文摘

铜(II)配合物与人第一代喹诺酮抗菌代理人诺氟沙星含有氮杂环配体2,2′关于环(bipy)或1,10-phenanthroline(苯酚的)准备和以红外光谱、电子顺磁共振光谱、摩尔电导率,和元素分析。实验数据表明,诺氟沙星是协调通过carboxylato铜(II)和酮氧原子。交互的铜(II)配合物与牛血清白蛋白(BSA)和人血清白蛋白(HSA)研究使用色氨酸残基的荧光猝灭和铜(II) EPR谱。荧光滴定的结果显示,铜(II)配合物有一个温和的固有荧光熄灭能力白蛋白通过静态猝灭机制。EPR实验表明,BSA和HSA铜(II)网站与不争夺铜(II) -bipy和铜(II)苯酚的mixed-ligand复合物形成蛋白质。铜(II)配合物与相应的配体,trypanocidal活动进行评估在体外对鲁兹锥体恰加斯病的病原体。执行的测试使用血液trypomastigotes表明,铜(II) -N-donor前体和比自由氟喹诺酮金属配合物更活跃。

1。介绍

恰加斯病,造成的鲁兹锥体原生动物,是一个寄生虫病流行,影响大约800万人在拉丁美洲和每年导致约50000人死亡1]。唯一两个可用药物治疗恰加斯病是使用苄硝唑和硝呋莫司,但都表现出严重的副作用(2]。目前的这种疾病证明化疗的局限性寻找新药的候选人,可以有效和选择性对这种寄生虫,但较低的毒性和负担得起的成本。

诺氟沙星(也)、1-ethyl-6-fluoro-1 4-dihydro-4-oxo-7——(1-piperazinyl) -quinoline-3-carboxylic酸,于1978年申请了专利,是合成和强有力的氟喹诺酮类抗菌剂(3]。也用于临床治疗许多感染包括前列腺癌、皮肤、肺、消化道和泌尿道感染(4]。

比他们的自由配体金属配合物可以更活跃。到目前为止在金属配合物研究含N-donor杂环coligand吸引了大量的关注。配体2,2′关于环(bipy)和1,10-phenanthroline(苯酚的)协调双配位基的金属中心模式已被证明是更积极比monodentate像吡啶配体对微生物。考虑N-donor杂环配体的性质,结果发现文献中表明,抑制微生物的生长提高苯酚的> bipy[的顺序5,6]。

在文献中有一些例子诺氟沙星铜(II)配合物含有氮捐赠者配体(6- - - - - -11]。然而,一些例子关于反t . cruzi氟喹诺酮类复合物活性可以找到(12- - - - - -15)以及他们使用EPR清蛋白相互作用的研究。

在最近的研究中,我们小组研究了反t . cruzi活动sparfloxacin和左氧氟沙星包含N-donor铜(II)配合物配体,发现bipy和苯酚的改善其生物活性。这些配合物与DNA结合,暗示作用机理可能涉及这个分子(12,14]。

在这项工作中,我们准备了两个铜(II)诺氟沙星包含N-donor配体复合物,2,2′关于环或1,10-phenanthroline,其反t . cruzi活动进行了测试。鉴于药物与血液组件之间的相互作用可以影响其生物利用度16),这些复合物的相互作用与牛和人血清白蛋白(BSA和HSA)也进行调查,使用的固有荧光蛋白和铜(II)的EPR谱离子。

血清白蛋白是最丰富的蛋白质,代表52 - 60%的总血浆蛋白质。人血清白蛋白(HSA)结合不同类型的配体在多个网站。HSA许多化合物提供了一个存储区域,影响药物动力学的药物,抑制一些配体的取向提供代谢改变,使潜在的毒素无毒运输处置场所,占大多数的人类血清抗氧化能力,和充当没有载波讯号17]。

直到最近,x射线结构调查哺乳动物血清白蛋白只集中在人血清白蛋白(HSA)存入(结构http://www.rcsb.org/),但在2012年从牛血清白蛋白孤立的晶体结构,马,野兔的血浆存入RBSC PDB (http://www.rcsb.org/)[18]。BSA是一种使用最广泛的蛋白质的蛋白质在许多实验研究和用作HSA的替代品,但它展品只有75.8%的身份与HSA [18]。HSA绑定有两个主要地区,站点I和II, 585个氨基酸残基,只有一个色氨酸(Trp)位于位置214在疏水口袋里。BSA有两个色氨酸残基(Trp 134和Trp 212), Trp 134位于分子的表面,Trp 212被位于疏水口袋16]。

色氨酸的固有荧光被广泛用于研究药物和蛋白质之间的相互作用(9,13,16,19]。是很重要的,但是,记住,有些结合位点远离Trp残留,没有交互将检测到。另一方面,许多药物吸收紫外线的辐射区域的电磁波谱和产生的构件(如内部过滤效应,而非淬火和某些药物的直接激发的荧光,而不是能量转移。因此荧光猝灭和能量转移的实验必须始终遵循光学吸收的测量,必须仔细的修正。

2。实验

2.1。材料

BSA, HSA,诺氟沙星,2,2′-bipiridine, CuCl₂h·2₂啊,(CuCl₂(苯酚的)]从Sigma-Aldrich购买。所有溶剂都从默克公司购买。

4×10⁻⁶摩尔L⁻¹BSA和HSA的解决方案准备在磷酸缓冲pH值7.4。1.0×10⁻³摩尔L⁻¹原液的铜(II)配合物制备使用2.5%的二甲亚砜(DMSO)和磷酸缓冲pH值7.4。

2.2。装置

元素分析PerkinElmer 2004中文元素分析仪。摩尔电导率测量在二甲基甲酰胺(DMF)的解决方案,1×10⁻³摩尔L⁻¹浓度,使用Quimis模型Q405M电导仪。红外光谱是获得马特森仪器星系3000分光光度计使用KBr丸。x波段电子顺磁共振(EPR)谱获得的力量ESP300E光谱仪调制100 kHz的频率和调制振幅1吨。冷冻水解决方案的复合物(~ 5×10⁻⁴摩尔L⁻¹)测量液体温度(77 K)管的内部直径3毫米。

2.3。(CuCl的合成₂(bipy)]的前兆

(CuCl₂(bipy)]前体制备使用方法在文献中所描述的相似(14),通过溶解CuCl克分子数相等的金额₂h·2₂O和2,2′关于环(1.74更易)20毫升的丙酮。允许混合搅拌回流24小时然后真空过滤。(CuCl₂(bipy)]进行元素和红外分析。

2.4。合成的配合物

(CuCl(也)(bipy)] Cl (1)是通过溶解和(0.31更易)丙酮(30毫升)微微加热,使。冷却后的解决方案到室温(CuCl丙酮溶液₂(bipy)](0.31更易)补充道。混合物在室温下搅拌24小时。的固体沉淀过滤,用乙醚洗净,晒干在真空。(CuCl₂(苯酚的)(不)(2)准备根据我们前面类似的方法描述(12]。复杂的是0.31通过溶解更易也在大约40毫升的丙酮。在那之后0.31 (CuCl更易₂(苯酚的)]是溶解在甲醇添加到解决方案。混合物仍然回流,搅拌约24小时。使用一个旋转蒸发器溶剂体积减少。形成的沉淀过滤在真空条件下,用乙醚洗净,晒干。图1显示了复合物的协调方案1和2。(CuCl (bipy)(也)]Cl·2 h₂O (1):绿色的固体。收益率:73%。肛交。48.2:发现,C, H 4.5, 10.8 N。Calc. C₂₆H_30.Cl₂CuFN₅O₅4.7,48.3 C, H, N 10.8%。摩尔电导率(1×10⁻³摩尔L⁻¹H₂O): 116.5μ年代厘米⁻¹。红外(cm⁻¹):1570年代ν(C = O)_p;1630年代(首席运营官⁻);1396米ν_年代(首席运营官⁻)。TG:质量损失(351 - 439 K): 10.5%(发现),11.0%(钙)。(CuCl₂(苯酚的)(也)]·3 h₂O (2):绿色的固体。收益率:90%。肛交。48.9:发现,C, H 4.6, 10.4 N。Calc. C₂₈H₃₂Cl₂CuFN₅O₆4.7,48.9 C, H, N 10.2%。摩尔电导率(1×10⁻³摩尔L⁻¹,DMF): 22.4μ年代厘米⁻¹。红外(cm⁻¹):1580年代ν(C = O)_p;1628年代(首席运营官⁻);1386米ν_年代(首席运营官⁻)。TG:质量损失(351 - 434 K): 7.0%(发现),7.8%(钙)。

2.5。寄生虫

Y的t . cruzi使用整个实验(21]。血液通过心脏穿刺收获从形式t . cruzi瑞士来华的老鼠在寄生虫血症[的高峰期21]。

2.6。Trypanocidal分析

为在体外分析trypomastigotes,寄生虫孵化在310 K的存在增加剂量(0 - 200μ米)的复合稀释杜尔贝科的修改鹰与5%胎牛血清的培养基补充和1毫米l谷氨酰胺(dm) [22]。24小时后,死亡率是由光学显微镜通过活寄生虫的直接量化使用纽鲍尔室,和电子商务₅₀值(药物浓度,减少活寄生虫的数量的50%)被计算报告(2,23]。

2.7。哺乳动物细胞培养和毒性分析

胚胎心肌细胞(CM)的主要文化进行了从小鼠胚胎从怀孕的女性(18 - 20天怀孕)。怀孕的动物安乐死和心灵的胚胎收集。然后心室受到连续步骤的机械和酶解离(0.05%胰蛋白酶和0.01%胶原酶5分钟/ 37°C)。净化后的厘米被播种密度为0.05×10⁶cell / 96孔酶标,包含gelatin-coated盖滑倒和持续在杜尔贝科修改鹰的媒介,补充5%胎牛血清,2.5毫米CaCl₂1毫米l谷氨酰胺,2%的鸡胚胎提取(DMEM) [24]。所有程序都按照指南进行FIOCRUZ伦理学委员会建立的动物(许可证LW-16/14)的使用。所有的文化都维持在37°C的氛围中5%的股份有限公司₂,分析运行至少三次重复。为了排除有毒化合物对哺乳动物宿主细胞的影响,未受感染的CMs孵化24 h在37°C存在与否的化合物(最高可达200μ在DMEM)稀释,然后他们的形态是评估通过光学显微镜和MTT比色测定细胞活力测定(25]。控制,只有车辆使用。490纳米波长的吸光度测定,分光光度计(VERSAmax可调、分子器件、美国)允许LC的决心₅₀值(药物浓度降低50%的细胞生存能力)和相应的选择性指数(SI = LC₅₀/电子商务₅₀)。

2.8。白蛋白结合的研究

稳态荧光测量进行Varian-Agilent卡里Eclipse或PTI QM1荧光系统。紫外可见吸收光谱得到安捷伦二极管阵列分光光度计型号8452。荧光寿命测量使用IBH-Horiba-Jobin Yvon TCSPC系统。NanoLEDs 1.0 ns名义脉冲持续时间和1 MHz重复率是用作激动人心的内在HSA光源或BSA荧光(283海里),也没有荧光(330海里)。

淬火的白蛋白荧光被测量3毫升的BSA或HSA (4×10⁻⁶摩尔L⁻¹在磷酸缓冲10毫米)pH值7.4。白蛋白的解决方案被连续滴定添加复杂的股票的解决方案。BSA的荧光发射光谱和HSA测量使用的激发波长290 nm。实验环境温度(296 K)和pH值7.4。

的电子顺磁共振研究交互复合物与HSA和BSA的克分子数相等的解决方案(0.5×10⁻³摩尔L⁻¹BSA)或保险公司与每个铜(II)复杂准备在0.020摩尔L⁻¹磷酸缓冲pH值7.4。在77 K EPR谱了。

3所示。结果与讨论

3.1。Microanalyses和摩尔电导率研究

Microanalyses和摩尔电导率数据显示的形成(CuCl (bipy)(也)]Cl·2 h₂O (1)和(CuCl₂(苯酚的)(也)]·3 h₂O (2),氟喹诺酮类和协调作为一个中立的双齿配体。水合热重数据证实了存在水分子复合物的结构。复杂的1展出pentacoordinated结构符合大多数例子发现文献中铜(II) -fluoroquinolone-N N-donor复合物。这提出了一个方形锥体几何证实了x射线晶体结构(7- - - - - -10,26]。复杂的2hexacoordinated并提出的八面体几何不常见的这种类型的配合物。在文献中有例子的x射线hexacoordinated氟喹诺酮类复合物的晶体结构没有N, N-donor [27,28]。

3.2。红外光谱研究

自由诺氟沙星的红外光谱(也)表现出一群1730厘米⁻¹这是分配给价羧基伸展的振动和一个乐队在1616厘米⁻¹被分配到吡啶酮拉伸(29日]。最典型的振动特点的协调类型metal-quinolone使用喹诺酮类的复杂特性。在配合物的红外光谱1和2的吸收振动没有观察到,由于羧基的去质子化,表明这一群体参与协调。两个新的很强的特点乐队出现在1630和1628厘米⁻¹和1396和1386厘米⁻¹并被分配到ν(首席运营官⁻)非对称和对称拉伸振动复合体1和2分别,而从1616年到1570年,1580厘米吗⁻¹在协调1和2,分别。

的区别是一个有用的特征来决定喹诺酮配体的协调模式。Δ值复合物1和2234和242厘米吗⁻¹分别指示monodentate协调模式和carboxylato集团(30.]。整体变化的红外光谱表明诺氟沙星配体是协调通过吡啶酮铜(II)和一个氧羧酸盐在中立的两性离子形式。

3.3。电子顺磁共振光谱的铜配合物

室温的x波段EPR谱1和2复合物粉末样品呈现在图2和参数表1。(CuCl的频谱₂(苯酚的)也提出了比较,与轴向对称单核铜配合物的特点,缺乏在室温下超精细分裂,通常观察到集中固体铜(II)配合物14]。复杂的1是一个单核和双核铜(II)配合物的混合物。其EPR谱叠加频谱类似于铜(苯酚的)光谱和解决紧身上衣,与三重态(,=±1)双核的复合物(14,31日,32]。

复杂的室温EPR谱2是一个非常宽泛的叠加(~ 330高斯)组件由于强烈的取向作用叠加100高斯线宽组件吗地区。

(CuCl的EPR谱₂(苯酚的)]和复合物1和2水在77 K呈现在图3(参数表1)。它可以观察到的光谱mixed-ligand复合物几乎完全是由于双核的物种,单核物种的一小部分,而(CuCl₂(苯酚的)]提出了一种单核光谱超精细分裂表明聚合的缺席导致交换(12]。

两个铜(II)离子之间的距离可以从零场分裂估计参数。的平均距离两个耦合之间的未配对电子可以通过使用下面的公式计算:

为在高斯和是在埃33]。计算距离的双核的复合物1和2是3.9。这个距离是类似于那些获得其他铜(II)双核的复合物(12,34,35]。

3.4。反鲁兹锥体活动

所有的复合物的影响、前兆和使用苄硝唑,参考药物,对血液trypomastigote形式的t . cruzi(Y应变),表示为EC₅₀及其相应的选择性指数(SI LC之间的比率₅₀和电子商务₅₀值,表2)进行评估。

自由诺氟沙星(也)和CuCl₂产生了对血液trypomastigotes trypanocidal作用低,表现出一个电子商务₅₀的价值和μM,分别。同样可以观察到当trypomastigotes (CuCl暴露₂也没有),显示一个电子商务₅₀的价值μM(表2)。

的络合铜(II) - 2, 2′关于环(bipy)提高了反t . cruzi活动。(CuCl₂(bipy)(也)]一个EC展出₅₀的价值μM (CuCl₂(bipy)]的前兆表现出一个电子商务₅₀的价值相同的顺序:电子商务₅₀=μm .因此我们建议活动提出的复杂1可以与相关的(CuCl₂(bipy)]前兆显示类似的活动来参考药物,使用苄硝唑(EC₅₀=μ米)。

(CuCl₂(苯酚的)]和[CuCl₂(苯酚的)(也)]透露自己是最活跃的化合物,具有电子商务₅₀的值和μM,分别。这些化合物比使用苄硝唑活跃2 - 3倍,是最有前途的反t . cruzi代理。

自由基地的相对毒性及其金属配合物在未受感染的评估厘米。24小时的治疗后,所有化合物诱导细胞生存能力和细胞收缩剂> 12μM(表2),因此相应的低SI值是暗示了一个通用的毒性。

3.5。白蛋白结合的研究

在本节中,荧光猝灭BSA和HSA的铜(II)离子,铜(II) -bipy、铜(II)苯酚的复合物1和2被监控。紫外线吸收和发射光谱都是注册。激发的荧光衰变曲线在283 nm,排放在340 nm得到没有饮料,中介和最终淬火浓度。原始数据可以在网上补充材料http://dx.doi.org/10.1155/2016/5027404。荧光强度的减弱是事件和发射光的吸收。这些衰减效应称为中小学内部过滤效果,分别,不包含分子信息。荧光光谱是纠正使用以下表达式(36]: 在哪里和是纠正和观察到的荧光强度,和激发和发射波长的吸光度,分别和在cm中光路。这个表达式假定的吸收和发射部分样品本地化中心的试管,观察是一个很好的近似吸光度小于0.5。

图4显示了一个示例的修正获得的荧光光谱滴定BSA与复杂1在290 nm,激发。BSA有很强的荧光发射峰在338 nm由于两个Trp残留,而保险公司(补充材料)在336纳米荧光发射峰由于单一Trp 214残渣。酪氨酸残基的荧光激发波长使用可以忽略不计的。

BSA的荧光强度下降和HSA观察铜(II)和所有四个复合体(图5),表明铜(II)是一个重要的淬火装置。图5显示Stern-Volmer情节的淬火HSA和BSA荧光复合物。它可以观察到,在低浓度没有淬火,表明高亲和力的网站对铜(II)和复合物不与Trp残留物(s)交互。对于复杂的浓度大于2或4×10⁻⁶摩尔L⁻¹故事情节都是线性的,建议在第二个站点交互。

猝灭荧光团的药物可以通过一个静态或动态过程发生。一个站点上的静态或动态淬火可以Stern-Volmer方程所描述的36]: 在哪里和的荧光强度是白蛋白复合物的缺失和存在,分别。是饮料的浓度,Stern-Volmer猝灭常数,与双分子的碰撞过程中动态猝灭,但静态猝灭的缔合常数。Stern-Volmer常数得到的线性区域地块(表3)。

Stern-Volmer常数,10的⁴L摩尔⁻¹表明配合物有主持与HSA和BSA的交互。

静态猝灭和动态猝灭都需要分子荧光团和冷却器之间的联系。在碰撞中淬火,淬火必须分散荧光团的激发态的寿命。接触后,荧光团返回到基态时发射的光子和激发态的生命周期的变化。在静态猝灭nonfluorescent复杂荧光团和冷却器之间形成,不导致荧光,一生不会改变(36]。为了区分静态猝灭和动态猝灭,HSA和BSA的荧光衰减,寿命是衡量使用time-correlated单光子计数(TCSPC)技术。观察到衰变概要文件是不会受到铜(II)离子的存在或铜(II)配合物。因此得出结论,一个nonfluorescent基态复杂的形成。

共振能量转移(RET)也减少了荧光强度和不同于静态或动态猝灭,因为它不需要分子接触。捐赠的药物必须是受体分子(Trp残渣,在这种情况下);也就是说,药物的吸收光谱必须与Trp发射光谱重叠。也就是一个很好的候选人Trp受体(见补充材料的吸收光谱),但它是观察到荧光增加约408海里(见图4)具有相同的大小也没有的直接激励。此外,一生没有修改消除RET的建议。

Živec et al。9]发现1:2铜:也和1:1:1 Cu:和:苯酚的复合物具有良好的结合人类倾向和牛血清白蛋白结合常数的数量级这些通过我们和表所示3。然而,他们没有正确的淬火结果为内滤效应及其绑定常量是高估了。

3.6。白蛋白结合铜(II)配合物的电子顺磁共振研究

人类和牛血清白蛋白有至少两个铜(II)结合位点(表示和),包括一个强大的氨基端网站,结合铜(II)在square-planar几何通过四个氮配体(),这是类似于人类和牛白蛋白(37- - - - - -39]。这个最高的亲和力是由金属结合位点αnh₂原子N, N原子的前两个肽债券,N₃His3元素的原子。这个氨基端站点相当特定的过渡金属离子和结合铜(II)和镍(II)在形式,不会生成活性物种17]。

Cys34是唯一半胱氨酸与自由巯基集团不参与与任何外部配体(二硫键40)和参与第二个铜结合位点。有证据表明,第二个铜(II)结合deprotonated Cys34残渣(41]。

图6显示铜(II)的EPR谱(0.5毫米)的克分子数相等的数量的HSA BSA (a)和(b),光谱特性的叠加两个结合位点(标有1和2的超精细线条地区,在图6)。的区域是一个叠加的两个站点的线路。它可以注意到HSA和BSA光谱是非常相似的。pH值7.4网站都占领了即使在1:1摩尔比,已经发现帕特尔和Pandeya42]。铜(II) bsa EPR谱模拟(b′)使用EasySpin [20.)和参数出现在桌子上4。

图6也显示了铜(II) -bipy和铜(II)苯酚的EPR谱的克分子数相等的数量的储蓄帐户((c)和(d))。两个配合物的光谱非常相似,也显示两个结合位点的叠加。它可以注意到标签为1的行有相同的位置(c)和(d)在(a)和(b),表明相同的绑定的环境。这可能是由于关于环的位移和邻二氮杂菲HSA配体的结合铜(II)在第一个网站。第二个网站的超精细线条(标记为2′),然而,是流离失所的更高的字段值,指示转移到一个较低的值相对于铜(II)网站2。铜的EPR谱(bipy) (HSA)也是模拟(c′)使用EasySpin [20.)和两个站点的参数出现在桌子上4。这一分析表明mixed-ligand复合物的形成铜(bipy) (HSA)和铜(苯酚的)(HSA)在第二个站点。光谱((c)和(d))也显示人口的增加网站2′相对于网站1,说明这个网站的高亲和力的复合物而不是裸铜(II)离子。BSA也发现类似的结果(见图7,(d)和(h))。

图7显示了EPR谱获得当HSA和BSA被添加到解决方案的铜配合物的摩尔比率1:1 ((a)、(c)、(e)和(g))。它可以观察到,双核的复合物的一小部分(标注3)行单核配合物解离和白蛋白结合,呈现EPR谱特性的叠加两个铜(II)结合位点(标签1和2′行)。图7还显示了各自的EPR谱铜(II) -bipy和铜(II)与HSA和BSA添加苯酚的1:1 mol / l比值((b)、(d) (f)和(h))。的双核的复合物(标注3)在缺席的情况下也不缺席,但两个站点的线路出现在相同的位置(见竖线标签1和2′),因此类似的EPR参数。得出两个铜(II)网站在白蛋白与和铜(II) -bipy和铜(II)苯酚的复合物。也许,mixed-ligand复合物铜(bipy) (SA)和铜(苯酚的)(SA)形成在网站2,在SA代表血清白蛋白。站点1可以取代这两个配体,由于光谱参数一样铜(II)离子。

比较每两个配合物的光谱有和没有也不(图7),注意到组件1和2′出现不同的分数。站点1组件是更大的存在((a)、(c)、(e)和(g))比缺乏和((b)、(d) (f)和(h))。平衡的存在也转向更大的站点1的人口。一个可能的解释是,分离和分子也与白蛋白结合站点附近2和与这个网站的复合物。

由于白蛋白分子不能取代所有的还是双核mixed-ligand复合物的分子,一个认为协会常量的铜(II) -bipy和铜(II)与血清白蛋白苯酚的相同的数量级与也。

在的情况下t . cruzi活动,也观察到类似的结果单和mixed-ligand复合体(见表2)。这一结果表明,铜(II) -bipy和铜(II)苯酚的主要活性物种在这些实验。基于结果证明BSA和HSA铜(II)网站与和争夺铜(II) -bipy和铜(II)苯酚的形成mixed-ligand复合物,它是合理的建议网站的重要活动t . cruzi还可以从混合取代也复合物,因此只有铜(II) -bipy和铜(II)苯酚的绑定到相关的网站。

4所示。结论

两个铜(II)配合物与诺氟沙星的捐赠者杂环氮配体2,2′关于环或1,得到了10-phenantroline:方形锥体或三方晶系的双锥体(CuCl (bipy)(也)]Cl·2 h₂O (1)和八面体(CuCl₂(苯酚的)(也)]·3 h₂O (2)。在这些配合物,诺氟沙星是协调通过carboxylato铜(II)和酮氧原子。

铜配合物的trypanocidal活动使用血液trypomastigotes测试。结果表明,(CuCl₂(苯酚的)]和[CuCl₂(苯酚的)(也)]·3 h₂O是最活跃的化合物。然而,EPR交互研究表明,BSA和HSA与形式mixed-ligand复合物,而且只有铜(II)苯酚的结合这些蛋白质的相关网站。这表明,铜(II)苯酚的反负责t . cruzi活动。

荧光滴定结果显示,低浓度的铜(II)配合物不与BSA和HSA Trp附近的残留。事实上,最高的亲和力铜在BSA和HSA包括前三个残基的氨基端,31到35远离Trp214在HSA (4 la0 RCSB PDB)或Trp213 BSA (4 f5 RCSB PDB)。之间的距离α碳Asp1和Trp134 BSA是更大的,40。然而,在浓度大于大约一半的白蛋白浓度、交互发生在白蛋白的第二个网站。值,约10⁴L摩尔⁻¹表示,一个温和的亲和力的白蛋白复合物网站。EPR的结果表明,这个网站取代也复杂,只有铜(II) -bipy和铜(II)苯酚的绑定到蛋白质。

电子顺磁共振研究白蛋白结合的铜(II)配合物显示协会常量的铜(II) -bipy和铜(II)与血清白蛋白是苯酚的相同的数量级与也不一样,由于白蛋白分子无法取代所有的或分子从双核的mixed-ligand复合物。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

本研究支持Fundacao德帕罗尽管做Estado de米纳斯吉拉斯(FAPEMIG), Fundacao卡洛斯恰加斯球场德帕罗尽管带动做里约热内卢(FAPERJ) FIOCRUZ,慰问Nacional de Desenvolvimento Cientifico e学府(CNPq)。巴西的电子顺磁共振波谱仪Centro de尽管运动(CBPF)被用于这项研究。

补充材料