血尿对膀胱癌的影响

摘要

介绍。一些护理点测试（POCT）可用于诊断膀胱癌（BC）。我们评估HU（血尿）对POCT性能的影响。材料和方法．10名献血者的尿液用血液稀释0.5至0.00625%。BladderCheck^R, BTAstat^R，车身控制模块^R，及BTA^R进行了测试。另外还对54例HU患者进行了检测。HU根据红细胞（RBC）的数量进行分层/μL使用两种系统：（1）无HU；轻度显微镜HU；重度显微镜HU；总HU；（2）I<25 红细胞；<250 II；≥结果与HU状态和组织病理学进行比较。结果．总HU在2090 rbc /之间变得明显μL和1065 /μ在所有4个版本中增加血液导致默认测试:BladderCheck^R0.25%;BCM 0.025%， BioNexia 0.00625%， BTAstat <0.00625%。无HU时，BladderCheck、BTAstat、BCM和BioNexia的假阳性率分别为5.9、11.8、0和1.8%;有HU时，假阳性率分别为0、66.7、44.4和66.7%。BTAstat、BCM和BioNexia受HU (）.结论.NMP22膀胱检查对血液最具抵抗力。所有其他检查的诊断率均受到HU的显著影响。定义明确的HU分级有助于确定HU限值，以可靠地解释BC POCT。

1.介绍

膀胱癌(BC)是一种发病率不断增加的恶性肿瘤，对生活质量有显著影响，每位患者一生中治疗费用最高[1.］．早期发现以防止病情恶化仍然是该疾病的挑战。由于缺乏特异性症状，大多数患者表现为非特异性血尿(HU)，最终诊断仍需采取侵入性措施。因此，膀胱镜检查仍是诊断BC的金标准[2.］．非侵入性检查仅限于尿液标记物。除尿液细胞学外，分子标志物近年来不断发展，在BC的诊断和监测中发挥着新兴的作用[3.］．然而，细胞学和分子标记的诊断准确性仍不令人满意。由于鉴别能力不足，尿液标记物仍不能取代膀胱镜检查[4.］．最近，基于办公室的护理点测试(POCT)系统可用[5.]。它们对于没有直接使用高成本实验室设备的办公室医生特别有用。

已经确定了几种诊断产量有限的来源，主要是特异性有限的来源。然而，泌尿道感染、仪器尿路取样和其他引起的机械应力可作为若干试验的影响因素确定[6.–8.]，胡尚未被广泛研究[6.,9]。尽管有很高比例的患者出现HU，但其在POCT上的缺陷定义不清。然而，HU涵盖了从单个红细胞到明显的总HU的广泛范围。尽管其他人已经报道了基于血液和尿液的BC检测的相互作用，但没有关于不同HU在此类测试中的t等级[10–12］．此外，集中研究poct对HU的易感性的证据甚至更为有限。

本研究的目的是调查明确的HU分级对实验环境下四种商业可用poct以及怀疑BC患者的影响。

2.材料和方法

2．1．体外研究

10名受试者在没有BC或其他疾病证据的情况下进行常规检查。中位年龄为44岁（21-55岁），6名为男性，4名为女性。中段尿至少100 共收集mL。所研究尿液样本的细胞学、试纸和显微镜检查不明显。患者没有尿路结石/肾结石、尿路感染或膀胱炎的迹象。该研究获得了当地IRB的批准（编号400/2009A）.抽取自体血液并储存在EDTA管中。随后，通过添加0.2%的 全血稀释至19.8毫升 mL尿液，产生1.0%v/v稀释液，通过进行连续稀释，产生额外浓度，如图所示1.．为了使尿液和血液之间存在潜在的相互作用并产生不同级别的HU，在加入血液后将尿液孵育5分钟。每次稀释均进行试纸试验，使用neubauer改进的计数室计数红细胞。NMP22 BladderCheck^R(Matritech, Freiburg, FRG)， BTAstat^R（美国纽约Cortlandt Manor Polymedco），BioNexia BTA^R(BioNexia, Göttingen，德国)和BCM^R(Ulti med GmbH, Ahrensberg，德国)在尿样后30分钟内根据制造商的建议同时进行。

2.2. 临床研究

2009年6月至2009年11月期间连续入选54名患者。患者怀疑患有膀胱癌或经组织学证实有肌肉浸润性膀胱癌。第一组患者随后接受膀胱镜检查，第二组患者进行根治性膀胱切除术。54名患者在膀胱镜检查前接受膀胱镜检查()或膀胱切除术()进行调查。中位年龄为68.5岁(范围42 - 90岁)，42名男性，12名女性。在标本采集前的7天内，没有病人对尿道或膀胱进行机械操作。排除近期有尿石症、尿路感染、膀胱炎或有丝裂霉素/卡介苗植入史的患者。进行了试纸和尿液显微镜检查，并记录HU的存在。

HU通过试纸、尿镜检和视觉评估进行细分:试纸和镜检均无rbc = HU;红血球10 - 250 /μL =轻度微hu;> 250 /μL红细胞试纸镜检=重度微hu;可见血色=粗HU。由于初步结果已经显示出在低级别HU中存在相当大的差异，因此在第二步中进一步细分HU: rbc≤25(包括0)= I级，<25 rbc <250 = II级，以及rbc≥250(包括总HU = III级)。

对所有poct的假阳性检测量进行了比较调查。在患者队列中，HU与有无BC的关系通过列联表进行分析。假阳性结果与HU的预定义级别进一步相关。多因素分析评估HU对BC诊断的独立影响。

3.结果

3.1.体外试验结果

采集尿液的连续稀释（0.5%-0.25%-0.125%-0.0625%-0.0025%-0.00125%-0.000625%）产生以下值：21.200 红细胞/μL =0．5%;10.730 红细胞/μL =0.25%;4.080 红细胞/μL =0.125%;2.090 红细胞/μL =0.0625%;1.065 红细胞/μL =0.0025%;326 红细胞/μL =0.00125%;168 红细胞/μL =0.000625%．试纸RBC计数与镜检有很好的相关性。从轻度到重度显微镜下HU的阈值水平在0.0125%到0.00625%之间。0.0625%(对应2090 rbc /μ五十） ，但不是0.025%（1065%）/μL)，总体HU明显显著。在所有4个poct中添加血液导致了默认检测。然而，稀释水平是不同的:NMP22-BladderCheck^R最稳定的测试系统为0.25%（10.730%）/μL)其次是BCM、BioNexia和BTAstat。BCM改变0.025% (1065/μ五十） BioNexia在0.00625%（168/μ五十） 和BTAstat在<0.00625%（<168/μ五十） 为了（数字）1（a））.

3．2.患者的结果

在膀胱镜检查前的随访中，8例患者有BC病史。经turr或膀胱切除术后，28/54例(51.9%)患者出现BC: 17 × Ta、4 × T1、5 × T≥2、2 × CIS。G1 7例，G2 13例，G3 6例。

在登记时，54名患者中有32名（59.3%）患有HU。根据预先确定的标准，20名受试者患有轻度显微镜HU，8名受试者患有重度显微镜HU，4名受试者患有严重HU。当使用HU的调整分级时，31名患者患有I级（包括无HU）、6名II级HU和17名III级（包括严重HU）.HU和BC的列联表如表所示1.．毕业HU和假阳性试验的权变分析结果如图所示1（a）.在确诊为BC的患者组中，12例为I级HU（42.9%），2例为II级HU（7.1%），14例为III级（50.0%），表1.）.

17/26（65.4%）没有BC但没有HU的患者出现假阳性。其中，1（5.9%）、2（11.8%）、0（0.0%）和2（11.8%）患者膀胱检查、BTAstat、BCM和BioNexia分别出现假阳性结果。9/26没有BC但有HU的患者出现假阳性检测结果：膀胱检查0（0%）、BTAstat 6（66.7%）和4（44.4%）对于BCM，6例（66.7%）为BioNexia。26例患者中有2例没有BC，但有严重的显微镜下HU或肉眼HU，膀胱检查和2例（100.0%）出现假阳性结果BTAstat、BCM和BioNexia患者，分别为。一名患者无BC，但总HU显示膀胱检查阴性，而BTA、BCM和BioNexia为阳性。

3．3.HU按等级分类

无BC的患者被发现有不同程度的HU：19×1级（占所有26例无BC患者的73.1%）、4×2级（15.4%）和3×3级HU（11.5%，表1）1.）.记录了BladderCheck、BTAstat、BCM和BioNexia的假阳性结果(图)1（a）)1级时，19例患者中1例（5.3%）、3例（15.8%）、0例（0%）和3例（15.8%）出现HU；2级时，4名患者中0名（0%）、2名（50.0%）、1名（25.0%）和2名（50.0%）出现HU；3级时，3名患者中的HU分别为0（0%）、3（100%）、3（100.0%）和3（100.0%）（图1（a））.

多因素分析中，HU是BTAstat、BCM和BioNexia结果的独立影响变量(NMP22膀胱检查试验不受HU的显著影响(）.

4.讨论

分子尿液检测是BC很有希望的生物标志物。然而，在BC的日常临床常规和标准诊断检查中，它们仍然没有得到很好的确定[2.].与其他需要精细分子方法学（如FISH、免疫细胞学或ELISA）的分子检测相比，新的POCT系统为办公室医生提供了应用机会，而无需直接使用昂贵的实验室设备。然而，为了广泛使用，充分的试验特异性和敏感性至少与可行性同等重要。

已经发表了一些比较各种poct准确性的研究。敏感性和特异性在不同的出版物中有很大的差异[3.,5.,13–15］．这些变化可以用感染或血尿等内在影响变量来解释。关于这种干扰的数据很少，实验数据更不常见。因此，我们设计了本研究，以调查这一变量对4种最常用的BC检测poct的影响。建立了不同等级HU的实验模型，以便准确评估RBC计数对测试系统的影响。此外，可以为所有poct确定默认阈值。由于4个poct都遵循不同的原则，所以调查的测试系统之间存在明显的差异也就不足为奇了。在0.5%的稀释后，BladderCheck仅在一名受试者中显示阳性结果，随后所有稀释后的结果均为阴性。其他检查全部呈阳性，为0.25%，BCM检查为0.125%，5人中有1人呈阴性，0.025%为完全阴性。Gross HU导致BTAstat和Bionexia的假阳性结果，而BladderCheck在这种情况下没有假阳性结果。 The BCM test was indeterminate being only partly susceptible to HU. In microscopic HU conditions, only BladderCheck and BCM remained constantly negative whereas BTAstat and BioNexia were not resistant to even very small amounts of blood in the urine.

总HU是进行膀胱镜检查和上尿路成像的明确指征。然而，目前还没有一种定义明确且被广泛采用的算法来评估微观HU。由于膀胱镜检查具有侵袭性，许多执业医师对向此类患者推荐膀胱镜检查犹豫不决，因此，POC测试作为一种额外的决策工具尤其令人感兴趣。

体外试验的结果在连续的队列患者中得到进一步验证。HU组中，BladderCheck无假阳性，BCM对血液的敏感性低于BTAstat和BioNexia。与体外试验相比，即使是严重的显微镜下HU也会导致BCM试验的100%假阳性。当HU被分级为I级到III级时，后者的测试表现有所改善，III级以下的假阳性率只有50%。

据报道NMP22被恶性尿路上皮细胞过度表达，并通过凋亡细胞释放到尿液中[16]因此，产生凋亡细胞的其他非恶性条件可能在尿液中提供NMP22[3.］．由于红细胞没有细胞核，所以不能在HU样本中直接增加NMP22。对红细胞影响的可能解释可能是膜因子引起交叉反应或相关血清蛋白[11]。剩余的研究分析检测人类补体因子H和相关蛋白（膀胱肿瘤相关抗原），据报道，该蛋白是膀胱癌的标志物[17].血液结合H相关蛋白可能是假阳性检测的原因[12］．

其他研究小组已经引入了实验性的将血液注入尿液的方法。与我们关注poct性能的研究相反，Atsü等人研究了定量NMP22-ELISA [11］．他们进行了连续稀释，并发现人为地将结果提高到高于血液0.2 - 0.02%之间的ELISA临界值。与目前的结果相比，他们的报告表明定量检测可能比POC检测更早转为阳性。然而，他们将稀释量与高场计数联系起来，并没有确定确切的红细胞浓度。

横山等[18]提供了关于膀胱检查的第一批数据：他们报告的假阳性结果超过10^5.红细胞表面/μL.两项研究都证实了BladderCheck对显微镜下HU有耐药性，HU是感染患者中极为常见的一种情况。Oge等[12]使用相对高浓度的血液添加剂，发现在稀释度为1时，BTAstat的假阳性率为20% : 2000（0.05%）；然而，这种稀释可能接近显微镜下的HU。我们的结果证实了这两种方法的结果。

Schwentner等人展示了HU对2000多名患者的尿检结果影响的数据。他们证实了HU对NMP22-ELISA性能的明显影响。此外，有报道称HU对免疫细胞学甚至细胞学有明显的影响[19］．在我们的研究中，检测系统在一个稀释阈值下没有显示一致的结果(无论是阳性还是阴性)，这也表明了尿液中影响检测结果的其他因素。

HU的分级越来越多地由尿液测试评估研究来解决。Pesch等人在一项前瞻性研究中建议使用尿红细胞半定量记录来更准确地解释阳性NMP22 (ELISA)结果[10].本工作中进行的稀释实验允许将HU量化为不同的亚组：试纸的上限为250个红细胞/μL.然而，总HU在2000年以前是不可见的/μ所有的测试都被证明在250红细胞试纸以下的结果明显更好。

我们研究的局限性在于患者数量相对较少。此外，由于我们的研究仅评估HU对假阳性结果的影响，我们无法评论敏感性对假阳性率的影响。NMP22是膀胱癌的一个强有力的独立预测因子。将NMP22纳入临床决策有助于避免不必要的膀胱镜检查[20］．

这是第一个在实验环境中比较HU对4种POC尿检BC性能的影响的研究。我们发现BTAstat、BMC和BioNexia试验的假阳性率与尿血负担之间存在相关性。BladderCheck的诊断特性不受HU的影响。我们的研究结果可能有助于更全面地理解HU的分级，并提供HU的临床分类。明确的HU分级有助于确定HU的适当限度，以便在办公室环境中可靠地应用和解释bc - poct。

利益冲突

作者声明不存在利益冲突。

作者的贡献

约尔格·亨内洛特和阿努夫·斯滕兹尔对这项工作做出了同样的贡献。

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