识别和描述的新孤立Chitinase-Producing应变地衣芽孢杆菌SSCL-10为几丁质降解

文摘

几丁质酶和几丁质(甲壳素)消化酶具有不同应用领域的医学、农业和工业。本研究旨在开发一种有效hyperchitinase-producing突变株的小说地衣芽孢杆菌。一个简单而快速的方法用于筛选chitinolytic微生物群通过化学诱变ethylmethane磺酸盐与紫外线照射。有16个突变株表现出几丁质酶的活动。chitinase-producing菌株,选择最大的几丁质酶活性的菌株,通过sds - page部分纯化的蛋白质,被确认为地衣芽孢杆菌(SSCL-10)具体活动最高的3.4 U /毫升。诱发突变模型已成功实现突变EMS-13 (20.2 U /毫升)产生5-6-fold更高收益率的几丁质酶,而突变UV-11 (13.3 U /毫升)3-4-fold更大的几丁质酶活性与野生菌株相比。部分纯化的几丁质酶的分子量为66 kDa。野生菌株(SSCL-10)被确认为地衣芽孢杆菌使用16 s rRNA序列分析。本研究探讨了潜在的应用hyperchitinase-producing细菌几丁质废物回收和处理从甲壳类动物和虾,从而增加价值的甲壳纲动物。

1。介绍

虾生产在印度在2019年估计为700000吨,在泰米尔纳德邦的主要生产商之一。海鲜产业作出了重大贡献全球粮食供应提供一个重要的蛋白质来源。商业化的水产养殖产生了经济利润,而这些行业产生的废物对生态系统有不利影响(1,2]。据估计,全球鱼类生产从2011年的1.54亿吨上升到2030年的1.86亿吨(3]。大约有5%的虾废弃物加工成面粉和提取,形成碱对动物饲料(4]。虾废弃物由甲壳素40%,多糖由N-acetylglucosamine单位(5)和一个重要的主要资源的来源生物活性分子(6]。

甲壳素是退化最常见的化学通路产生低聚糖。然而,这涉及到不良后果,比如处理成本和有害影响生态系统高度腐蚀性化学试剂的使用(7,8]。另一方面,生物技术途径是一种环保的方法9]在几丁质酶(glycosyl-hydrolase蛋白质)发挥重要作用在裂开β1 4债券N-acetylglucosamine单位产生的几丁质降解[10]。

最常见的细菌和真菌微生物群合成几丁质(甲壳素)消化酶,和一些未知的物种有效分解几丁质聚合物。研究人员报道,海洋环境chitinase-synthesizing微生物的主要来源,主要是细菌物种(11),其中只有4%的菌株进行分类(12]。属中被确定为从海洋生态系统包括几丁质酶生产商芽孢杆菌,气单胞菌属,沙雷氏菌属,肠杆菌属,欧文氏菌,色素细菌,黄杆菌属,节细菌属,弧菌(13]。其他细菌物种,追究生产几丁质(甲壳素)消化酶链球菌,梭状芽胞杆菌,真细菌属,与鲸鱼废物(14];地衣芽孢杆菌从食品行业的废液15];链霉菌属和沙雷氏菌属残留的甲壳类动物(16];和芽孢杆菌amyloliquefaciens和不动杆菌johnsonii从虾残留17]。几丁质酶生产商很少水生生态系统与陆地隔绝的环境中,因为它们是有氧(12]。筛查几丁质酶生产商已经成为许多研究者的重要领域帮助铺平道路退化虾残留在经济上可行的和环保的方式。因此,目前的调查集中隔离一个chitinase-producing应变和使用16 s rRNA测序识别它。突变菌株生产hyperchitinase发达。

2。材料和方法

2.1。生物、媒体和文化条件

压力地衣芽孢杆菌(SSCL-10)被孤立的海鲜工业废料(Thoothukudi虾壳堆填区)、印度、和鉴定微生物实验室,V.H.N.S.N(自治),Virudhunagar、TN、印度,已被用于这项研究。文化条件下,最佳温度、pH值和胶体几丁质浓度随访的早期报告显示Abirami et al。7]。甲壳素分解和抗真菌特性已确定并公布7,18]。

2.1.1。制备胶体几丁质和胶体几丁质琼脂(CCA)板块

根据[胶体几丁质制备19]。短暂、几丁质粉5克(grm1356 - 100 g Hi-media,印度)慢慢加入到60 L盐酸(10 N HCl)集中在4°C与连续搅拌过夜。这种混合添加到500毫升的50%冰冷的乙醇与连续25°C和剧烈的搅拌在扶轮瓶200 rpm过夜。在10000转离心20分钟后,收集沉淀,用无菌蒸馏水洗净,直到成为中性(pH值7.0)。收集胶体几丁质是冻干的,储存在4°C到使用。胶体几丁质琼脂板之前准备根据我们的报告75 g)通过混合矿物盐(KH的胶体几丁质₂阿宝₄0.7 g、K₂HPO₄0.3 g, MgSO₄h·5₂O 0.5 g, FeSO₄7·h2o 0.001 g, ZnSO₄0.001 g, MnCl₂0.001 g,琼脂20 g 1 L pH值8)。

2.1.2。Chitin-Degrading细菌的主要筛选

初级筛选是由现场接种所有chitin-degrading细菌隔离CCA使用牙签的2毫米直径,在室温下孵化。间隙区由于甲壳素水解被记录到5天。细菌分离生产清除区选5毫米单独进行二次筛选。

2.2。确定特定Chitinolytic活动

几丁质酶活性测定的方法Vyas以及和Deshpande20.]。简而言之,胶体几丁质作为底物测定几丁质酶的活动。酶解(0.5毫升)添加到1.0毫升的基质溶液(0.5%的悬浮胶体几丁质磷酸盐缓冲剂(50毫米,pH值7.0))在37°C孵化15分钟。离心后,上清液测定还原糖的二硝基水杨酸法和n -乙酰葡萄糖胺被用作标准(21]。一个单位的几丁质酶活性被定义为所需的酶解放1μ摩尔的n -乙酰- D-glucosamine相当于50°C h¹。

2.3。使用Chitinolytic微生物测定虾壳退化

的生物降解潜力地衣芽孢杆菌(SSCL-10)确定了虾壳。简单地说,选择的地衣芽孢杆菌(SSCL-10)生长在0.5%胶体几丁质作为接种体含有营养肉汤。50微升的细菌培养液(0.5 OD)接种1 g的虾壳5毫升基本培养基pH值(7)在40°C 100 rpm旋转瓶6 - 12天。孵化后,基于虾shell-degrading功效,地衣芽孢杆菌(SSCL-10)被选为诱变和维护在营养琼脂偏进行进一步的研究。

2.4。分子识别和种系发生树结构

2.4.1。PCR扩增

分子识别是由16 s rRNA分析。简而言之,高收益的几丁质酶生产商地衣芽孢杆菌(SSCL-10)在我们先前的研究报道7被选为研究。细菌基因组DNA的地衣芽孢杆菌使用英斯达(SSCL-10)提取基因TM矩阵(Bio-Rad cat-no。7326030),根据制造商的指示。然后,16 s rRNA亚基基因片段被使用放大16 s rRNA通用引物27 f (5 - - - - - -AGAGTTTGATCMTGG CTCAG-3 )和反向引物1492 r (5 - - - - - -TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3 )(22)使用MJ珀尔帖效应研究热循环(美国马歇尔科学)。PCR进行30μL反应混合物(20 ng基因组DNA)在下列循环条件:2分钟95°C,紧随其后的是35周期为1分钟95°C, 55°C 1分钟,1分钟和72°C,最后孵化10分钟的72°C。

2.4.2。16 s rRNA基因测序

PCR产品是用琼脂糖凝胶电泳检测和提取使用Genei®凝胶萃取设备(印度班加罗尔Genei)。周期序列的帮助下进行ABI3730xl DNA分析仪BigDye终结者循环测序设备v.3.1(美国应用生物系统公司,卡尔斯巴德,CA)。引物518 f (5 - - - - - -CCAGCAGCCGCGGTAATACG-3 )和800 r (5 - - - - - -TACCAGGGTATCTAATCC-3 )被用于测序反应。16 s rRNA的短序列基因编译使用SeqMan (DNASTAR Inc .)。新生成的序列存入基因库。

2.4.3。系统发育分析

分析最近的几丁质酶生产商的系统分类,16 s rRNA基因测序与爆炸(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi使用相似的NCBI blast搜索工具)。序列的系统发育分析从爆炸结果密切相关的序列进行多序列比对紧随其后。3.7程序的肌肉被用于多个序列的比对23]。对齐序列治愈使用Gblocks 0.91 b消除不对齐的位置和不同地区(除去对齐噪音)[24]。最后,Phyml 3.0 aLRT程序用于系统发育分析和HKY85替换模型所示至少尽可能准确的其他现有的发展史项目使用模拟数据和更快的数量级。树树达因198.3程序被用于呈现(25]。

2.5。紫外线诱变的地衣芽孢杆菌

紫外线诱变协议之后根据Vaidya et al。26与修改)。野生型的地衣芽孢杆菌(SSCL-10)接种在37°C在营养肉汤和孵化24小时。1微升文化被暴露在紫外线波长短(280海里)的距离60厘米(飞利浦德国莱茵30 W、G3018、荷兰)与不同的时间间隔(0、2、4、6、8和10分钟)在一个开放的玻璃petridish在黑暗条件下保护从光致复活作用。然后,文化是连续稀释CCA板块和突变株隔绝紫外线的比率非常低的幸存者。突变体筛选和选择通过观察高区间隙(CZ)蚁群的规模(CS)比和几丁质酶的活动。

2.6。化学诱变地衣芽孢杆菌

突变被ethylmethane诱导化学磺酸盐(EMS)的方法Vaidya et al。26与修改)。紫外线突变菌株进一步突变化学通过EMS hyperchitinase观察影响生产。的地衣芽孢杆菌(SSCL-10) (UV-11)接种在37°C在营养肉汤和孵化24小时。孵化后,颗粒收集从1毫升的培养基和洗两次无菌0.1 Tris-HCl缓冲区(pH值7.5)和悬浮在相同体积的0.1米Tris-HCl缓冲区(pH值7.5)。颗粒收集和resuspended体积的一半0.1 Tris-HCl缓冲区(pH值7.5)。细胞被收集在0.1毫升整除,不停地在冰上。共有50个μ克/毫升的EMS被添加到每个管,放置在一个瓶在37°C水浴30分钟。这些细胞被洗和悬浮在1和0.1毫升Tris-HCl缓冲区(pH值7.5),和变异的样本24 h。诱导突变体是连续稀释和镀CCA盘子。突变体筛选和选择通过观察高区间隙(CZ)蚁群的规模(CS)比和几丁质酶的活动。

2.7。筛选和隔离Hyperchitinase-Producing突变

诱变处理后,CCA板在室温和孵化了5天的间隙区(甲壳素水解)。殖民地的大小(CS)以及间隙区(CZ)测量,和CZ / CS比率测量,与野生型相比。更高的CZ / CS殖民地亚文化甲壳素琼脂偏同时接种到100毫升含1%胶体几丁质和营养肉汤孵化30°C在100 rpm旋转瓶48 h。几丁质酶的培养滤液收集和测量活动。

2.8。部分纯化的几丁质酶

文化上层清液的粗酶部分纯化(野生、紫外突变和EMS突变株)使用65%饱和硫酸铵在4°C (SAS)沉淀搅拌的方法ake et al。27]。降水是由离心法在11500 x g 10分钟4°C。沉淀resuspended在相同体积的乙酸钠缓冲(pH值6),蛋白质浓度估计(28]。的几丁质酶活性最高的分离纯化12%聚丙烯酰胺凝胶电泳和染色使用0.5%考马斯亮蓝R250(σ)。一种蛋白质标记也电泳的大小确定。

2.9。统计分析

方差分析(方差分析)和执行手段比较使用图基测试( )具体chitinolytic活动使用SPSS 18.0统计软件。

3所示。结果

3.1。野生型菌株的筛选

我们以前的研究报道,16个菌株分离出虾残留表示不同的水解晕大小(带间隙超过5毫米胶体几丁质琼脂培养基)(8]。从这些隔离,地衣芽孢杆菌(SSCL-10)产生的几丁质酶活性最高的野生型(KCCD 201018)并与突变生产商(无花果。S2)。SSCL-10是编目机构收集的Kamaraj大学文化存托(KCCD 201018)。同样,突变株,UV-11 EMS-13数字KCCD登记在案的201807年和201812年KCCD,分别。

菌株的菌落形态地衣芽孢杆菌(SSCL-10)显示白色,圆形凸形状和边界和光滑的质地。显微镜检查显示杆状,能动的营养细胞,证实属于内生孢子形成芽孢杆菌集团(无花果。S3)。的地衣芽孢杆菌(SSCL-10)酶活性为3.4 U /毫升的第四天孵化(图1)。基于我们之前的研究(8),最佳浓度的胶体几丁质(1%),温度40°C,增长和pH值7被用于这项研究野生和突变株的几丁质酶的生产。

图2揭示了生物降解后的虾壳6和12天时间的方式观察到视觉。12天有效降解的外骨骼虾壳相比,6天。

3.2。紫外诱变

地衣芽孢杆菌(SSCL-10)被紫外突变和CCA的幸存者被镀板测量间隙区(CZ)殖民地大小(CS)。突变hyperchitinase-producing菌株被确定在不同的时间间隔和孤立。幸存者百分比减少剂量依赖性的方式在不同的时间间隔(0、2、4、6、8和10分钟)(图3(一个))。13突变体,显示CZ / CS比率高,检查了几丁质酶的生产区域的间隙从15到19毫米胶体几丁质琼脂培养基。突变UV-11被发现产生13.3 U /毫升(表1)更高的几丁质酶( )比野生型(3.4 U /毫升)(图1)。

3.3。EMS诱变

地衣芽孢杆菌(SSCL-10)突变UV-11进一步突变与EMS和减少幸存者是剂量依赖性(鹿μg)测量spectrophotometrically(图3 (b))。16个突变体显示更高的CZ / CS比率进行生产几丁质酶,使区域的间隙从19到27毫米胶体几丁质琼脂培养基。突变EMS 13被发现产生几丁质酶的最高金额的20.2 U /毫升(表1),明显高于( )比野生型(3.4 U /毫升)和突变UV-11 (13.3 U /毫升)(图1)。突变EMS-13 hyperchitinase产量的测定,发现是稳定的连续接种于CCA偏超过6个月。

3.4。特定的Chitinolytic活动

图1显示了分析chitinolytic活动三个重要突变几丁质酶生产商( )有不同chitinolytic能力比野生菌株。增加订单的具体活动,野外地衣芽孢杆菌(SSCL-10)生产紧随其后的是突变UV-11最低和最高的是由突变EMS 13。特定的几丁质酶活动的结果与所选菌株范围从3.4 U /毫升20.4 U /毫升的蛋白质(表1)(图。S4)。此外,发现了一个强大的协会之间观察到的几丁质酶活性和水解区形成观察每个应变。

3.5。系统发育分析

与数据库序列相比,SSCL-10隔离的16 s rRNA显示,97%相似地衣芽孢杆菌这是记录在NCBI数据库(银行ID SUB2051105;加入基因库。KY063593;确定生物地衣芽孢杆菌)(表S1-S2)。项目树达因渲染(表198.3被用于系统发育树S3)。图4显示树呈现的结果地衣芽孢杆菌(SSCL-10)。16 s rRNA的校准和系统发育分析序列的不同芽孢杆菌物种强烈建议物种状态的菌株(SSCL-10)(图。S7),证实分离菌株的分类和识别地衣芽孢杆菌。

3.6。几丁质酶纯化

几丁质酶(chi - 66)部分提纯65%饱和硫酸铵(SAS)降水在4°C。sds - page变性部分纯化的几丁质酶分子量66 kDa附近(图标识5)。基于等值总蛋白质的加载压力,野生型的沉淀显示薄,小乐队;紫外突变株透露一个中型乐队;和EMS突变菌株表现出厚带表明几丁质酶产量的增加程度(无花果。S5-S6)。EMS突变chitinase-producing应变有效地产生几丁质酶的最高水平相比,紫外突变体和野生型。

4所示。讨论

几丁质酶最近成功地分离和特征芽孢杆菌物种(29日- - - - - -31日]。然而,有必要产生的几丁质酶高产满足基本需求生存的生态系统。目前的研究报告隔离,分子识别,诱导诱变高产的野生菌株地衣芽孢杆菌从虾废弃物chitinolytic活动。我们之前的研究报告chitinase-producing隔离,其表征,和最优生长因子如温度、pH值、培养基的营养成分与胶体几丁质浓度,几丁质酶生产,其活动从不同的海洋来源(7]。chitinolytic活动被带间隙的存在表示的隔离。早期的研究表明,光环的存在(清除)区需要很长的潜伏期5到6天(32]。革兰氏阴性的隔离在海洋环境中很常见,尤其是在甲壳类和虾废弃物可以导致海洋生物的疾病。我们先前的研究发现几丁质酶产生的地衣芽孢杆菌(SSCL-10)有效降低外骨骼的蟑螂7]。同样,本研究也证明产生的酶地衣芽孢杆菌(SSCL-10)有效降低虾壳废弃物。我们的研究结果显示,地衣芽孢杆菌(SSCL-10)是一种潜在的生物作为生物防治剂和改善环保的环境。

革兰氏阳性细菌相比,90%的革兰氏阴性细菌在海洋生态系统的多样性特征,提高这些生物的生存在极端温度、宽容和快速适应营养不良,和高盐浓度(33,34]。突变菌株的几丁质酶活性UV-11和EMS-13显示值大于先前的报告(27)最大的特定的酶活性为14.2 U /毫升的应变地衣芽孢杆菌B307。另一方面,我们的野生菌株地衣芽孢杆菌SSCL-10 chitinolytic活跃值3.4 U /毫升,这低于突变值相比,在本研究中在我们先前的研究和报告(7]。戴et al。35)报道,芽孢杆菌spp。Hu1显示几丁质酶活性为11.1 U /毫克蛋白粗提取液,而B。地衣芽LHH100表明几丁质酶494.5 U /毫克的蛋白质的活动报道Laribi-Habchi et al。15]。

除了几丁质酶的正常生产,我们设计了突变株几丁质酶活性增加了紫外线诱导和EMS突变。这种方法在早期研究与应用产碱杆菌属xylosoxydans,增强了几丁质酶生产2-3-fold高(26]。我们的研究是第一个报道hyperchitinase活动地衣芽孢杆菌诱导化学(EMS)和紫外线辐射。此外,紫外线突变地衣芽孢杆菌SSCL-10 UV-11增强几丁质酶生产3-4-fold高于野生型。进一步,几丁质酶生产紫外线诱变处理增强了突变(UV-11)与EMS (EMS-13)与特定的活动20.4 U /毫升。因此,紫外线和化学诱导的几丁质酶高产突变野生型地衣芽孢杆菌SSCL-10 5-6-fold。人都有双重的几丁质酶产量提高粘质沙雷氏菌QMB 146636),在假单胞菌stutzeri与N-methyl-N YPL-M26 - - - - - -nitro-N-nitrosoguanidine (NTG)诱变37]。部分纯化的几丁质酶被认定为66 kDa(图5通过sds - page)分子量蛋白质。研究人员分离和纯化产生的几丁质酶芽孢杆菌种虫害的36,42岁,53岁,59岁,62年,66年,72年、76年和89年kDa [38- - - - - -40]。几丁质酶已经从其他微生物分离分子量下降在相同的范围。66 kDa的endochitinase分离和克隆沙雷氏菌属proteamaculans(41]。另一项研究发现,四个几丁质酶分子量为92,82年,70年,55 kDa分泌气单胞菌属caviaeCB101被单个基因编码chi1(42]。相同的蛋白质不同截断Chi1蛋白质可能是因为posttranslation蛋白水解分裂,形成了几丁质酶处理。然而,这种处理的作用是不确定的。大多数chitinolytic细菌研究有多个几丁质酶,几丁质降解的协同功能。进一步说明我们的研究将突出的几丁质酶结构与其他几丁质酶的异同,说明可能存在多个截断相同的蛋白质。我们之前的研究报道,孤立的几丁质酶酶检测对所选phytofungal病原体即生物防治剂一样重要。腐皮镰孢霉菌,Rhizconia以上,尖孢镰刀菌,曲霉属真菌spp。18]。

地衣芽孢杆菌细小集团的一部分,通常存在于土壤和鸟的羽毛。在鸟类,羽毛降解性和影响蜕皮和颜色模式。在人类中,这些通常导致食物中毒和污染物的乳制品,原料奶,婴儿食品蔬菜,煮熟的肉类,和处理。因为这种细菌产生和分泌水解酶,它能够降低许多基质。这种降解性特性已经吸引了对潜在的应用在生物技术(18,43]。发酵的鸟羽毛变成了营养的牲畜饲料。它还产生碱性蛋白酶,这反过来用于洗衣粉,因为它可以将蛋白质的泥土从衣服在较低的温度。作为生物杀虫剂,它具有抗真菌活性(17,44]。这潜在益生菌一起使用时B。细小促进更好的免疫功能。B。地衣芽扮演一个重要的角色在甲壳素的生物转化,甲壳纲动物的主要废弃物产业之一。甲壳素是难以生物降解,造成一个几丁质酶可以缓解环境问题。几丁质酶负责甲壳素的生物转化等药物活性产品n -乙酰葡萄糖胺和chito-oligosaccharides。这些衍生品最终会导致下游一个可持续发展的环境和应用程序。的鉴定和测序地衣芽孢杆菌可以代表一个生物技术的选择操作不致病的微生物能分解几丁质在海洋生态系统和可行的工业应用。

5。结论

Chitinolytic潜在被确认和隔离地衣芽孢杆菌从虾废弃物(SSCL-10)。我们的结果显示,地衣芽孢杆菌(SSCL-10)是一个潜在的生物作为生物防治剂和改善环保的环境。诱变是孤立的野生菌株诱导提高几丁质酶的生产。细胞外的几丁质酶部分纯化,纯化酶的大小约为66 kDa。的几丁质酶产量提高6-7-fold突变株与野生菌株相比。测序的16 s rRNA孤立野生几丁质酶生产商确定它属于物种地衣芽孢杆菌和序列被记录在NCBI数据库(银行ID SUB2051105;加入基因库。KY063593;确定生物地衣芽孢杆菌)。突变EMS-13 hyperchitinolytic的应变能力,与一个特定的活动20.4 U /毫升。EMS-induced突变株地衣芽孢杆菌SSCL-10 EMS-13,被认定为最高的几丁质酶生产商,可以发现潜在的应用在生物防除,制药和生物技术行业(无花果。S1)。此外,未来的研究,包括几丁质酶的分子分析结构可以帮助绘图比较与其他几丁质酶的特征。这也将有助于进一步研究chitin-degradation系统中可用的可能性芽孢杆菌和多个几丁质酶或截断的存在形式相同的蛋白质。由于其高降解性特性,可以探索使用这种酶的工业应用。Hyperchitinase突变体可以追究几丁质的废物的生物转化在商业水平。此外,其生物防除致病性真菌疾病控制在商业上重要的农作物可以使用从而减少杀虫剂的使用及其对作物和人类健康的负面影响。

数据可用性

在这项研究中使用的所有数据可以作为补充材料网上可以找到这篇文章。

附加分

高光。(1)几丁质酶生产商被孤立,被16 s rRNA基因测序B。地衣芽。(2)通过EMS诱变和紫外线诱导增加hyperchitinase生产比野生的几丁质酶的生产。(3)几丁质酶是部分提纯并确定66 kDa的蛋白质。(4)本研究提供了一个有效的工业级hyperchitinase生产战略,生物处理非降解性甲壳素废物环境甲壳类和虾残留。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

ND,公里,SD的概念和设计研究,这项研究的数据采集、和监督。NAD、DV、文献搜索也是如此。公里,和ND手稿准备评论。ND, SD,公里,DV, NAD的最后修订手稿。

确认

科学研究的作者感谢院长以来,Sattam。本。阿卜杜阿齐兹王子大学支持这项工作。作者表示衷心的感谢我们的团队的及时援助和SD亲自感谢Muthamil先生对他的理解,赛尔凡来到满腔热情的支持和鼓励。

补充材料

图1:chitinolytic生产商孤立和确定从土壤含有虾废弃物。孤立的地衣芽孢杆菌(SSCL-10)检测虾退化属性和诱变。16 s rRNA的分子类型序列揭示了地衣芽孢杆菌的演化谱系(SSCL-10)。野生株突变与紫外线,高产几丁质酶生产商(UV-11)被选为EMS突变和比较野生和突变株之间的几丁质酶的生产。细胞外的几丁质酶部分纯化,纯化酶的大小确定约66 kDa。我们的结果表明生物成生物药物的潜力,可以帮助改善一个生态友好的环境。图2:初级筛选和隔离chitinase-degrading生物胶体几丁质琼脂。图3:形态学的野生菌株b地衣芽SSCL-10。图4:几丁质酶突变株与野生品的活动。图5:高效液相色谱法的部分纯化的几丁质酶酶由地衣芽孢杆菌(SSCL-10)。 Figure 6: partial purification of SDS-PAGE (original). Table 1: analysis report of B1 (B1_contig_1 report). Table 2: blast N report of B1. Table 3: parameters used for constructing the phylogenetic tree.(补充材料)

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