管理多重空间的气体泡生源论Halobacterium salinarumNRC-1

文摘

人们越来越清楚的认识到的气泡生物起源的规定Halobacterium salinarumNRC-1是多方面的,似乎集成环境和代谢信号在转录和转录后的水平。机械的细节潜在的这个过程,然而,尚不清楚。在这个手稿,我们量化光散射的贡献由细胞内和释放气体的囊泡隔绝Halobacterium salinarumNRC-1,证明每个表单可以导致增长不同的特性曲线由光密度测量在600 nm (OD_600年)。在研究过程中,我们也证明气体泡积累的敏感性Halobacterium salinarumNRC-1小不同的生长条件和评估工作发表在我们的结果中提出一个假设的角色一般转录因子tbpD柠檬酸循环酶顺乌头酸酶和调节气体泡生源论。

1。介绍

的嗜盐的archaeonHalobacterium salinarumNRC-1调节生产的气泡在应对各种环境因素的变化。而气体囊泡(通过疏水蛋白复合物,隔离气体可能排除水)授予浮力,功能相关性,长久以来都被认为是一种细胞能逃脱缺氧的地下环境更富氧地表水,最近被带进问题[1]。在Halobacterium salinarumNRC-1,气泡蛋白表达从两个基因簇,gvp1和gvp2。每个基因簇的副本在pNRC200找到质粒同时只pNRC100编码gvp1集群(2- - - - - -4]。这两个gvp基因簇编码两种不同操纵子编码gvpACNO和gvpDEFGHIJKLM,分别为(3]。gvp 14个基因的基因簇,只有10 (gvpACODEFGJLM)特征,只有一小部分是所需气体泡表达式(4- - - - - -6]。

数量和环境因素之间的关系影响气体泡生源论透露自己是更复杂的比最初预期。碳源和氧气都可能参与调控生物合成的气体囊泡在转录和转录后的水平。大量的研究表明,低溶解氧含量增长媒体可以触发气体泡生源论(7- - - - - -10]。延长这一假设被用来解释气体泡丰富中观察到的大量增加批文化进入增长的相对缺氧固定相(11,12]。然而,最近的两项研究,使这个简单的功能解释通过展示,精氨酸和柠檬酸也可能导致气泡生物起源的监管Halobacterium salinarum菌株PHH1、PHH4 NRC-1 [1),葡萄糖也可能影响气体泡生源论Haloferax mediterranei(13]。Hechler和具有1)也表明,厌氧条件抑制气泡生源论。最近,考尔等人也表明增加天然气泡积累引起的氧化应激反应H₂O₂和治疗百草枯14)信号,也许其他未知因素也可能导致全球之声表达的规定。除了前面讨论的环境因素影响气体泡生产,奇怪的是要注意,在一些条件下全球之声,通常与锥形圆柱帽,可以有很大区别在大小和形状取决于环境刺激15]。因此,全球之声言论和集会自由的规定是多方面的,可以作为一个有趣的模型系统为研究复杂的环境数据集成到不同的生理和形态表型。

两个观察相关问生产的增长Halobacterium salinarum最初问生源论吸引了我们的注意力。第一个是笔挺的观察和Betlach [11增加的光密度测量在600 nm (OD_600年),发生在固定相的文化Halobacterium salinarumNRC817生长在复杂的媒体在明亮的组织培养瓶。的OD_600年从OD增加_600年~ 1.0 OD_600年~ 10.0从固定相的开始到最后的高原。计数集落形成单位(cfu),然而,表明可行的细胞的数量在这一阶段保持不变。作者认为OD的增加_600年细胞内积累的全球之声援引未发表的数据11]。最近,Facciotti和同事(12OD)注意到类似的增加_600年在固定相的细胞生长在ambiently照亮,复合媒体,摇动烧瓶成长的文化Halobacterium salinarumNRC-1(图1)。在这份报告中,OD_600年增加从2.5 ~ 1.0 ~从固定相的开始到最后的高原,一个较小的OD的增加_600年比报道Betlach和笔挺11]。通过进一步对比Betlach和笔挺11),CFU计数减少flask-grown文化在固定相暗示细胞死亡和可能消散。而在固定相OD年底增加_600年一直在传统上归因于细胞内的积累问[16),观察OD的增加_600年在固定相的生存能力下降更神秘。

提出了几种可能性占OD的增加_600年在后者flask-grown文化,包括光散射从气体囊泡,细胞聚集,增加细菌视紫红质生产,是发生在固定相(12]。两个假设是消除细胞聚集并不是观察,和光学密度读数以700海里(主要bR吸收峰外)没有任何明显的影响在600 nm (12]。因此,作者认为最合理的解释可用的数据是一个释放的气体从溶解细胞囊泡(12]。文化的相衬拍摄的图像在其增长轨迹还显示丰富的积累小的光散射体积累的增长阶段,加强这一假设。

这个假设是,然而,实物证据不足的基础上提出挑战,尽管历史证据强烈的光散射的悬浮液的净化气体囊泡项圈藻flos-aquae(16,17]。核心问题,是否自由气体囊泡,数量预计将公布的赖氨酸Halobacterium salinarumNRC-1细胞,会散射光线充足占总体OD的增加_600年从溶解细胞,尽管减少散射。鉴于最近的兴趣问周围嗜盐古生菌,我们认为这将是值得的正式地址问从溶解释放的假设Halobacterium salinarumNRC-1细胞散射光线足够影响OD_600年测量。

在这项研究中,我们证明自由气体的囊泡,在数字比例可能会释放细胞溶菌作用在后期阶段的增长,散射光线充分考虑到光密度的增加前所述Facciotti和他的同事(12]。我们还证明了内部气体的囊泡在光密度的影响Halobacterium salinarumNRC-1,证实了早些时候的观察Walsby (17]。在这个过程中,我们还注意到,经济增长和全球生产Halobacterium salinarum文化条件的微小变化非常敏感。在一起,我们的观察也让我们重新审视以前公布的结果和提出一个假设的角色一般转录因子TbpD柠檬酸循环酶顺乌头酸酶和调节气体泡生源论。

2。材料和方法

2.1。文化发展

Halobacterium salinarumNRC-1和突变都是生长在复杂的媒体(CM)组成的25%氯化钠,MgSO 2%₄h·7₂O, Oxoid Na-Citrate氯化钾0.2%,0.3%和1%^TM中和胨(费舍尔科学:新罕布什尔州,美国)18]。50毫升文化,生长在125毫升unbaffled烧瓶(美国纽约康宁)37°C,注射midlog preculture最初OD_600年~ 0.001,动摇了在100、150、或225 rpm,根据实验。集落形成单位(CFU)测定使用扩散板技术。两个不同的稀释(和每个时间点镀)一式三份。光密度测量使用埃普多夫光度适应计(德国汉堡)。程序DataThief [19)被用来从笔挺,Betlach提取数据11)进行比较和分析。

2.2。透射电子显微镜(TEM)

h . salinarumNRC-1成长为固定相,。水瓶被允许平衡实验室的长凳上24 h,和活跃的细胞收获(参见图S1在网上补充材料http://dx.doi.org/10.1155/2011/716456)。Formvar-coated铜网格在收获细胞浸泡1分钟,用滤纸和多余的液体被。百分之二醋酸双氧铀,pH值4.0,用于染色细胞。细胞用飞利浦CM120电子显微镜检查(荷兰阿姆斯特丹)上运行的80千伏电压和11000 X放大。图像被使用Gatan MegaScan相机连接到显微镜。天然气泡尺寸计算与ImageJ软件(20.]。

2.3。隔离气体的囊泡

天然气泡收获使用修改后的版本的方法描述Cohen-Bazier et al。21]中描述22]。短暂,草坪NRC-1厘米种植在2%琼脂板在37°C。15毫升1.0毫米MgSO₄有10μL Benzoase (Novagen:达姆施塔特,德国)涌上草坪和孵化为3小时37°C。溶菌产物是三张Kimwipes过滤,滤液氯化钠浓度调整到10% (w / v)。天然气泡洗了覆盖5%的氯化钠溶液和离心机JOUAN CR3离心机转子T40摆了一桶(美国热科学、质量)60 xg过夜。浮动的气泡被收获,再洗3次5%氯化钠。

2.4。计算气泡散射因子(GVSF)

TEM图像有液泡的NRC-1细胞如上所述。问了上面指定的条件下被发现的平均长度为350 nm和平均宽度200海里(参见图S2A),尺寸符合以前的观测(5,23]。确定GVSF,一个典型的气体泡被建模为长方体(350海里长度、宽度200海里和200 nm高度)的表面由立方蛋白质。立方单元尺寸近似使用GvpA的分子量,全球之声的主要结构部件,具体体积部分猪腺苷酸激酶(24),一种蛋白质的外壳可以用一个小近似立方体。自猪腺苷酸激酶比GvpA大,21 kDa和8 kDa,分别GvpA的立方模型的边缘尺寸适当比例。共有43810个蛋白质需要覆盖理论的表面的气泡表明每个气泡的质量=μg。

在600纳米测量光密度连续稀释净化气体的囊泡,溶解在5%氯化钠。连续稀释样本然后用SDS可溶性(最终浓度1.0%)和煮10分钟95°C。可溶性气体囊泡蛋白浓度被发现使用BCA分析工具包(美国热科学、质量)。标准准备使用稀释的牛血清白蛋白在5 - 250的工作范围μ克/毫升。工作试剂准备根据协议提供的工具包。25μL preprepared标准和样品稀释都用移液器吸取成单个井的96清楚平底盘子(康宁:纽约,美国)。二百毫升的工作试剂添加到每个和混合。板被放置在37°C 30分钟然后冷却到室温。吸光度为每个测量在562 nm M200无限板读者(Tecan: Mannedorf,瑞士)。蛋白质浓度/ OD_600年单位确定蛋白质浓度除以OD_600年各自的样本产生一个值为44.1μg / mL / OD。使用单个气泡的质量计算,GVSF然后决定全球之声/毫升每。我们注意到这个特定GVSF高度依赖全球之声形态(球形诉主轴和大小)和组成16,25),适用于问隔绝Halobacterium salinarumNRC-1媒体为固定相细胞生长在厘米。类似的计算需要重复问生长在其他条件显示形态差异的研究。

验证分析蛋白质主要是气体泡蛋白,这可以导致囊泡是2.23毫克的净化气体溶解在2% SDS和煮10分钟之前加载在4 - 12% Tris-glycine凝胶(美国加州表达载体)。凝胶是洗3次5分钟MiliQ 200毫升的水,然后沾20毫升的帝国蛋白质染色(热科学、生病,美国)1 h。凝胶与0.5 M氯化钠在一夜之间使退色。与以前的结果一致(26,27),彩色凝胶显示比预期的更少的蛋白质材料表明气体泡相对单纯。

2.5。测量微量元素对经济增长的影响

无限M200板振动器(瑞士Mannedorf)被用来测试在CM中不同浓度的微量元素是如何影响的增长Halobacterium salinarumNRC-1。细胞被稀释至初始OD_600年厘米~ 0.01的补充与0.25 x 0.5 x 0.75 x 1.0 x 2.0 x等量的标准铁^{2 +}和锰^{2 +}浓度的18μM和1.9μM,分别。二百毫升的稀释剂被装载在复制6 Nunc 96 - 60的井的好清楚光底板(美国热科学)。防止蒸发实验井60,最外层环36井满是200μL空白厘米。96孔板的盖子密封在TempPlate密封膜(美国科学)和透明胶带(美国明尼苏达州3 m)。板被加载到无限M200板振动器设置为震动轨道振幅的2.5毫米在37°C。光密度为每一个测量的波长600 nm每30分钟120小时。OD_600年值被转换为一个路径长度为1厘米的标准化数据用艾本德光度适应计(德国汉堡)。

2.6。隔离和增长的气体泡-(问−)突变体

隔离问-突变体完成根据方法提出了Stoeckenius et al。28]和DasSarma [29日]。简单地说,Halobacterium salinarumNRC-1厘米细胞被镀到2%琼脂板上。一旦长大,紫色半透明的殖民地(参见图开通)选择和recultured厘米。的问−证实了应变检测通过相差显微镜和金属堆焊2%琼脂板(见图开通和S2C)。

3所示。结果

3.1。天然气泡释放细胞溶解细胞可以增加文化占OD_600年

我们首先测试提出的假说Facciotti et al。12],光散射从气体囊泡释放细胞溶解固定相细胞占OD的增加_600年报告在他们的手稿(图1)。我们在两个方面。首先,使用上面GVSF决定,我们计算理论OD的增加_600年从细胞的数量可能会Facciotti et al。12)据报道,在固定相失去了生存能力。减少可行的细胞,认为完全来自细胞裂解,决心通过CFU x点之间的差异在早期固定相(最大CFU,图1晚,x)点到一个点在固定相(最低CFU)(图1,点a)。使用之前发表问每个细胞的计数Halobacterium salinarumNRC-1(~ 80年全球之声/细胞在固定相)(1),我们计算气体的囊泡释放到媒体的预期数量的细胞溶解细胞(细胞溶解细胞)。使用这个以前公布的价值是合适的作为细胞内占领(视为光明折射区使用相差显微镜)和全球之声的平均尺寸(由电子显微镜)细胞非常类似Hechler和普法伊费尔在他们的研究报告1]。GVSF然后用于确定应该被释放,这些气泡单独占一个OD_600年2.87。添加预期的散射(细胞/毫升)unlysed (OD_600年~ 0.6)导致预期的最终OD_600年3.47。这是近1.0 OD_600年报告的单位比是什么Facciotti et al。12]表明释放气体的囊泡,孤独,确实可能占观察增加OD_600年。

最后OD的差异_600年来自上面的计算和数据报告的Facciotti et al。12可以很容易地由两个因素。首先,它可能的细胞溶解细胞总数低于前面假设的。降低CFU并不需要所有的细胞溶解,因此,从发布全球之声散射可能略低于我们计算。第二,很可能问表示每个细胞的数量小于80。而Hechler和Pfeifer [1]报道平均~ 80问细胞,可想而知,文化增加了Facciotti et al。12]包含更少的问每个细胞从细胞开始溶解在固定相的开始问积累了相对较少。事实上,每个细胞减少全球之声的平均数量54可以带来理论OD_600年与实测数据一致。

接下来,我们经验决定是否添加特定数量的纯化细胞培养可以解释全球之声,以可预测的方式,增加OD_600年指出通过Facciotti et al。12]。在这个实验中,净化Halobacterium salinarumNRC-1气体囊泡是野生型定义中添加数据Halobacterium salinarumNRC-1细胞,各自增加OD_600年测定。我们模仿两个点末Facciotti等的固定相。(12)实验,cfu降低了通过一个示例可行mid-log (在一个OD)细胞_600年这是相当于点在曲线(图1,点A和B)。这些样本,净化气体囊泡(resalted 25%氯化钠)被添加在固定金额对应于40岁,80年和120年全球发布的每个细胞。全球之声的总数增加是由问每个细胞释放的数量乘以数量的细胞,细胞溶解的固定相Facciotti et al。12)文化。的OD_600年这些purified-GV /细胞的混合物被测量。对于A和B点,添加一个相当于40问每个细胞(分别为2.45和2.70)最密切的OD复制_600年(2.51和2.48)中观察到Facciotti等人批文化(12)(图2)和相当类似于54问细胞释放的价值计算。再次,每细胞低于40问Hechler和Pfeifer所预测的情况1),最有可能是因为细胞开始出现溶解固定相年初完成问积累尚未发生。

总之,这些数据支持两个假设提出了Facciotti et al。12]。第一,自由全球之声的释放Halobacterium salinarumNRC-1能够显著600纳米的光散射。第二,自由仅问,数量预计将释放溶解细胞Facciotti et al。12),可以解释OD的增加_600年他们的手稿中描述12]。

3.2。细胞内也问增加光散射在600海里

除了要求自由气体泡是否有助于增加OD_600年,我们也试图确认是否胞内气体囊泡Halobacterium salinarum菌株,用我来解释和Betlach [11)与未发表的数据(参考引用的其他人在这种情况下),确实能够解释stationary-phase-associated OD的增加_600年。我们注意到Walsby和同事(7,17)也表明细胞内光散射的问Halobacterium salinarum菌株。量化细胞内全球之声在散射的影响Halobacterium salinarumNRC-1,我们首先孤立和自发增长和稳定的气泡-(全球之声−突变体的Halobacterium salinarum NRC-1。野生型Halobacterium salinarumNRC-1和突变体的气泡-(全球之声−)应变增长中描述的材料和方法。野生型Halobacterium salinarumNRC-1显示stationary-phase-related OD的增加_600年前所述Facciotti等人和笔挺,Betlach11,12)(图3面板)。相比之下,全球之声−应变缺乏固定phase-associated OD的增加_600年以野生型样品(图3面板B)。从野生型和获得最大CFU计数问−文化~每一个。这些数据符合假设气体泡表达占OD的增加_600年观察到的固定相Halobacterium salinarumNRC-1。

第二,我们有液泡的细胞和“弹出”通过离心分离气体的囊泡。在这种情况下,细胞平均初始在埃普多夫5424微型离心机旋转(埃普多夫,汉堡,德国)5000 xg, 5分钟。细胞被温柔的移液,然后resuspended和OD_600年测量平均等于3.48。没有降低cfu确定离心前后指出,确保可行性没有改变。这表明,减少OD_600年可以归因于一个枯竭的气体囊泡,而不是细胞溶菌作用。图4总结了数据。微分干扰细胞离心前后的对比图像表明,离心之前,近95%的细胞是高度有液泡的。postcentrifugation图像表明,全球之声的总体损失是50%。鉴于~ 80问每个细胞,报道(1)为固定相细胞后期,50%的损失由于离心,,没有可行的细胞损失由于离心,我们计算出在离心问“突然”。耦合损失减少OD_600年1.87表明,细胞内的GVSF问,一个值小于免费GVSF问。另外,我们的计算表明,在Halobacterium salinarumNRC-1自由气体泡分散3.1 x比当他们当自由形成空泡细胞内的气体。一个类似的自由和胞内气体的囊泡之间的散射强度差异项圈藻flos-aquae分别报2.44 x [25]。

3.3。敏感的生长曲线资料的文化风潮和几何

测试过程中上述假设,我们做了两个观察似乎与以前公布的数据不一致。首先,Halobacterium salinarumNRC-1细胞生长在条件是为了模仿文化条件Facciotti et al。12]失败导致降低cfu相同,尽管OD复制类似规模的增加_600年在固定相。第二,它是指出,固定phase-associated OD的增加_600年报告的笔挺,Betlach (11]Halobacterium salinarumNRC817远远大于此处的实验或报道的Facciotti et al。12]。我们试图调查这两个问题。

我们假设(OD的主要差异_600年和cfu)我们的研究和发表的上述研究至少可以部分解释为特殊的生长条件的差异。这是特别相关的比较我们的结果的Facciotti et al。12]。比较我们的数据与笔挺,Betlach11带有额外的并发症,这两项研究越来越相似但不同的菌株Halobacterium salinarum。尽管这个关键的区别,它仍然是有趣的探索多少的差异最终OD_600年在每一个研究报道可以占flask-grown改变生长条件Halobacterium salinarumNRC-1。例如,我和Betlach [11)报告说,他们的细胞最早是厄伦美厄烧瓶在种植的350 rpm,随后在进入固定相转移到密封Monogro烧瓶(美国新泽西州惠顿),然后在100 rpm动摇高度照亮或黑暗条件。Facciotti et al。12在厄伦美厄烧瓶)增长他们的文化环境光在英诺华4900 225 rpm孵化器瓶(美国新泽西州新不伦瑞克)。例如,一些简单的处理,比如减少震动速度影响最终OD_600年在flask-grownHalobacterium salinarumNRC-1,最终导致显著高于OD_600年吗?

测试的假设一个震动速度会导致发散增长放缓剖面发现笔挺,Betlach11),OD_600年在固定相增加了~ 9.0个单位,我们增长了野生型Halobacterium salinarumNRC-1细胞在100 rpm模拟搅拌速度,虽然没有文化,固定相的生长条件报告的笔挺,Betlach (11)(图5)。这些增长的条件下,我们也看到一个最大OD_600年~ 8.5的固定相接近OD_600年发现我和Betlach11]。然而,自从我们在低转速增长我们的文化在整个实验(与高速度,直到静止),这种增长曲线仍以两种方式不同的笔挺,Betlach11)报道。第一个区别是,一个简短的停顿或暂时的高原增长持续发生在OD ~ 24小时_600年~ 0.4瓶文化动摇在100 rpm Barnstead / LabLine Max^问Mini 4450(美国热科学、质量)。没有证据表明类似的low-OD_600年高原是指出在任何其他增长实验探讨了手稿。这个过渡期间,文化改变其外观,成为银河系/粉色的过渡,表型的改变,通常是与全球之声相关积累(16]。事实上虽然文化可见外表的变化发生在这过渡,微观分析前后的细胞显示气体泡积累后才发生转变(图6)。

全球之声的积累在这种情况下,然而,似乎之前第二个增长阶段,而不是仅仅增加散射由于全球生产和/或释放。除了短暂的出现高原的生长曲线Halobacterium salinarumNRC-1, CFU计数增加超出了高原的建议导致增长发生在过渡可能是由于生理基质利用率的变化,经典diauxic转变而不是只是问积累的开端。自100年和225年的唯一区别rpm文化(图3面板和图5)是晃动的速度,我们怀疑diauxic过渡可能在媒体上受到氧的消耗。我们注意到,在媒体hyper-saline氧气溶解度极低。胡子等人报道了与深度有关的溶氧浓度在静态4 M氯化钠媒体,只有略氯化钠浓度低于厘米(4.27 M氯化钠)。在氯化钠浓度高,溶解氧在表面的空气(45 ~ 66%μmol / L),但急剧下降到7.3% (~ 5μmol / L)在第(~ 2毫米,最终到3.1%μmol / L)在接下来的34毫米深度7]。在这种情况下,它是合理的假设的耗氧率的文化可能很快超过添加新的气体速度慢摇。

测试假设氧气耗竭速度低震动感应diauxic转变Halobacterium salinarumNRC-1,我们recultured野生型Halobacterium salinarum在100 rpm NRC-1细胞。然而,在这种文化,我们一半的文化转移到一个新布伦瑞克科学G-53瓶(美国新泽西州新不伦瑞克科学)150转75小时后推测diauxic转变(图5,T),假设这将增加溶解氧。这个乐器转移的重大影响是增加曝气。直到文化分离150 h, OD_600年和CFU完全相同的慢速(100 rpm)和快速(150 rpm)动摇了文化。七个小时后三个烧瓶放在150 rpm, CFU的快餐文化(可行的细胞/毫升),而缓慢的文化cfu(可行的细胞/毫升)的差异cfu(可行的细胞/毫升)(图5)。快速过渡到快速增长指出增加了文化与观测一致的施密德等人注意到恢复快速增长,以应对急剧增加的溶解氧(10]。有趣的是,尽管cfu增加过渡点后迅速动摇了文化对缓慢的同行,我们没有观察到显著改变OD_600年快,慢慢动摇文化之间。

这些数据表明,100 rpm动摇文化可以成为在OD氧饥饿_600年接近0.4,增加溶解氧引入过渡到更高的RPM摇晃允许恢复氧依赖性的新陈代谢从基质中仍然存在但否则被消费文化一直在高转速。此外,无法区分的OD值_600年快和慢动摇文化之间建议恢复增长可能减少了每个细胞问积累迅速动摇的样本。

第二个报道差异结果Facciotti et al。12]和我们最初的增长实验细胞似乎溶解并保持不变,分别在固定相更困难直接测试。这里我们假设小媒体或培养的差异可能起到了重要的作用。在我们最初的实验,旨在模拟Facciotti et al。12Barnstead / LabLine]文化都摇动了Mini 4450(美国热科学、质量)225转,而不是英诺华4900。不同的震动平台可能引入一些变化由于震动轨道的差异2和0.75,分别是4900年英诺华和Barnstead / LabLine Max^问Mini 4450。额外的风潮可能4900年英诺华LabLine Max诱导细胞溶菌作用而增长^问Mini 4450没有虽然剧烈摇晃20毫升整除的细胞在50毫升锥形管没有导致降低细胞生存能力。媒体组合,包括元素出现在当地的DI水源可能也导致了我们的实验之间的差异和Facciotti et al。12]。最后,Halobacterium物种已知敏感残留洗涤剂留在玻璃器皿。而洗协议样本收集的Facciotti et al。12]和我们目前的数据都需要用去离子水清洗大量的使用之前,有可能不同的洗涤剂类型或精确数量的清洗也可能导致我们注意的差异。不幸的是,这种特定的神秘仍未得到解决。

3.4。敏感的生长曲线资料的微量元素浓度

考虑到数据提出了这一点,人们很容易高原功能将明显增长,生长曲线的过早或过晚Halobacterium salinarumNRC-1,直接与气体泡生产和在某种程度上与氧的可用性。然而,我们有一段时间了,怀疑的一些小型interexperiment差异我们在定性观察增长高原的外观Halobacterium salinarumNRC-1可能与微量元素铁的浓度有关^{2 +}和锰^{2 +}(未发表的数据),而不是直接影响氧气和天然气泡积累。因此,我们决定正式测试典型的微量元素铁的影响^{2 +}和锰^{2 +}生长曲线的形状。

自媒体配方用于最常见的增长Halobacterium salinarumNRC-1呼吁菲^{2 +}和锰^{2 +}将增加到18岁μM和1.9μM,分别,我们决定测试不同稀释铁的影响^{2 +}和Mn2 +股票的解决方案。0.25 x 0.5 x 0.75 x 1.0 x 2.0 x等量的铁^{2 +}和锰^{2 +}被添加到CM。Halobacterium salinarumNRC-1接种到每个媒体变体和加载到96孔板中描述的材料和方法。我们注意到,氧含量在96 -孔板往往低于well-shaken瓶文化。因此,增长曲线增长在96 -孔板更环保相关的缓慢搅拌flask-grown文化(例如,100 RPM实验前所述)比典型的fast-shaken文化。Halobacterium salinarumNRC-1生长在CM与不添加微量元素表现出短期高原OD在增长_600年~ 0.5的可能是类似于高原报道的数字1和4。增加微量元素浓度降低高原的持续时间,直到它完全不存在2.0 x微量元素浓度的增长曲线。总结了数据图7。尽管这种增长变化概况、铁^{2 +}和锰^{2 +}浓度对最大OD似乎没有影响_600年值的铁的直接影响^{2 +}、锰^{2 +}可能是在全球之声的生产。从板的读者删除后,细胞生长的微量元素浓度显示浮动问+表型,并问丰度没有明显差异可以被相衬显微镜。这些结果,连同之前的数据似乎表明,我们看到增长的高原Halobacterium salinarumNRC-1可能是由于多种因素,包括(Fe^{2 +}),(Mn^{2 +}),和/或(O₂)。

这些数据复杂的简单视图一个简单功能氧浓度之间的联系,发展高原,问生产。而似乎氧、微量元素和代谢状态(如感觉到也许存在与否的关键代谢物)所有整合调节气体泡生产。总结,(a)缓慢摇动实验表明,氧气很可能增长的一个限制因素参与形成的高原Halobacterium salinarumNRC-1;(b)增加氧气(快速摇动)可以减少高原或平移后的增长;(c)和/或铁锰也可以消除高原低氧条件;(d)在高原发生时,它通常是增加问生产,但其缺乏并不排除问生产;(e)精氨酸和柠檬酸既能影响全球生产(1]。剩下的理解是所有这些因素是否(氧气、微量元素和关键代谢物),似乎直接或间接与气泡生物起源的规定是功能协调全球之声表达。更完整的合成一些潜在的监管方案,符合这些观测提出了讨论。

4所示。讨论

在这个手稿,我们开始通过处理相对简单的问题中气泡的能力Halobacterium salinarumNRC-1影响光散射细胞和免费的解决方案。我们已经证明,自由问,数字可以合理预期从溶解细胞批发展文化,可以在600 nm散射光线足够占OD的增加_600年这是前所述发生在固定相Halobacterium salinarum由Facciotti NRC-1 et al。12]。现在这一结论提供了实验支持的解释公司数据报告Facciotti et al。12]。此外,我们还提供直接证据表明细胞内气体囊泡在光散射贡献显著增加600海里,一个事实经常提出但很少发表的证据Halobacterium salinarumNRC-1 [17,25]。我们也重申,仔细的描述和报道的培养条件(包括文化几何和表型)是至关重要的,如果我们要比较不同实验室实验数据中生成气体泡生产Halobacterium salinarumNRC-1。凸显了这个事实,尽管努力模仿增长条件Facciotti et al .,文化生长在我们当前的实验室设置不显示降低cfu指出Facciotti et al。12在固定相)。另外,听不清OD的差异_600年快与慢之间动摇文化(尽管增长明显差异)表明,CFU计数测量尤为重要和有液泡的细胞实验。

更有趣的是,这些实验让我们思考更多关于特定环境因素(其中一些可以调制小文化条件)的变化影响生长表型和全球生产。本文提供的数据,他们得出这样的结论:在氧气中扮演着关键角色的气泡生源论Halobacterium salinarumNRC-1其他因素特别是微量元素和柠檬酸代谢产物和精氨酸(后者结果Hechler和具有1])也起到目前未定义但至关重要的角色。

4.1。TbpD调节气体泡的作用表达式Halobacterium salinarumNRC-1

认为其他因素比氧可能在问生物合成的调控中发挥作用促使我们回顾以前公布的数据,以确定是否我们可以开始综合监管的情况下与氧气在问生物合成的作用一致,观察由Hechler和Pfeifer [1]关于柠檬酸的影响、异柠檬酸和精氨酸在全球之声的厌氧生产和铁的潜在参与^{2 +}和/或锰^{2 +}。至少,我们可以确定一组有限的潜在的“罪魁祸首”,可能与全球之声生物合成的调控?

我们最初吸引到一个有趣的关联气体泡生物起源和短暂的增长高原观察报道Facciotti et al。12)的应变Halobacterium salinarumNRC-1的通用转录因子TbpD持续表达的非本地的水平,tbpD- - - - - -cmyc压力。的tbpD-cmyc应变,即使动摇在225 rpm,比野生型生长更慢,显示了一个类似的,但短,暂时的高原在OD增长_600年~ 0.4,在野生型动摇在100 rpm(数据提出了手稿)。此外,全球之声的积累是严重的衰减tbpD-cmyc相对于野生型菌株。微阵列数据还表明,转录丰度,尤其是pF的基因转录启动子(23,30.),gvpF G H, I, J, K, L,和米(vng5019g-vng5027g)的gvp1也严重下降tbpD-cmyc相对于野生型菌株。Facciotti et al。12)也报告问转录丰度的变化tbpD淘汰赛。在这里,记录由pA和pD推动者,gvpD, E, A, C, N,和O (vng5028g-vng5034g)展示大量降低控制应变水平,同时为pF基因调控的启动子转录丰度,gvpF G H, I, J, K, L,和M (vng5019g-vng5027g),增加了。科克et al。31日)也报告的表达减少gvpD, E, A, C, N,和O (vng5028g-vng5034g)在tbpD基因敲除菌株。我们注意到,之前的研究也显示微分监管pF和pD的推动者。北方的污点分析gvp1基因簇中Halobacterium salinarumsp。PHH1 pF的表明,基因转录启动子(gvpFGHIJKLM在指数期)优先转录,而从pD启动子转录(gvpDE在固定相(优先)转录32]。这些数据显示,一个强大的监管之间的联系一般转录因子TbpD和全球之声的表达gvp1基因簇。

数据从Facciotti et al。12]tbpD微扰菌株没有明显的变化gvp2(vng6229g-vng6246g)转录丰度和控制压力,而科克等人提出了一些数据的扰动gvp2基因的tbpD基因敲除菌株(31日]。Teufel et al。33)也表明c-vac表达式(gvp2)基因簇是平静的Halobacterium salinarum缺乏应变PHH4(压力真沸点A B C、D和F)。

slown增长和早期diauxic转变的tbpD-cmyc应变,模仿diauxic转变出现在可能缺氧野生型细胞生长在这个研究进一步表明,100 rpmtbpD表达也可能与氧含量有关。因此我们寻找证据的扰动在氧含量和之间的联系tbpD表情,尤其是证据表明tbpD表达可能与“低”氧条件。施密德等人收集的微阵列数据显示tbpD转录丰度增加氧气成为限制条件下,其丰度可以相应地减少了将细胞从“高”“低”氧气浓度(10]。微阵列数据还显示tbpD转录丰度增加的固定相(12)当氧气可用性被认为是有限的。数据从Kaur et al。14)进一步表明,过氧化氢压力也导致增加tbpD和天然气泡转录丰度相对于如果控制样本。Kaur等人提出的手稿,损害水平活性氧(ROS)触发细胞代谢状态下采用类似采用氧气耗尽环境代谢生成的活性氧引起的任何额外的伤害降到最低。鉴于这种解释,增加tbpD转录丰度与氧依赖性的表达式将协议指出先前在Facciotti et al。12),在数据提出的施密德et al。10]。在一起这些观察结果表明功能TbpD之间的联系,全球之声的氧浓度,调节。

4.2。顺乌头酸酶的作用在调节气体泡表达Halobacterium salinarumNRC-1

我们下一个集成多个手稿观察表明,柠檬酸循环酶顺乌头酸酶,它催化可逆异构化异柠檬酸和柠檬酸之间和在一些生物体作为核酸结合蛋白(34- - - - - -38),也可能扮演重要的角色在气体囊泡的积累。首先,Facciotti et al。12)指出,顺乌头酸酶和气体泡基因的转录丰度很低tbpD-cmyc应变控制菌株相比,他们的水平。他们还指出,控制压力,顺乌头酸酶tbpD转录丰度是anticorrelated细胞转变(即通过地区增长曲线。滞后,指数增长和固定相)。进入缺氧细胞表达上调固定相的表达顺乌头酸酶并与此同时增加的表达tbpD。此外,数据从施密德et al。10进一步支持观察,氧浓度的波动会导致反关联顺乌头酸酶的转录表达tbpD。综上所述,数据之间的链接tbpD表达和问生产,指出在前款规定的,一致的anti-correlation之间tbpD顺乌头酸酶控制文化,扰动顺乌头酸酶和全球之声的表情tbpD-cmyc应变都还顺乌头酸酶与生产在全球之声Halobacterium salinarumNRC-1。

有趣的是,全球之声的扰动表型之间的联系,TbpD,现在顺乌头酸酶带我们回到了观察Hechler和具有1)指出,全球之声积累在厌氧增长也依赖于存在异柠檬酸或柠檬酸,各自顺乌头酸酶的底物和产品。这对顺乌头酸酶也可以初步功能推理解释上下文中的其他数据。例如,考尔et al。14已经观察H中气泡的丧失₂O₂全身的压力peroxidase-knockout突变没有伴随问转录丰度的变化。活性氧物种的增加peroxidase-knockout突变很可能采取行动调整问转录后的丰度。这些额外的观察和著名的ROS顺乌头酸酶的敏感性,其已知的敏感性在细胞内氧化还原状态(39),其作用被称为mRNA-binding监管蛋白在其他物种35- - - - - -37)还提供额外的信任的假设顺乌头酸酶可能参与全球之声生物起源的规定,也许作为一个rna结合蛋白的能力。

我们也提出了假设,微量元素(铁之间的联系^{2 +}和锰^{2 +})和天然气泡生产中提到的结果也可能代表顺乌头酸酶功能的链接。顺乌头酸酶的三羧酸循环功能已知需要协调铁到酶的活性部位。然而,在其他生物,顺乌头酸酶也被证明其功能之间切换柠檬酸循环催化剂和铁和oxygen-sensitive核酸结合蛋白(35- - - - - -37,40]。铁和富氧条件有利于柠檬酸循环函数转换成一种核酸结合时喜欢在铁和氧气耗尽的条件。使用程序陛下[41),我们发现了一个假定的铁响应要素(愤怒)——发夹结构受顺乌头酸酶作用的RNA chaperone-just下游gvpK2。

许多个别的证据指向顺乌头酸酶作为潜在的另一个重要球员在问生物起源的规定,也许作为一个积分器的代谢和环境信号,积极参与监管通过氧、代谢物、iron-dependent rna结合。虽然这个假设是合理的考虑到越来越多的间接证据在问生源论顺乌头酸酶的作用,确认清楚地等待进一步的实验和分析。

4.3。顺乌头酸酶和TbpD活动整合到一个模型为全球之声的监管

顺乌头酸酶的作用和TbpD融入模型问生物起源的规定仍具有挑战性的可用数据。然而,我们提出一个假设,与上面讨论的数据一致,能刺激未来实验的设计,最终完善我们对全球之声生物起源的理解。首先,与顺乌头酸酶在其他生物一样,我们认为顺乌头酸酶Halobacterium salinarumNRC-1可以作为一个RNA监护人转录后的调控问生源论通过愤怒或不满的绑定元素。而顺乌头酸酶的具体目标是未知的,RNA的绑定是假设,以促进翻译的目标,甚至问成绩单。在其他系统中,开关顺乌头酸酶活动Halobacterium salinarum柠檬酸循环酶之间NRC-1, rna结合蛋白也可能是由环境因素如铁和氧气的rna结合功能支持在低氧浓度,高活性氧物种浓度和/或铁限制。如果Halobacterium salinarumNRC-1顺乌头酸酶也有类似的对环境因素的敏感性,它将推动在低氧条件下核糖核酸绑定。在这种情况下,它可以作为女伴问成绩单翻译,符合假设microaerobic或厌氧条件似乎驱动问生物合成和调制转录后的这个过程的一部分。如果顺乌头酸酶是这样一个角色和表达,稳定,或活动的顺乌头酸酶还可以进一步调制的柠檬酸或异柠檬酸,这也可以帮助解释Hechler和具有的观察1]。

TbpD角色的一个简单的假设,与当前数据一致,建议TbpD行为是通过蛋白质相互作用调节的活动还没有明确的转录监管机构。Teufel和Pfeifer最近在体外数据显示,TbpD可以身体与活化剂GvpE [42]。这是作为证据表明TbpD可能启动子启动转录与GvpE互动的另一种解释是建议TbpD与另一种竞争,激活真沸点GvpE绑定从而调制有效GvpE活动。TbpD另一个潜在的目标也可能是一个或多个潜在的激活真沸点Halobacterium salinarumNRC-1。Facciotti等人提出了co-IP数据显示,TbpD可能是高度互动与替代真沸点滥交Halobacterium salinarumNRC-1、互动与通用转录因子TbpA TbpB, TbpE, TbpF, TfbC [43]。真沸点与真核真沸点(二聚体的形成已经证明44- - - - - -46),被认为是一种机制来调节池中可用的真沸点。前两个方案的结合也可以调节的活动GvpE TbpD与异性相互作用或通过一个机制为替代激活真沸点。当然,其他监管机构也可能TbpD活动的目标。

这种类型的功能活动很容易解释的观测TbpD外来表达和基因敲除前面提到的扰动实验。过度的TbpD顺乌头酸酶和全球之声的差别导致严重的对这些记录。这可能是通过功能衰减的转录监管机构通过物理交互。同样,明显pF启动子的下游基因的过度表达,gvpF G H, I, J, K, L和M (vng5019g-vng5027g),可以解释为缺乏调节活动TbpD-knockout监管目标的压力。验证这种类型的活动TbpD也有助于更清楚地了解这一功能角色的多重性真沸点蛋白质的古生菌。

5。结论

尽管环境和监管的输入控制问生源论尚未完全阐明,什么是显然是新兴的过程是高度敏感的小环境扰动可能引入的实验者,和在自然环境中,环境。问生物合成显然是多维的规定,涉及环境因素如溶解氧浓度,具体营养物可用性(即。异柠檬酸,柠檬酸精氨酸),特定的转录监管机构(GvpE,GvpD,TbpD,也许几个tfIIB同系物)甚至双重职能的活动柠檬酸循环顺乌头酸酶酶/ rna结合蛋白。虽然所有的监管的特定角色的影响,直接或间接,都不清楚,集群可能的候选人是逐步成为更好的定义。这表明报告详细描述实验设置有关问生源论解释数据是至关重要的,和一些营养可用性和氧浓度的测量应明确测量或将来严格控制实验。我们认为,由于全球之声的多维性质生物起源及其监管,这个系统可能提供一个良好的实验系统,研究生物环境和遗传信号集成原理,发生复杂的细胞内转录和转录后的组装结构。

承认

这项工作是通过启动资金资助的MTF。

引用

1. t . Hechler和f . Pfeifer乏氧生活在嗜盐古生菌抑制气泡形成,”分子微生物学,卷71,不。1,第145 - 132页,2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. c . Englert k·克鲁格,s . Offner和f . Pfeifer”三个不同但相关的基因簇编码嗜盐古生菌中气泡,”分子生物学杂志,卷227,不。2、586 - 592年,1992页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. w . v . Ng, s p·肯尼迪,g . g . Mahairas et al .,“基因组序列Halobacterium物种NRC-1。”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷97,不。22日,第12181 - 12176页,2000年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. j·l . j .楚m . c . Chen Setter et al .,“新结构蛋白质Halobacterium salinarum天然气泡比较蛋白质组学分析显示,“蛋白质组研究期刊》的研究,10卷,不。3、1170 - 1178年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. s . DasSarma p . Arora f .林·e·莫利纳里和l . r . s .阴”,野生型气体囊泡的形成至少需要十gvp基因的基因群Halobacterium halobium质粒pNRC100。”细菌学期刊,卷176,不。24日,第7652 - 7646页,1994年。视图:谷歌学术搜索
6. s Offner a Hofacker、g . Wanner)和f具有“八14骗取基因是足够的嗜盐古生菌中气泡的形成,“细菌学期刊,卷182,不。15日,第4336 - 4328页,2000年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. s . j .胡子、p·k·海耶斯和a . e . Walsby“增长之间的竞争Halobacterium salinarium应变PHH1气体泡合成突变体影响,”微生物学,卷143,不。2、467 - 473年,1997页。视图:谷歌学术搜索
8. c·f·杨和美国DasSarma转录诱导archaebacterium紫膜和气体泡合成Halobacterium halobium被一个DNA促旋酶抑制剂”,细菌学期刊,卷172,不。7,4118 - 4121年,1990页。视图:谷歌学术搜索
9. j·a·穆勒和美国DasSarma archaeon基因组分析无氧呼吸Halobacterium sp。应变NRC-1:二甲亚砜和三甲胺N-oxide当终端的电子受体,”细菌学期刊,卷187,不。5,1659 - 1667年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. a·k·施密德d·j·赖斯Kaur a . et al .,”微生物细胞的解剖状态转换,以应对氧气,”基因组研究,17卷,不。10日,1399 - 1413年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. r·f·尚德和m . c . Betlach”bop基因簇的表达Halobacterium halobium由低氧张力和受光诱导,“细菌学期刊,卷173,不。15日,第4699 - 4692页,1991年。视图:谷歌学术搜索
12. m . t . Facciotti w·l·庞f . y . Lo et al .,“大规模生理期间调整增长使快速、全面和廉价的系统分析,“BMC系统生物学第64条,卷。4日,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. t . Hechler m·弗雷希,“具有葡萄糖抑制气体囊泡的形成Haloferax volcanii转化株。”环境微生物学,10卷,不。1、20 - 30,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. a·考尔·t·范·c·r·布希et al .,“前线防御机制的协调下严重的氧化应激,”分子系统生物学》第六卷,第393条,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. s . Offner Ziese, g·华纳、d . Typke和f具有“halobacterial气体囊泡的结构特点,微生物学第5部分,卷。144年,第1342 - 1331页,1998年。视图:谷歌学术搜索
16. a . e . Walsby“气泡”,微生物学检查,卷。58岁的没有。1,第144 - 94页,1994。视图:谷歌学术搜索
17. a . e . Walsby“气体液泡的压力关系,”英国伦敦皇家学会学报》上。系列B,生物科学卷,178年,第326 - 301页,1971年。视图:谷歌学术搜索
18. d . Oesterhelt和w . Stoeckenius隔离的细胞膜Halobacterium halobium及其膜分离成红色和紫色。”方法酶学没有,卷。31日。C, 667 - 678年,1974页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. b . Tummers三世,”DataThief三世。共享软件DataThief三世,”2009年,http://datathief.org/。视图:谷歌学术搜索
20. m·d·艾布拉姆、p . j . Magalhaes和s . j . Ram”与imageJ图像处理”,Biophotonics国际,11卷,不。7日,第36 -,2004页。视图:谷歌学术搜索
21. g . Cohen-Bazire r . Kunisawa, n .芬尼”结构的比较研究气体液泡,”细菌学期刊,卷100,不。2、1049 - 1061年,1969页。视图:谷歌学术搜索
22. f·t·罗伯嗜盐菌,冷泉港实验室出版社,纽约,纽约,美国,1995年。
23. f . Pfeifer d·格雷戈尔a . Hofacker p . Ploßer p·齐默尔曼,“嗜盐古生菌气体囊泡形成的监管”,分子微生物学和生物技术杂志》上,4卷,不。3、175 - 181年,2002页。视图:谷歌学术搜索
24. t·e·克莱顿蛋白质:结构和分子性质w·h·弗里曼,纽约,纽约,美国,1993年。
25. a . e . Walsby和r·e·阿姆斯特朗”气体泡壁的平均厚度项圈藻flos-aquae”,分子生物学杂志,卷129,不。2、279 - 285年,1979页。视图:谷歌学术搜索
26. r·d·西蒙“丙烯酰胺凝胶电泳的疏水蛋白质:气体泡蛋白”电泳1卷,第176 - 172页,1980年。视图:谷歌学术搜索
27. b . Surek b·皮莱rd, k . Beyreuther和w . Goebel“证据有两个不同的气泡蛋白和基因Halobacterium halobium”,细菌学期刊,卷170,不。4、1746 - 1751年,1988页。视图:谷歌学术搜索
28. w . Stoeckenius和w·h·Kunau“进一步表征颗粒细胞溶解细胞信封的分数Halobacterium halobium和隔离气体液泡膜。”细胞生物学杂志,38卷,不。2、337 - 357年,1968页。视图:谷歌学术搜索
29. s Dassarma j·t·哈j·g·琼斯,j·w·多诺万,p . j . Giannasca和n . t . de Marsac高频plasmid-encoded气体泡的突变基因Halobacterium halobium”,《美国国家科学院院刊》上卷,85年,第6865 - 6861页,1988年。视图:谷歌学术搜索
30. a . Hofacker施密茨k . m ., a . Cichonczyk s Sartorious-Neef和f . Pfeifer GvpE - GvpD-mediated转录监管中气泡的p-gvp基因编码Halobacterium salinarum”,微生物学,卷150,不。6,1829 - 1838年,2004页。视图:谷歌学术搜索
31. j·a·科克和美国DasSarma基因和转录因子基因的转录组分析模型中的嗜盐的Archaeon:协调行动TbpD TfbA,”BMC遗传学第61条,卷。8日,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. Offner和f具有“互补研究气体vesicle-encoding p-vac地区Halobacterium salinariumPHH1 p-gvpDE基因,揭示监管角色”分子微生物学,16卷,不。1,9-19,1995页。视图:谷歌学术搜索
33. k . Teufel a . Bleiholder t . Griesbach和f具有多个真沸点的基因在不同的变化Halobacterium salinarum菌株及其表达式在增长。”档案的微生物学,卷190,不。3、309 - 318年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. p h . Viollier k·t·阮w·米纳斯m . Folcher g . e .戴尔和c·j·汤普森,“顺乌头酸酶的角色成长、代谢和形态分化链霉菌属coelicolor”,细菌学期刊,卷183,不。10日,3193 - 3203年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. Banerjee, a . k . Nandyala p . Raviprasad n .艾哈迈德和s·e·哈斯南Iron-dependent rna结合的活动结核分枝杆菌顺乌头酸酶。”细菌学期刊,卷189,不。11日,第4052 - 4046页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. y . Tang和j . r .客人,“mRNA绑定和转录后调控的直接证据大肠杆菌顺乌头酸酶。”微生物学第11部分,卷。145年,第3079 - 3069页,1999年。视图:谷歌学术搜索
37. c·阿伦和a . l . Sonenshein枯草芽孢杆菌顺乌头酸酶是一种rna结合蛋白,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷96,不。18日,第10417 - 10412页,1999年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. g . s . Shadel”,线粒体DNA顺乌头酸酶“包裹”起来,“生化科学趋势,30卷,不。6,294 - 296年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. a . l . Bulteau m . Ikeda-Saito, l . i Szweda”Redox-dependent调制完整线粒体顺乌头酸酶活动的。”生物化学,42卷,不。50岁,14846 - 14855年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. d . j .海尔·t·a·鲁阿尔c . k . Tang j .下巴,j·b·哈福德和r·d·Klausner“互惠rna结合的控制和顺乌头酸酶活动的监管iron-responsive元素结合蛋白:iron-sulfur集群的作用,“美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷89,不。16,7536 - 7540年,1992页。视图:谷歌学术搜索
41. m . Campillos i情况下,m . w . Hentze m·桑切斯,“雄:寻找iron-responsive元素。”核酸的研究,38卷,不。2,W360-W367, 2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. k Teufel和f具有转录激活GvpE TATA-box-binding蛋白质的相互作用Halobacterium salinarum”,档案的微生物学,卷192,不。2、143 - 149年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. m·t·Facciotti d·j·赖斯·m·潘et al .,“指定全球通用转录因子基因调控在古生菌,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷104,不。11日,第4635 - 4630页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. k·m·坎贝尔,r·t·Ranallo l . a . Stargell和k . j . Lumb”重新评估tata结合的转录调控蛋白寡聚化:单体的优势,”生物化学,39卷,不。10日,2633 - 2638年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. c . Chitikila k . l . Huisinga j·d·欧文公元Basehoar,和b·f·普,“真沸点抑制剂在全球转录控制的相互作用”,分子细胞,10卷,不。4、871 - 882年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. h·寇和b·f·普”工程dimer-stabilizing突变tata结合蛋白质,”生物化学杂志,卷279,不。20日,第20973 - 20966页,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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