用Prune Belly综合征研究胎儿睾丸结构

摘要

目的．比较西梅腹部综合征(PBS)胎儿的睾丸结构与正常对照。材料和方法．我们用PBS对3个胎儿的6个睾丸和7个男性胎儿的14个睾丸进行了研究。睾丸标本切成5-μM厚切片并用苏木精和曙红（HE）染色，观察糖尿管;Weigert的解决方案观察弹性纤维;和picrosirius红色观察胶原蛋白。使用Olympus BX51显微镜和Olympus DP70相机捕获图像。使用图像Pro和Image J程序进行了立体学分析。使用Mann-Whitney进行统计比较的手段测试()．结果．定量分析证明无差异(）在PBS睾丸中的嗜合细胞（ST）的数量（平均值= 8.87％，)，与对照组比较(平均值= 11.4%，)和无差异(）在PBS睾丸中直径（平均值= 52.85 μ米,)，平均为53.17μ米,)，但我们确实观察到一个更低的数字()，平均为67.03%)，与对照组比较(均数= 90.1%和)．结论．我们的研究显示三联征胎儿的间质细胞浓度较低。

1.介绍

Prune belly syndrome (PBS)或三联征综合征是一种疾病，其特征是腹部肌肉缺乏或发育不良，泌尿道畸形，如大而低张的膀胱，扩张而曲折的输尿管，以及双侧隐睾[1］.腹部内隐睾及不孕症是梅子肚综合征的普遍特征[2］.该综合征隐睾的病因尚不清楚，但推测可能是前腹壁的解剖改变阻碍了腹内压力的增加，这是睾丸下降的必要因素之一[3.］.最近，在胎儿中患有PBS的胎儿睾丸结构的重要改变[4］.

先前的研究表明，发芽性上皮显着降低，并且糖尿管直径随着修剪腹膜综合征的患者患者的年龄增加[5- - - - - -8］.然而，在PBS中对人胎儿时期的输精管、细胞外基质和间质细胞进行结构和定量分析的文献很少。

我们的研究假设如下:PBS与正常胎儿的输精管结构和间质细胞数量是否相似?PBS腹腔内压力增加是否引起睾丸结构改变?

因此，本文的目的是将捕获术中睾丸的结构与Prune Belly综合征（PBS）进行比较和对比正常对照。

2.材料和方法

这里描述的实验方案是由我们大学人体实验伦理委员会批准的。这项研究是按照医院人体实验机构委员会的道德标准进行的。

我们用PBS从3名男性胎儿中获得6个睾丸(典型的前腹壁，前列腺尿道阻塞，膀胱增大，双侧肾积水)和从7名男性胎儿中获得14个睾丸，没有异常。胎儿在宏观上保存得很好。胎儿的胎龄是根据尺长标准在受孕后数周(WPC)确定的，尺长标准目前被认为是计算胎龄最可接受的参数[9- - - - - -11］.在分离前对胎儿进行冠-臀长(CRL)和体重评估。同一个观察者分析了测量结果。

测量后，借助于具有16/25倍放大率的立体镜片，小心地解剖胎儿。打开腹部和骨盆以识别和暴露泌尿生殖器官和腹股沟管，并显示睾丸的位置。

解剖后将睾丸位置分为(a)腹部，睾丸靠近内环;(b)腹股沟，在腹股沟内外环之间发现睾丸;(c)阴囊，当睾丸越过腹股沟外环并进入阴囊时。

每个睾丸从其他结构中分离出来，固定在10%缓冲福尔马林中，常规石蜡包埋，然后5-μM厚部分是在200-μ米的间隔。切片用苏木精-伊红染色以评估组织的完整性和输精管的结构。采用威格特间苯二酚品红染色法观察弹性系统纤维，微天狼星红染色法观察不同类型的胶原。

用体视学方法对输精管和间质细胞进行了定量分析[12- - - - - -14］.我们研究了随机选择的5个微观场，总共25个测试区域，为每个睾丸研究了定量分析。我们使用Image J软件版本1.46R，装入自己的插件（http://rsb.info.nih.gov/ij/)．所有切片在相同条件下用数码相机(DP70, Olympus America, Inc, Melville, New York)拍摄，分辨率为2040像素，直接与显微镜(BX51, Olympus America, Inc)耦合，并存储在TIFF文件中。输精管直径通过Image J软件的“直线”工具测量。这个工具允许在小管上画一条线并计算它的直径。每个显微镜下分析五个小管(图)1(一))．

为了量化输精管的数量，我们使用Image J软件来确定体积密度(VV.)(图1 (b))．通过定量评价法得到各野的结果，计数各节段的所有小管。确定各区段5个领域量化的算术平均数。然后，我们得到了每个睾丸研究的5个切片(总共25个测试区域)的平均量化值。为了计数间质细胞，我们使用Image J软件cell和计数器工具，选择并标记所有存在于输精管之间的细胞。

使用未配对的数据进行统计比较T.-测试和曼-惠特尼对所有分类变量采用秩和检验，对连续变量采用秩和检验。所有的测试都是双面的值< 0.05认为有统计学意义。

3.结果

修剪腹部胎儿的年龄从17〜31个WPC，体重在240到2150克之间，并且具有18至43厘米之间的冠臀长度。对照组中的胎儿在12至35WPC的年龄范围内，体重在210和2860g之间，并且具有18至34厘米之间的冠臀长度（表1)．李子肚综合征胎儿6个睾丸，对照组14个睾丸为腹部睾丸。在我们的样本中没有观察到附睾异常的病例。

定量分析证明无差异()，与对照组(均值为11.4%，SD = 2.99, SE = 1.499)相比，差异有统计学意义(均值为8.87%，SD = 1.59, SE = 0.9179)。数字2显示正常和修剪后的腹部睾丸中精小管的排列。

定量分析证明无差异()，在PBS的睾丸中，输精管直径(平均值= 52.85μ与对照组相比，M，SD = 1.58和SE = 0.9142）（平均值= 53.17 μm, SD = 1.55, SE = 4.717)。

定量分析记录的数字要小得多()，与对照组(均值= 90.1%，SD = 2.986)比较(图3)2)．

PBS组和对照组输精管中均未见弹性纤维和平滑肌细胞。偏光显微照片显示，小天狼星红在两组之间没有颜色差异。分析显示，PBS和对照胎儿睾丸中红色均占优势，提示存在I型胶原(图)3.)．

4.讨论

双侧隐睾是李子肚综合征的特征[1- - - - - -3.］.解释该综合征中双侧隐睾最重要的理论是:(a)腹壁肌肉收缩受损;(b)膀胱膨胀引起的机械性梗阻;(c)腹股沟管结构改变，阻碍睾丸通过;(d)睾丸座的结构改变[1- - - - - -4］.

隐睾患者患睾丸癌和不育症的风险较高。随机容量和组织学研究表明，一岁前的早期治疗比后期治疗更有利于睾丸发育和未来精子发生[15,16］.尽管进行了手术治疗，但随着时间的推移，观察到生育能力受损(单侧病例33%，双侧隐睾66%)，癌症风险比正常水平高出5-10倍[15］.在PBS中，生殖上皮明显减少，因此应在新生儿期进行睾丸下降，以增加生育的机会[5- - - - - -8,17］.有报道称，使用PBS患者的精子进行胞浆内精子注射(ICSI)可导致男婴活产[18］.

关于胎儿和/或PBS患者睾丸间质细胞和输精管的研究很少。在一项优雅的研究中，Orvis等人[5结果显示PBS组胎鼠间质细胞明显增生。在本研究中，我们没有观察到间质细胞体积的显著变化，但PBS组的睾丸间质细胞比对照组少，提示PBS组的睾丸组织学改变始于胎儿时期。乔杜里等人[8]研究了人类胎儿和尸体的输精管直径，观察到输精管直径随年龄增长而增大。先前一项对人类胎儿的研究表明，输精管的直径随着胎儿年龄的增加而显著增加[19］.

用PBS检查男孩的睾丸组织学，未见精原细胞[6］.然而，Uehling等人[7结果显示，所有接受PBS治疗的患者均有非典型生殖细胞，细胞核大，核仁突出，胞质膜碱性磷酸酶染色强烈，提示隐性睾丸发育停滞与西梅腹综合征有关。Uehling等人[7还研究了胚芽细胞，但没有研究生殖细胞结构。我们的研究是我们知道分析胎儿胎儿的直径和胎儿小管数量的知识。我们的研究结果显示PBS和对照组之间的管状结构没有差异。我们没有分析胚芽细胞，但对小管结构的分析是新的，可能是理解PBS中结构改变的重要性。

在一项关于人胎儿期细胞凋亡的有趣研究中，Helal等[20.[发现妊娠期血液细胞比例的比例降低，无论与孕龄相关的生殖细胞和霉菌细胞没有显着变化。但是，O'Shaughnessy等。[19]分析了57例人类胎儿的Leydig细胞，发现在妊娠中期的最初阶段，Leydig细胞数量呈指数级增长，而到妊娠末期，Leydig细胞数量基本不变。

在我们的样本中，我们在任何分析的任何睾丸中都没有观察到弹性纤维。这可能表明该细胞外基质组分仅在胎儿睾丸中的第三个妊娠三个月中出现。以前的研究表明，在其他人胎儿泌尿内器官中存在弹性系统纤维[21］.胶原蛋白具有抗张强度，但过度积累会抑制收缩性和通过内壁传导的电脉冲[22,23］.在我们的研究中，定性分析没有揭示胶原蛋白在胎儿睾丸中的分布在两组之间的差异。

需要指出的是，本研究的一些局限性:(a) PBS胎和对照组胎之间的WPC分布不均匀;(b)样本量小，因为梅子肚胎很少见。然而，尽管样本量有限，这些观察结果仍然提供了重要的新信息。

5.结论

李子肚综合征胎儿的睾丸结构显示间质细胞浓度较低。我们没有观察到梅干综合征的输精管数目、直径和胶原分布的差异。

的利益冲突

作者声明他们没有利益冲突。

致谢

这项研究得到了巴西国家科学和技术发展委员会(CNPq, Brazil)和里约热内卢州立研究基金会(FAPERJ)的资助。

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