文摘
上下文。自然假设必须参与管理急性和慢性疾病。Cnestis ferruginea是疗愈的来源之一将要安装在传统医学实践中治疗伤口。尽管如此,没有科学报告归档到目前为止这种植物的伤口管理活动。客观的。建立hydroethanolic的伤口管理属性Cnestis ferruginea叶提取物(CFHE)。材料和方法。伤口面积测量切除后背白化病老鼠的一部分,和治疗后5 - 15% CFHE软膏为14天。吸光度富含血小板血浆治疗-100 - 0.8毫克/毫升CFHE和聚合代理spectrophotometrically决定的在体外血小板聚集试验。伤口组织组织病理学CFHE ointment-treated动物显示血管生成,reepithelialization,胶原的沉积,颗粒状组织形成伤口组织。减少大腿水肿和疼痛阈值,在7-day-old小鸡,被carrageenan-induced水肿和Randall-Sellito压力评估模型,分别。琼脂扩散法,细菌生长抑制15% CFHE药膏了伤寒沙门氏菌,大肠杆菌,铜绿假单胞菌,葡萄球菌。葡萄球菌,和酿脓链球菌。结果。所有CFHE药膏的浓度显著降低( )伤口面积29 - 41%后处理。CFHE(1.6 -100毫克/毫升)促进血小板聚集( )37 - 67% (IC50:3.1 - -6.2毫克/毫升)。有改善伤口组织reepithelization,成纤维细胞增殖,血管增生和胶原沉积15% CFHE软膏治疗。CFHE药膏显著( )大腿和剂量依赖性降低水肿和显示显著( )镇痛效果。在体外,CFHE软膏15% > 100%的增长选择抑制细菌引起的。结论。hydroethanolic叶提取的Cnestis ferruginea拥有伤口愈合,抗血小板聚集,抗炎,镇痛,和抗菌性,因此,可以有效地管理打开和关闭伤口。
1。介绍
伤口是皮肤的上皮细胞的不连续,因为受伤的皮肤或皮下组织(1]。它可能发生由于物理、化学、热、微生物、免疫攻击组织(2]。在慢性状态,剧烈的疼痛、感染、组织或器官功能丧失,截肢和死亡有时伤口特征(3]。慢性伤口已经估计的患病率在0.18%和1.3%之间全球老年人口,及其治疗和/或管理估计每年花费超过10亿美元(4]。在全球范围内,治疗伤口的年度审查成本在2014年约为28亿美元,而且预计将超过220亿美元,到2024年,科技进步推动下,慢性伤口的发生率上升,增加政府的支持,和不断增加的老年人口5]。
伤口管理提出了巨大的金融成本和重大不良社会影响,特别是在个人与其他并发症。在加纳,伤口无法愈合的情况数量指数增加化合物的非传染性疾病,如糖尿病和微生物感染尤其是农村社区进行了研究,在慢性伤口的患病率和影响在不断增加(6- - - - - -9]。伤口管理包括不仅照顾伤口愈合的复杂的生理和动态过程,即。,止血阶段,炎症阶段,扩散阶段,和装修阶段10),而且疼痛的缓解和预防感染,加速愈合过程。
在加纳,因为传统药物的高成本,加上卫生保健设施不足和医疗专业人士尤其是在农村地区,大多数人依赖的药物,这被认为是有效的,现成的,负担得起的和低毒性的管理的伤口11- - - - - -13]。植物刺激科学界的广泛使用传统搜索和提供的证据效力这些伤口管理草本植物(14]。Cnestis ferruginea直流(家庭:牛栓藤科),一个受欢迎的植物在加纳,与当地的名字Apose(双胞胎),Akitase(芬提)Pudaegye(Nzema)就是这样一种药用植物有用民俗在伤口愈合。因此,本研究试图探讨伤口hydroethanolic叶提取的管理活动Cnestis ferruginea揭示其有用性卫生保健社区使用在体外和在活的有机体内科学实验模型。
2。材料和方法
2.1。工厂收集
新鲜的叶子Cnestis ferruginea收集从Ayigya加纳库马西,阿善堤地区(纬度6°35 N 6°40 N和经度1°30 W 1°35 W) 2020年1月。巨人先生Sarfo,植物学家的草药,KNUST、库马西,加纳,并识别和身份验证的植物标本。
2.2。植物提取物的制备
新鲜的叶子Cnestis ferruginea是清洗和shade-dried(温度:25 - 34°C)。干叶子是使用锤式粉碎机粉碎成一个光滑的粉末(实验室轧机机,克里斯蒂和诺里斯,切姆斯福德,英格兰)。1公斤的粉末很冷浸渍使用5 l 70%乙醇(提取水溶液和有机活跃的原则植物材料)为72小时偶尔搅拌。浸渍是过滤使用棉布(残渣remacerated获得最高产量的三倍)。得到的滤液集中使用旋转蒸发器(Rotavapor BUCHI r - 200与加热浴b - 490, BUCHI,康斯坦茨,汉堡,德国)和冷冻干燥(yk - 118真空冷冻干燥机,真正的十个工业公司,台湾)在科学和工业委员会Research-Forestry加纳研究所(CSIR-FORIG) Fumesua,加纳库马西,。提取的粉末重84.7克(百分比收益率:8.47%)贴上Cnestis ferrugineahydroethanolic叶提取物(CFHE)和存储在一个干燥器在这项研究中。
2.3。制定CFHE药膏
CFHE膏浓度5、10和15% 制定从简单的药膏英国药典(BP)主要由凡士林(15]。准备这些浓度,每个2.5,5.0,和7.5 g CFHE不一的47.5,45.0,和42.5 g的简单的药膏BP,分别轻轻和加热温度60ºC,同时不断搅拌直到均匀混合物。准备然后冷却、包装和适当的标签。
2.4。道德的考虑
动物伦理委员会(FPPS-AEC / CA01/13)、药学和制药科学教师,恩克鲁玛科技大学库马西,加纳,批准了动物研究。
2.5。实验动物
二十五(25)男性成人白化大鼠体重150 - 200 g和年龄的6 - 8周内获得动物设施的药理学系KNUST,库马西,加纳,愈合研究中使用,而forty-seven-day-old小公鸡(背带吊裤带579年应变剃须刀Akropong农场,库马西,加纳),重达30 - 50 g,用于抗炎、镇痛的研究。动物被关在一个金属线网笼子根据预先确定的组。每个笼子里的地板上满是粗锯末、控制环境条件下(温度25±3ºC,在50 - 70%相对湿度的空气,和环境光/暗周期)。标准颗粒饮食喂养的大鼠(Agricare有限公司、Kwadaso库马西)和小公鸡与小鸡饲料(Agricare有限公司、Kwadaso库马西)和水随意在整个实验期间。动物被保存和治疗在美国国立卫生研究所的实验室动物保健和使用指南(NIH,卫生和人类服务部没有出版。85 - 23,1985年修订)。
2.6。微生物用于这项研究
临床株微生物用于微生物敏感性测定大肠杆菌,绿脓杆菌,金黄色葡萄球菌、伤寒沙门氏菌,和酿脓链球菌。微生物制药学和微生物实验室获得,药学和制药科学学院KNUST,加纳库马西,。
2.7。准备在这项研究中使用的血液样本
库马西的羊全血收集屠宰场有限公司,Asokwa,库马西,加纳(地点:纬度6°43 55′N,经度1°31′28“W)到500毫升玻璃样品瓶含有柠檬酸钠,作为抗凝剂。离心分离富含血小板血浆(PRP)柠檬酸盐羊全血(德国贺利氏初Biofuge离心机)15分钟在3000 rpm,获得血液样本(4小时后16]。
2.8。CFHE的愈合效果
我们研究了CFHE使用切除伤口的愈合效果模式17)与轻微的修改。短暂,白化大鼠麻醉使用注射40毫克/公斤pentobarbitone腹腔内。预期的伤口面积提出了创建的老鼠在胸背地区,远离脊柱1厘米,由剃须的背皮克林刮胡子不锈钢刀片摩擦与70%乙醇。全层环形切除伤口,大小约30毫米,沿着标记创建使用消毒齿钳,手术刀,剪刀。我们实现了印迹止血的伤口用棉签浸泡在生理盐水。整个伤口保持打开状态。老鼠被分为a e (n= 5)和测量了直径的切除伤口一毫米的规则。伤口的动物在A组(负控制)处理简单的药膏BP,而在组织B, C, D治疗5,10,分别和15% w / w CFHE软膏。E组(积极控制)是接受Silverzine(1%磺胺嘧啶银乳膏;艾尔顿药品生产公司,加纳),参考药物。药膏是局部管理为14天。切除伤口的直径测量天0(我们创建的天伤口),3、6、9和12受伤后伤口区域进行了计算。
2.9。体外血小板聚集试验
二百微升(200µL)与1卷的PRP涨跌互现µL CFHE浓度的0.8,1.6,3.2,6.4,12.5,25日,50和100毫克/毫升。20毫升(20µL) 0.1二磷酸腺苷(ADP)的解决方案是添加到每个混合物作为聚合的聚合剂和允许5分钟。合成混合物的吸光度(作为)测定spectrophotometrically波长600 nm,比例和结果抑制聚合(18使用以下公式);
类似的测试是通过使用1%二甲亚砜(DMSO)解决方案(作为一个负控制测试),和吸光度(广告)测量19,20.]。的集成电路50CFHE估计。我们把实验一式三份。
2.10。组织学研究
伤口组织是无菌移除14天每组实验动物的和固定在10%福尔马林溶液。(描述的固定组织准备21]。然后我们观察到光显微镜下的挂载玻片(徕卡微系统公司,位于德国)×40放大率变化和血管生成,细胞修复,reepithelialization,胶原蛋白含量和颗粒状组织的形成。量化reepithelization,纤维母细胞增殖、血管生成和胶原沉积的评估在白化大鼠伤口愈合1 =没有,2 =轻微,3 =中等,4 =广泛。两位研究者做了失明的方式得分,和成绩进行了整理和分析。
2.11。抗炎活性CFHE
实验研究使用carrageenan-induced大腿CFHE炎症的抗炎活动之前所描述的蟑螂和Sufka轻微修改(22]。炎症是由注射角叉菜胶诱导在7-day-old公鸡(10μL 2%的生理盐水溶液)的subplantar组织右脚大腿后测量他们的初始厚度(“透明国际”使用数字卡尺)(公元前江苏磁铁有限公司,中国)。我们花了3小时后大腿粗细再次postcarrageenan注入(T0),炎症是量化。小鸡与大腿厚度>初始厚度的50%被认为是研究。小鸡与发炎的大腿被随机分成五组a e (n= 5)。A组、消极控制是处理简单的药膏BP。组B, C, D处理5,10,15% CFHE药膏。E组,积极控制,处理Olfen凝胶(1%双氯芬酸钠软膏;瑞士Acino)。所有治疗都做局部轻微的按摩。防止药物擦红肿的地方,gauze-bandaged大腿。然后,我们每小时测量大腿厚度(Tt)超过6小时,然后24th小时。比例减少大腿厚度估计使用以下公式:
然后我们绘制的百分比减少大腿厚度与时间建立CFHE的抗炎活性。
2.12。镇痛活性CFHE
镇痛活性CFHE被Woode et al .,确定所述Randell-Selitto压力测试(23)与轻微的修改。在该测试中,最初的疼痛阈值(π)7-day-old公鸡用Randell-Selitto一个痛觉计(测量模型:PPA01;兰花的科学和创新的印度私人有限公司、印度)。因此,炎症和疼痛在右腿诱导下描述的小公鸡的“CFHE抗炎活动,”小公鸡发炎大腿被放入3组(A、B和C),和痛阈(P0)3小时后再次确定postinflammation归纳。小鸡在A组(负控制)处理简单的药膏BP。B组治疗的15% CFHE药膏,C组(阳性对照)处理Olfen凝胶(1%双氯芬酸钠软膏)。疼痛阈值(Pt)是测量每小时4小时,和每日间隔4天。比例,提高痛阈(表明镇痛效应)测量所施加的力的大小的大腿发炎引起的痛觉计从痛觉计大腿的撤军,计算
痛阈的百分比增加然后绘制与时间建立CFHE的镇痛活性。
2.13。抗菌活性的CFHE
我们调查的抗菌活性CFHE使用琼脂扩散法。营养琼脂(Oxoid有限公司、英国)媒体用于抗菌活性的决定。0.1毫升量18小时测试生物体(文化伤寒沙门氏菌,大肠杆菌,铜绿假单胞菌,葡萄球菌。葡萄球菌,和酿脓链球菌)是用于种子营养琼脂板。在每一个盘子,一个(10毫米)是减少使用无菌5号软木钻孔机,充满了200年µL CFHE 15%,允许每个人分散在室温1小时。我们测量的区域抑制在37°C(孵化24小时后24]。我们把实验一式三份。
2.14。统计分析
我们分析数据用图表垫棱镜为Windows version 8(图垫软件、圣地亚哥、钙、美国),表示值意味着±SEM。治疗和控制之间的显著差异决定使用单向方差分析,其次是Dunnett多个对比测试。 被认为是具有统计学意义。
3所示。结果
3.1。CFHE的愈合效果
所有CFHE药膏的浓度显著( )减少伤口面积相比从3天到14后处理简单药膏BP治疗伤口。观察到的影响是造成类似Silverzine治疗(图1)。
(一)
(b)
3.2。CFHE对血小板聚集的影响
我们发现CFHE显著( )促进血小板聚集,浓度使用除了在0.8毫克/毫升。我们估计的IC50 3.1 - -6.2毫克/毫升(图2)。
3.3。组织学评价治疗伤口
切除伤口组织的组织学显示改善愈合活动(即。,fibroblasts proliferation, neovascularization, epithelial regeneration, and collagen deposition) with 15% CFHE and Silverzine-treated wounds compared to the control group (Figure3)。有持续的炎症、组织坏死,减少血管生成治疗简单的药膏BP。然而,治疗10到15% CFHE显著( )增强纤维母细胞增殖和血管生成(图4)。而且,1%磺胺嘧啶治疗显著( )造成大量胶原沉积补充纤维母细胞增殖和血管生成。
(一)
(b)
(c)
(d)
3.4。抗炎效果CFHE
卡拉胶(10μL, 2%悬浮液)诱导中度炎症导致大腿水肿在7-day-old小鸡达到2 - 3小时。CFHE药膏和Olfen凝胶显著( )在小鸡和剂量依赖性抑制carrageenan-induced水肿剂量(图5)。
(一)
(b)
(c)
(d)
3.5。CFHE的止痛效果
显著的镇痛效果( )观察小鸡的大腿红肿接受15% CFHE和Olfen凝胶为四个小时,每小时,每天四天(图6)。
(一)
(b)
(c)
(d)
3.6。抗菌活性的CFHE
15% CFHE软膏抑制增长伤寒沙门氏菌,大肠杆菌,铜绿假单胞菌,葡萄球菌。葡萄球菌,和酿脓链球菌的最大抑制区是24±5.3和26±2.0毫米伤寒杆菌和大肠杆菌,分别。抑制的最小区域是16.57±7.5毫米,这是链球菌,而铜绿假单胞菌,金黄色葡萄球菌也抑制了直径为23.3±5.8毫米和23±2.0毫米,分别(图7)。
4所示。讨论
天线的部分Cnestis ferruginea加纳当地用于治疗各种炎症条件(25管理),所以对于伤口,局部准备(与不同浓度)为其愈合评估了这种植物的叶子,血小板聚集、抗炎、镇痛、抗菌、效果。
愈合过程的复杂性,涉及到多种细胞物质的空间和时间同步与不同的角色在止血的阶段,收缩,炎症,肉芽,collagenation, reepithelialization,重塑1,3,26]。而止血和炎症为特征的炎症阶段,增殖阶段与上皮形成补充,血管生成,和胶原沉积。伤口收缩减少疤痕组织,这是与造粒(26]。成纤维细胞主要出现在受伤后伤口72个小时,和他们的积累需要表型变化。伤口遍布含糊中的纤维母细胞产生矩阵蛋白质如透明质酸、纤连蛋白、蛋白聚糖和1型和3型胶原(1]。成纤维细胞刺激胶原蛋白的生产或合成,这是一个有机体的细胞外基质的主要成分。胶原蛋白生产促进内皮细胞的表达,促进血管生成,这增强了肉芽组织形成,从而论证伤口愈合,这是表现为减少伤口面积。伤口关闭上皮组织发生迅速有效地恢复皮肤的屏障功能。的结果在白化大鼠切除模型和组织病理学评价显示,所有的浓度CFHE软膏局部使用时伤口愈合方面表现出显著的促进活动。影响被发现与CFHE软膏15%浓度,显示更重要的愈合活动通过促进reepithelization,成纤维细胞增殖,肉芽组织的形成,胶原的沉积,降低伤口面积比简单的药膏BP治疗组。因此,显著减少伤口面积经组织学研究表明,CFHE有一个固有的愈合的潜力。
血管受损或受伤时,血小板,绑定了形式聚集现场暴露损伤激活凝血酶受体。Reepithelization大大加速伤口的血纤蛋白或富含血小板血浆。上皮形成开始几小时后细胞损伤和提出了单层上皮细胞有丝分裂活动伴随着显著增加伤口边缘(1]。它包括血小板在正常的体内平衡,这限制了失血的组件之间的交互通过调节血管壁,血液循环血小板和血浆蛋白。从在体外血小板聚集试验、CFHE显示血小板聚集的增量相比vehicle-treated样本。这可能表明CFHE刺激血小板聚集,从而促进上皮形成。代理人的能力来刺激加速愈合过程或具有抗菌,抗氧化和抗炎活动是有益的21在整体的伤口护理管理方法。
Carrageenan-induced水肿是常用的作为急性炎症实验动物模型和建立是两相的27]。5 -羟色胺和组胺主要介导的早期阶段(1 - 2小时)卡拉胶模型和增加受损组织中前列腺素的合成。后期阶段持续通过前列腺素释放和由缓激肽,白细胞三烯,多形核的细胞,组织巨噬细胞产生的前列腺素(27,28]。CFHE显著抑制角叉菜胶诱导的炎症的抗炎治疗协议活动评估。的各种长处CFHE药膏使用相比,炎症控制重要活动。时间进程图24小时以上的研究结果显示,接近完全抑制炎症。这表明,随着时间的推移CFHE增加的抗炎效果。这个发现也证明使用治疗炎症条件下提取传统。CFHE的抗炎作用与先前的研究一致辛格et al。29日]。CFHE和Olfen凝胶表现出显著的镇痛活性carrageenan-induced疼痛模型。皮肤炎症从受损的细胞释放内源性促炎介质和聚集他们受伤的身体的一部分。这减少了各种机械的阈值和传导机制,从而产生痛觉过敏(30.]。因此,CFHE可能会增加皮肤的阈值的机械生产的疼痛和/或减少内源性介质。但在镇痛试验,单一剂量的CFHE受雇。因此,提取和双氯芬酸的相对效力并不成立。
CFHE从研究显示抗菌活性金黄色葡萄球菌链球菌,铜绿假单胞菌,大肠杆菌,伤寒杆菌,与伤口污染和殖民2,31日]。这些微生物的存在、炎症和氧化应激阻碍愈合过程,从而延长伤口愈合的早期阶段1,32,33]。感染伤口成为慢性,变得难以治疗。CFHE表明其用途的抗菌活性感染伤口的治疗和管理。
抗氧化,抗炎镇痛,抗菌活性表现出由CFHE [29日,33,34),导致其伤口管理效应在这项研究中,可以归因于植物化学的出现在工厂。次生代谢产物如生物碱、黄酮类、单宁苷、萜类化合物和植物类固醇中发现的各种植物提取物处理各自的药理特性(35,36]。单宁(37),类黄酮(38),皂苷(39],苷也增强愈合过程基于他们的抗菌和抗氧化活性。此外,我们已经确定了苷具有抗炎,以及促进伤口愈合。首脑和拉赫曼40报道,一个异黄酮糖苷afrormosia-7-O-beta-D-galactoside隔绝c . ferruginea,具有广泛的抗菌活性。那里,从植物化学的初步筛选,叶中提取的c . ferruginea包含次生代谢产物,如生物碱、皂苷苷,单宁和类黄酮(41)这可能是其传统伤口管理负责。
5。结论
研究结果表明,hydroethanolic叶中提取的Cnestis ferruginea可以有效管理的伤口,因为它具有愈合,抗血小板聚集,抗炎,镇痛,抗菌性。
可以做进一步的工作来评估一些炎症介质如5 -羟色胺、组胺,在早期阶段和受损组织中前列腺素、缓激肽和白细胞三烯阶段后期炎症;我们提取的进一步解释活动的机制。同样,可以使用不同的剂量的CHFE进一步镇痛研究建立其相对效力。
数据可用性
所有生成的数据或分析在这项研究中都包含在这个手稿。然而,和/或使用的数据集分析在当前研究可从相应的作者在合理的请求。
的利益冲突
没有利益冲突。
确认
作者表达诚挚的感谢药理学系的技术人员和制药学,恩克鲁玛科技大学(KNUST),库马西,加纳,因为他们的技术帮助。作者资助这项工作。