%7)。红外光谱(ATR):ν= 3279,2924,2579,1975,1712,1586,1527,1471,1259,1186,1068,1022,892,781,750厘米⁻¹。¹H NMR (CD₃OD, 300 MHz):δ= 8.04 (d、3 h,J= 8.1赫兹),7.74 (m, 6 h), 7.47 (d, 3 h,J= 5.4赫兹),6.98 (t, 3 h,J= 7.5赫兹),6.69(年代,3 h), 3.59 (t, 6小时,J= 5.1赫兹),2.63 (t, 6小时,J= 6.9赫兹),2.12(年代,9 h) ppm。谱米/z):计算的。对于C₄₈H₄₅写作,₆O₉[M]⁺:1042.28773,发现:1042.28784。

红外复杂9(72年]:DIEA(63毫克,0.5更易)PyBOP(126.6毫克,0.24更易)和mono-Boc-protected己二胺(103毫克,0.5更易)被添加到解决方案7(33毫克,0.039更易)蒸馏DMF(1毫升)。反应混合物在室温下搅拌了36 h,然后集中在减少压力。剩下的残渣被硅胶柱层析法纯化(CHCl₃/甲醇,1/0到50/1到0/1)、凝胶渗透色谱法(CHCl₃从己烷/ CHCl)和再结晶₃买得起的Boc-protected9作为一个黄色固体。的混合物TMSCl(21毫克,0.46更易)和奈(70毫克,0.46更易)在CH₃CN(1毫升)被添加到暂停Boc-protected9(21.6毫克,15μ在CH摩尔)₃CN(3.3毫升)。混合物在室温下搅拌10分钟,用近2分钟。不溶性化合物与CH离心机和清洗₃CN给9嗨,盐。产品被制备高效液相色谱纯化(H₂O组织(0.1%)/ CH₃CN(0.1%的TFA) = 80/20到50/50(30分钟),t_r= 21分钟,6.0毫升/分钟),其次是冻干9作为一个黄色固体(41毫克,62% 3组织盐)。红外光谱(ATR):ν= 2934,2862,2035,1674,1600,1531,1472,1425,1262,1199,1069,892,781,721厘米⁻¹。¹H NMR (D₂啊,300 MHz):δ= 8.04 (d、3 h,J= 8.41 Hz), 7.82 - -7.76 (m, 6 h), 7.69 (d、3 hJ7.09 - -7.05 = 5.4赫兹),(t, 3 hJ= 6.0赫兹),6.58(年代,3 h), 3.38 - -3.33 (m, 6 h), 3.01 - -2.96 (t, 6小时,J= 6.9赫兹),2.11(年代,9 h), 1.68 - -1.62 (m, 12 h),和1.43 (m, 12 h) ppm。谱米/zC):计算的₅₇H_73年写作,₉O₃[M + H]⁺:1124.54656,发现:1124.54487。

Fmoc-Leu-NH-SAL-Trt (2-Cl)树脂:北半球₂-SAL-Trt (2-Cl)树脂(500毫克,0.54更易/ g)是悬浮在DMF(2.5毫升)的混合物Fmoc-Leu-OH情商(3),迪拜国际资本(4情商),和HOBt情商(4)了。搅拌2 h后,残渣过滤,用DMF, CH₂Cl₂、醚、真空干燥。Fmoc-Leu-OH加载量的树脂是由紫外线吸收Fmoc导数在301 nm (ε_301海里= 7800⁻¹·厘米⁻¹)治疗后20% (v / v)哌啶在DMF。产量:593毫克(加载:0.43更易/ g树脂)。

环肽CP1:Fmoc-protecting群Fmoc-Leu-NH-SAL-Trt (2-Cl)树脂(500毫克,0.43更易)被哌啶治疗20% DMF deprotected。每个Fmoc-Xaa-OH (4 eq。)耦合在45°C 1 h Fmoc-deprotected树脂在DIC情商(4)和HOBt (8 eq。)在DMF(2.5毫升)。最后去后,N终点站是乙酰化使用交流电₂4 O (eq)和DIEA (4 eq。)在DMF(2.5毫升)。从树脂裂解肽和deprotected使用组织/ H的混合物₂O /技巧/ thioanisole (85/2.5/10/2.5)。经过4小时的搅拌,树脂与组织过滤和清洗。组织的蒸发后,获得的降水量增加冷却等₂O和离心收集的。原油产品被制备高效液相色谱纯化(H₂O组织(0.1%)/ CH₃CN(0.1%的TFA) = 80/20→50/50(30分钟)t_r= 11分钟,1毫升/分钟),冻干CP1作为一个线性形式。的线性形式CP1使用0.1毫米aq受到环合。NH吗₄HCO₃(1毫克/毫升)。环合反应为12 - 24 h后,解决方案集中和剩下的残渣又纯化制备高效液相色谱法(h₂O组织(0.1%)/ CH₃CN(0.1%的TFA) = 80/20→50/50(30分钟),t_r= 7.5分钟,1毫升/分钟),冻干CP1为白色粉末(217毫克,26%)。红外光谱(ATR):ν= 3217,2992,2291,2167,2097,2031,1980,1637,1508,1434,1173,1118,839,800,723厘米⁻¹。¹H NMR (D₂啊,300 MHz):δ= 7.62 (m, 1 h), 7.46 (m, 1 h), 7.23 (m, 2 h), 7.22 (m, 1 h), 5.59(年代,1 h), 4.29 (m, 17小时),3.91(年代,1 h), 3.34(年代,1 h), 2.80(年代,8 h), 2.55 (m, 3 h), 2.49 (m, 3 h), 2.34 (m, 6 h), 1.95 (m, 5 h), 1.59 (m, 7 h), 1.41 (m, 31 h), 1.29 (m, 2 h)和0.98 (m, 50 h) ppm。谱m / zC):计算的_85年H_142年N_30.O₂₃年代₆[M + 2 h]^{2 +}发现:1008.01809:1008.01709。

环肽CP2和CP3准备按照相同的程序描述环肽CP1。

环肽CP2:白色粉末(371毫克,29%在两个步骤)。高效液相色谱法(H:₂O组织(0.1%)/ CH₃CN(0.1%的TFA) = 90/10→60/40(30分钟),t_r= 16分钟,1毫升/分钟)。红外光谱(ATR):ν= 3283,2939,2167,2027,1980,1651,1533,1431,1177,1119,1044,891,840,798,721,655厘米⁻¹。¹H NMR (D₂啊,300 MHz):δ= 7.49 (m, 1 h), 7.38 (m, 1 h), 7.20 (m, 2 h), 7.09 (m, 1 h), 4.97 (m, 24 h), 3.86 (m, 12 h), 3.17 (m, 24 h), 2.09 (m, 24 h), 1.62 (m, 29 h)和0.90 ppm (m, 38 h)。谱米/z):计算的。对于C_95年H_159年N₃₄O_29日年代₂[M + 3 h]^{3 +}:768.71559,发现:768.71568。

环肽CP3:白色粉末(18毫克,23%超过两个步骤)。高效液相色谱法(H:₂O组织(0.1%)/ CH₃CN(0.1%的TFA) = 90/10→60/40(30分钟),t_r= 11分钟,1毫升/分钟)。红外光谱(ATR):ν= 3287,3071,2965,2547,2045,1778,1651,1532,1440,1290,1155,1042,845,700,578厘米⁻¹。¹H NMR (D₂啊,300 MHz):δ= 7.51 (m, 1 h), 7.38 (m, 1 h), 7.20 (m, 2 h), 7.10 (m, 1 h), 4.97 (m, 31 h), 3.86 (m, 18 h), 3.17 (m, 27 h), 2.09 (m, 24 h), 1.62 (m, 29 h)和0.90 ppm (m, 38 h)。谱m / zC):计算的_105年H_175年N₃₈O₃₅年代₂[M + 3 h]^{3 +}:864.41581,发现:864.41735。

红外复杂44.34:EDC(832毫克,更易)和NHS(500毫克,4.34更易)添加到解决方案7(120毫克,0.14更易)在DMF(12毫升)。反应混合物在室温下搅拌24 h,集中在减少压力。后添加CHCl₃、有机层与坐。NH洗₄Cl。结合有机层与H洗₂啊,干了Na₂所以₄、过滤和集中在减压下给NHS酯7作为一个黄色固体(110毫克,67%)。红外光谱(ATR):ν= 2941,2162,1705,1581,1519,1380,1293,1206,1066,976,886,648厘米⁻¹。¹核磁共振(CDCl₃,300 MHz):δ= 8.45(年代,3 h), 8.00 (d, 3 h,J= 7.8),7.73 (t, 3 h,J= 7.8),7.42 (d、3 h,J= 5.7),6.97 (t, 3 h,J= 6.0),6.82(年代,3 h), 2.89(年代,12 h)和2.42(年代,9 h) ppm。谱m / zC):计算的₅₁H₃₉写作,₆O₁₂[M]⁺:1120.22552。发现:1120.22641。NHS酯的红外复杂70.8(1毫克µ摩尔)被添加到解决方案CP12.6(5.39毫克µ和DIEA(4.7摩尔)µ0.026 L,更易在DMF (100)μL)和在室温下搅拌24 h在黑暗中。在那之后,0.1%的组织H₂O是添加到反应混合物和原油产品被制备高效液相色谱纯化(H₂O组织(0.1%)/ CH₃CN(0.1%的TFA) = 80/20→50/50(30分钟),t_r= 21分钟,(1毫升/分钟)),冻干4作为黄粉(3.8毫克,43%来自7)。红外光谱(ATR):ν= 32879,2320,1981,1638,1535,1426,1264,1201,1134,923,835,800,722厘米⁻¹。¹H NMR (DMSO, 300 MHz):δ= 8.26(年代,3 h), 8.22(年代,7 h), 8.15 (m, 10 h), 7.83 (m, 8 h), 7.40 (m, 8 h), 7.30 (m, 12 h), 7.13 (m, 21 h), 6.96(年代,13 h), 6.55(年代,3 h), 4.23 (m, 6 h), 4.12 (m, 14 h), 3.11(年代,3 h), 2.51 (m, 29 h), 2.49 (m, 10 h), 2.48 (m, 24 h), 2.22 (m, 12 h), 1.76(年代,7 h), 1.47 (m, 36 h), 1.3(年代,3 h)和0.80 (m, 41) ppm。谱m / z);计算的C_294年H_450年写作,_93年O_72年年代₆[M + 6 h]^{6 +}:1137.2104,发现:1137.20847。

红外复杂50.71:EDC(137毫克,更易)和NHS(83毫克,0.71更易)添加到解决方案8(25毫克,0.023更易)在DMF(2.5毫升)。最终的解决方案是在室温下搅拌24 h。反应混合物都集中在减少压力。后添加CHCl₃,有机层与坐。NH洗₄Cl。结合有机层与H洗₂啊,然后干/ Na₂所以₄、过滤和集中在减压下给NHS酯8作为一个黄色固体(20毫克,62%)。红外光谱(ATR):ν= 3743,3318,2925,1815,1780,1706,1471,1375,1260,1204,1131,1067,994,781,648厘米⁻¹。¹核磁共振(CDCL₃,300 MHz):δ7.94 (d、3 h,J= 8.1),7.73(年代,3 h), 7.58 (t, 3 h,J= 7.8),7.40 (d、3 h,J= 5.1),6.84 (t, 3 h,J= 6.3),6.67(年代,3 h), 6.50 (t, 3 h,J= 6.6),3.81 (d, 6 h,J= 5.1),2.95 (t, 6 h,J= 6.3),2.91(年代,12 h)和2.23(年代,9 h)。谱m / zC):计算的₆₀H₅₄写作,₉O₁₅[M]⁺:1333.33686,发现:1333.33747。NHS酯的红外复杂8(6毫克,0.0044更易)被添加到解决方案CP20.013(31.06毫克,更易)和DIEA (23µ0.134 L,更易在DMF (600)μL)和在室温下搅拌24 h在黑暗中。反应混合物被稀释0.1%组织H₂制备高效液相色谱法(H O和净化₂O组织(0.1%)/ CH₃CN(0.1%的TFA) = 80/20→50/50(30分钟),t_r= 10分钟,1毫升/分钟),冻干5作为黄粉(15.45毫克,27%来自8)。红外光谱(ATR):ν= 3282,3074,2964,2054,1980,1639,1531,1472,1425,1261,1181,915,799,720厘米⁻¹。¹H NMR。(D₂啊,300 MHz):δ= 7.68(年代,3 h), 7.46(年代,3 h), 7.08 (m, 6 h), 6.89 (m, 3 h), 6.68(年代,3 h), 3.79 (m, 18 h), 3.73 (m, 7 h), 3.71 (m, 11小时),3.25 (m, 18 h), 3.23 (m, 12 h), 3.18 (m, 13 h), 2.73 (m, 5 h), 2.24(米、193 h), 2.23 (m, 20 h), 2.00 (m, 11小时),1.63 (45 m), 1.35 (1.15 m, 50 h) (m, 12 h)和0.89 ppm (m, 74 h)。谱m / z):计算的。对于C_333年H_513年写作,_108年O_93年年代₆[M + 6 h]^{6 +}:1316.94104。发现:1316.94569。

红外复杂6准备按照相同的程序描述5。

红外复杂6:黄色粉末(8.3毫克,21%来自8)。高效液相色谱法(H:₂O组织(0.1%)/ CH₃CN(0.1%的TFA) = 90/10→60/40(30分钟),t_r= 12分钟,1毫升/分钟)。红外光谱(ATR):ν= 3383,2963,2014,1984,1638,1535,1475,1262,1200,1057,836,799,720厘米⁻¹。¹H NMR (D₂啊,300 MHz):δ= 7.72(年代,3 h), 7.42(年代,3 h), 7.17 (m, 6 h), 6.95 (m, 3 h), 6.78(年代,3 h), 3.86 (m, 23 h), 3.71 (m, 38 h), 3.23 (m, 42 h), 2.73 (m, 31 h), 2.07 (m, 12 h), 1.92(米、70 h), 1.62(米、69 h), 1.34(米、132 h)和0.88 ppm (m, 120 h)。谱m / zC):计算的_363年H_563年写作,_120年O_111年年代₆[M + 8 h]^{8 +}:1096.00145,发现:1096.00136。

2.3。UV / Vis吸收和发光光谱测量

UV / Vis光谱被记录在JASCO v - 550 UV / Vis分光光度计装有一个温度控制器,和发射光谱被记录在JASCO fp - 6200荧光谱仪25°C。发光测量之前,样品被Ar脱气水溶液鼓泡10分钟在石英比色皿配备聚四氟乙烯隔膜螺钉帽。股票的解决方案中的所有红外复合物浓度(DMSO)测定基于380海里的摩尔消光系数(ε_380海里= 1.08±0.07×10⁴米⁻¹·厘米⁻¹)。发光量子收益率(Φ)比较与综合修正发射光谱测定硫酸奎宁的标准,其发射量子产量在0.1 H₂所以₄被假定为0.55(励磁366海里)。方程(1)是用来计算发射量子产量,Φ_年代和Φ_r表示样品的量子产量和参考化合物,η_年代和η_r折光指数的溶剂用于样品的测量数据和参考,一个_年代和一个_r样品的吸光度和引用,然后呢我_年代和我_r站综合地区样品的发射光谱和参考下,分别(所有的红外化合物兴奋在366纳米发光测量在这项研究):

示例解决方案的发光寿命测量在TSP1000-M-PL (Unisoku,大阪,日本)仪器使用THG (355 nm)的Nd: YAG激光器,Minilite我(连续、钙、美国),在脱气水25°C的解决方案。R2949光电倍增管是用于监控信号。数据分析使用非线性最小二乘的过程。

2.4。27 MHz石英晶体微量天平(药物)分析

药物分析进行一个Affinix-Q4装置(Initium Inc .)、日本)。清洁盟(4.9毫米²)电极安装在石英晶体与水溶液中孵化的3′-dithiodipropionic酸(3毫米,4μL)在室温下60分钟。与蒸馏水洗涤后,表面激活了EDC·HCl的混合物(0.52米)N羟基琥珀酰亚胺为30分钟(0.87米),用蒸馏水洗净,然后用DR5 (100μg / mL, 4μL)在室温下60分钟。用蒸馏水洗涤后,乙醇胺(1米5的水溶液中μL)添加作为一个阻塞试剂。用蒸馏水洗涤后,细胞充满了磷酸盐(PBS) (500μL)。明显的绑定常量(K_应用程序)IPHs DR5在PBS计算频率下降。非特异性反应是减去从频率下降曲线获得明显的络合常数K_应用程序和离解常数K_d(= 1 /K_应用程序)。

2.5。细胞培养

细胞系(Jurkat Molt-4, K562细胞)是培养RPMI 1640中补充heat-inactivated 10%胎牛血清(FCS)、谷酰胺、玫瑰(2 - [4 - (2-hydroxyethyl) 1-piperazinyl] ethanesulfonic酸,pK_一个= 7.5),2-mercaptoethanol、青霉素、链霉素和monothioglycerol (MTG)湿润有限公司5%₂孵化器在37°C。

2.6。MTT试验

Jurkat细胞(1.0×10⁵细胞/毫升)在1% DMSO孵化,10% FCS RPMI 1640中包含解决红外复合物(MTG免费)4 - 6(0 - 75µ米)有限公司5%以下₂在37°C 1到24 h 96 -孔板(BD猎鹰),然后在PBS缓冲(10 0.5% MTT试剂µL)添加到细胞中。孵化后5%的股份有限公司₂在37°C 4 h,甲瓒溶解溶液(盐酸10% SDS在0.01 N) (100µL)添加和孵化一夜之间在相同条件下,紧随其后的是测量吸光度在570 nm的标(Bio-Rad)。MTT测定Molt-4细胞和K562细胞与红外复合物也按照上述同样的程序执行。

2.7。MTT试验的半胱天冬酶抑制剂(Z-VAD-FMK)和Necroptosis抑制剂(Necrostatin-1)和氧化应激诱导坏死抑制剂(IM-54)

Jurkat细胞(1.0×10⁵细胞/毫升)孵化10% FCS RPMI 1640中包含解决方案Z-VAD-fmk (15 (MTG-free)µ米)/ necrostatin-1 (30µ米)/ IM-54 (10µ米)/(5%以下有限公司₂在37°C 1 h 96 -孔板(BD猎鹰)。然后,红外复合物(75µ米)添加5%以下孵化有限公司₂在37°C 24 h,然后PBS缓冲(10 0.5%的肝癌和试剂µL)添加到细胞和5%以下孵化有限公司₂在37°C 4 h。甲瓒溶菌作用的解决方案(10% SDS在0.01 N HCl) (100µL)添加,最终解决方案孵化一夜之间在相同条件下,紧随其后的是测量吸光度在570 nm标(Bio-Rad)。

2.8。荧光显微镜研究Jurkat细胞K562细胞,与红外Molt-4细胞复合物

Jurkat细胞K562细胞,或Molt-4细胞(1.0×10⁶细胞/毫升)没有孵化或存在Ir复合物10% FCS RPMI 1640中为指定的时间(MTG免费)有限公司5%₂在37°C。细胞被洗两次与冰冷的PBS南为0.1%₃和0.5% FCS,他一一CELLview™培养皿(35×10毫米)和安装在荧光显微镜观察(Biorevo, bz - 9000,日本基恩士)(激励:377±25海里;排放:520±35海里;用作过滤器)。

2.9。荧光显微镜的研究与红外复合物Jurkat细胞抑制剂的存在

Jurkat细胞(1.0×10⁶用给定的抑制剂细胞/毫升)孵化RPMI 1640中(MTG免费)FCS公司5%以下为10%₂在37°C 1 h,然后红外复合物被添加,然后再次孵化24小时37°C。细胞被洗两次南与含有0.5% FCS的冰冷的PBS和0.1%₃在PBS和孵化π在室温下10 - 15分钟。这些细胞被再一次洗PBS缓冲和荧光显微镜观察到(日本基恩士Biorevo, bz - 9000)(激励:377±25海里;排放:520±35海里;用作过滤器)。

2.10。Propidium碘(π)染色

细胞为指定的时间与红外孵化复合物,用PBS缓冲液洗净,然后孵化与πPBS缓冲在室温下10 - 15分钟。这些细胞被再一次洗PBS缓冲和荧光显微镜观察到(日本基恩士Biorevo, bz - 9000)(激励:540±25海里;排放:605±55纳米;TRICT过滤器)或分析流式细胞分析仪(贝克曼库尔特gallio流式细胞分析仪,检测器:FL2,激励:488海里,排放:575±20海里)。

2.11。Anti-DR5抗体染色

鉴于细胞孵化anti-DR5抗体在4°C 15分钟在冰上。细胞被洗两次南与含有0.5% FCS的冰冷的PBS和0.1%₃并安装在荧光显微镜(日本基恩士Biorevo, bz - 9000)(激励:540±25海里;排放:605±55纳米;TRICT过滤器)或分析流式细胞分析仪(贝克曼库尔特gallio流式细胞分析仪,检测器:FL2,激励:488海里;排放:575±20海里)。

2.12。膜联蛋白V-Cy3染色

Jurkat细胞孵化与红外复合物2 h,用PBS缓冲液洗净,然后悬浮在1 x绑定缓冲。膜联蛋白V-Cy3被加入到细胞悬液,然后在室温下孵化在黑暗中5 - 10分钟。细胞被洗PBS缓冲和荧光显微镜观察到(日本基恩士Biorevo, bz - 9000)(励磁540±25海里,发射605±55纳米,TRICT过滤器)。

2.13。染色和流式细胞仪分析细胞死亡归纳分析

Jurkat细胞K562细胞,或Molt-4细胞(3.0×10⁵细胞)在没有孵化或红外复合物的存在10% FCS RPMI 1640中指定时间低于5% (MTG免费)有限公司₂在37°C。之后,这些细胞被洗两次与冰冷的流式细胞仪缓冲区,然后悬浮在450年µl流式细胞仪缓冲区。分析了细胞流式细胞分析仪(贝克曼库尔特gallio流式细胞分析仪,检测器:FL2,激励:488海里,排放:575±20 nm)检测PI染色或anti-DR5抗体染色(检测器:FL10,激励:405海里,排放:550±40 nm)检测红外复合物染色)。

3所示。结果与讨论

3.1。设计和合成的红外Complex-Peptide混合动力车(IPHs)

合成的红外complex-peptide混合动力车(IPHs)4- - - - - -6如图3。的麦尔反应1(前沿空中管制官红外(tpy)₃)和以下Pinnick氧化(72年,73年,75年)给7。凝结的7与β丙氨酸乙酯盐酸盐和酯水解后产生了8。这两个7和8被转换为对应的吗N羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯,然后与肽单位反应,CP1,CP2,CP3所准备的Fmoc固相肽合成,买得起4- - - - - -6,分别。因为4不溶于水、亲水Ser-Gly-Ser-Gly (H₂N-SGSG-CO)序列成立N终点站的环肽CP1负担不起CP2-3。所有的红外复合物4- - - - - -6被反相高效液相色谱柱纯化的连续梯度H₂O组织(0.1%)/ CH₃CN(0.1%组织)和冻干给相应组织盐黄色粉末。应该提到的面部形式的转换可以忽略不计4- - - - - -6观察到相应的子午形式在合成和下面的生物化验。

3.2。UV / Vis IPHs发光光谱

UV / Vis和发光光谱,红外复合物2摄氏度,4,5,6(10µ米)在DMSO 25°C图所示4,他们的物理数据总结表1。红外的浓度复合物在股票的解决方案(DMSO)是由摩尔消光系数在380 nm (ɛ_380海里= 1.43±0.03×10⁴·米⁻¹·厘米⁻¹)4,5,和6,这是几乎相同的典型红外(tpy)₃衍生品有肽2- - - - - -f和3- - - - - -c(图1),如我们之前报道72年,73年]。强吸收波段在270 - 300海里都被分配了¹π- - - - - -π^∗过渡tpy配体和弱肩带在320 - 450海里被分配spin-allowed singlet-to-singlet metal-to-ligand电荷转移(¹MLCT)转换,spin-forbidden singlet-to-triplet (³MLCT)转换,³π- - - - - -π^∗转换。强烈的绿色排放4,5,和6观察到发射最大值在506海里,这几乎是一样的吗2摄氏度(图4 (b))。发光量子收益率(Φ)4,5,和6被确定为0.39、0.33和0.36,分别和他们的发光寿命(τ)是1.1 - -1.3µ年代,几乎是相同的1- - - - - -3。

3.3。测定络合IPHs DR5的属性

首先,络合的IPHs DR5检查了27 MHz石英晶体微量天平(药物)。DR5固定在传感器芯片,IPHs被添加在一定的时间间隔。添加IPHs,频率变化是观察(图5)与DR5指示IPHs之间的相互作用。明显的络合常数(K_应用程序)(和离解常数,K_d),5,6与DR5确定为(2.3±0.05)×10⁸米⁻¹(K_d= 4.3±0.1 nM), (3.8±0.1)×10⁵米⁻¹(K_d= 2.7±0.1µ米)和(4.0±0.2)×10⁵米⁻¹(K_d= 2.5±0.1µ米),分别假设1:1络合(表2)。观察相互作用可以忽略不计9,缺乏受体结合肽(图6),2摄氏度包含KKGG肽(图1)[72年,73年]。

3.4。癌症引起的细胞死亡IPHs,评估通过MTT测定和荧光显微镜

接下来,细胞死亡诱导红外复合物的活性4- - - - - -6反对Jurkat细胞被麻省理工评估试验(MTT = 3 - (4 5-dimethyl-2-thiazolyl) 2, 5-diphenyl-2H-tetrazolium溴化)。Jurkat细胞与给定浓度的孵化5或6在10% FCS(胎牛血清)RPMI 1640 (MTG免费)中在37°C和MTT试剂处理。这是观察到Jurkat细胞的诱导细胞死亡5和6远远低于我们之前红外复合物2摄氏度,二维,和3 c诱导细胞死亡的Jurkat细胞1 h。因为两个5和6与DR5在相同的程度上,在图中描述5和表2,下面进行化验5。Jurkat细胞后,荧光显微镜观察孵化51 h, 6 h、12小时、24小时和沾propidium碘(π)来检查他们的细胞死亡。在总结数据7和8,5要求24 h ca。引起相当大的细胞死亡(ca。50%的细胞死亡(5)= 72µ米)。相比较而言,可以忽略不计4全身的细胞死亡,即使在孵化16 h,可能是由于其低水溶性(图S1在补充材料)。

3.5。与IPHs Jurkat细胞荧光染色

慢诱导的细胞死亡IPHs允许我们Jurkat细胞进行荧光染色实验。数据9(一个)- - - - - -9 (c)和9 (d)- - - - - -9 (f)表明,5(5和10µ米)结合Jurkat细胞孵化后37°C 1 h。被动的吸收5通过细胞膜不太可能,因为事实微不足道的观察发射在4°C孵化后1 h ([5)= 20µ米)(图9 (g)- - - - - -9(我)),与南的预处理₃在4°C(代谢抑制剂)15分钟([南₃]= 5毫米,所需浓度抑制代谢活动)展品的本地化5在细胞膜(数字9 (j)- - - - - -9(左))。

竞争Jurkat细胞的染色5和DR5绑定肽(20.- - - - - -22)(CP1,图3)进行。Jurkat细胞被孵化CP11 h在37°C5添加并再次孵化1 h在37°C。绿色排放大大减少了从细胞预处理CP1(100µ比只接受M)5(图S2在补充材料)。通过流式细胞术(图也获得了类似的结果S3在补充材料),暗示5竞争对手CP1DR5。

3.6。Costaining IPHs和Anti-DR5 Jurkat细胞的抗体和观察运动的DR5在细胞表面和细胞质之间

在数据11 (aa)- - - - - -11 (ee)观察,红色发射Jurkat细胞的细胞膜上,对待anti-DR5抗体(共轭红色荧光染料)在4°C 15分钟(方法图10)。接下来,我们观察到发光的Jurkat细胞图像处理anti-DR5抗体在4°C 15分钟然后孵化5在37°C 1 h(方法b图10)。在数据11 (bb)和11 (bc)、绿色排放5分别观察和红色发光anti-DR5抗体。的覆盖数据11 (bb)和11 (bc)显示黄色斑点(数字11 (bd)和(11日)),这表明anti-DR5抗体5染色细胞相同或相似的区域。此外,发现有微不足道的区别排放强度(从anti-DR5抗体)Jurkat细胞治疗只有anti-DR5抗体5(图S4在补充材料),这表明这两个5并与DR5 anti-DR5抗体结合,可能在不同的站点。

接下来,治疗的顺序Jurkat anti-DR5抗体和细胞5被逆转。在这个实验中,Jurkat细胞治疗5(5µ米),然后用anti-DR5抗体(c图方法10)。在这种情况下,观测到了非常微弱的红色发光Jurkat细胞(数字11 (ca)- - - - - -11 (ce)),这表明细胞膜DR5的表达水平降低了治疗5。的浓度的增加5到10µM导致相当大的减少红色发光anti-DR5抗体(数字11 (da)- - - - - -11(反))。也观察到类似的结果流式细胞术测定,Jurkat细胞治疗只有anti-DR5抗体展览高排放强度(红色曲线在图S5在补充材料)。

在前面的实验中,假设DR5内化于细胞膜与IPH绑定后的细胞胞浆。检查这个假设,Jurkat细胞被孵化5在37°C 1 h,用新鲜的媒介,在孵化新的媒介在37°C d在图1或6 h(方法10)(数据11 (ea)- - - - - -11 (ee)1 h孵化和数字11 (fa)- - - - - -11(铁)6 h孵化)。有趣的是,红色发光从anti-DR5抗体恢复额外的孵化后6 h,数字显示11 (fa)- - - - - -11(铁),显示良好的对比数据11 (da)- - - - - -11(反)没有孵化的新媒介获得6 h。在流式细胞仪分析,红色排放强度从anti-DR5抗体在细胞减少1 h孵化5然后anti-DR5抗体相比Jurkat细胞只有anti-DR5抗体治疗。孵化后Jurkat细胞5然后在新的媒介6 h,排放anti-DR5抗体恢复(图S6在补充材料)。

我们假设这些实验结果的基础上总结了图12。(我)在孵化Jurkat细胞与IPH 37°C 1 h, IPH-DR5复杂经历内化到细胞质从细胞表面(图12(一个))。(2)因此,anti-DR5抗体细胞膜的绑定变得弱(图12 (b))。(3)孵化后Jurkat细胞(IPH-DR5复合物内化在细胞质)在新鲜培养基37°C 1或6 h,大量的DR5恢复细胞膜(图12 (c)),然后(iv) anti-DR5抗体能够绑定DR5(图12 (d))。

评估的亲和力IPH DR5表达肿瘤细胞膜上,我们进行了细胞染色不同类型的癌症细胞系表达DR5的不同水平。DR5的表达Jurkat细胞K562细胞,Molt-4细胞评估与anti-DR5抗体染色和流式细胞分析仪分析。发现Jurkat细胞表达相对高水平的DR5 K562细胞和Molt-4细胞相比,与anti-DR5染色证实了抗体(左第二个图13)。这三个细胞株孵化了5(5µ米和10µ在37°C M) 1 h,然后通过流式细胞分析仪分析。图13表明,Jurkat细胞是高度染色5,而K562细胞和Molt-4细胞弱染色。荧光显微观察不同类型的癌症细胞系也显示类似的结果(数据S7 (a)- - - - - -S7(我)在补充材料)和红外复杂9没有肽(72年)(图6)可以忽略Jurkat细胞染色(数据S7 (j)- - - - - -S7(左)在补充材料)。连同上述药物实验的结果(图2),这些事实强烈建议的绑定5依赖于DR5表达水平的癌细胞。

细胞死亡诱导IPH活动之间的关系和DR5表达的肿瘤细胞进行了研究。与Jurkat细胞,流式细胞仪测定进行了K562细胞,和Molt-4细胞表达不同程度的DR5,如上所述。这三个细胞株孵化了5(25/75µ在37°C M) 24 h,π(30µ米)被添加到染色流式细胞分析仪的分析的死细胞。总结,如图14,这三个细胞系的细胞死亡感应平行DR5的表达水平。

3.7。机械IPH引起的细胞死亡的研究

上述结果强烈建议5能够检测Jurkat细胞和诱导细胞死亡与DR5通过络合。的稳定性5RPMI 1640 (MTG免费)介质(在37°C孵化24 h)被选中,如图S8在补充材料。因为它是良好的,DR5绑定后启动细胞凋亡信号的记录或其他人工跟踪模仿,它最初是假定引起的细胞死亡5将细胞凋亡。MTT测定Jurkat细胞5在的存在进行Z-VAD-FMK(15吗µ米),这是一个广泛的半胱天冬酶抑制剂(76年),necrostation-1 (30µ米),这是一个necroptosis抑制剂(77年),和IM-54 (10µ米),这是一种抑制剂的氧化应激诱导坏死(78年]。然而,这三种药物可忽视地抑制引起的细胞死亡5(数据S9和S10在补充材料)。另一方面,TRAIL-induced细胞死亡被Z-VAD-FMK几乎完全抑制(数字S9和S10在补充材料)。此外,死者Jurkat细胞的染色实验用膜联蛋白V-Cy3 [79年,80年),这是一个众所周知的试剂来检测细胞凋亡,透露,只有少数细胞被膜联蛋白染色V-Cy3。这些事实让我们得出这样的结论:不太可能5Jurkat细胞的凋亡。

上述研究表明,5化为DR5-mediated进入细胞的内吞作用。因此,5可能与胞质细胞器或干预和/或任何细胞激活诱导细胞死亡的事件。为了检查这个机制,我们评估了细胞死亡在几个细胞抑制剂的事件或新陈代谢,通道阻滞剂,或受体拮抗剂,即羰基氰化物3-chlorophenylhydrazone (CCCP)(线粒体解偶联剂)81年,82年)、阿米洛利(Na⁺通道阻断剂,抑制剂macropinocytosis) [83年],氯喹(自噬抑制剂)[84年),bafilomycin A1 (vacular atp酶抑制剂(V-ATPase) [85年),寡霉素(线粒体F1 / F0-ATP合成酶的抑制剂导致ATP耗竭)(86年),4-aminopyridine (K⁺通道阻断剂),维拉帕米(l型压控Ca^{2 +}通道阻断剂)(87年- - - - - -89年),nicardipine (l型压控Ca^{2 +}通道阻断剂)(87年- - - - - -89年)、奎尼丁(Na⁺和K⁺通道阻断剂,对手的α肾上腺素能受体,抑制线粒体钙的吸收^{2 +})[90年- - - - - -94年],根据我们以往的研究[72年,73年]。Jurkat细胞孵化与这些抑制剂推荐浓度(图S11在补充材料)37°C 1 h,它5添加和再次孵化温度为24小时。细胞被洗PBS缓冲和沾propidium碘(PI)显微观察。有趣的是,只有压控Ca^{2 +}通道阻滞剂(nicardipine和维拉帕米)显著抑制细胞死亡引起的5。因此,我们得出结论:诱导的细胞死亡5可以被认为是通过Ca necrosis-type细胞死亡吗^{2 +}介导的细胞内信号通路。

3.8。检测Jurkat细胞牛血

肿瘤细胞的检测使用IPHs。Jurkat细胞(10×10⁵细胞在牛血(100)被停职µL),然后孵化5(10µ米)在介质(RPMI 1640) 37°C 6 h,导致成功检测Jurkat细胞牛血,如图15。

4所示。结论

在这项研究中,我们报告的设计和合成红外complex-peptide混合动力车(4- - - - - -6)由C₃对称tris-cyclometalated红外环肽复合物配备DR5绑定。在这些配合物中,5和6被发现是针对Jurkat细胞细胞毒性。研究表明,5结合DR5在细胞膜(27 MHz anti-DR5抗体药物和costaining实验),及其复杂的由DR5-mediated内化到细胞质内吞作用。我们之前的红外复合物2- - - - - -3拥有基本的肽,如KKGG序列诱导Jurkat细胞死亡在几个小时内和坏死细胞表现出强烈的排放。相比之下,IPHs在本研究报告(5和6)检测Jurkat细胞,然后引导他们的死非常缓慢(16 - 24小时后)。此外,DR5转移和/或额外的孵化后复制在细胞表面。Jurkat细胞可以发现即使在牛血可能为癌症诊断提供一个简单和方便的方法。我们所知,5的第一个例子是人工复合,实现成像和细胞死亡与DR5相关诱导癌细胞,由于其温和的细胞毒和缓慢的细胞死亡感应财产。

上述结果推测,IPHs可以适合研究死亡受体生物学、癌细胞成像,诱导肿瘤细胞死亡,细胞死亡的机制的理解通过死亡受体介导的。此外,IPHs诱导缓慢的细胞死亡,这可能提供新的方法治疗癌症和相关疾病。改进IPHs的抗癌活性和尝试控制细胞死亡类型现在在进步。

缩写

迪拜国际资本:	N,N′-diisopropylcarbodiimide
DIEA:	N,N二异丙基乙胺
DMF:	N,N二甲基甲酰胺
EDC:	(1-Ethyl-3) - 3-dimethylaminopropyl碳化二亚胺
HOBt:	1-Hydroxybenzotriazole
国民健康保险制度:	N羟基琥珀酰亚胺
PyBOP:	Benzotriazol-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium方法
组织:	三氟乙酸
四氢呋喃:	四氢呋喃
小贴士:	Triisopropylsilane
TMSCl:	氯化三甲基硅烷基。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项工作是支持的补助金从教育部,文化,体育,科学和技术(下边了),日本(22890200号,24890256,26860016,和16个k18851 Yosuke Hisamatsu和nos。19659026, 22390005, 24590025, 24650011, 24640156,和15 k00408 Shin青木),Uehara纪念基金会(日本东京)Yosuke Hisamatsu,东京生化研究基金会(日本东京)胫骨青木,为私立大学“学术前沿”项目(从下边了匹配基金补贴),和摘要(东京大学)基金战略研究领域。作者感谢教授博士Inukai武(大学医学院的儿科学系山梨县)的有价值的建议。作者真诚地承认长谷川Fukiko女士和女士Noriko Sawabe(东京大学制药科学教师科学)的质谱和核磁共振测量。

补充材料

图S1: MTT试验的结果。图S2:竞争染色的微观图像。图S3:流式细胞术分析竞争染色的结果。数字S4-S6:流式细胞仪测定的结果costaining图S7: Jurkat的微观图像,K562, Molt-4细胞染色。图S8:高效液相色谱图5在孵化后RPMI 1640中。数字S9 / S10: MTT测定的结果抑制剂的存在。图S11:显微图像染色的抑制剂的存在。图S12-13:¹H NMR、ESI质量图表NHS酯的红外复杂7。数字S14-S15:¹H NMR、ESI质量红外复杂的图表8。图S16和肌力表现:¹H NMR、ESI质量图表NHS酯的红外复杂8。S18数据美国和S19:¹H NMR、ESI质量红外复杂的图表9。数字S20-S22:高效液相色谱法,¹H NMR、ESI质量图表CP1。数字S23-S25:高效液相色谱法,¹H NMR、ESI质量图表CP2。数字S26-S28:高效液相色谱法,¹H NMR、ESI质量图表CP3。图S29-S31:高效液相色谱法,¹H NMR、ESI质量红外复杂的图表4。数字S32-S34:高效液相色谱法,¹H NMR、ESI质量红外复杂的图表5。数字S35-S37:高效液相色谱法,¹H NMR、ESI质量红外复杂的图表6。(补充材料)

引用

1. 答:德系犹太人和v . m .武断的话,”:死亡受体信号,调制。”科学,卷281,不。5381年,第1308 - 1305页,1998年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. g .锅k . O’rourke a . m . Chinnaiyan et al .,“细胞毒性的受体配体小道。”科学,卷276,不。5309年,第113 - 111页,1997年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. h·查克·m·a . Delgi-Esposti r . s . Johnson et al。”TRAIL-R2:小说apoptosis-mediating受体小道”,EMBO杂志,16卷,不。17日,第5397 - 5386页,1997年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. g .锅j .倪y f, g . Yu r . Gentz和v . m .武断的话,“诱饵受体拮抗剂和死亡受体domain-containing小道,“科学,卷277,不。5327年,第818 - 815页,1997年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. m·a·Delgi-Esposti p . j . Smolak h·查克et al .,“TRAIL-R3克隆和表征,小说新兴TRAIL受体家族的成员,“实验医学杂志,卷186,不。7,1165 - 1170年,1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. m·a·Delgi-Esposti w . c . Dougall p . j . Smolak j.y.沃,c·a·史密斯和r·g·古德温”小说受体TRAIL-R4诱发NF-kB和防止TRAIL-mediated细胞凋亡,但保留了一个不完整的死域,“免疫力,7卷,不。6,813 - 820年,1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. 特里夏w·s·d·l·莱西c·r·邓斯坦et al .,“Osteoprotegerin:小说分泌蛋白参与骨质密度的规定,“细胞,卷89,不。2、309 - 319年,1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. s . g . Hymowitz h·w·Christinger g . Fuh et al .,“触发细胞死亡:Apo2L /跟踪在一个复杂的晶体结构与死亡受体5”分子细胞,4卷,不。4、563 - 571年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. s . g . Hymowitz m·奥康奈尔·m·h·Ultsch et al .,“一个独特的锌结合网站透露了一个高分辨率x射线结构homotrimeric Apo2L /小道,“生物化学,39卷,不。4、633 - 640年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. s . w . Fesik”,通过结构生物学见解程序性细胞死亡,”细胞,卷103,不。2、273 - 282年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. 答:德系犹太人,r·c·拜美国方et al .,“安全性和抗肿瘤活性的重组可溶性Apo2配体,“临床研究杂志,卷104,不。2、155 - 162年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. h·查克·r·e·米勒,k . Ariall et al .,“杀肿瘤的活性肿瘤坏死factor-related凋亡诱导配体体内,”自然医学,5卷,不。2、157 - 163年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. 美国k·凯利和德系,“针对死亡受体在癌症Apo2L /小道,“当前舆论药理学,4卷,不。4、333 - 339年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. 答:德系犹太人,p .荷兰和美国g .堪称“Ligand-based针对癌症:细胞凋亡的潜在的重组人类细胞凋亡配体2 /肿瘤坏死factor-related凋亡诱导配体(rhApo2L /小道),“临床肿瘤学杂志,26卷,不。21日,第3630 - 3621页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. k市川w·刘赵l . et al .,“杀肿瘤的活动的一部小说反DR5单克隆抗体没有肝细胞细胞毒性,”自然医学,7卷,不。8,954 - 960年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. h·金,r·杨,美国方et al .,“Apo2配体/肿瘤坏死factor-related凋亡诱导配体配合化疗抑制肺原位肿瘤生长和改善生存,”癌症研究,卷64,不。14日,第4905 - 4900页,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. d . r . Camidge”Apomab:兴奋剂单克隆抗体针对死亡受体5 / TRAIL-receptor 2用于实体肿瘤的治疗,”生物治疗专家意见,8卷,不。8,1167 - 1176年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. d·a·j . Li膝盖,y王et al .,“LBY135,小说anti-DR5争胜抗体诱导肿瘤特异性细胞毒性活动在人类结肠肿瘤细胞系和异种移植,”药物开发研究,卷69,不。2、69 - 82年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. p . j . Wiezorek荷兰,j .坟墓,“死亡受体受体激动剂作为癌症的靶向治疗”临床癌症研究,16卷,不。6,1701 - 1708年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. y . m .天使a .班达里a Chakrabarti et al .,“发现和优化痕迹R2受体激动剂对癌症治疗,”理解生物学使用肽,美国e . Blondelle Ed,页405 - 406,施普林格,纽约,纽约,美国,2006年。视图:谷歌学术搜索
21. y . m .天使a .班达里m . n . De弗朗西斯科et al .,“青年肽,”实验医学和生物学的发展,s . Del Valle、大肠埃舍尔和w·d·卢贝尔Eds。施普林格,页101 - 103年,纽约,纽约,美国,2009年。视图:谷歌学术搜索
22. y . m .天使m .班达里m . n . De弗朗西斯科et al .,“发现和优化痕迹R2受体激动剂对癌症治疗,”实验医学和生物学的发展卷,611年,第103 - 101页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. 诉Pavet, j . Beyrath Pardin et al .,“多价DR5肽激活小道死亡通路和发挥杀肿瘤的活动,“癌症研究,卷70,不。3、1101 - 1110年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. g . Lamanna c . r . Smulski: Chekkat et al .,“Multimerization的apoptogenic TRAIL-mimicking肽通过adamantane-based树枝石,“Chemistry-A欧洲杂志,19卷,不。5,1762 - 1768年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. k . Pulka-Ziach诉Pavet: Chekkat et al .,“硫醚类似物的disulfide-bridged针对死亡受体5:环肽构象分析、二聚作用受体激活和后果,”ChemBioChem,16卷,不。2、293 - 301年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. b . Valldorf h . Fittler l . Deweid et al .,”一个凋亡诱导peptidic七个有效的集群死亡受体5”《应用化学国际版,55卷,不。16日,1 - 6,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. c . Kaga m . Okochi m .录像h . Hayashi r·加藤和h本田、“CNSCWSKD小说八聚物肽的筛选,诱发caspase-dependent细胞死亡,”生物化学和生物物理研究通信,卷362,不。4、1063 - 1068年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. h . g . Wang x Wang Yu et al .,“小分子活化的受体DR5在人类癌症细胞,”化学生物学性质,9卷,不。2、84 - 89年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. s . Lamansky p . Djurovich d·墨菲et al .,“高度磷光bis-cyclometalated铱配合物:合成、光物理特性,并使用在有机发光二极管、”美国化学学会杂志》上,卷123,不。18日,第4312 - 4304页,2001年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. m·a·鲍多d·f·奥布莱恩y你et al .,“从有机高效磷光发射电致发光设备”,自然,卷395,不。6698年,第154 - 151页,1998年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. 通用汽车Farinola r .情景不禁啜泣,“白色有机发光二极管,场致发光材料”化学学会评论,40卷,不。7,3467 - 3482年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. h . Yersin高效有机磷光材料Wiley-VCH,德国魏因海姆,2008年。
33. c·乌布利希拜尔,c . Friebe a .冬天,和美国舒伯特,“最近的事态发展在磷光铱(iii)的应用复杂系统,”先进材料,21卷,不。44岁,4418 - 4441年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. a . b . Tamayo b . d . Alleyne p i Djurovich et al .,“合成和表征面部和子午triscyclometalated铱(III)复合物,”美国化学学会杂志》上,卷125,不。24日,第7387 - 7377页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. k . Dedeian p i Djurovich f·o·加尔,g·卡尔森和r . j .瓦”,一个新的合成路线制备一系列强劲的photoreducing代理:前沿空中管制官-tris-ortho-metalated复合物与替换2-phenylpyridines铱(III),“无机化学,30卷,不。8,1685 - 1687年,1991页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. m . s .洛瑞和s . Bernhard”综合定制激发态:磷光,cyclometalated铱(III)复合物和他们的应用程序,“Chemistry-A欧洲杂志,12卷,不。31日,第7977 - 7970页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. l . Flamigni巴比里,c·萨巴蒂b·文图拉和f . Barigelletti”协调化合物的光化学和photophysics:铱,”主题在当前化学卷,281年,第203 - 143页,2007年。视图:谷歌学术搜索
38. r·c·埃文斯·道格拉斯和c j . Winscom”协调配合物表现出室温磷光:评估的适用性作为发光二极管的三联体发射器,”配位化学的评论,卷250,不。15 - 16岁,2093 - 2126年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. y Chi和p . t .周”,过渡金属荧光粉cyclometalating配体:基本面和应用,“化学学会评论,39卷,不。2、638 - 655年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. a·g·d·马可·m·兰扎马莫et al .,“发光单核和双核的铱(III) cyclometalated复合物固定化在聚合物基体固态氧传感器,”分析化学,卷70,不。19日,5019 - 5023年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. m . c .现在,p . j .莫舍g . p . a . Yap k . s . Focsaneanu r . j . Crutchley, c, e . b . Evanc合成、表征和评价(Ir (ppy)₂(vpy) Cl] polymer-bound氧传感器,”无机化学,42卷,不。16,4864 - 4872年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. m . Licini和j·a·g·威廉姆斯,“铱(iii) bis-terpyridine复合物显示长寿pH敏感的发光,“化学通讯,没有。19日,1943 - 1944年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. k . j .手臂,w·莱斯利和j·a·g·威廉姆斯,“bis-terpyridyl铱(III)的合成和pH-sensitive发光配合物将下垂的吡啶基组,“Inorganica Chimica学报,卷359,不。4、1222 - 1232年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. f·m·m·l·Ho黄,p . n . Chen等人”的设计和合成铱(III) azacrown复杂:应用程序作为一个高度敏感的金属阳离子磷光传感器,”有机和生物分子化学,4卷,不。1,第103 - 98页,2006。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. k Konishi, h山口,a . Harada”合成的水溶性铱(iii)复杂的pH值和金属阳离子敏感的光致发光,“化学信,35卷,不。7,720 - 721年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. m . Schmittel h·林,“发光铱邻二氮杂菲冠醚复杂的检测银离子(I)在水媒体中,“无机化学,46卷,不。22日,第9145 - 9139页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. 问:赵,t·曹f·李et al .,“高度选择性和multisignaling optical-electrochemical Hg的传感器^{2 +}基于磷光铱(III)复杂,“有机金属化合物,26卷,不。8,2077 - 2081年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. k·k·w·罗·m·w·路易,刘贤美,“设计发光铱(III)和铼(I) polypyridine复合物体外和体内离子,分子和生物探针,”配位化学的评论,卷254,不。21 - 22日举行,2603 - 2622年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. k . k . w . Lo s . p . y .李和张刘贤美,“发展发光铱(III) polypyridine复合物化学和生物探针,”新化学杂志,35卷,不。2、265 - 287年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. s . k .梁刘贤郭,刘贤美,和k·k·w·罗,“发光生物素酰化试剂的设计来源于cyclometalated铱(III)和铑(III) bis (pyridylbenzaldehyde)复合物,”无机化学卷,49号11日,第4995 - 4984页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
51. k·k·w·s . p . y .李,“利用磷光过渡金属配合物的光物理、光化学性质在photofunctional细胞传感器的发展,成像试剂和细胞毒性药物,”RSC的进步,4卷,不。21日,第10585 - 10560页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
52. 刘贤,s . p . y .李:朱et al .,“结构、光物理、电化学性能、生物分子的相互作用和细胞内吸收发光cyclometalated铱(III) dipyridoquinoxaline复合物,”无机化学卷,49号5,2530 - 2540年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
53. w·h·t p k . Lee, h·w·刘,和k·k·w·罗,“发光cyclometalated铱(III) polypyridine di-2-picolylamine复合物:合成、photophysics,电化学,阳离子绑定,细胞内化和细胞毒性的活动,“无机化学,50卷,不。17日,第8579 - 8570页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
54. 刘贤张、刘h·w·t·t·h·方x g . Chen和k·k·w·罗,“发光树突cyclometalated铱(III) polypyridine复合物:合成、排放行为,和生物属性,“无机化学卷,49号12日,第5443 - 5432页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
55. 问:赵,黄c、f·李”bioimaging磷光重金属配合物,”化学学会评论,40卷,不。5,2508 - 2524年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
56. 施问:赵,m, l . et al .,“阳离子铱(III)复合物可调发射颜色的磷光染料活细胞成像,”有机金属化合物卷,29号5,1085 - 1091年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
57. m . c . Li Yu, y太阳,y, c·黄和f·李,“Anonemissive铱(III)特别复杂,点亮生活的细胞核,”美国化学学会杂志》上,卷133,不。29日,第11239 - 11231页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
58. y,李,t . Kim et al .,“生物移动锌、磷光传感器”美国化学学会杂志》上,卷133,不。45岁,18328 - 18342年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
59. h . y . Wu, z,赵,h . Wu和f·李,“比率计磷光成像hg (II)的活细胞基于中性铱(III)复杂,“无机化学,50卷,不。16,7412 - 7420年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
60. l·墨菲,a·康格里夫l .困扰o . Palsson和j·a·g·威廉姆斯,“co-stained单元中的时域成像:时间-解决发射成像显微镜使用protonatable发光铱复杂,“化学通讯,46卷,不。46岁,8743 - 8745年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
61. e . Baggaley j·a·温斯坦和j·a·g·威廉姆斯,“照明的方式看到活细胞内发光过渡金属配合物,”配位化学的评论,卷256,不。15 - 16岁,1762 - 1785年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
62. y你,”磷光bioimaging使用cyclometalated ir (III)复合物,”当前化学生物学的观点,17卷,不。4、699 - 707年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
63. r·曹j·贾、马x m .周和h·范,“膜局部铱(III)复杂的诱导内质网应激和mitochondria-mediated细胞凋亡在人类癌症细胞,”医药化学杂志卷,56号9日,第3644 - 3636页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
64. y, j .贾w·李·h·范,和m .周”发光biscarbene铱(III)复合物作为活细胞成像试剂,”化学通讯卷,49号31日,第3232 - 3230页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
65. s, m . Hosaka t俊井et al .,“磷光发光铱配合物作为hypoxia-sensing探测肿瘤在活体动物成像,”癌症研究,卷70,不。11日,第4498 - 4490页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
66. 细胞内和飞和t .俊井。在活的有机体内氧气传感使用磷光铱(III)复合物,”当前化学生物学的观点33卷,39-45,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
67. y Hisamatsu和青木,设计和合成blue-emitting cyclometalated铱(III)复合物基于特定选择的功能化,”欧洲无机化学》杂志上,卷2011,不。35岁,5360 - 5369年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
68. 铃木s Moromizato y Hisamatsu, t . y .松尾r·安和青木,“设计和合成的发光cyclometalated铱(III)复杂的N, N-diethyl氨基污渍酸性胞内细胞器和由光致辐照诱导细胞死亡,”无机化学,51卷,不。23日,第12706 - 12697页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
69. a .中川y Hisamatsu, s . Moromizato m . Kohno和青木,“合成、光化学性质pH响应tris-cyclometalated铱(III)复合物含有吡啶环2-phenylpyridine配体,“无机化学,53卷,不。1,第422 - 409页,2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
70. a .庙宇,y Hisamatsu, h . Ohwada s Moromizato m . Kohno和s .青木“光化学性质red-emitting三羟甲基氨基甲烷(cyclometalated)液铱(III)复合物有基本和硝基组和应用pH值传感和照片诱导细胞死亡,”无机化学,54卷,不。11日,页。5342 - 57,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
71. 库马尔,y Hisamatsu y .玉城丹尼,o . Ishitani和青木,“设计和合成heteroleptic cyclometalated铱(III)包含quinoline-type配体配合物表现出双重磷光,”无机化学,55卷,不。8,3829 - 3843年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
72. y Hisamatsu,涩谷,铃木n r·安和青木,“设计和合成两亲性和发光tris-cyclometalated铱(III)复合物含有阳离子肽诱导物和探测器通过calcium-dependent细胞死亡通路,”Bioconjugate化学,26卷,不。5,857 - 879年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
73. 铃木y Hisamatsu: a . Masum et al .,“阳离子两亲性tris-cyclometalated铱(iii)复合物诱导肿瘤细胞死亡与Ca通过交互^{2 +}钙调蛋白复杂。”Bioconjugate化学,28卷,不。2、507 - 523年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
74. k .提价y Hisamatsu、k . Naito和青木,“设计、合成、抗癌活性cyclometalated三羟甲基氨基甲烷(ppy)液铱(III)复合物有阳离子肽在4 -安置的ppy配体(ppy = 2-phenylpyridine),“欧洲无机化学》杂志上,卷2017,不。44岁,5295 - 5309年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
75. 青木,y松尾s Ogura et al .,“特定选择的芳香取代反应cyclometalated ir (III)复合物:合成、光化学性质代替红外(III)复合物表现出蓝色、绿色和红色荧光发射,“无机化学,50卷,第818 - 806页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
76. e . a .睡h·朱s . c . Chow m·麦克法兰d·w·尼科尔森和g·m·科恩“Benzyloxycarbonyl-Val-Ala-Asp(当地)fluoromethylketone (Z-VAD-FMK)抑制细胞凋亡通过阻断CPP32的处理,“生物化学杂志,卷315,不。1、21 - 24日,1996页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
77. a . Degterev j . Hitomi m . Germscheid et al .,“识别RIP1激酶作为一个特定的细胞necrostatins的目标,“化学生物学性质,4卷,不。5,313 - 321年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
78. 清水k .渡渡鸟m . Katoh t m .高桥和m . Sodeoka”抑制氢peroxide-induced坏死细胞死亡与3-amino-2-indolylmaleimide衍生品”生物有机和药物化学字母,15卷,不。12日,第3118 - 3114页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
79. g .•库普曼c·p·Reutelingsperger g . a . Kuijten r . m . Keehnen s . t .朋友和m . h . van Oers”膜联蛋白V流仪检测磷脂酰丝氨酸的表情B细胞发生凋亡,”血卷,84年,第1420 - 1415页,1994年。视图:谷歌学术搜索
80. 蠕虫类,c . Haanen h . Steffens-Nakken, c . Reutellingsperger”小说为凋亡流试验仪检测磷脂酰丝氨酸表情早期凋亡细胞使用荧光素标记膜联蛋白V,”《免疫学方法,卷184,不。1,39-51,1995页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
81. P.-K。李,H.-W。刘,S.-M。姚,m,硕士。路易,k . K.-W。瞧,“发光cyclometallated铱(III) bis (quinolylbenzaldehyde)二亚胺complexes-synthesis, photophysics,电化学,蛋白质交联特性,细胞毒性和细胞吸收,”道尔顿事务,40卷,不。10日,2180 - 2189年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
82. t . s . m . s . p . y . Li, k . s . m .姚和k . k . w . Lo”Cyclometalated铱(III)聚胺复合物和强烈的长寿多色磷光:合成、晶体结构、光物理行为,细胞吸收,和转染属性,“Chemistry-A欧洲杂志,18卷,不。42岁,13342 - 13354年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
83. 诉z太阳,z, t·j·戴明和d . t .龟井静香,“细胞内cell-penetrating块copolypeptide囊泡的命运,”《生物高分子,12卷,不。1,10号至13号,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
84. t .木村,y Takabatake、t .高桥和y Isaka,“在癌症治疗氯喹:自噬的一把双刃剑,”癌症研究,卷73,不。1,3 - 7,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
85. 美国滴,̈se和k·奥腾朵夫说:“Bafilomycins和concanamycins抑制剂V-ATPases P-ATPases,”实验生物学杂志》上卷,200年,页1 - 8,1997。视图:谷歌学术搜索
86. 诉Novohradsky z . Liu m . Vojtiskova p . j .萨德勒诉Brabec和j . Kasparkova”机制的细胞积累的铱(III)五甲基环戊二烯基抗癌复杂的包含一个C, N-chelating配体,“Metallomics》第六卷,没有。3、682 - 690年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
87. w·a·Catterall和j . Striessnig受体Ca的网站^{2 +}通道拮抗剂。”药理科学趋势13卷,第262 - 256页,1992年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
88. g . h . Hockerman b z彼得森,b·d·约翰逊和w·a . Catterall”分子药物对l型钙通道绑定和行动的决定因素,”药理学和毒理学的年度审查,37卷,不。1,第396 - 361页,1997。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
89. d . j . Triggle“钙通道拮抗剂:临床用途:过去、现在和未来,“生化药理学,卷74,不。1、1 - 9,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
90. h . j . Motulsky a . s .梅塞尔·m·d·Snavely和p . a . Insel“奎尼丁竞争对手在α1和α2 -肾上腺素能受体,”循环研究,55卷,不。3、376 - 381年,1984页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
91. k .柴田a . Hirasawa r . Foglar s小川和g . Tsujimoto“奎尼丁和维拉帕米对人类的影响心血管α1-adrenoceptors,”循环,卷97,不。13日,1227 - 1230年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
92. g .施赖伯a .巴拉克和m . Sokolovsky“丙吡胺和奎尼丁结合逆选择性在心脏和额外的心脏毒蕈碱的受体大鼠组织,”心血管药理学杂志》上,7卷,不。2、390 - 393年,1985页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
93. j·a·哈罗和n s Dhalla奎尼丁对钙的影响兔心脏线粒体和sarcotubular囊泡运输活动,“生化药理学,25卷,不。8,897 - 902年,1976页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
94. w·范·Driessche,”青蛙皮肤顶端钾离子通道的生理作用,”生理学杂志,卷356,不。1,第95 - 79页,1984。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2018,阿卜杜拉·阿尔Masum等。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。