建立CD3正常参考区间⁺, CD4⁺, CD8⁺, CD4⁺以CD8⁺埃塞俄比亚西北部贡达尔大学医院HIV阴性成人中T淋巴细胞的比例

摘要

背景。CD3的参考值⁺, CD4⁺, CD8⁺, CD4⁺以CD8⁺T淋巴细胞亚群比值采用教材。但是，为了对患者进行适当的诊断、治疗和随访，必须从正常参考区间正确解释实验室结果。因此，本研究拟建立T淋巴细胞亚群计数和CD4正常参考区间⁺以CD8⁺比率。方法。对2013年4月至5月前往冈达尔大学医院自愿咨询和艾滋病毒检测诊所就诊的健康成年人进行了横断面研究。全血使用荧光激活细胞分选(BD FACS, San Jose, CA)机器分析t细胞亚群。结果。在320名研究参与者中，161人(50.3%)为男性，159人(49.7%)为女性。正常参考区间为(655 - 2823 cells/)μ/ L),(321 - 1389细胞μL)和(220 - 1664个细胞/μL) CD3⁺, CD4⁺, CD8⁺T淋巴细胞亚群和CD4⁺以CD8⁺比率为0.5 - -2.5。结论。整个CD3⁺本研究T淋巴细胞参考区间较宽;低CD4⁺T淋巴细胞，CD4 / CD8比值，CD8高⁺观察T淋巴细胞值。

1.介绍

T淋巴细胞是由表达分子。识别T淋巴细胞亚群的最重要的细胞表面分子是，，和t细胞受体复合体分子(即t细胞受体α和β链(1］．

那些表达CXCR4细胞表面分子分别作为人类免疫缺陷病毒(HIV)的受体和辅受体。艾滋病毒感染主要是T淋巴细胞，在细胞内复制，当复制的病毒粒子被释放到细胞外感染其他细胞时，它会溶解细胞细胞(2］．

在晚期疾病中，大多数观察到的免疫缺陷最终可以用定量的缺失来解释T淋巴细胞和严重程度通过测量绝对值来反映每血容量T淋巴细胞数淋巴细胞(%)/比(3.］．

T淋巴细胞协调免疫系统对病原体的反应[4]，因此，正常参考区间值对于正确解释诊断试验至关重要[5］．地理位置、种族和民族背景、年龄、性别和生活条件对人类外周血T淋巴细胞亚群分布的影响已经在世界不同地区对特定人群的各种研究中得到证实[6- - - - - -8］．

在非洲进行的研究很少显示出显著的参考范围变化t细胞和由于环境、社会人口统计学差异以及年龄、海拔和种族等生物影响，非洲人口中的t细胞[9- - - - - -12］．

埃塞俄比亚地理上有很大的多样性[13]，但在全国范围内，埃塞俄比亚人的参考价值从未确立，尽管在少数地方进行了很少的尝试，显示与其他国家有差异[14］．

为了对病人进行适当的诊断、治疗和随访，必须正确解释实验室结果，因为它有助于临床医生。这是通过在当地建立的正常参考区间的知识获得的，而不是使用来自气候、社会经济地位、生活方式和基因组成等不同的西方国家的参考区间[15］．因此，本研究拟提供正常的T淋巴细胞亚群参考区间来埃塞俄比亚西北部冈达尔人口的细胞比率。

2.材料和方法

2．1．研究设计和研究对象

2013年4月至5月在冈达尔大学医院自愿咨询和艾滋病毒检测诊所进行了横断面研究，所有实验室调查都在埃塞俄比亚西北部冈达尔镇该医院的抗逆转录病毒治疗实验室进行。根据埃塞俄比亚国家认可办公室(ENAO)建立的逐步实验室(质量)改进过程认证(SLIPTA)，该实验室从5星(≥95%)获得了3星(75-84%)。ENAO根据在满足国际标准规定的要求方面取得的进展以及在SLIPTA审计前12个月实验室的表现予以肯定，依靠完整和准确的数据，提高发展中国家公共卫生实验室的质量，以实现ISO 15189标准。

所有的研究参与者都没有临床疾病，看起来很健康，年龄在18到64岁之间，过去至少在该地区居住了6个月，HIV-1/2抗体阴性，身体质量指数在16.5 Kg/M之间²和22公斤/米²被包括在内。参与者提供近期肠道，呼吸道感染，疟疾和慢性非传染性疾病如糖尿病，慢性肾脏疾病，过敏史，最近6个月的免疫史，过去3个月的类固醇治疗史，入组前四周的抗生素使用史，过去6个月输血或血液制品除外。经人绒毛膜促性腺激素(hcG)试验证实怀孕的女性参与者也被排除在研究之外。

根据临床及实验室标准学会(CLSI)的建议指引，共纳入320人[21］．因此，在选择参考个体之前，我们采用了一种需要明确排除和划分标准的先验抽样方法。

2．2．数据收集与处理

在实际数据收集之前，该工具的清晰度是使用其他研究领域总样本量的5%进行评估的。此外，还对数据收集人员、两名艾滋病毒顾问护士和三名实验室技术员进行了数据收集方面的培训。研究对象的所有标本均按照标准操作程序处理。仅在上午的指定时间(上午8:30至10:30)采集血液，以控制T淋巴细胞计数可能的日变化。在运行参与者样本之前，每天使用质量控制样本检查仪器、实验室试剂和技术性能的正常功能。

采用半结构化和预测问卷，通过面对面访谈收集研究参与者的社会人口学特征和相关临床数据。5 (5) mL全血用于所有hiv /2抗体筛查，，,来在三钾乙二胺四乙酸(K_3.EDTA)真空采血管管。

根据制造商的说明和国家检测算法，使用HIV-1/2快速检测试剂盒(使用KHB、STAT Pack和UNIGOLD)对参与者样本进行HIV抗体筛查。该HIV血清学是匿名进行的，具有所有社会人口学特征。对hiv /2抗体阴性的妇女，要求进行一步条状hCG妊娠试验。最后，对所有HIV阴性个体和非孕妇样本进行检测,,， CD4 / CD8比值T淋巴细胞计数。

根据制造商的说明，所有用于T淋巴细胞计数的样本在ART实验室采集后8小时内进行处理和计数。BD真空管采集的血液混合均匀，50μL全血转入单克隆抗体试剂管进行FACSCount分析，计数T淋巴细胞。

总之,50μL全血与单克隆抗体(MAbs)混合(5μ各T淋巴细胞试剂试管L)，室温单独试管孵育15分钟，置于黑暗处。加入荧光激活细胞分选溶解液(50%二甘醇和15%甲醛)(Becton Dickinson)裂解红细胞。旋转试管后，在室温黑暗中培养15分钟。细胞被注射到位于光源光路的“流动细胞”中，使用荧光激活细胞分类计数机(正欲FACSCount流式细胞分析仪);在这里，细胞与激光接触，导致荧光标记细胞发出荧光。这种荧光灯为仪器计数细胞提供了必要的信息。

2．3.数据分析

首先使用Epi-Info version 3.5.1录入和清理数据，然后导出到SPSS version 20进行分析。计算正态参考区间值的平均值、中位数和标准差。参考区间确定为排序数据的95百分位。小于0.05的值被认为具有统计学意义。

２.４.伦理许可和同意

获得了冈达尔大学生物医学和实验室科学学院伦理审查委员会的伦理许可。获得了冈达尔大学教学医院主任办公室的官方信函，并将其提交给VCT中心和抗逆转录病毒治疗实验室协调员。每位研究参与者都获得了书面知情同意。这些感染了HIV病毒的参与者在咨询后被转介到HIV护理和治疗诊所进行进一步的管理。对hcG测试有反应的女性参与者被转介到产前诊所接受更好的护理。

3.结果

共有320名研究参与者被纳入研究，平均年龄为岁了。在320名研究参与者中，161人(50.3%)为男性，159人(49.7%)为女性。男性比女性年龄大，平均年龄为年,年,分别。大多数研究参与者是224人(70%)的婚姻状况和95人(29.7%)的职业状况;关于教育状况，大多数参与者116人(36.3%)是9 - 12年级，292人(91.3%)是阿姆哈拉族(表)1）.总体平均值、中值和95%正态参考区间的绝对值，,T淋巴细胞计数和绝对计数来为参与者建立比例(表2）.

据报道，HIV-1/2血清阴性个体的T淋巴细胞亚群值受性别、年龄和全球地理位置等不同因素的影响。在这项研究中，随着年龄的增长，价值也会下降T淋巴细胞(表3.）.

的绝对平均值（细胞/μL)和（细胞/μL)男性的T淋巴细胞在统计学上低于女性(细胞/μL) ()和(细胞/μL) ()，但两组的平均绝对计数差异无统计学意义T淋巴细胞(),来男女淋巴细胞比率(）.

4.讨论

参考区间的平均值和上限结果T淋巴细胞计数高于使用指南的平均值:1206和(参考区间:688-1955)细胞/μL.的平均值女性参与者的T淋巴细胞计数明显高于男性参与者(）.

女性中这些淋巴细胞的中位数(参考区间)似乎略大于在埃塞俄比亚其他地区进行的研究中位数(参考区间)。另外，男性的中位数和上限根据Kassu等人的研究，当前研究的T淋巴细胞结果高于男性参与者的中位值和参考区间[16]，低于Haileamlak等人在埃塞俄比亚西南部进行的研究中位数(参考范围)1643 (760 - 3465)[22];这可能是由于研究对象的不同，因为我们使用的是明显健康的个体，而他们的研究组在Kassu等人的研究中是专门进行临床评估的。当前研究的T淋巴细胞平均值、中位数和95%参考区间与在肯尼亚进行的研究具有可比性，中位数和参考区间[20.］．

绝对的95%参考区间参与者的T淋巴细胞计数较低，且略宽于当前ART使用者的国家指南和FACSCount使用者指南(参考区间:470-1298细胞/)μL)可能是由于研究对象之间的种族差异。结果的平均值和中值T淋巴细胞比Tsegaye等人在埃塞俄比亚亚的斯亚贝巴的Akaki工厂工人的研究结果(细胞/μL)，本研究95%正常参考区间(321-1389细胞/μL)下限接近低于那里(366-1235细胞/μL) (14可能是由于地理差异造成的。T淋巴细胞计数与在坦桑尼亚进行的研究一致[10]及博茨瓦纳献血者[23］．

然而，价值T淋巴细胞平均值、中位数和95%正常参考区间均低于在肯尼亚进行的研究[20.]，乌干达(平均值:938，参考区间:418-2105细胞/μL) (8， Menard等人的中非共和国研究(平均值:940，中位数:912，参考区间:386-1454细胞/μL) (17]，尼日利亚健康成人(平均值:847，参考区间:365-1571细胞/μL) (11];这可能是由于地理位置的不同。

的绝对中位数男性T淋巴细胞(737个/μL)和女性(858个细胞/μL)在本研究中有统计学差异，且低于Torres等在巴西两个地区献血者的研究，即Bahia/Pará男性绝对计数(897/768细胞/)的研究μL)和女性(1032/802细胞/μL) (7也许是因为在目前的研究中使用了明显健康的研究对象。

总体平均值和中位数T淋巴细胞计数显示与Tsegaye等人的研究相似，到目前为止，埃塞俄比亚其他地区的T淋巴细胞计数与Tsegaye等人的研究相似。T淋巴细胞计数与FACSCount用户指南差异显著(平均值:346，参考区间:208-796);这可能与本研究使用的样本量大和/或种族多样性有关。女性的平均值和中位数T淋巴细胞计数高于男性，但无统计学意义(）.

男性和女性对当前结果也有相似之处(女性中位数:667,95%正常参考区间:241-1667)(男性中位数:623,95%正常参考区间:206-1733 cells/)μ(女性中位值:617，范围为258-1301细胞/μL)(男性中值619，参考范围:249 - 1933个细胞/μL)，但男性95%正常参考区间的上限(206-1733个细胞/μL)完全高于在原智中发现的男性的值(范围:180-1253细胞/)μL) (16];可能是环境因素(见表)4）.

绝对的本研究的T淋巴细胞平均值、中位数和95%正常参考区间也大于Bisset等在瑞士进行的研究(中位数:347个，范围:137-823个细胞/)μL) (19]，中国上海(平均值:539，中位数:503，范围:336-780电池/μL) (24]，亚洲人群(平均642个，中位数616个，参考范围243-1206个细胞/μL) (25];差异可能是在我们的健康研究人群中而他们只使用献血者特别是在亚洲人群和瑞士的研究中，我们在当前的研究中使用了更多的研究对象但在瑞士的研究使用了70个健康的献血者，也可能是由于当地寄生虫流行率高，微生物感染高，这可能导致绝对数量的增加T淋巴细胞计数，自从T淋巴细胞被激活，它们的寿命就会更长。

绝对来比值T淋巴细胞平均值、中位数、95%正常参考区间均低于女性，但差异无统计学意义(）.

此外，本研究中性别比例的结果(男性中位数:1.23，正常参考区间:0.4-2.8)(女性中位数:1.26，正常参考区间:0.6-2.5)与Akaki的研究(男性中位数:1.10，参考区间:0.41-2.57)(女性中位数:1.2，参考区间:埃塞俄比亚东南部的Wonji(男性中位数为1.4，范围:0.6-2.80)[16］．

性别相关的结果来比(男性的意思是:，正常参考区间:0.4-2.8)(女性平均:本研究的正常参考区间:0.6-2.5)低于在乌干达进行的研究(男性平均值:1.47，范围:0.54-3.94)(女性平均值:1.46，范围:0.48-4.41)[8］．

总体而言，当前研究的CD4 / CD8 T淋巴细胞比例低于肯尼亚的研究[20.)、坦桑尼亚(10)、尼日利亚(11]，以及印度[18］．与在瑞士进行的研究相比[19]及亚洲人口[25]，目前的结果也显示出很大的变化(表5)，因为我们的生活方式暴露于不同的感染微生物和当前研究的高感染率可能是CD4/CD8 t细胞比率降低的解释。

5.结论

整体T淋巴细胞参考值高，区间宽。

平均值和95%正态参考区间的绝对值T淋巴细胞强度的早期报告来自埃塞俄比亚和其他非洲研究;它很低T淋巴细胞。总的来说，在这项研究中，是非常高的T淋巴细胞计数极低来比观察;因此，当前的参考区间结果应仅适用于研究区域。自参考价值为T淋巴细胞较低的研究在目前的国家参考和使用指南中也有，医师应该使用较高的ART药物起始时的T淋巴细胞截止值，强烈建议为每个实验室建立局部参考区间。

利益冲突

作者声明本文的发表不存在利益冲突。

作者的贡献

Addisu Gize、Biniam Mathewos和Beyene Moges构思了这项研究，并参与了设计和数据分析。Meseret Workineh参与了数据采集和实验室工作，并起草了论文。Lealem Gedefaw对这篇论文进行了评论。所有作者阅读并批准了这篇论文。

致谢

作者要感谢冈达尔大学医院的工作人员，特别是医学实验室的工作人员在数据收集过程中的合作。他们很感激研究参与者。这项研究是由冈达尔大学资助的。

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