文摘

Stenochlaena palustris(Burm.f)。Bedd。(Blechnaceae)或Kelakai是传统的药用植物中发现印尼婆罗洲和苏门答腊岛。它已经被用来治疗伤口愈合,感染,和糖尿病。本研究调查了自由基清除活性,antiplasmodial活动,毒性,对病原菌的抗菌活性。该物种的地上部分与甲醇提取,紧随其后的是一个液液萃取(n己烷、二氯甲烷和乙酸乙酯)。提取物的自由基清除活性测定采用DPPH自由基。使用两个antiplasmodial和毒性进行了分析恶性疟原虫菌株(3 d7和W2)和盐水虾杀伤力测试。此外,抗菌活性测定采用扩散法。结果表明,乙酸乙酯中潜在的活动分析。乙酸乙酯显示潜在的自由基清除活性与IC50值为51.63±0.46μ克/毫升(DPPH)和60.03±0.65μ克/毫升(不)。antiplasmodial活动表明,乙酸乙酯提取物中有潜在的活动集成电路50值为11.06±0.45μ克/毫升。然而,所有的提取证明无毒的方向卤虫盐沼与信用证50> 1000μ克/毫升。此外,演示的乙酸乙酯中间易感性b的仙人掌写明ATCC 10876,诉parahaemolyticus写明ATCC 17802,l . monocytogenes写明ATCC 7644,美国沙门氏菌感染写明ATCC 14028浓度的500μ克/盘。根据这些发现,乙酸乙酯提取的美国palustris(Burm.f)。Bedd是一种很有前途的来源的天然抗氧化剂和antiplasmodial代理。

1。介绍

近年来人们对传统医学的兴趣的增加由于多种模式的行动,这对人类的负面影响相对较少。对于有药用价值的植物富含次生代谢物,用于各种各样的治疗方法。因此,考虑到高水平的生物多样性存在于印尼,当务之急是潜在的植物,包括蕨类植物,研究[1]。几组进行了药理研究蕨类植物和相关报告他们的治疗效果,科学的好奇心,需要新的药物。蕨类植物物质的药理和ethnopharmacological研究显示不同的药理作用,包括细胞毒性、王亚南活动,抗炎活性和抗菌性。由于这些活动需要新的药物,蕨类植物及其次生代谢产物可能有很大的药用价值2]。

蕨类植物属于家庭Blechnaceae,Stenochlaena palustris(蛇)。Bedd。可以找到高树木或拖曳在地上。它是许多热带地区,包括南部和北部的印度、马来西亚、波利尼西亚和澳大利亚(3]。这个特殊物种属于家庭Blechnaceae,其中包含七个物种,包括一个在廖内省的流行,美国riauensis(4]。在马来西亚、泰国、菲律宾和印尼,红色的野外捕获的年轻的叶子和食用蔬菜(5]。

这个物种在一些国家被用于传统医学治疗各种各样的疾病。人在印度的西高止山脉,例如,使用这个物种的叶子来治疗发烧、喉咙痛、和胃溃疡。而叶子和根状茎被用作冷却剂治疗烧伤和溃疡(6]。在马来西亚,植物生吃或煮开水治疗腹泻,在苏门答腊岛,印度尼西亚,它是作为一种温和的泻药7]。此外,粘贴应用于溃疡,伤口,在苏门答腊岛和皮肤细菌感染,印度尼西亚、马来西亚、婆罗洲岛和印尼。人们在巴布亚新几内亚的中部地区使用嫩的叶子美国palustris(Burm.f)。Bedd。作为避孕和植物的汁可以帮助治疗发烧的5,8]。

虽然这个物种是食用和药用价值,一些药理学和植物化学研究已经出版。根据茶et al .,原油水提取物美国palustris(Burm.f)。Bedd。有更高的抗氧化活性和多酚、类黄酮和hydroxycinnamic酸内容(7,9]。茶和他的同事们还透露,水从物种作为一种有效的提取α葡糖苷酶抑制剂相比,槲皮素作为一种控制(10]。此外,美国palustris(Burm.f)。Bedd。叶提取物抑制食源性病原体黑曲霉(11]。此外,这个物种的methanolic提取显示对乙酰胆碱酯酶和胆碱酯酶的抑制活性butyrylcholinesterase IC50121和19.8μg / mL,分别12]。有一个缺少的植物化学信息美国palustris(Burm.f)。Bedd。stenopaluside,脑苷脂、叶黄素和β-sitosterol-3-O -β-D-glucopyranoside被孤立的离开美国palustris(Burm.f)。Bedd [13]。此外,stenopalustrosides a e和山柰酚葡萄糖苷是孤立的物种的叶子,和stenopalustrosides模拟显示显著的抗菌活性对革兰氏阳性菌株(3]。此外,山柰酚3 -(3“执着p-coumaroyl) - (-O-E-feruloyl 6”)β-D-glucopyranoside和山柰酚3 - (3“6”di-O-E-p-coumaroyl) -β-D-glucopyranoside孤立的物种显示细胞毒性特性对乳房(MCF-7和mda - mb - 231)和前列腺癌症细胞系(du - 145) [14]。

在这项研究中,我们报告的详细信息的提取美国palustris(Burm.f)。Bedd。产生更少的极地subextracts以及自由基清除评估。在一项研究的发现Arullappan et al .,乙酸乙酯提取的叶子美国palustris(Burm.f)。Bedd。表现出与IC DPPH自由基抑制剂活性50值为650μ克/毫升(5]。即使DPPH方法通常用于抗氧化活性,结果并不是标准化的直接比较抗氧化力量在两个不同的植物提取物和纯化合物是困难的。因此,在这项研究中,我们报告的抗氧化活性指数基于谢勒的方法和戈(2009)(15]。这种分析可以让我们比较提取物的抗氧化能力的积极的控制。此外,这是第一次,彻底清除活动使用一氧化氮自由基和炎症相关报道从这个物种的提取。小说antiplasmodium和抗菌活性物种的首次提取。此外,之前是否会产生这个物种进行了讨论与足底药理相关索赔。

2。材料和方法

2.1。植物材料

新鲜的叶片美国palustris(Burm.f)。Bedd。聚集在科技园意大利廖内省(0.46587747854712624和101.38066586137639)。磨削过程开始前,该物种被风干,证实是完全干燥,其体重保持不变。土壤样本被放置在一个密封的容器和存储2和7°C之间,直到进一步的分析。植物学家(博士打破传统Sofianty)沉积凭证标本(37号/ UN19.5.1.1.3/2019)生物学系在廖内省。

2.2。提取

浸渍在甲醇的2公斤的样品1×24小时重复了三次,直到浸渍结果不再深绿色。提取在浸渍过程中,过滤,滤液收集。然后浸渍集中使用40°C旋转蒸发器,产生粗提取液。粗甲醇提取分区使用液液萃取方法。获取n己烷提取物、甲醇提取分区与水在9:1甲醇:水比之前分区n己烷1:4比例。甲醇-水提取物被淡化到40% (v / v)和分区与二氯甲烷溶剂1:4生产二氯甲烷提取比例。甲醇-水提取被蒸发后形成水提取物,当时分区1:3比率产生乙酸乙酯提取物的乙酸乙酯。剩下的水提取物是蒸发生产成品,这是水提取物(16]。

2.3。抗氧化活动
2.3.1。DPPH自由基清除活性

一个使用DPPH方法进行抗氧化活性分析(1,1-diphenyl-2 picryl hydrazyl)。(1,17,18各种提取最终浓度为1000)μg / mL稀释使用两倍稀释法(1000 - 31.25μg / mL)在96孔聚苯乙烯微型板块。五十μL的样本是80年混合μL 80年μg / mL DPPH,混合物在黑暗中孕育了30分钟。吸光度测量使用贝特标在520海里。作为一个积极的控制,抗坏血酸受到相同的方法。试验进行了一式三份,数据报告为平均值±标准偏差。

%抑制值是由下列公式计算:

集成电路50分析了使用GraphPad棱镜9软件,一个0的吸光度是没有样品和DPPH激进的解决方案一个年代样品的吸光度与DPPH激进的解决方案。试验进行了一式三份,数据报告为平均值±标准偏差。

抗氧化活性指数(AAI)计算如下:

2.3.2。一氧化氮清除活动

一氧化氮(NO)清除活动各种提取物是由Oskoueian et al。19]。以96 -平底的盘子,六十毫升的样品被稀释的双重结合60毫升水中硝普酸钠溶解在磷酸盐的浓度(PBS) 10毫摩尔每升。这种混合物在室温下培养了150分钟,而曝光。最后,同等体积的格里斯试剂添加到每个测量没有内容。抗坏血酸作为一个积极的控制在这个实验中。没有清除活动是根据公式计算: ,在哪里A0的吸光度和控制反应吗A1样品的吸光度存在。试验进行了一式三份,数据报告为平均值±标准偏差。集成电路50分析了使用GraphPad棱镜8软件。

2.4。在体外Antiplasmodial化验

在这个分析中,chloroquine-sensitive (3 d7)和仍然(W2)株恶性疟原虫被利用。总共1毫克的样例于100年解散μl (DMSO(股票的解决方案,10000μ克/毫升浓度)和连续稀释是由股票的解决方案。这个测试中使用的寄生虫是同步(环阶段)寄生虫与寄生虫血症不到百分之一。然后,198年μl寄生虫的添加(测试材料的最终浓度是100μ10 g / ml,μg / ml, 1μ0.1 g / ml,μ0.01 g / ml,μg / ml)。板会放置在室,气体混合(O25%,有限公司25%,N290%)。花了48小时孵化室包含板在37°C。文化是收获,20% Giemsa-stained血液层形成。在显微镜下,受感染的红细胞的数量每1000人健康的红细胞进行血液测试确定。DMSO作为消极的控制和青蒿素作为一种积极的控制(标准药物),以避免错误的结果。然后,和抑制增长的百分比取决于分析数据。根据抑制百分比结果,统计分析使用Minitab®probit分析19进行了确定IC50值或浓度的测试材料,可以抑制寄生虫的增长50%。试验进行了一式三份,数据报告为平均值±标准偏差。

2.5。毒性试验

盐水虾杀伤力测试是用来确定毒性水平的提取物(BSLT)展出。准备十瓶之后,每个包含2毫升的海水,进行为目的的测试方法,进行双重稀释产生几种不同的浓度。在应用一个整除(0.1毫升),其中包含大约十无节幼虫每个瓶,设置被允许持续24小时。24小时后,每个瓶子的内容被检查,和死去的幼虫被统计。作为一种消极的控制、二甲亚砜或DMSO,被利用。试验进行了一式三份,数据报告为平均值±标准偏差。通过绘制中死亡率百分比浓度的日志,我们可以确定浓度(LC50),导致百分之五十的人口死亡的直接结果被暴露在提取。

2.6。抗菌活性
2.6.1。微生物菌株

七个微生物,即蜡样芽胞杆菌(写明ATCC 10876),枯草芽孢杆菌(写明ATCC 19659),大肠杆菌(写明ATCC 8739),单核细胞增多性李斯特氏菌(写明ATCC 7644),金黄色葡萄球菌(写明ATCC 6538),鼠伤寒沙门氏菌(写明ATCC 142028)弧菌parahaemolyticus(写明ATCC 17802)被用于这项研究。微生物隔离的琼脂斜面保持在4°C的实验室生物化学、化学、意大利廖内省。在任何抗菌测试之前,24小时的菌株是亚文化新的琼脂板。

2.6.2。抗菌活性

随后,100μL含有致病细菌的营养肉汤在营养琼脂接种。提取物的抗菌活性筛选对这些病原菌利用agar-disc扩散法细胞悬液约1.5×106 CFU /毫升从麦克法兰获得浊度标准没有0.5。6毫米无菌滤纸片立即被放置到接种媒体,并且每个盘满了20μL提取最终浓度为500μ氯霉素(30 g / cdμg /盘)是一个积极的控制、孵化一夜之间在37°C。24小时孵化后,抑菌圈(mm)测量。抑菌圈的直径(毫米)周围油井使用卡尺测量。所有程序进行了一式三份。Minitab®19是用于分析比较,和数据被当作平均数±标准差。

2.7。统计分析

所有的测试进行了一式三份和结果表示为平均数±标准差。数据分析使用GraphPad棱镜Version 9,和比较的方法由单向方差分析(ANOVA)图基测试紧随其后。值明显不同,如果他们低于显著性水平(0.05)。

3所示。结果

3.1。自由基清除活性

这项研究的自由基清除活性测定使用两个化学分析,即DPPH和一氧化氮自由基。结果表明,有一个显著区别提取物和乙酸乙酯提取物中最高的抑制对DPPH自由基的抑制百分比值的96.87%±0.67,其次是二氯甲烷的浓度在95.21%±0.37 1000μg / m,而n己烷提取物抑制最低为62.21%±1.09。

此外,提取的half-maximal抑制浓度(IC50)以及抗坏血酸作为积极的控制,评估在GraphPad棱镜(表9使用剂量反应曲线1)。结果表明,乙酸乙酯提取IC最低50在提取中,一个值为51.63±0.46μ克/毫升。尽管如此,这些发现表明,乙酸乙酯提取物有效仍显著低于抗坏血酸,一个集成电路504.15±0.24μ克/毫升。此外,提取物的抗氧化活性指数显示广泛的活动。根据表1、二氯甲烷、乙酸乙酯提取物抗氧化活性指数最高,而n己烷提取指数最低。虽然乙酸乙酯和二氯甲烷指数最高,这两个化合物的活动被视为低劣的抗坏血酸。

此外,提取物的自由基清除活性检查有关一氧化氮(NO)激进的、和结果表明,提取物抑制不激进的方式依赖于剂量。最重要的是,二氯甲烷和乙酸乙酯提取物中活动水平高,与各自的抑制新兴的百分比为83.40±0.45%和85.17±0.58%。此外,集成电路50值的提取进行了分析以同样的方式作为集成电路50DPPH实验。乙酸乙酯提取显示高活动与IC5060.30±0.65μg / mL,n己烷拥有最低的活动(956.70±0.54μg / mL)和抗坏血酸相比,提取显示低活动向不激进。

3.2。在体外Antiplasmodial和毒性检测

antiplasmodial活动对chloroquine-sensitive 3 d7和W2仍然紧张恶性疟原虫在体外评估,使用盐水虾杀伤力的毒性测试。四种提取物对展出活动恶性疟原虫剂量依赖性的方式,在100年μg / mL;乙酸乙酯抑制的增长恶性疟原虫69.85±0.22%,二氯甲烷提取物显示出类似的活动水平为64.18±0.22%。观察到的活动水平与乙酸乙酯和二氯甲烷与IC高出两倍5011.06±0.45,21.68±0.56μ分别g / mL。然而,这些结果表明,该提取物表现出较低的活动比青蒿素,IC50值为0.0054±0.0013μ克/毫升。此外,盐水虾杀伤力的提取应用测试毒性水平,结果表明,提取物表现出相似的毒性水平(表2)。

3.3。抗菌活性

原油中提取的效果七个测试指标的增长细菌如表所示3。乙酸乙酯提取物表现出最佳的提取,提出了抑制反对最高b的仙人掌写明ATCC 10876,诉parahaemolyticus写明ATCC 17802,l . monocytogenes写明ATCC 7644,美国沙门氏菌感染写明ATCC 14028,其次是二氯甲烷提取最明确的区域枯草芽孢杆菌写明ATCC 19659,金黄色葡萄球菌写明ATCC 6538。的所示的小活动n己烷提取,没有原油提取的生长的影响大肠杆菌写明ATCC 10876。

4所示。讨论

本研究应用solvent-solvent分区技术与甲醇提取物(修改库普坎分区20.]。共分离甲醇提取从四个大的提取,简化混合不同的极性,只使用分区由nonmiscellaneous溶剂、Kuphan分区的主要目的,一个实用和简单的方法来初始化一个净化过程。有可能有显著差异之间的分布提取的化合物与不同程度的极性(17),然后提取研究的抗氧化剂,antiplasmodial和抗菌特性。

抗氧化剂是一种物质,大大阻碍或阻止氧化过程。抗氧化活性是间接测量通过确定氧化的速率过程中抑制抗氧化剂的存在。(21每个提取然后分析其抗氧化活性自由基(DPPH)清除方法。2-diphenyl-1-picrylhydrazyl DPPH(2),有机稳定激进的晶体结构和解决方案,常被用来衡量一个复合的反激进主义的活动或提取。复合的能力或提取物清除自由基通常是作为一种抗氧化剂的能力有关。(22]。

尽管DPPH方法的广泛使用,缺乏标准化的结果很难比较不同植物提取物的抗氧化能力和纯化合物。谢勒和戈多,因此,提出了一种新的抗氧化活性指数(AAI)。AAI公司的计算基于DPPH的质量和样品的质量在反应中,导致一个常数为每个样本无论DPPH浓度和使用。样品被认为有一个低水平的抗氧化活性,抗氧化指数(AAI)小于0.50。AAI介于0.5和1.0时,样品的抗氧化活性被认为是温和的。AAI公司在1.0和2.0之间时,认为样本有一个高水平的抗氧化活性。(15根据这些标准,乙酸乙酯和二氯甲烷提取物被认为应该有一个高水平的抗氧化活性。

这些提取物的自由基清除活性可能是次生代谢产物的存在,特别是酚醛树脂和类黄酮。黄酮类化合物可能有多个属性清除活性氧和氮物种。通常情况下,存在一个ortho-hydroxylation b环的类黄酮分子,自由羟基的数量,C2-C3双键在c - r或存在3-hydroxyl集团是上市作为抗氧化剂的条件和反激进主义的活动。(23根据早期的研究发现,美国palustris(Burm.f)。Bedd。包含acylated和nonacylated山柰酚苷类,每一个都具有自由基清除活性对DPPH自由基在IC50浓度范围从120到400μm (14这些研究结果的基础上,可以得出结论,提取的美国palustris(Burm.f)。Bedd。,more specifically dichloromethane and ethyl acetate, can inhibit free radicals. These findings are consistent with a few other publications that have been done in the past. According to the findings of Arullappan et al., ethyl acetate extracted from the leaves of美国palustris(Burm.f)。Bedd。,which originated in Malaysia, exhibited DPPH radical inhibitor activity with an IC50值为650μ克/毫升。此外,乙酸乙酯提取的美国palustris(Burm.f)。Bedd。从霹雳州,马来西亚,表现出很高的自由基清除活性,及其集成电路5049.8浓度被发现μg / mL,结果相比较,发现在报告中(5,10]。

此外,探索潜在的各种提取物对自由基,一氧化氮(NO)抑制剂。一氧化氮,也称为不,是一个强有力的多向性的中介产生的氨基酸精氨酸血管内皮细胞、吞噬细胞、特定的脑细胞。当没有与超氧化物自由基结合,被称为ONOO高活性过氧亚硝基阴离子生产。这是当没有的毒性变得更加糟糕24]。之间的反应产生的一氧化氮硝普酸钠和氧气会导致亚硝酸盐的形成。亚硝酸盐离子与磺胺酸使重氮化,与萘乙二胺,形成一个粉红色的波长546 nm。(25)表1显示相应的集成电路50值没有清除活动,二氯甲烷和乙酸乙酯提取物有集成电路50值小于200μg / ml,指示好NO-scavenging活动,而n己烷和水提取物有集成电路50值大于400μg / ml,表明贫穷没有清除活动。没有清除值分类基于蔡et al。26]。

此外,自由基清除活性美国palustris(Burm.f)。Bedd。提取,特别是二氯甲烷,乙酸乙酯对一氧化氮(NO)激进,显示合适的活动。这是由于山柰酚糖苷在物种的存在。Multiflorins,山柰酚糖苷,孤立的蕨类植物Neocheiropteris palmatopedata在20显示抑制百分比没有52%μg / ml,山柰酚抑制也报道了原始264.7中没有细胞的生产集成电路5090.3μ米(27,28]。

氧化应激被认为扮演一个角色在发展中几种疾病,包括癌症、糖尿病和肾脏疾病。这带来的压力是过度一氧化氮(NO)的生产,从而导致感染或炎症。因此,消除自由基或抑制不得承诺由增殖细胞生产指标发现新的治疗这些疾病。(26]因此,这些研究的结果,这个物种可以进一步的提取其潜在抑制动物细胞系的研究调查。没有抑制剂的存在来自这个物种此前还没有记录。由于这项发现,附加信息有关的自由基清除活性物种。

此外,它被发现,所有四个提取具有不同程度的活动对chloroquine-sensitive 3 d7菌株恶性疟原虫和仍然W2菌株(表2)。根据世界卫生组织的指导方针和抗寄生虫药物发现的基本需求,提取的活动被分为四类IC基于他们的价值观50浓度:高活动(IC50≤5μ(5克/毫升),承诺活动μg / ml < IC50≤15μ(15 g / ml),适度活动μg / ml < IC50≤50μg / ml),可怜的活动(IC50> 50μ/毫升)。(29日,30.]因此,二氯甲烷和乙酸乙酯提取物有温和的和有前途的antiplasmodial活动,分别,而n己烷和水提取物被划分一个贫穷的活动。这可能是由于存在山柰酚苷、山柰酚等3点-α-L-rhamnopyranoside,隔绝美国palustris(Burm.f)。Bedd。离开。这种化合物已被报道,针对仍然拥有承诺antiplasmodial活动恶性疟原虫与集成电路50106年μ米(14,31日]。这一发现是由以前的报告,决定乙醇提取物的抗疟活性美国palustris(Burm.f)。Bedd。叶子对寄生虫血症和脾肿大疟原虫是在感染BALB / c小鼠rghei安卡。结果表明,提取物具有良好的抗疟活性的ED50值(77.05毫克/公斤体重32]。

提取是通过使用盐水虾的杀伤力测试以确定其整体水平的毒性。测试是一个简单和高效的方法来确定潜在的有毒生物活性物质或提取。它是基于测试化合物的能力杀死虾,一个相对简单的动物有机体(卤虫盐沼)[33]。根据Meyer和合作者,植物提取物表现出毒性LC50不到1000的价值μg / ml;然而,植物提取物被认为是剧毒的虾LC50小于30的价值μ克/毫升(34]。研究结果显示无毒LC50> 1000μg / ml的提取(表2)。这个结果与以前的报告,提到美国palustris(Burm.f)。Bedd。ethanolic提取孟加拉国增长显示了信用证50在184.7μ使用BSLT方法g / ml。(35丰年虾的毒性已经发现预测细胞毒性和寄生虫活动。之间有很强的相关性BSLT毒性和细胞毒性对9 KB细胞系(人类鼻咽癌)和其他肿瘤在活的有机体内小鼠白血病。BSLT检测到有效的抗癌活性,但其预测能力区分的,温和的,弱的抗癌化合物是有限的。因此,BSLT提供了一种快速有效的细胞毒素和更高层次的癌症筛查的歧视。(36]。

一般来说,大多数的提取物表现出微弱的抗菌活性进行了测试。如表所示3在500年,提取μg /盘表现出对所有变量抑制活性细菌抑菌圈直径从0.7到1.5厘米。不同提取物的微生物的响应。在这项研究中,确定所有提取物抑制革兰氏阳性细菌更有效地比革兰氏阴性细菌。根据这些结果支持,革兰氏阴性微生物通常比革兰氏阳性细菌对抗菌药物。这一直是归因于一个革兰氏阴性细菌外膜通透性屏障,防止抗菌药物从细菌细胞内达到他们的目标37]。尽管提取物的抗菌活性表现出弱抗菌,值得注意的是刘等人的发现表明,stenopalustrosides模拟显示显著的抗菌活性对革兰氏阳性菌株(蜡样芽胞杆菌,葡萄球菌epidermidis、金黄色葡萄球菌和微球菌危害2)与麦克风之间和64年μ克/毫升(3]。另一份报告显示,甲醇提取物美国palustris(Burm.f)。Bedd。展出各种抗菌活动对病原菌与麦克风之间50和12.5毫克/毫升(8]。

,总的来说,表现出广泛的生物活性在这次调查的主题。根据研究的结果,物种表现出潜在的活动清除自由基(DPPH和一氧化氮),并能抑制一氧化氮自由基在这个物种是首次报道。除此之外,这是第一次,这个物种的antiplasmodium活动报道,它有一个很好的抑制两菌株的生长潜力疟原虫。另一方面,这个特殊的物种并没有表现出显著的抗菌活性。然而,本研究的限制,我们没有报告在这个物种的植物化学的化合物。相反,我们在这项研究中所显示的生物活性与相关化合物已知在物种基于先前发表的研究。

5。结论

这项研究的结果表明,提取的美国palustris有前途的抗氧化剂和antiplasmodial活动。二氯甲烷和乙酸乙酯提取物表现出显著水平的antiplasmodial和自由基清除活动。提取物的抗菌活性,另一方面,只显示弱的活动对病原菌进一步调查这些发现提供了一个基础的分离和分析生物活性次生代谢产物中提取。

数据可用性

和/或使用的数据集分析中包括在这项研究的文章。可以获得相应的作者进一步说明。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

相对湿度和H.Y.T.负责概念化,A.S.N.负责方法,相对湿度和R.A.负责验证,Y。H负责正式分析,上面和硕士负责调查,相对湿度和A.S.N.写了初稿,N.F.响亮N审查和编辑文章,相对湿度负责可视化,H.Y.T负责监督上面和Y.H.负责项目管理和相对湿度负责融资收购。所有作者已阅读及同意发布版本的手稿。

确认

作者要感谢研究和社区发展的中心,廖内省大学和研究、技术和高等教育的印度尼西亚共和国的支持(1635 / UN19.5.1.3 / PT.01.03/2022)。这项研究是由研究、技术,和印度尼西亚共和国高等教育和研究、技术、教育和高等教育,授予1635号/ UN19.5.1.3 / PT.01.03/2022。