文摘

一种高效的染色体DNA克隆成集成的方法甲烷八叠球菌属。开发利用特有的复合系统的链霉菌属噬菌体φC31。宿主菌株表达φC31整合酶基因和携带一个适当的复合网站non-replicating可以改变的质粒携带补充复合网站效率类似于同自我复制的向量。我们还构建了一系列混合启动子结合高度表达m·巴氏细菌PmcrB启动子与结合位点tetracycline-responsive、细菌TetR蛋白质。这些启动子是严格监管的存在与否四环素表达的菌株tetR基因。混合基因启动子可用于遗传实验测试重要性通过将一个基因的兴趣在他们的控制之下。因此,生长的菌株tetR调节基因变得tetracycline-dependent至关重要。一系列的质粒载体,利用特有的复合系统来构建报告基因融合和四环素调控表达克隆基因的报道。这些向量是用来测试翻译的效率在不同的启动密码子。融合使用ATG开始网站是最活跃的,而那些用GTG和TTG大约1/2或1/4活跃,分别。CTG融合比ATG融合活动减少了95%。