饱和脂肪酸的影响甲烷生成和细胞的可行性Methanobrevibacter ruminantium

文摘

饱和脂肪酸(美国)被抑制瘤胃甲烷生成,但潜在的机制尚不清楚。在目前的研究中,甲烷形成的抑制作用,细胞膜渗透率(钾流出),和存活率(现场/死染色)的纯瘤胃Methanobrevibacter ruminantium(DSM 1093)细胞悬浊液进行测试的美国。甲烷产量不会受到月桂的低浓度(C₁₂;1μg / mL),肉豆蔻(C₁₄;1和5μg / mL),或棕榈(C₁₆;3和5μg / mL)酸,而抑制浓度更高。C₁₂和C₁₄最抑制。硬脂酸(C₁₈),在10 - 80测试μg / mL和无效的37°C,甲烷产率降低了一半以上在50°C和≥50岁μ克/毫升。钾射流是由美国引起的(C₁₂= C₁₄> C₁₆> C₁₈=控制),抑制甲烷确凿的数据。此外,C₁₂和C₁₄减少细胞生存能力接近于零,而40%的控制细胞24小时后仍然活着。一般来说,测试美国抑制甲烷生成,细胞膜通透性增加,减少的生存m . ruminantium剂量和时间。这些结果给新的深入了解美国的甲烷抑制效应可能在产甲烷菌介导。

1。介绍

甲烷()作为一种强效温室气体在大气气体成分变化的最重要的驱动程序,因此全球变暖(1]。农业总CH的排放量约占50%₄人为来源,其中最大的一个是肠内发酵的反刍家畜(2]。甲烷是由一个小组的古生菌,产甲烷菌,这是反刍动物的前胃(瘤胃),占主导地位的Methanobrevibacter(3]。在不受干扰的瘤胃功能,蛋白质和高分子碳水化合物为主要成分的饮食是由微生物降解和发酵主要挥发性脂肪酸(vfa),氨、氢()和二氧化碳()。瘤胃产甲烷菌主要是利用作为减少能源来在一系列的反应耦合的ATP合成(4,5]。作为不能用于动物的新陈代谢,瘤胃甲烷生成也损害饲料转化效率和代表一个重大浪费的能量(能量摄入的2%到12%;(6])。

因此,抑制瘤胃甲烷生成应该接洽各种干预措施。其中最有效的是饮食中期和长链饱和脂肪酸(美国)。Nonesterified月桂酸()据报道,尤其高抑制瘤胃甲烷生成的潜力,其次是肉豆蔻酸()[7- - - - - -9]。相比之下,长链美国(LCFAs)如棕榈酸()、硬脂酸()没有有效地抑制瘤胃甲烷生成在体外(7,10]。的生产纯,增长,文化m . ruminantium,主导瘤胃产烷生物3),被发现被添加不饱和的11,12)和饱和碳链(;(12])脂肪酸。当测试nonruminal产甲烷菌Methanothermobacter thermoautotrophicus和产甲烷球菌属voltae,和也发现抑制甲烷生成(13]。然而,系统研究剂量反应与美国的关系在纯瘤胃产烷生物甲烷生成文化失踪。除此之外,目前还不清楚为什么长链美国不抑制甲烷生成如果这这些长链的低溶解度有关美国在温度低于40°C (13,14]。此外,虽然脂肪酸(FAs)已知抗菌和细胞毒性特性(15),使用范围广泛的生物和人类一样(16),软体动物(17),褐藻(18)抵御病原体的机制,导致抑制效应还不肯定。提出了几种机制(15]。行动的主要目标似乎是微生物细胞膜和各种基本过程发生在和膜(15]。脂肪酸,包括,C₁₆,,已被证明通过无蛋白磷脂影响工会的形式(19]。饱和和不饱和脂肪酸可以吸附细菌细胞膜(20.),破坏细菌细胞膜由钾的损失()[21)、ATP和蛋白质(16)和电子显微镜(22,23),和在细胞死亡中发挥作用22,24,25]。产甲烷菌的细胞被膜的成分从根本上不同于细菌细胞信封,和产甲烷菌系统和生理上不同于所有其他细胞类型(26],足总对产甲烷菌的机制可能不同于其他生物有效。然而,由于产烷生物细胞被膜通常作为扩散障碍之间的细胞质和细胞外介质,它也可能代表一个关键点识别抑制剂的目标。因此,我们假设膜完整性是不安和泄漏的细胞代谢产物包括无机离子等发生的交互与细胞膜脂质SFA,这导致受损细胞的生存。就像在大多数原核生物,在细胞质中积累的产甲烷菌,以换取吗(27]。

在目前的研究中,纯粹的文化m . ruminantium服用纯nonesterified美国为了排除混杂因素如饲料之间的相互作用,矿物质,和微生物发生吗在活的有机体内或与瘤胃液体在体外。本研究的目的是(我)调查SFA类型和用量之间的关系和甲烷生成的抑制不生长细胞,也就是说,细胞悬浮液,和(2)首先洞察在这一过程中潜在的行为模式。在细节,射流作为膜完整性的一个指标。最后,细胞生存被监控使用现场/死亡BacLight工具包之前已成功地用于古生菌(28,29日]。

2。材料和方法

2.1。应变和生长条件

一个纯粹的文化m . ruminantiumM1 (DSM 1093)是获得“德意志Sammlung冯Mikroorganismen和Zellkulturen,”布伦瑞克,德国。这是厌氧培养119年特效病毒培养介质那样准备根据DSMZ (http://www.dsmz.de在120毫升)血清瓶,密封与丁基橡胶瓶塞(20毫米大小;美国葡萄地2048 - 11800,Bellco)和铝海豹(2048 - 11020,Bellco)。试剂对媒体被溶解在煮缺氧蒸馏水,搅拌磁搅拌器在厌氧室(美国Grasslake腼腆的实验室产品)。热稳定的媒体解决方案成分在一批高压蒸汽消毒(萨德,Belimed萨德AG) Sulgen,瑞士)20分钟在121°C。热敏感的解决方案,即维生素、甲酸钠,和国家林业局通过0.2过滤μm Minisart-plus过滤器(缝匠肌AG,哥廷根,德国)。从rumen-cannulated牛瘤胃液体了,透过四层药用纱布(Novamed REF 200137年,耶路撒冷,以色列),然后离心两次15分钟在4000×g (Osterode Varifuge K,贺利氏,德国)。上层清液pH值调整到7.0盐酸和氢氧化钠,加油150 kPa的大气压力、热压处理过的,储存在−20°C长达6个月,使用前准备媒体。整除的准备介质填充到250毫升瓶,关闭与橡胶隔膜,加油250 kPa的大气压力、热压处理过的和存储在4°C 8周或−20°C 6个月之前被使用。m . ruminantium生长在大气压力下的250 kPa的公司吗₂/小时₂混合物(20:80)(AG)穿、Dagmarsellen、瑞士)。顶部空间的气体混合物是每24 h和3毫升precultures重新转移到27毫升新鲜中每四天。文化瓶在水平位置孵化的孵化瓶(Incu瓶10 L、基准、韩国)在37°C的震动速度150 rpm。增长的文化被录音监控CH₄生产、天然气消耗量和光学密度。体积为0.15毫升的气体收集从培养瓶的顶部空间气密注射器(RN汉密尔顿,1725型/ 250毫升,费舍尔科学AG, Wohlen,瑞士),及其CH₄集中分析了气相色谱仪(型号6890 n,安捷伦科技,圣克拉拉,CA,美国)配有火焰离子化检测器在250°C和234毫米×23毫米列(80/100;166目;Porapak Q,丙烯酰胺化学AG)、书、瑞士)。超压在培养瓶检测压力计(国民幸福指数200 - 13,Greisinger电子GmbH Regenstauf,德国)。文化一毫升液体收集在丙烯酸吸收比色皿(路径长度1厘米;(VWR鲁汶,德国)),其光密度测量在600 nm (OD_600年),uv - 160分光光度计录音(日本岛津公司,京都,日本)。生长阶段杰出的滞后、指数、静止和死亡阶段。每次实验之前,产甲烷菌接种到新鲜培养基和3毫升pre-culture mid-exponential增长阶段的早期。

2.2。实验1

月桂酸,C₁₄C₁₆C₁₈(纯度≥97%)来自Sigma-Aldrich,书,瑞士,用作补充实验。股票的解决方案是由溶解的SFA sterile-filtered溶剂二甲亚砜(DMSO) (Sigma-Aldrich)的浓度达到1,3,5、10和30毫克/毫升(C₁₂C₁₆)以及50和80毫克/毫升(C₁₈)。他们补充之前储存在室温下。C₁₈解决方案应用后在50°C被加热到50°C使用前。

作为OD_600年被用来估计细胞干物质(DM)浓度增长文化收获之前,回归OD之间行吗_600年和细胞DM浓度实验开始前成立。17瓶中准备和接种m . ruminantium如之前所述。于每人三瓶,21日文化的mL液体收集在24日,48岁,53岁,72年、77年和96年h覆盖指数增长阶段的早期开发的固定相。,1毫升是用于测量OD_600年在70°C, 20毫升干燥恒重的50毫升猎鹰管湿重被记录以计算文化DM的内容。总共17 OD的回归曲线建立/ DM对(OD范围:0.348 - 0.986)是线性和读取DM (mg / mL) = 7.6092×OD_600年+ 0.4754 ()。这种关系被用来调整和平衡细胞DM浓度在细胞悬浮液。

为了准备在厌氧室实验细胞悬浊液,总是20毫升的文化中收获mid-exponential增长阶段和转移到两个50毫升消毒猎鹰管和离心10分钟3000×g。浮在表面的丢弃,颗粒被两次热压处理过的磷酸盐缓冲剂的包含0.025 KH pH值6.8₂阿宝₄,0.025 K₂HPO₄,0.5毫米钛柠檬酸,0.1 M氯化钠,MgCl 1毫米₂(30.]。根据琼斯和皮卡德(柠檬酸钛制备31日),通过厌氧添加5毫升15%的三氯化钛溶液(默克密理博,达姆施塔特,德国)50毫升0.2柠檬酸钠溶液,调整与饱和碳酸钠溶液pH值7,吹嘘瓶子N₂,其次是高压灭菌法。注射器是用于所有提款。洗涤后,细胞颗粒resuspended在相同的缓冲区的最终浓度细胞DM 6毫克/毫升的帮助下调整OD和文化有关的回归线DM浓度。在厌氧条件下,1μL不同集中SFA股票的解决方案添加到999μL细胞悬浮液在25毫升血清瓶浓度达到1,3,5,10,30岁μ克/毫升的C₁₂C₁₄C₁₆50和80μ克/毫升的C₁₈。瓶子是密封橡胶瓶塞(大小18 d, 203018;Glasgeratebau Ochs、Lenglern、德国),加油250 kPa CO的大气压力₂/小时₂混合物(20:80)和存储在冰等待孵化首先投入一个恒温水槽(优莱博动摇临时、默克、瑞士)每隔一段时间由于GC测定所需时间(3.2分钟/样本)。细胞悬浊液在37°C和孵化50°C(只有C₁₈悬浮液在150 rpm)发抖了。最后,停赛,没有国家林业局被添加补充了1μL / mL DMSO,等于DMSO浓度在治疗组(对照组)或1μL /毫升的缓冲(空白组)。CH的₄浓度(摩尔%)是由气相色谱后1、2、5、24小时已经过去了。CH的₄产量(μ摩尔CH₄每分钟/ mg细胞DM)计算从瓶头空间气体体积和CH的体积₄生产。气体的量存在于瓶实验开始时设置为0.0023摩尔的计算使用理想气体定律(,在那里是气体的超压的总和瓶子里(150000 Pa)和标准气压苏黎世(96600 Pa),气体的体积= 24×10⁻⁶米³,是瓶子里的气体摩尔,气体的温度= 309.15 K,然后呢理想气体常数K = 8.314 J⁻¹摩尔⁻¹)。CH的数量₄在每个瓶子(生产;在摩尔)计算考虑甲烷生成的化学计量学H₂和有限公司₂,也就是说,5摩尔的气体消耗生产1摩尔的CH₄意义CH₄ 因此。

对于每个国家林业局,至少两个独立的细胞悬液进行了孵化项目与新发展m . ruminantium文化,每个执行至少一式三份。

2.3。实验2和3

细胞收获之前和所述resuspended最终浓度细胞DM 6毫克/毫升的K⁺包含0.025米(NH无缓冲₄)₂HPO₄0.025米,NH₄H₂阿宝₄,0.01 M氯化钠,MgCl 1毫米₂,0.5毫米钛柠檬酸。两个静息细胞悬液实验进行像之前描述的那样在37°C和在实验2中,C₁₂补充最终浓度的10,15和30μ克/毫升,在实验3中,C₁₂C₁₄C₁₆和C₁₈被添加到最终的浓度10μ克/毫升。3 h和24小时后的孵化,300μL细胞悬液被转移到在厌氧室2毫升离心管,离心10000 g×10分钟,和K⁺分析了集中在上层的电感耦合Plasma-Optical发射光谱仪(715 - es径向ICP OES,瓦里安,加拿大)。一个包含1 mg / L KNO股票的解决方案₃(默克公司,达姆施塔特,德国)和HNO 1%₃在蒸馏水被用来准备一个校准曲线与浓度0,25、50、75和100μL / L。样本用稀释剂稀释50倍(1000年麦蓝,Hanmilton Martinsried,德国)总量的5毫升。的存活率m . ruminantium在细胞悬浮液3和24小时后评估使用现场/死BacLight细菌生存工具显微镜和量化分析(Kit L7012;英杰公司GmbH,达姆施塔特,德国)。设备应用包含两种荧光染料:propidium碘与红色荧光穿透细胞受损细胞膜;SYTO 9只在活细胞与绿色荧光积累。因此,undestroyed古细菌与完整的膜有绿色荧光细胞,而细胞损坏膜显示红色荧光。偶尔,一个中间模棱两可的黄颜色一直在观察也一直在观察别人的研究(28]。细胞表现出这种颜色被归类为活细胞受损的膜,但不包括属于活细胞的表。染色根据制造商的协议进行修改。一个数量的0.5μL 1: 1的混合物SYTO 9和碘化propidium染料添加到100μL在有氧条件下的细胞悬液,在黑暗中在室温下混合彻底和孵化了10分钟。没有洗之前需要染色,因为这个实验系统的背景荧光很低,和氧气接触最小化了。数量5μL之间的染色细胞悬液被困一个显微镜幻灯片和一个18毫米平方盖玻片。所有样本检查在600和1000倍放大使用荧光显微镜(BX60;奥林巴斯GmbH,瑞士Voketswil)和数码相机(FView;适配器U-CMAD、奥林巴斯、瑞士)。三个地方在每个样本选择和随机捕获。荧光显微图(曝光时间:50 ms)同一样品的部分被适当的滤波器组申请propidium碘(530 - 545 nm波长:激发,发射> 610海里)和SYTO 9(励磁440 - 470 nm,发射525 - 550 nm)和使用数字图像分析软件分析(软图像系统GmbH,明斯特,德国)。两一个样本的伪色图像部分结合使用相同的软件,和死细胞和活细胞数与Adobe Photoshop CS5(美国圣何塞Adobe)。Postacquisition处理涉及亮度/对比度调整优化可视化图像内的生活和死细胞。可行性是计算的可行性,在那里总荧光计数和吗是绿色荧光计数3 h和24小时后的反应。实验2和3进行了一式三份每治疗组有三个样品,另外,三个样本/死染色和K生活⁺3 h后泄漏的决心。

2.4。统计分析

对于实验1,方差分析进行使用SAS的混合过程(9.1版本2003;SAS研究所Inc .,卡里,NC)治疗组和时间点及其相互作用为固定因素和重复语句比较控制和SFA-supplemented文化在每一个时间点。实验2和3,治疗组被认为是固定的,复制是比较CH随机因素₄抑制率、K⁺渗漏和细胞生存能力在3和24小时。Bonferroni调整是用于多种方法之间的比较。被宣布为统计上的显著差异。结果意味着±标准错误。

3所示。结果

3.1。抑制甲烷的生产Methanobrevibacter ruminantium由饱和脂肪酸根据实验1中剂量

所有美国调查影响CH₄生产m . ruminantium剂量依赖性的方式,但影响的程度不同(图1)。在图1,只有一两个孵化项目执行/ SFA显示(另一种是作为补充图1),但价值观相似孵化项目。对于C₁₂,CH₄产量是剂量依赖性的方式抑制(μ10 g / mL) 30 > = 5控制≥≥1(孵化1;图1(a))=控制(孵化2;补充图1)。对于C₁₄的序列控制> = 5(孵化1;图1和(b))控制(孵化2)。C的抑制模式₁₆不同于C₁₂和C₁₄;C₁₆需要更多的时间来施加自己的影响力:10和30的剂量μg / mL抑制CH₄生产速度24小时完全(孵化1;图1(c))或减半(孵化2)而不是更早的时间点。低浓度没有抑制CH₄生产测量期间。C₁₈没有有效的37°C(图1(d)),但在50°C, C的温度接近熔点₁₈69°C。在50°C, C₁₈降低了CH₄产量剂量依赖性的方式5 h后在10到30 55%和68%μ分别为g / mL(孵化1;图1(e))。在50岁μg / mL, CH₄生产速度更早开始下降,分别下降了63%和99%在5 h和24 h,在80年μg / mL, 52%, 94%, 100%在1 h, 3 h,分别和5 h。

3.2。月桂酸对甲烷产量的影响,K⁺实验2中渗漏和细胞生存能力

在K⁺无缓冲,CH₄抑制C模式₁₂(表1)是类似的实验相比1 K⁺包含缓冲区;的浓度≥10克/毫升下降CH₄生产速度非常快,30岁μg / mL,已经3 h后完全停止它。快速增加细胞外K⁺集中发生在C₁₂治疗组3 h(孵化后(表1)。尤其是在15和30组μg / mL是补充说,细胞外K⁺浓度达到顶峰已经达到3 h,没有随着反应时间的进行。的生存能力m . ruminantium使用动态/死染色细胞验证3 h和24 h后补充的15和30μg C₁₂/毫升表所示1。尽管甲烷生成完全抑制和K⁺泄漏发生在团体补充15和30μg C₁₂/毫升3 h,细胞生存能力仍然是27%和29%,分别,而不是零。在24 h, C₁₂引起细胞死亡。

3.3。饱和脂肪酸对甲烷产量的影响,K⁺在实验3中泄漏,和细胞生存能力

美国都是补充在同一浓度(10μg / mL)在一个孵化允许美国之间的直接比较(表2)。C₁₂和C₁₄对甲烷生成类似的抑制作用。马上开始展示他们的影响力。C₁₆需要更多的时间和其效果弱于前两个美国,而C₁₈在37°C显示没有影响,这与实验1的结果是相一致的。甲烷生成抑制和K的模式⁺射流相似(表2)。C₁₂和C₁₄也有最强的所有美国测试效果触发K⁺泄漏,而C₁₆引起低钾⁺射流相比,C₁₂和C₁₄,但细胞外K⁺浓度高(比控制(表)2)。总之,K⁺流出(递减顺序):C₁₂= C₁₄> C₁₆> C₁₈>控制。有趣的是,C₁₈在CH没有抑制作用₄产量却引起K⁺流出(+ 23%相比,控制在3 h)。C₁₂和C₁₄对细胞的影响最强烈的生存能力,57%和64%的细胞被归类为死后3 h,在C₁₆组只有32%的细胞死亡或作为细胞的一部分,而不是红色的黄色的,损坏的(图2)。在24 h, C处理几乎所有细胞₁₂和C₁₄都死了,而只有60%的死细胞中发现的控制(表吗2和图2)。在C₁₆治疗后88%的细胞死亡24 h,这意味着甲烷生成的抑制和K⁺射流是相关的。C₁₈没有造成大的额外的细胞死亡与对照组相比。

4所示。讨论

FA的抗菌和杀菌性能都进行了广泛的调查,和泛化,细胞膜似乎是主要目标来解释美国对细胞的活性和微生物的影响(15]。然而,研究美国对瘤胃产甲烷菌的纯文化的影响是有限的(12]。虽然,最后,瘤胃甲烷生成的潜在抑制剂必须评估存在的混合微生物群落和提要,阐明对个人的影响,国家林业局产烷生物物种在缺乏进一步的影响因素是非常重要的区分直接和间接SFA影响产甲烷菌和识别机制导致甲烷生成的抑制美国。

4.1。饱和脂肪酸抑制甲烷生成的效率Methanobrevibacter ruminantium

在目前的研究中,最初的影响美国在CH₄生产主要瘤胃产烷生物的细胞悬浮液,m . ruminantium是检查。甲烷生成的抑制细胞悬浮液m . ruminantium越来越明显降低链长(C₁₂= C₁₄> C₁₆> C₁₈)和增加国家林业局浓度(1到80μg / mL悬挂)或国家林业局/细胞DM比率(0.2 - 13所示μg / mg细胞DM)。虽然细胞培养液每次总是适用于传输相同的体积使用微生物几乎相同的生长阶段和细胞悬浮液由遵循同样的协议在每个孵化,孵化项目之间似乎细胞敏感性不同,这也引起了CH的可变性₄对照组(图的生产模式1和补充图1)。在协议研究执行35-38°C和中性pH值在瘤胃的文化和nonruminal产甲烷菌和细菌(12,13,32),在羊在活的有机体内(33),目前的数据还表明,C₁₂和C₁₄美国是最有效。C₁₂也曾最抑制性的代表美国对12革兰氏阳性微生物(32]。在目前的研究中,疏水美国被溶解在DMSO保证分布SFA的亲水性m . ruminantium细胞悬液。然而,尽管用DMSO, SFA溶解度是视觉上观察到减少SFA链长增加。使用C时溶解度尤为薄弱₁₈在37°C,也没有CH₄抑制发生。C₁₈只有抑制在50°C,符合其在该温度下溶解度增加。这支持的假设美国需要至少部分溶解在缓冲或媒介能够施加影响13]。进一步的实验调查如果美国政府(使质子化与分离)起着作用m . ruminantium。降低孵化介质的pH值已经被证明可以提高美国的吸附到细菌以及他们对美国的敏感性(20.,34]。实现所需的SFA浓度减少50% CH₄形成率低得多比在目前研究中需要研究的亨德森(12),0.5 g / L C₁₂和C₁₄是必要的,以减少的增长率吗m . ruminantium相比50%的控制。这可能会导致从代谢的不同状态之间的细胞培养和细胞悬浮液或从不同的生长状态之前SFA补充和收割或两者兼而有之。不过,国家林业局浓度,显著抑制甲烷生成发生在本研究(10 - 80g / mL)在同一个数量级比早些时候报道(30 - 1000g / mL)在产烷生物培养12,13,20.,32]。这表明在细胞培养和细胞悬浮液通常发生相同类型的影响。大概,没有细胞生长发生在由于没有使用的洗细胞悬浊液生长所需的营养m . ruminantium,如醋酸和辅酶M [35),以防K-containing缓冲区,也氮。因此,只有CH₄执行生产,也就是说,能量代谢,这表明美国直接影响CH的过程₄形成。每个剂量反应测试至少重复一次,在孵化项目三个复制允许可靠的结论。尽管甲烷生成的抑制程度不同的国家林业局浓度中没有完全相同的两个孵化项目,排名和抑制的治疗方面的效果是一致的。CH的轻微变化₄形成率和峰值时间以及国家林业局的影响可能是由于轻微的增长阶段孵化项目,当细胞之间的差异在mid-exponential阶段收获。

4.2。适应症的行动模式的饱和脂肪酸

在目前的研究中,发现在K⁺泄漏、损坏膜的指标(21),表明国家林业局暴露后,细胞膜通透性增加。古细菌膜的完整性是维持化学渗透假说的平衡的基础,是至关重要的膜相关细胞的能量代谢5,26]。K⁺泄漏也发生与此同时抑制甲烷生成的似乎是紧随其后的是增加细胞死亡的发生。K⁺射流在m . ruminantium应对不同的美国,不同C₁₂浓度同样CH₄生产速度。因此,C₁₂和C₁₄引发了最大的K⁺流出,所有美国的最强的抑制效果测试,并增加C₁₂浓度越来越抑制甲烷生成和促进了K⁺射流相比,低剂量。生活/死BacLight细菌生存工具包已经证明是一个有用的工具来指示细胞生存能力古生菌(28,29日]。虽然CH₄产量下降为零,证实了沉重的K⁺泄漏,在治疗组与C补充₁₂和C₁₄3 h,并与膜受损细胞的百分比明显不同于其他组,它不是零。细胞死亡似乎不会立即发生,但推迟时间,因为24小时之后,这两组的细胞几乎都死了。

4.3。结论

美国的抑制作用在生产重要的温室气体甲烷m . ruminantium被证明是依赖于国家林业局浓度,SFA类型和孵化温度(37°C和50°C)。本研究首次显示瘤胃产烷生物,m . ruminantium美国的补充也可以破坏细胞膜和触发K⁺流出。美国是如何识别的详细机制不利于产甲烷菌需要进一步的研究。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

作者非常感谢r·肖他的建议和有益的讨论和b图德博土钾分析。本研究支持的中国奖学金委员会。

补充材料

引用

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