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| 分离和纯化步骤 |
作者 |
| 吉尔和托马斯,1999年 |
哈蒙德et al。2006 b |
Mukhamedzhanova等,2011;伊万诺夫et al .,2011年 |
Donchenkoet al .,2017年 |
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| 收益率(毫克病毒/ 100 g(绿色植物)和宿主植物使用 |
23.4 /土荆芥amaranticolor/ |
8.6 - -12.4 /烟草benthamiana/ |
3.4 /马齿苋属的植物大花蔷薇/ |
20.0 /马齿苋属的植物大花蔷薇/
57.3 /烟草benthamiana/ |
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| 均化缓冲 |
0.02М硼酸钠缓冲,
0.5%的钠2所以3,
рН8.2
(每150克250毫升缓冲区的叶子) |
0.5 K2H / KH2P04,
0.5%的钠2所以3,
рH 8.4
(3 - 5个叶子的缓冲体积/重量) |
0.3Мglycine-КОН,
1%的钠2所以3,
рН7.5
(3毫升缓冲/ 1 g的叶子) |
0.3Мglycine-КОН,
1%的钠2所以3,
рН7.5
(3毫升缓冲/ 1 g的叶子) |
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| 从植物组织病毒浓缩 |
离心分离
特里同x - 100年的0.5% |
离心分离
特里同x - 100, 2%
4%挂钩8000年,
2%氯化钠 |
离心分离
特里同x - 100年的1%
5%挂钩6000年,
2%氯化钠
(个人沟通) |
离心分离
特里同x - 100年的1%
降水的两个阶段:
(1)5%的挂钩6000年,
2%氯化钠
(2)8%的挂钩6000年 |
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| 提取的病毒颗粒 |
- - - - - - |
在0.1М提取硼酸钠缓冲,
0.1М氯化钾,
рН8.0 (BK缓冲区),
0.75 - -1.5小时。 |
提取Tris-HCl在0.05米,
0.01 EDTA,
pH值8.0,
(个人沟通) |
提取在0.05МTris-HCl,
0.01МEDTA,
рН8.0,
两个阶段2 - 6小时。 |
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| 超速离心法步骤 |
(1)分离的10 - 40%蔗糖梯度(0.01МTris-HCl, 0.001МEDTA,рН8.0)
(85 000克,4小时)
(2)病毒降水(85 000克,2.5小时) |
(1)分离30%蔗糖垫(BK缓冲)(85 600克,2.5小时)
(2)由中海梯度分离,密度1.32克/厘米3(139 000克,16 - 20小时)
(3)透析对0.5хBK缓冲区1 l(3)变化 |
(1)病毒降水
(100 000克,1.5小时)
(个人沟通)
(2)分离30%蔗糖垫(110 000克,2.5小时)
(个人沟通) |
(1)病毒降水
(111 000 g, 3小时)
(2)分离30%蔗糖垫(提取缓冲)
(111 000克,4小时) |
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| 光谱分析(
,0.1
) |
2.84 |
2.5 |
2.84 |
2.84 |
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