保利(3-Hydroxybutyrate)的生产Haloarcula,Halorubrum,NatrinemaHaloarchaeal属使用淀粉作为碳源

文摘

微生物生物塑料的生产,来自保利(3-hydroxybutyrate) (PHB),对塑料污染提供了一个不错的选择。与其他极端微生物相比,嗜盐古生菌被认为是细胞PHB工厂生产通过使用可再生,廉价的碳源,从而降低发酵成本。本研究旨在筛选33嗜盐古生菌分离三个浓缩文化从突尼斯咸水湖泊,盐湖盆地El木标枪使用淀粉作为唯一碳源的尼罗红/苏丹黑染色,进一步证实了PCR扩增phaC和阶段聚合酶基因。14隔离被认为是积极的候选人PHA生产和检测在两个季节。这些菌株的鉴定通过16 s rRNA基因分析显示他们的关系Halorubrum,Natrinema,Haloarcula属。其中,三个PHB-producing菌株,CEJ34-14, CEJ5-14 CEJ48-10,相关Halorubrum chaoviator,Natrinema螺旋体,Haloarcula tradensis被发现是最好的实现值为9.25,7.11和1.42%的细胞干重(CDW),分别。我们的研究结果强调,Halorubrum,Natrinema,Haloarcula属是有前途的候选人的PHB生产用可溶性淀粉作为碳源在高盐度(250 g L¹氯化钠)。

1。介绍

塑料是一种非常有用的材料,其生产增长。数百万吨的非降解性塑料最终每年在我们的自然环境影响我们的健康,野生动物,陆地和海洋栖息地1]。出于这个原因,polyhydroxyalkanoates (pha)可生物降解和生物相容性的聚合物已被提升为以石油为原料的替代传统塑料(2,3]。pha合成各种各样的细菌和古菌的各种碳源和作为细胞内存储化合物生存不平衡条件下(4,5]。极端嗜盐古生菌,居住在高盐环境中含高盐份浓度,喜欢各种潜在的应用,包括polyhydroxyalkanoates的合成。保利(3-hydroxybutyrate) (PHB)是第一个生物塑料种类的死海中找到Halobacterium1972年(6]。此后,微生物包括极端嗜盐古生菌属于属Haloquadratum,Halorubrum,Halobacterium,Haloterrigena,Haloferax,Natronococcus,Natronobacterium,Haloarcula,Natrinema,Halogeometricum,Halopiger,Halobiforma,Halococcus还发现了PHB积累大量的(7- - - - - -9)使用殖民地/细胞染色方法、分子工具针对PHA合酶基因,并分析技术如傅里叶变换红外光谱学、巴豆酸分析,气相色谱,液相色谱(10]。

这些生物可以利用各种可再生碳源和PHB释放细胞容易被溶解在蒸馏水,从而降低其生产成本高(11]。最近的一些调查表明,生产力的PHB的古细菌菌株获得使用葡萄糖为唯一碳源(9,12,13比与其他基质(废物和酒糟预处理)14,15]。PHB,然而,很少有研究探索的基础上生产的热点使用淀粉已报告,尽管其广泛的可用性(16,17]。因此,它是重要的选择压力能够利用PHB生物合成的淀粉基板。

盐湖盆地El木标枪,最大的盐湖,位于南部的突尼斯。此外,这个湖是最大的一个在非洲的北部(5360公里²与盐浓度高于33%氯化钠()18]。thalassohaline盐成分,尽管其起源大陆。它可能被淹没在冬天和蒸发沙漠在旱季。这些气候条件使盐湖盆地的一个短暂的极端环境。我们先前的研究描述了微生物多样性在盐湖盆地厄尔木标枪湿和干燥的季节,用文化和分子的方法。嗜盐的厌氧发酵菌株被分离从表面沉积物19,20.]。文化无关的技术,针对16 s rRNA和功能标记编码异化的亚硫酸盐还原酶beta-subunit基因(dsrB),甲基辅酶还原酶(mcrA),展示了丰富而多样的原核社区,硫酸盐还原菌(SRB),和产甲烷菌,分别20.,21]。此外,嗜盐的有氧细菌和古细菌的分离菌株胞外水解酶生产已经取得了在盐湖盆地厄尔木标枪22]。因为古菌数量细菌研究样本,在这里,我们的目的是扩大的可能性PHA合成盐湖盆地的古生菌厄尔木标枪。这项研究的目标是(1)浓缩,隔离,和筛选PHA-accumulating嗜盐古生菌在水中或水/沉积物混合样本收集的盐湖盆地厄尔木标枪在这两个季节使用表型和分子方法;(2)识别和表征PHA-producing隔离,利用淀粉作为碳源;(3)识别和量化生产的聚合物。

2。材料和方法

2.1。样品收集

样品(S1-10)和(S6M-14;S6W-14)收集干(2010年10月)和湿季节从大陆季节性湖泊(2014年1月),分别盐湖盆地厄尔木标枪。高盐度水或水/沉积物混合样本收集在不同的位置,大约从表面清廉厘米。样品被收集在无菌瓶,带到实验室在三个小时内,和无菌保持在4°C到分析。抽样的环境参数表中列出的网站1正如之前报道的(20.]。

2.2。浓缩和隔离Polyhydroxyalkanoic酸(PHA)生产古生菌

样品被培养丰富PHA-accumulating介质(每升氯化钠,250克;MgCl₂6 H₂哦,10 g;MgSO₄7小时₂啊,15克;氯化钾,4 g;CaCl₂2 H₂啊,1 g;NaHCO₃,0.5克;酵母提取物,1 g)补充1%的可溶性淀粉在37°C在180 rpm为7天。

为了隔离PHA-producing haloarchaea,样本连续稀释和100年μL(每个稀释镀到琼脂培养基(20 g L¹如上所述。孵化后,33个殖民地从盘子被选为结果的色素沉着和/或形态学和被转移到新的板块几次直到获得纯培养。殖民地被区分颜色、形状和边缘外观。细胞的形态学特征进行使用油浸在100 x客观(Optika、b - 500因此模型、意大利)。

2.3。基因组DNA的提取

增长的热点文化达到对数生长期时,提取的基因组DNA进行使用GF-1核酸提取工具包(Vivantis技术有限公司Sdn,雪兰莪州,马来西亚)根据制造商的指示。

2.4。识别的热点品种

使用引物PCR扩增实现集21 f (5 - - - - - -TTCCGGTTGATCCYGCCGGA-3 )(23r)和1492年(5 - - - - - -GGTTACCTTGTTACGACTT-3 )(24]。PCR反应是意识到50μL混合物1.25 U(聚合酶(Fermentas), 1 x PCR缓冲,200μ0.2 M的核苷酸μM的底漆,50 ng的基因组DNA。三十个周期(1分钟94°C;1分钟55°C;2分钟72°C)进行了使用thermocycler(美国应用生物系统公司)。PCR扩增产物大小1500个基点在1%琼脂糖凝胶电泳分析和拍摄凝胶Doc XR成像系统(Bio-Rad)。然后,限制的分析是由消化10μL (PCR产品10 U的限制性内切酶运算器我和Mbo我虽然有三世(8 Uμl¹)和适当的限制缓冲区的最后一卷20μL 3小时37°C。这些酶(技术),经常用于限制分析,给最重要的物种之间的区别。16 s rRNA片段,获得酶消化后,3%的琼脂糖凝胶上分离4 h与凝胶Doc系统50 V和拍照。积极隔离的原始PCR产品选择通过比较酶限制模式和描述为PHA-producing隔离在以下部分纯化与PureLink®快速凝胶萃取和PCR净化组合工具包(猫。不。K220001表达载体,卡尔斯巴德,美国制造商的指令之前克隆。纯化PCR产品被结扎pGEM-T容易(Promega公司麦迪逊WI)系统推荐的制造商。变成DH5结扎混合物α主管细胞。重组质粒被验证了生态国际扶轮消化和选择排序。测序和系统发育分析被执行之前报道(25]。

2.5。筛选潜在的嗜盐的PHA生产商

所有隔离受到PHA筛选由苏丹黑B (SBB)和证实了尼罗红染色(NR)(σ),一个更具体的污渍。染色的殖民地是使用0.3%酒精溶液的苏丹黑b PHA-producing殖民地出现黑色(26]。尼罗红染色(25% (w / v)原液在二甲亚砜(DMSO))直接接种在复制(0.5μ克毫升¹(w / v))琼脂培养基中含1% (w / v)淀粉和增长细胞发生在染料的存在。压力大肠杆菌作为一个消极的控制。Natrinema altunense应变CEJGTEA101 (KY129977)被认定为PHA-producing隔离在我们以前的工作(9),被用作积极控制在这个研究。15天的孵化后37°C,揭示了橙色的隔离荧光板后接触紫外线被选为PHA蓄能器(27]。与尼罗红染色的细胞是通过使用荧光显微镜(奥林巴斯BX51) [28]。

并行,分离筛选的遗传潜力polyhydroxyalkanoate生产。基因负责haloarchaea聚集在PHA生产第三类合成酶是构成两个亚基(阶段和PhaC)。PCR技术用于筛查热点polyhydroxyalkanoate生产商使用两对codehops (codehopEF / codehopER)和(codehopCF / codehopCR),根据高度保守的地区阶段和PhaC分别为(29日,30.]。引物codehopEF (5 - - - - - -CGACCGAGTTCCGCGAYATHTGGYT-3 )和codehopER (5 - - - - - -GCGTGCTGGCGGCKYTCNAVYTC-3 )被用来放大阶段聚合酶基因。的放大PhaC聚合酶基因进行了使用底漆codehopCF (5 - - - - - -ACCGACGTCGTCTACAAGGARAAYAARYT-3 )和codehopCR (5 - - - - - -GGTCGCGGACGACGTCNACRCARTT-3 )(30.]。PCR条件如下:初始变性后5分钟(94°C), 30 94°C的周期30年代,55°C 45 s,和72°C 45 s进行,紧随其后的是最后一个扩展(10分钟,72°C)。PCR扩增是运行在一个thermocycler(应用生物系统公司)使用1.25 U的Taq DNA聚合酶(Fermentas), 1 x PCR缓冲,0.2μ每个引物,200μ50 M的核苷酸,ng DNA模板。PCR产品受到用2%琼脂糖凝胶电泳。

2.6。生长动力学的潜在PHA生产商

菌株培养在50毫升PHA-producing介质修正与10 g L¹淀粉。厄伦美厄烧瓶内的文化是孕育在重复37°C, 180 rpm。吸光度在600 nm决心使用紫外可见分光光度计(uv - 1800,日本岛津公司日本)为每个PHA-producing应变每24小时。

2.7。测定细胞干重(CDW)

文化发展到后期对数期为30分钟在6000转离心;然后,细胞用蒸馏水洗两次。上层清液是丢弃离开球,冻干,重。

2.8。潜在的PHB含量测定嗜盐的PHA生产商通过气相色谱法(GC)

甲醇分解后,聚合物及其成分的细胞内容是由气相色谱(GC)化验使用安捷伦科技7890色谱仪,配备了毛细管柱( )和火焰离子化检测器(FID)如前所报道(31日]。分析了复制样品。美国标准的PHB (Sigma-Aldrich)是用于校准。细胞的PHB含量是决定 。峰在4.4分钟代表3-hydroxybutyrate methylester。

3所示。结果

3.1。筛选PHA-Producing隔离的染色过程

大量的橙色,红色,粉红色的殖民地和纯化被重复接种。共有33个极端嗜盐的菌株被分离从三个测试浓缩文化和PHA积累(表筛查2)。11、20和2分离得到的水/沉积物混合样本S1-10,水/沉积物的混合样本S6M-14,分别和样本S6W-14超咸水。选择14积极隔离在苏丹黑B染色后(图S1 (a))。此外,他们表现出高荧光强度与尼罗红暴露在紫外线(图S1 (b))。积极控制应变表现出橙色荧光紫外线照射下。

3.2。筛选PHA合成酶基因的退化聚合酶链反应

因此,33株的筛选显示14株的检测作为PHA生产商。同一菌株,显示阳性结果与表型方法(苏丹黑和尼罗红),给了乐队的大约230个基点(阶段)、280个基点(phaC)(表2;图S2)。

3.3。形态特征的潜在PHA生产商

所有分离的细胞是棒,球菌和pleomorph(表2)。所有选定菌株作为生产者是圆的。近似电池尺寸是1 - 2μm(图S3)。

3.4。系统发育分析

33 haloarchaeal隔离与ARDRA检查分析。比较三种酶有三世,运算器我和Mbo我消化模式withisolates显示古生菌(表六个不同模式的出现2)。三个配置文件分组polyhydroxyalkanoate-producing菌株。菌株CEJ3-14、CEJ5-14 CEJ6-14、CEJ7-14 CEJ8-14, CEJ9-14, CEJ10-14, CEJ11-14, CEJ21-14, CEJ24-14 CEJ25-14, CEJ28-14聚集到概要三世。应变CEJ34-14被分为概要文件即ARDRA模式V代表孤立CEJ48-10(图S4)。16 s rRNA基因的系统发育分析针对隔离表示,属Natrinema,Haloarcula,Halorubrum。隔离CEJ34-14有关Halorubrum chaoviatorDSM 19316。CEJ5-14,隔离CEJ3-14 CEJ6-14、CEJ7-14 CEJ8-14, CEJ9-14, CEJ10-14, CEJ11-14, CEJ21-14, CEJ24-14, CEJ25-14, CEJ28-14显示密切亲缘物种最丰富的属Natrinema。最后,应变CEJ48-10属于属Haloarcula(图1)。

3.5。定量估算的PHB生产积极Haloarchaeal隔离

表中的数据3表明,细胞的PHB含量是车损险的范围从0.07%到9.25%。菌株的研究、隔离CEJ34-14 CEJ5-14, CEJ48-10隶属于Halorubrum chaoviator相似(99.7%),Natrinema螺旋体相似(99.33%)Haloarcula tradensis相似(97.72%)被发现是最好的,。他们的细胞荧光显微镜下观察(图2)。隔离CEJ34-14应该强调,因为它表现出更高的PHB生产和更高增长率48 h后的文化。其生长对数期的增加2天,获得长时间的固定相。然而,菌株的生长CEJ5-14 CEJ48-10要求3或4天到达对数期(图3)。值得注意的是,压力CEJ8-14、CEJ9-14 CEJ28-14表现出更高的生物质生产(1150 - 3620 mg L¹(表),但较低的PHB生产3)。比较标准的PHB, PHA的GC谱获得的隔离CEJ34-14, CEJ5-14, CEJ48-10显示,主要山峰在保留时间为4.17,4.11,和4.43分钟对应聚(3-hydroxybutyrate),分别为(图4)。这些菌株表现出的PHB含量约为9.25,7.11,和细胞干重的1.42%。其他菌株的生长曲线和色谱中提供补充材料(数据S5和S6)。

4所示。讨论

生物可降解塑料的发展代表了另一种应对问题的方法与塑料垃圾。Polyhydroxyalkanoates被认为是优秀的候选人可生物降解塑料。极端嗜盐古生菌有能力合成和积累PHA的夹杂物细胞(11,32]。在这项研究中,已经努力搜索PHB-producing古生菌孤立于咸水湖泊,盐湖盆地El木标枪使用淀粉类底物。总共有33个隔离来自三个浓缩的文化。PHB中检测出14株三haloarchaeal属分组Haloarcula,Halorubrum,Natrinema在门和集群Euryarchaeota包括Haloarculaceae,Halorubraceae,Natrialbaceae家庭,分别。他们筛选通过染色手段(苏丹黑B和尼罗红)被广泛用于嗜盐的细菌也成功地用于Halococci,Haloarcula,Haloferax,Halorubrum,Natronococcus,Halogeometricum,Halobacterium属和其他haloarchaeal菌株(8,13]。同时,很明显的检测phaC和阶段基因的14所示古细菌细胞与染色方法如上所述,证实了PHB生物合成。据我们所知,一些研究基于基因的分子特征的PHB合成领域的古生菌进行了调查(33]。重要的是,一群极端嗜盐古生菌的生物技术的重要性Haloarcula这是基因很好理解。汉et al。12)确定两个相邻的基因阶段_嗯和phaC_嗯编码两种亚基的PHA合成酶(第三类)和显示这些基因所需的PHB合成Haloarcula marismortui(培养在2%葡萄糖,生产21%的PHB CDW) (12]。后来,汉et al。30.确认检测phaEC基因的PHB在18或聚(3-hydroxybutyrate-co-hydroxyvalerate) PHBV生产商,包括Haloarcula,Halorubrum,Natrinema和其他属利用碳水化合物的葡萄糖或果糖(30.]。最近,据报道,这两个基因的基因组中发现Natrinema altunense从盐湖盆地厄尔木标枪CEJGTEA101、孤立9]。

目前的研究是我们的以前的工作的连续性9),提出扩大我们的知识的可能性的PHB分泌大量haloarchaeal菌株的盐湖盆地厄尔木标枪由于他们几个优势:首先,他们的增长在高盐度微生物污染最小化。其次,高渗透压的PHB细胞促进复苏。最后,他们的消费能力范围广泛的低成本的碳源的PHB减少了生产成本。测试之间的隔离,三个菌株CEJ34-14, CEJ5-14, CEJ48-10隶属于Halorubrum chaoviator相似(99.7%),Natrinema螺旋体相似(99.33%)Haloarcula tradensis相似(97.72%)被认为是最好的PHB生产商9.25%,7.11%,和1.42%的车损险,分别。需要注意的是,这三个属被发现在其他高盐度环境(PHA蓄电池7),但只有少数物种能够利用PHB分泌大量的淀粉。关于Haloarcula调查,没有PHB积累了Haloarcula物种使用淀粉除了Haloarcula。sp IRU1可以产生57%的PHB /车损险。17]。这个物种隔绝Urmia PHB湖已被证明产生重要的数量从石化废水(CDW)的63%作为碳源包含多个碳氢化合物如线性烷基苯(34]。其他Haloarcula物种如Haloarcula粳稻,Haloarcula amylolytica,Haloarcula argentinensis可以积累PHB,收益率从葡萄糖是0.5,4.4,和分别为6.5% (CDW) (30.,35]。尽管PHB生产淀粉、葡萄糖、废料,成员Haloarcula观察第一次在突尼斯南部盐湖的PHB生产商(15]。目前,还没有证据表明PHB的积累Halorubrum物种淀粉作为碳源时(11]。如前所述,隶属于两个物种HalorubrumPHB产生或PHBV(2.1 -12.7%的车损险)能够使用葡萄糖为唯一碳源(30.]。另一方面,大多数的成员Natrinema被发现时PHBV生产商与葡萄糖培养基培养(30.)或淀粉(36)作为碳源。

在我们以前的工作(9),20属于属极端嗜盐古生菌Halorubrum(17株),Natrinema(2株)Haloterrigena(1株)和孤立从收集到的样本S1-10盐湖盆地厄尔木标枪在旱季筛选PHA生产在同一PHA-accumulating介质用于这项研究。其中,只有两个菌株属于Natrinema和Haloterrigena属已被证明的PHB积累7%的和3.6%的聚(3-hydroxyvalerate) (PHV),分别在一个中等补充2%的葡萄糖。在当前的研究中,浓缩文化相同的样本(S1-10)和补充淀粉显示PHB的选择只有一个生产者属相关Haloarcula。然而,与样本收集浓缩文化在雨季和补充碳源透露一个物种的存在Halorubrum和大量的Natrinema物种(12株)从样品S6W-14和S6M-14 PHB-producing能力,分别。这些发现显示,隔离方法,碳源,季节,采样位置可能影响PHB-producing热点的选择。

5。结论

的基础上获得的数据,不同的古细菌分离得到纯文化从突尼斯沙漠和能够使用淀粉作为唯一碳源的PHB生物合成。然而,PHB在烧瓶批量生产文化的收益率在细胞内与其他近亲相比很低。因此,未来的研究在分批发酵优化,馈料式,和持续的文化利用淀粉和其他低成本的原料以及代谢工程策略来提高质量和PHB生产力将受到调查。

数据可用性

序列已被提交到基因库数据库下加入数字:MN516817 MN516830。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

Fatma Karray马奈尔·本·阿卜杜拉和贡献同样这项工作。

确认

这项工作得到了突尼斯的高等教育和科学研究。我们也感谢评论者对他们有用的评论这个手稿。

补充材料

补充1。图S1:细胞积累polyhydroxyalkanoic酸染色与苏丹黑B (a)和尼罗红(B)琼脂板上。的菌株大肠杆菌和Natrinema altunense应变CEJGTEA101被用作正面和负面的控制,分别。

补充2。图S2: PCR扩增PhaC(一)和阶段(b)基因编码PHA合成酶(第三类)的积极的生产菌株。巷M1表示分子大小标记(100 bp DNA梯)和车道M (1 Kb DNA梯)。

补充3。图S3:相差显微图显示细胞PHA-producing菌株生长在PHA-accumulating介质为25% (w / v)氯化钠;酒吧,10μm。

补充4。图S4: (A)限制消化隔离放大16 s rRNA的裂开运算器我(一个),Mbo我和(b)有从示例S1-10 III (c)和(B) S6M-14和S6W-14样品。巷M代表分子大小标记DNA梯1 Kb。

补充5。随着时间的推移图S5:生长曲线的隔离。光密度是每24小时在600海里。平均值显示重复测试。

补充6。图S6:色谱的PHB获得文化隔离CEJ3-14(一),(b) CEJ6-14, (c) CEJ7-14, (d) CEJ8-14, (e) CEJ9-14 CEJ10-14 (f) (g) CEJ11-14 CEJ21-14 (h),(我)CEJ24-14 (j) CEJ25-14 (k) CEJ28-14和PHB (l)标准(σ)。

引用

1. j·h·歌,r . j .墨菲r·纳·g·b·h·戴维斯,“可降解和可降解的替代传统塑料,”英国皇家学会哲学学报B,卷364,不。1526年,第2139 - 2127页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. r·c·汤普森·c·j·摩尔,f·s·萨尔Vom,和s . h .天鹅”塑料、环境和人类健康:当前的共识和未来趋势,”英国皇家学会哲学学报B:生物科学》,卷364,不。1526年,第2166 - 2153页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. j . m . Luengo b·加西亚,a·桑多瓦尔g . Naharro和e·r·奥利维拉,“从微生物生物塑料,”目前看来在微生物学》第六卷,没有。3、251 - 260年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. a . Steinbuchel h·g·施莱格尔,“生理和分子遗传学的聚β羟基烃酸)合成产碱杆菌属eutrophus”,分子微生物学,5卷,不。3、535 - 542年,1991页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. a·j·安德森和e·a·道斯”发生,代谢,代谢作用,和工业使用的细菌polyhydroxyalkanoates,”微生物学检查,54卷,不。4、450 - 472年,1990页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. r·g·柯克和m·金兹堡”两种halobacterium超微结构”,超微结构研究期刊》的研究第41卷。。1 - 2、80 - 94年,1972页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. 波里,p . Di Donato g . r . Abbamondi和b . Nicolaus”合成、生产、和生物技术应用的胞外和polyhydroxyalkanoates古生菌,”古生菌文章ID 693253卷,2011年,13页,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. a . Legat c·格鲁伯k .桑戈g .万纳和h . Stan-Lotter polyhydroxyalkanoates的识别Halococcus和其他haloarchaeal物种。”应用微生物学和生物技术,卷87,不。3、1119 - 1127年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. m·本·阿卜杜拉·Karray, s . Sayadi”由两个嗜盐古细菌生产polyhydroxyalkanoates隔离使用廉价的碳源,从盐湖盆地厄尔木标枪”生物分子,10卷,不。1,2020。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. G.-Y。棕褐色,C.-L。陈,李l . et al .,“开始研究生物高聚物polyhydroxyalkanoate (PHA):复习一下,”聚合物》第六卷,没有。3、706 - 754年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. m·科勒”Polyhydroxyalkanoate生物合成在水的边缘activitiy-Haloarchaea biopolyester工厂,”生物工程》第六卷,没有。2、2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. l . j .汉问:Lu, j .周和h,”phaEC的分子特征_嗯所需的基因,生物合成的聚(3-hydroxybutyrate)极端嗜盐的archaeon Haloarcula marismortui,”应用与环境微生物学,卷73,不。19日,6058 - 6065年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. 比比Salgaonkar、k·摩尼和j·m·布拉干萨”积累的polyhydroxyalkanoates嗜盐古生菌分离与传统太阳能盐场的印度,”极端微生物,17卷,不。5,787 - 795年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. a . Pramanik a . Mitra m . Arumugam et al .,“利用酒糟polyhydroxybutyrate的生产Haloarcula marismortui”,叶形线Microbiologica卷,57号1,第79 - 71页,2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. 徐r . Mitra t、h·香和j .汉”当前进展polyhydroxyalkanoates合成利用嗜盐菌是一种很有前途的细胞工厂,”微生物细胞工厂,19卷,不。86年,外墙面,2020页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. j·g .签约和f . Rodriguez-Valera培养条件对聚的影响β-hydroxybutyric酸)生产Haloferax mediterranei。”应用与环境微生物学卷,56号8,2517 - 2521年,1990页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. “m . Taran合成聚(3-hydroxybutyrate)从不同的碳源Haloarculasp, IRU1。”聚合物塑料技术和工程,50卷,不。5,530 - 532年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. n . Kbir-Ariguib d . b . h . Chehimi, l . Zayani”治疗使用溶解度的突尼斯盐湖相图,“纯粹与应用化学,卷73,不。5,761 - 770年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. m·本·阿卜杜拉·Karray: Mhiri et al .,”表征Sporohalobacter salinus sp. 11月,厌氧,嗜盐的,发酵细菌隔绝咸水湖泊,“国际系统与进化微生物学杂志》上第2部分,卷。65年,第548 - 543页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. m·b·阿卜杜拉·Karray: Mhiri et al .,“原核的多样性在突尼斯咸水湖泊,盐湖盆地El木标枪”极端微生物,20卷,不。2、125 - 138年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. m·b·阿卜杜拉·Karray: Kallel et al .,“原核生物的丰度和多样性短暂的高盐度盐湖盆地湖厄尔木标枪使用Illumina公司Miseq测序,DGGE和qPCR化验,”极端微生物,22卷,不。5,811 - 823年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. f . Karray m·b·阿卜杜拉n . Kallel m·哈姆扎·m·Fakhfakh和s . Sayadi“嗜盐细菌和古细菌产生的胞外水解酶分离出高湖,”分子生物学报告,45卷,不。5,1297 - 1309年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. e . f . DeLong“古生菌在沿海海洋环境,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷89,不。12日,第5689 - 5685页,1992年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. d . j . Lane”16 s / 23 s rRNA测序,”Stackebrandt Em·格拉汉姆·古德费勒,艾德,核酸技术在细菌分类学,页。115 - 175年,约翰威利& Sons,纽约,1991年。视图:谷歌学术搜索
25. f . Karray m . Mezghani n . Mhiri b . Djelassi和s . Sayadi”降低膜生物反应器降解阴离子表面活性剂废水的研究:隔离新阴离子型表面活性剂的降解细菌,”国际生物退化和生物降解卷,114 5,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. m . Liu j·e·冈萨雷斯,l·b·威利斯和g·c·沃克,“小说隔离exopolysaccharide-deficient突变体筛选方法,”应用与环境微生物学,卷64,不。11日,第4602 - 4600页,1998年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. p . Spiekermann b·h·A·雷姆曾为此写过r . Kalscheuer d·鲍迈斯特和A . Steinbuchel”敏感,viable-colony使用尼罗红染色法直接筛选细菌积累polyhydroxyalkanoic酸和其他脂质存储化合物,”档案的微生物学,卷171,不。2、73 - 80年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. 比比Salgaonkar, k和j·m·布拉干萨,”玛表征polyhydroxyalkanoates积累的中度嗜盐的盐锅隔离芽孢杆菌megaterium应变H16。”应用微生物学杂志,卷114,不。5,1347 - 1356年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. t . m .玫瑰,e·r·舒尔茨j·g . Henikoff s Pietrokovski c . m . McCallum和s . Henikoff”Consensus-degenerate混合远亲序列的寡核苷酸引物进行扩增,”核酸的研究,26卷,不。7,1628 - 1635年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. 刘j .汉j .侯h . et al .,“宽分布的嗜盐古生菌小说polyhydroxyalkanoate合酶亚型与同源性细菌类型III合成酶,”应用与环境微生物学,卷76,不。23日,第7819 - 7811页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. h . Brandl r . a .总值r·w·伦茨和r·c·福勒”假单胞菌oleovorans的聚β-hydroxyalkanoates)为潜在应用生物可降解聚酯。”应用与环境微生物学,54卷,不。8,1977 - 1982年,1988页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. 诉Kumar和s . k .女子”Halocin多样性在嗜盐古生菌和他们的应用程序中,”微生物多样性在生态系统可持续性和生物技术的应用程序施普林格,页497 - 532年,新加坡,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. 问:刘l . Wang,吴x et al .,“代谢通路的生物信息学分析的热点能源储备,”科学报告,9卷,不。1034年1 - 12,2019页。视图:谷歌学术搜索
34. “利用m . Taran石化废水保利(3-hydroxybutyrate)的生产Haloarculasp, IRU1。”《有害物质,卷188,不。1 - 3,途径的2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. b . Nicolaus l .喇嘛e·埃斯波西托等。”Haloarculaspp能够biosynthesize外,endopolymers。”工业微生物学和生物技术杂志》上,23卷,不。6,489 - 496年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. o . Danis a . Ogan p Tatlican et al .,“制备聚(3-hydroxybutyrate-co-hydroxyvalerate)电影从嗜盐古生菌和他们潜在的用于药物输送,”极端微生物,19卷,不。2、515 - 524年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. r . Mahansaria a . Dhara萨哈,s . Haldar j·穆克吉,“polyhydroxyalkanoate由生产增强和特征Natrinema ajinwuensis(同义词)≡Natrinema altunense应变RM-G10。”国际期刊的生物大分子,卷107,不。B部分,1480 - 1490年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2021 Fatma Karray et al。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。