植物化学的分析、抗氧化活性、抗菌活性和细胞毒性Chaptalia高寒草场叶子

文摘

上下文。Chaptalia高寒草场(l)波尔。(家庭:菊科)广泛用于传统医学泻药和anticough药物和特别是在创伤,伤口,并在局部出血的准备。客观的。这项工作是评估hydromethanolic的化学组成(30/70甲醇-水)浸渍提取获得的叶子c .高寒草场以及研究抗氧化剂,抗菌、细胞毒性、基因毒性活动的物种。材料和方法。植物化学的筛查,抗氧化活性(总酚、总类黄酮、浓缩单宁含量、DPPH自由基,并收紧),抗菌活性(铜绿假单胞菌,b的仙人掌,大肠epidermidis,大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,大肠粪,p .奇异君子兰,念珠菌glabrata(临床分离),假丝酵母tropicalis(临床分离),c . krusei(临床分离),和白念珠菌(临床分离)和氧化压力参数(TBARS、羰基蛋白、和DCFH)根据文献进行了分析。毒性的c .高寒草场使用另一种方法是评估,d .腹,以及运动分析。结果。methanolic树叶中提取的植物化学的筛选试验揭示了生物碱的存在,香豆素,第四纪基地、酚醛树脂、黄酮类、单宁和免费的类固醇。定量植物化学的研究表明总酚(30.17±1.44毫克/克),类黄酮(21.64±0.66毫克/克)和浓缩单宁(9.58±0.99毫克/克)。DPPH (345.41±5.35μg / mL)和收紧(379.98±39.25μ摘要/毫克样品)中提取的c .高寒草场留下了一个中间值,表明适度的提取物的抗氧化活性。抗菌结果显示只有一个积极的结果(抗菌活性)己烷分数大大抑制了微生物e . epidermidis c . tropicalis glabrata,c . krusei在1000年的浓度μ克/毫升。TBARS、羰基蛋白和DCFH证明提取有能力保护细胞不受蛋白质和脂质损伤,以及抑制oxygen-derived激进分子的三个浓度测试:0.1,1,10毫克/毫升。的毒性c .高寒草场提取物对d .腹,它是发现,直到15毫克/毫升的浓度,提取没有毒性和LC₅₀获得24毫克/毫升。结果表明,该c .高寒草场提取叶子用来防止PQ损害是有效地降低果蝇死亡率和提高运动能力。结论。我们的研究首次证明了这一点c .高寒草场原油叶提取物具有较高的抗氧化能力在体外和体内都通过不同的分析技术。这些结果可以推断出未来的应用在药理学领域,低毒性观察到d . melanogatser证明,以及能够中和不同来源的罗恩。

1。介绍

的利益的科学类化合物研究的植物来源日益在世界范围内,尤其是在发展中国家使用草药广泛用于他们的基本卫生需求(1]。

众所周知,药用植物世界自古以来一直用于治疗各种疾病,包括哮喘、腹部疾病、皮肤疾病、呼吸道和泌尿系并发症,肝和心血管疾病(2,3]。这个经验知识来自于植物防御系统,生成大量的化合物与不同的分子结构,远优于来源于合成产品(4),所以新活动原则的说明非常感兴趣。

仅在过去的二十年里,研究集中在天然化合物与抗氧化活动展示了巨大的增长,因为大量的证据表明,细胞损伤引起的氧化应激已经被认为是衰老的一个重要因素,在多种疾病的发展,如自身免疫性疾病、传染病和/或炎性疾病,以及退行性和神经退行性疾病5,6]。因此,寻找天然产物的重要性具有抗氧化效果强调,他们能够防止,

稳定,或禁用前自由基攻击生物目标细胞(DNA、蛋白质和脂质)7]。

通常,人们用植物来治疗各种疾病,不知道其有毒的潜力,可对人体健康有害。的一个主要问题在使用天然产品是植物来源的相信产品是免费的从不良反应和毒性作用8]。因此,研究药用植物的毒性非常重要,为了定义与植物疗法相关的风险,以及指导研究某些化合物的隔离,直到新药物的开发。

这个物种Chaptalia高寒草场(l)波尔。(c .高寒),属于家庭菊科,称为“lingua-de-vaca”或“arnica-do-campo”,是一年一度的草本物种原产于美洲,可以发现从墨西哥到阿根廷9,10,11]。这个物种很容易区分,草本大小,黑根,非常小的茎,无柄,薄如纸的,抒情的,乐观,和毛叶背面出现,和细长的花香味高达79厘米(长度),它支持花序[12,13,14]。叶有unistratified表皮覆盖一个明显有角质层和无数毛状体,这些特征用于分类的目的,也在药物morphodiagnosis [15]。

广泛应用于民间医药,它的叶子也表示内部泻药和anticough药物,尤其是在创伤,伤口,出血在局部制剂(12]。药理进行了化验用树叶的C。高寒草场为了证明影响归因于他们,,胆碱能抗炎。和抗菌活动证明16,17]。从这种植物的根的粗提取液,香豆素,7点-β-D-glucopyranosylnutanocoumarine,抗菌活性枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌被发现(18,19]。根据同一作者,污染伤口的愈合来自这种化合物。

虽然这些报告验证其民间使用,到目前为止,没有研究的植物化学的成分、抗氧化活性、细胞毒性已经证明,因此重要的新调查。兴趣的需求逐渐增加更多的植物的药物,合成药物相比,它有时被认为是安全的(20.]。

这项工作的目的是评估的化学宪法hydromethanolic(30/70甲醇-水)浸渍从的叶子和根茎中提取得到c .高寒草场以及研究抗氧化剂,抗菌、细胞毒性、基因毒性活动的物种。

2。材料和方法

2.1。植物材料

c .高寒草场物种是手动收集从圣弗朗西斯科•德•Assis-Rio(巴西)(Lat。南里奥格兰德州:29°33′01”年代e长。55°07′52”W)。发现的植物材料Patricia de Oliveira七巧板(生物学家),联邦大学的南美大草原(校园圣加布里埃尔),巴西。凭证标本的标本存放在联邦大学的南美大草原(HBEI 203)。

叶(18.19 g)材料干,动力,并提取使用hydromethanolic(30/70甲醇-水)浸渍(30 g / 100毫升)超过4周。之后,使用旋转蒸发器粗提取液集中。抗菌试验,粗提物受到分区的顺序使用增加极性溶剂萃取:己烷(十六进制)、氯仿(CHCl₃)、乙酸乙酯(层)和正丁醇(BuOH)。分数集中在旋转蒸发器。

2.2。植物化学的分析

植物提取物是评估存在的生氰苷、酚类、单宁酸、花青素、原花青素、类黄酮、儿茶素、类固醇,常用药用,皂甙,树脂、生物碱、植物化学的分析(筛选)和第四纪基地的使用典型的标准方法(21]。

2.2.1。总多酚、类黄酮和单宁浓缩试验

叶总酚类化合物的提取测定根据Folin-Ciocalteu方法(22]。总酚的含量结果表示为毫克每毫升没食子酸等价物(GAE)提取。

总黄酮类化合物的氯化铝比色测定的基础上,通过Woisky和Salatino23]。总黄酮类化合物的提取槲皮素等价表示为毫克/毫升提取(毫克/毫升EXT)。

浓缩单宁莫里森测定et al。24]。短暂,0.1毫升的叶样本添加到整除(25毫克/毫升)到0.9毫升的甲醇和5.0毫升的香兰素试剂。然后,它是在40°C水浴加热20分钟,在500 nm和吸光度是阅读。分析使用儿茶素作为标准进行了一式三份(0.0025 - -0.2 mg·毫升⁻¹)(Y= 0.0015x−0.0005,r= 0.9968)。儿茶素的研究结果表示在毫克当量每毫升提取/分数(猫mg / mL EXT)。

2.2.2。由HPLC-DAD-MS测定化学成分

识别和量化的次生代谢物c .高寒草场粗提取液后提出的方法论维埃拉et al。25),小的修改。高效液相色谱法结合质谱检测器(HPLC-DAD-MS)与岛津制作所突出UFLC(日本岛津公司,日本京都)配备一个Auto-Sampler (SIL-20AHT),两个日本岛津公司LC-20ADT往复泵连接到脱气器DGU20A3R,积分器CBM20A,紫外可见检测器爸爸SPD-M20A,烤箱CTO-20A。

高效液相色谱系统耦合的小型四极飞行时间(Q-TOF)质量分析仪(力量Daltonik GmbH,不来梅,德国),这是控制使用的控制软件。分析的参数设置使用负离子模式与光谱获得大量从50到1200不等米/z。质参数的最优值毛细管电压4500 V,干燥气体温度达到215°C,干燥气体流量的10.0 L / min,喷洒气体压力为5.0酒吧,碰撞150 Vpp的射频传输时间70 ls,和前脉冲存储5 ls。此外,自动MS / MS实验使用氮作为碰撞气体和通过调整碰撞能量的值如下:米/z100年,20电动车;米/z500年,30电动车;和米/z1000年,35 eV。4.0 MS数据分析使用数据分析软件(力量Daltonics,不来梅,德国)。

分析中进行了C-18列(4.6毫米×250毫米、默克公司、德国)挤满了5μ米粒子直径和内C-18 precolumn (RP 18 5μ米,默克公司、德国)。第一个流动相,相,百分之二乙酸在pH值为4.2。第二个流动相,B阶段,使用甲醇,醋酸,和蒸馏水的比例18:分别为1:1。梯度洗脱是0分钟:20%的B, 0-25分钟:50%的B, 25分钟:20%的B,和30分钟:B(运行)的20%,流量的0.8毫升·分钟⁻¹。山顶被确定通过比较目前的结果保留时间和质量光谱从软件库和外部标准。外部标准包括40%的异黄酮(黄豆苷:3.1%,Glycitin: 1.56%,萃取精制:0.98%,大豆苷:35.49%,Glycitein: 0.1%,和染料木黄酮:0.03%——东明Huiren生物制品、山东、中国)0.156和2.34毫克/毫升Glycitin之间,3.5 - -53.2毫克/毫升的黄素,3 - 4.5μ染料木素的g / mL,咖啡酸、没食子酸,clorogenic酸,catequin,毛地黄黄酮、香豆素、槲皮素和芦丁(Sigma-Aldrich标准”,圣路易斯,密苏里州,美国)1.5和24之间μ克/毫升。样品和标准测试一式三份。结果平均值±标准偏差。

2.3。体外抗氧化活性

2.3.1。DPPH自由基清除活性

百分比叶提取物的抗氧化活性(AA %)获得了利用DPPH (2, 2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl)激进的吸光度测定,根据崔等描述的过程。26)有一些变化。反应混合物包含样本和DPPH在不同浓度乙醇(250、125、62.5、31.25、15.62e7.81μg / mL)。当DPPH与抗氧化剂复合反应,氢可以捐赠,减少。积极的控制抗坏血酸在同一样品浓度。颜色的变化(从深紫色到淡黄色)阅读(吸光度(Abs)) 518海里反应30分钟后用紫外可见分光光度计(发逻100分光光度计Spectroquant®默克公司,达姆施塔特,德国)。反应发生在30分钟,之后不久,吸光度是阅读在518 nm的分光光度计。整个测试进行了一式三份。百分比DPPH˙扫气效果计算从以下方程: 在Abs_样本、Abs_空白和腹肌_控制样品的吸光度、空白和消极的控制。抑制浓度集成电路₅₀从线性回归分析被插值计算。

2.3.2。铁降低抗氧化能力分析(捆牢)

抗氧化能力的活动。高寒草场由铁还原能力(收紧)进行描述的方法显示Rufino et al。27),小的修改。样本准备在1000年的浓度μg / mL蒸馏水稀释。测试进行了一式三份,增加200人μL的样本和1800年μL收紧的试剂。随后,样本存储在一个烤箱(37°C)四分钟。阅读进行紫外-可见(紫外光谱仪在593海里。硫酸亚铁的标准曲线的浓度1000更易与62.5更易/ L / L (y= 0.000049x+ 0.036181,R²= 0.9922)被用来执行计算。

2.3.3。脂质过氧化反应试验(TBARS)

硫代巴比土酸活性物质被用作衡量氧化应激根据Okhawa et al。28]。总之,样本混合1毫升10%三氯乙酸和1毫升0.67%的硫代巴比土酸,然后在沸水浴中加热30分钟。TBARS是由吸收535海里。结果表示为丙二醛相当于每毫克的蛋白质(Eq MDA /毫克蛋白)。

2.3.4。TBARS由硫酸亚铁(FS)

另一种方法用于脂质过氧化作用分析TBARS(硫代巴比土酸活性物种),根据VYNCKE[描述的方法29日),做了一些调整。在这个方法中(与损伤诱导物),1%稀释蛋黄(v / v)是用于100毫米三羟甲基氨基甲烷HCl pH值7.4缓冲液,使用硫酸亚铁水浓度为13.9μg / mL损伤诱导物。的浓度c .高寒草场提取使用10、100和1000μ克/毫升⁻¹(p / v)。缓冲溶液作为消极的控制。吸光度是阅读在532纳米波长分光光度计。分析一式四份。

2.3.5。蛋白质含量的测定羰基组

羰基氧化蛋白质含量的测定(分组)是由羰基化合物的反应与2,4-dinitrophenylhydrazine (DNPH),正如前面所描述的莱文et al。30.]。简而言之,肝素化全血与10%柠檬酸和沉淀,离心后,颗粒是治疗1毫升0.2% DNPH盐酸(2摩尔/升)或1毫升盐酸作为白(2摩尔/升)。样本孵化一小时在室温下用颤抖的5分钟。200年μL(柠檬酸随后补充道,随后和沉淀蛋白质与10%柠檬酸清洗三次,三次与乙醇/乙酸乙酯1:1 (v / v)和三次再次与10%柠檬酸。最后的沉淀溶解在6与柠檬酸mol / L盐酸胍:不溶性残渣被离心分离去除。羰基化合物的浓度的吸光度计算370海里使用21.5更易·L /厘米作为脂肪族腙的消光系数,结果被表示为羰基更易与每毫克蛋白(更易与羰基/毫克蛋白)。

2.3.6。评估DCFH氧化

评估的氧化2,7-dichlorofluorescein (DCFH)叶的粗提取物C。高寒草场进行确定的水平细胞内活性氧和氮物种的一代(罗恩),一般的氧化压力指数根据Myrhe et al。31日]。150年的试验反应混合物包括μL的0.1μ米磷酸钾缓冲(pH值7.4),40岁μL的蒸馏水,5μL DCFH-DA (200μ5米,最终浓度μ米),5μL的样本(1:10稀释)。排放的氧化造成的DCF荧光DCFH监测10分钟(30年代间隔)在488年和525海里,激发和发射波长,分别使用SpectraMax板读者(分子器件、钙、美国)。贴现的利率形成被表示为一个百分比对照组(%)。

2.4。抗菌活性试验

原油提取和分数是单独评估铜绿假单胞菌(写明ATCC 9027),b的仙人掌(写明ATCC 33019),大肠epidermidis(写明ATCC 1228),大肠杆菌(写明ATCC 25922),金黄色葡萄球菌(写明ATCC 33019),粪大肠(写明ATCC 29212),p .奇异君子兰(写明ATCC 25933),假丝酵母glabrata(临床分离),假丝酵母tropicalis(临床分离),c . krusei(临床分离),白念珠菌(临床分离)。抗菌感受性测试执行推荐的CLSI(临床和实验室标准协会)文档M07-A9 [32)和抗真菌是按照协议M27-A3酵母真菌的临床和实验室标准协会(CLSI) [33]。菌株生长在一夜之间在35°C 24 h Mueller-Hinton琼脂和真菌菌株在35°C 48 h或72 h Sabouraud葡萄糖琼脂。从2000年开始连续稀释到15.6μg / mL提取物的准备在96 -微型板块。为此,200毫克/毫升1% DMSO股票解决方案使用。90年μ这个解决方案的L是转移到微型板块,已经包含了100年μL培养基。完成200年第四卷μL, 10μ培养液添加L(光密度之间的悬挂调整0.5和2.5×10³集落形成单位(CFU) /毫升根据规模比浊麦克法兰标准)。板块在37°C孵化24小时的细菌和真菌的35°C 48 h。麦克风被计算为最低稀释显示完整的抑制增长的微生物测试。细菌,2、3、去除氯开发者添加和真菌是可视化的裸眼井中浊度的评估。所有的测试进行了一式三份。

2.5。毒性试验

2.5.1。无节幼虫的毒性卤虫盐沼

的毒性试验卤虫盐沼(Leach)无节幼虫进行根据席尔瓦等改编的方法(34). .盐水的囊肿在30°C在人工孵化盐水(23 g / L的海盐和0.7 g / L的碳酸氢钠蒸馏水)。文化是保持在恒定的曝气和搅拌48小时孵化。之后,十无节幼虫被转移到包含人工海水管,用三种不同浓度的提取C。高寒草场:0.1,0.5,和1.5毫克/毫升。测试进行了一式三份。活和死无节幼虫的数是24小时后进行。消极的控制,只有人工使用生理盐水和积极控制,使用和月桂醇硫酸酯钠盐。计数活和死无节幼虫后,信用证₅₀和置信区间计算。

2.5.2。在洋葱基因毒性评价

的毒性试验。应变,特德斯科的方法论和Laughinghouse [35)与一些修改使用。8组5灯泡被放置在蒸馏水根48 - 72 h。之后,灯泡不同浓度处理的粗提取物(0.1,0.5,和1.5毫克/毫升)48 h,负控制的蒸馏水和积极的草甘膦2%。随后,根被收集并固定在ethanol-acetic酸(3:1)为另一个24小时。这一时期后,从固定的根被移除,包含70%的酒精用琥珀色玻璃瓶包装,储存在冰箱里,直到使用。

评价抗增殖潜力,胚根收集,在1 M盐酸水解5分钟,洗后在蒸馏水和沾2%醋酸地衣红。板是由破碎技术(36),研究了通过观察细胞周期的各个阶段(相间,前期,中期,后期,末期)借助光学显微镜40 x的目标。分析了1000个细胞/灯泡,总计5000细胞/治疗,和平均细胞细胞周期的每个阶段的数量值答:cepa计算。的决心有丝分裂指数(MI)是根据以下方程:

确定异常的百分比(一)执行根据方程(2):

2.6。动态行为分析

2.6.1。果蝇的股票

野生型黑腹果蝇获得国家物种证券中心、保龄球绿色,哦,美国。苍蝇被饲养在一个标准的玉米面粉饮食与酵母颗粒作为蛋白源在恒定的温度和湿度(22±1°C;分别为60%相对湿度)和黑暗在12 h / 12 h光周期。

2.6.2。存活率

确定存活率,苍蝇被暴露在不同浓度提取7天(15、20、25、30、35毫克/毫升)混合的饮食和评估通过计算每日活苍蝇的数量直到试用期的结束。每组80飞测试。的治疗,死苍蝇的数量记录,表示为一个百分比的幸存的苍蝇比控制(被认为是100%)。

2.6.3。百草枯曝光和c .高寒草场提取治疗

成年苍蝇,1-4-day-old,被分成以下组:NC:负控制蔗糖(1%);电子商务:提取控制(10毫克/毫升提取叶);和PC:积极的控制(PQ)约3毫米;治疗:T1: 3毫米PQ + 1毫克/毫升提取;T2: 3毫米PQ + 5毫克/毫升提取;T3: 3毫米PQ + 10毫克/毫升提取。苍蝇被暴露于治疗4天,瓶包含苍蝇保持在一个孵化器22±1°C和60%相对湿度和12 h黑/ 12 h光周期)在使用前在化验37]。接触PQ(3毫米)和不同浓度c .高寒草场提取浓度是基于生存曲线和对应于所需最小时间和浓度诱导显著运动赤字和毒性苍蝇。

2.6.4。负趋地性试验

传统的成年苍蝇爬化验使用负面影响趋地性分析(37]。苍蝇提交简短的冰层下麻醉和被放置在一个垂直空塑料瓶子(长15厘米,直径2厘米/ 10飞)。从寒冷暴露复苏后(约10分钟),苍蝇轻轻了底部的列。苍蝇的数量从底部上升到15厘米在8秒数。试验重复了六次,数据都表示为每复制6试验的手段。类似的措施也跟着进了控制。

2.7。统计分析

植物化学的分析和在体外抗氧化活性结果报告为±SD方法。体内和体外结果表示为±SEM手段。所有实验进行了一式三份。进行多重比较使用单向方差分析Bonferroni紧随其后的多重比较检验,和差异被认为是重要的时候 ,0.01和0.001。统计分析使用GraphPad Prism5软件。

3所示。结果

3.1。植物化学的分析

C的定性的植物化学成分分析。高寒草场物种表现出生物碱的存在,香豆素,第四纪基地、酚醛树脂、黄酮类、单宁和免费的类固醇。显然这些活跃的植物成份的存在表明,叶C。高寒草场有突出的抗氧化特性和药理作用的进一步探索。

3.1.1。高效液相色谱- DAD-MS化验

通过HPLC-DAD-MS分析结果显示六个可能的化合物存在于粗提取液c .高寒草场叶(表1)。山顶被确定通过比较获得的结果与软件的保留时间和质谱库和外部标准。

3.1.2。多酚、类黄酮和缩合单宁的内容

表2所获得的结果显示多酚(30.17毫克/克),类黄酮(21.64毫克/克),浓缩单宁(9.58毫克/克)在methanolic提取C。高寒草场叶子。这些化合物的存在表明,作为一种抗氧化剂材料。

3.2。体外抗氧化活性

3.2.1之上。DPPH和收紧的分析

抗氧化活性的结果用DPPH和收紧分析显示在表2b IC低₅₀观察到C。高寒草场叶(345.41±5.35μg / mL)意味着这个物种具有很高的DPPH自由基的抑制能力与少量的样本。同样的行为观察铁降低抗氧化能力分析(收紧(379.98±39.25)μg / mL)。

3.2.2。TBARS、蛋白质羰基和DCFH化验

三种不同浓度的c .高寒草场提取叶受到硫代巴比土(TBARS),蛋白质羰基和DCFH化验。

见图1,提取TBARS和羰基的浓度降低,以及中和过氧化氢自由基浓度三个测试(图1)。TBARS化验证明之间的显著差异的结果这三个样本的提取浓度显示值低于正面和负面的控制(图1(一))。它可以推断出,C。高寒草场叶具有抗氧化活性,防止脂质氧化。

根据统计结果,三种提取物浓度存在显著变化在蛋白质羰基含量显示在图1 (b)。叶子提取物预防的自然氧化损伤细胞,我。e,保护组织的蛋白质和脂质损伤。1毫克/毫升的浓度和10毫克/毫升呈现类似的结果和最大保护蛋白质的组织。

中和氧自由基的能力是决定使用DCFH试验(图1 (c))。结果表明,叶提取物能够降低氧自由基的活性。三种提取浓度测试现值低于控制,主要是为了0.1毫克/毫升的浓度。

3.2.3。TBARS由硫酸亚铁(FS)

为了验证下的物种研究的潜在保护硫酸亚铁引发的脂质过氧化,蛋黄作为脂质来源。通过这种方式,它可以观察到,没有增加浓度的丙二醛(MDA)的示例(图2),表明提取不产生脂质过氧化反应在三个浓度分析,不同的统计与消极控制和他们之间。关于治疗诱导的损伤(硫酸亚铁),发现最低浓度的提取是不能保护脂质过氧化反应,没有从积极的控制不同的统计。然而,对于1000的浓度μg / mL,观察减少MDA(有前途的结果),证明在这个浓度c .高寒草场叶提取物能够降低硫酸亚铁引起的脂质过氧化作用。

3.3。抗菌活性

评价抗菌活性的C。高寒草场叶在原油进行提取和己烷、氯仿,乙酸乙酯,丁醇分数。然而,只有积极的结果(抗菌活性)观察己烷分数(表3)。己烷分数显著抑制微生物e . epidermidis c . tropicalis c . glabrata和c krusei在1000年的浓度μ克/毫升。

3.4。毒性和基因毒性

的毒性c .高寒草场评估了卤虫盐沼(答:盐水湖)测定,分析无节幼虫的致死浓度为50% (LC₅₀)(表4)。在那之后,洋葱(答:cepa)测试执行与之前标准浓度卤虫盐沼。

的答:盐水湖测试表明,C.nutans叶呈现中度毒性(342.89μ指示LC g / mL)₅₀将近6倍的积极控制十二烷基硫酸钠(57.80μg / mL)。

基因毒性测试(图3)没有显示显著差异的MI叶浓度测试(图3(一个))与消极的控制,证明提取不干扰MI。异常的统计分析表明,三个浓度中提取(0.1,0.5,1.5毫克/毫升)进行测试,有显著性差异的草甘膦积极控制(图3 (b)),证明样品没有显示基因毒性答:cepa的根源。然而,在预防损伤的分析,可以观察到的三个叶浓度统计等于积极的控制,指示,对于这些浓度,提取无法防止草甘膦损害。

3.5。黑腹果蝇化验

3.5.1。生存

的致死浓度的测定c .高寒草场叶提取物,能杀死50% (LC₅₀)的测试人群常见的果蝇,黑腹果蝇(d .腹),这是毒性研究的基准浓度。在这项研究中,信用证₅₀的c .高寒草场叶提取获得的是24.83毫克/毫升五天后暴露浓度测试(图4)。这个结果表明,提取叶有一个低程度的毒性和建议可用于药理研究的未来。

3.5.2。百草枯曝光和c .高寒草场叶提取物治疗

百草枯(PQ 1 10-dimethyl-4 40-bipyridinium二氯化)是常用的在实验室里产生氧化应激。在活的有机体内PQ激进与氧气反应生成过氧化物阴离子,一个活性氧(ROS)。后方,过量的活性氧和损耗减少代理导致氧化应激,导致活性氧损伤脂质、蛋白质和DNA,可能导致细胞死亡(38]。在目前的研究中,苍蝇被暴露于治疗4天PQ(3毫米)c .高寒草场三个浓度提取叶(1、5、10毫克/毫升)。结果表明,提取叶片测试显示飞死亡率减少了大约40%与PQ(图5),证明提取能够防止PQ损害。

3.5.3。负趋地性试验

的使用c .高寒草场叶提取物治疗效果造成的运动系统(神经毒性效应)的使用除草剂PQ评估使用d .腹作为一个模型。PQ作为压力源的使用是证据确凿的文献中,影响神经系统,因此,运动系统(39]。

3种不同浓度的c .高寒草场叶提取物(1、5和10毫克毫升⁻¹)及其影响PQ neurostressor(3毫米)。负趋地性测定结果(图6)表明行为存在剂量依赖的相关性c .高寒草场提取运动活动。增加神经保护效应是随着浓度的提取。这行为是第一次观察到C.nutans物种。我们的研究小组(类似的效果观察40使用叶子花属叶提取和PQ)。

4所示。讨论

植物化学的筛查c .高寒草场叶子透露的存在多酚、类黄酮、生物碱、香豆素、浓缩单宁,第四纪基地,和免费的类固醇。没有观察到的研究在文献中证明这些植物成份的存在,无论是在属,只有香豆素类被Truiti和Sarragioto18)的物种。积极成果存在的类黄酮、香豆素类单宁,类固醇的粗提取液中被发现Tithonia diversifolia叶子和阴性皂苷(41),类似于我们的结果c .高寒草场属于同一家族。

色谱分析(HPLC-DAD-MS)显示methanolic提取的成分c .高寒草场叶子含有酚类化合物,大量的物质,从别人单分子具有高聚合度(42)和存在于蔬菜在自由形式或与糖(苷)和蛋白质(43]。酚类化合物分为三大组:黄酮类化合物和衍生品,酚酸(安息香酸、肉桂酸及其衍生物),和香豆素类44]。他们有各种各样的物质具有芳香环的存在一个或多个连接到至少一个氢氧自由基和/或其他替代品。它可分为根据酚环的数量和结构连接(45]。结果(表1)显示,酚酸是最丰富的多酚类物质的检测c .高寒草场奎尼酸叶提取物,4-phenylbutiric酸,isoferulic酸,5-hydroxyanthranilic酸,3-hydroxybenzoic酸、熊果苷。根据文献,奎尼酸是一种强有力的抗氧化剂46],王亚南[47,可以用来对抗前列腺癌(48]。研究表明,使用4-phenylbutirc酸氧化应激的调节减毒细胞损伤和充当了cytoprotector可能与抑制氧化应激(49]。杨et al。50]声称的能力乙醇蜂胶提取物作为抗氧化剂及其消除自由基是由于酚酸的存在,包括isofeluric酸。•克尔(51),研究艾犹太文物,观察到一个强大的自由基清除活性与抗坏血酸为这个活动酚和类黄酮酸的含量高,山中酚酸isofeluric酸的存在。熊果苷是植物的酚糖苷,众所周知的药用价值和广泛应用于化妆品。研究已经证明其抗真菌和抗氧化活性52和有效地用于治疗尿路感染53]。3-hydroxybenzoic酸,而不是二级植物代谢物,在绿茶中发现少量样品Gruz et al。54),这表明土壤中微生物的污染可能发生发现和/或动物排泄物。相似的结果可能会发生在我们的研究中。5-hydroxyanthranilic酸是一个包含部分香豆酸,咖啡,和阿魏酸,被发现在avenanthramides从燕麦中提取的有机分子,广泛用于化妆品(55]。定性分析的主要化合物的提取c .高寒草场叶子可能会是有用的澄清内容之间的关系的酚类化合物和总黄酮类化合物及其抗氧化能力。

黄酮类、单宁和酚类物质是植物与潜在的抗氧化活性成分,主要是因为他们作为自由基拾荒者(56]。关于这些代谢物的存在,没有量化研究在文献中发现,无论是对于物种Chaptalia属。获得的结果为单宁、黄酮和多酚c .高寒草场物种(表2)可以证明他们的流行作为泻药和bicheal内部和在局部准备伤害,创伤、出血(12,14),由于药物潜在的许多物种菊科家庭与高单宁和类黄酮浓度(57),因为他们的许多药用价值往往归因于这些次生代谢物。

Pretti et al。41)发现的类黄酮和多酚含量值t . diversifolia叶子,验证了在我们的研究中,只在单宁含量不同,发现在大的数量。Nalewajko-Sieliwoniuk et al。58)观察到酚类化合物的含量高methanolic芽提取物,主要的飞蓬属植物阿克利离开时,一个物种属于菊科家庭。此外,Johari和Khong [59)观察p . bleomethanolic提取酚类化合物含量(40.82毫克GAE / g)附近发现的c .高寒草场GAE树叶(30.17毫克/克)。作者证明了抗氧化能力高的物种有高含量的酚类化合物。

黄酮类化合物是一类多酚类物质,在植物次生代谢产物大量存在。这些化合物的药理的重要性,造成这个类的一些属性作为抗癌的,抗炎,antiulcerogenic、抗病毒60,抗诱变剂的抗氧化和抗菌作用[61年),抗过敏药、antihepatotoxic antiosteoporotic,甚至抗肿瘤(62年]。

如今,有很多兴趣跟踪植物或食物提取物的抗氧化活性研究可能的药用价值(63年]。评估的抗氧化活性,其中一个方法是DPPH (2-diphenyl-1-picrylhydraza)方法,其中最有效,简单,可靠在体外清除自由基的方法,有能力。DPPH是稳定的紫色有机氮自由基和最大吸收在515 - 520纳米的范围64年),降低集成电路₅₀,材料的抗氧化活性越高。对DPPH方法,提取的c .高寒草场留下了一个中间值(表2 b),表明适度提取物的抗氧化活性。为美国baccifera物种,中等强度的活动被描述在这65年由于高集成电路₅₀报告(118.31μg / mL)。崔et al。26)加强,由于原油中提取的化学物质的复杂性,有必要评价植物的抗氧化能力至少两个方法。

从这个意义上说,另一种方法是使用抗氧化活性评价铁降低抗氧化能力(收紧)方法;它被广泛应用在抗氧化分析是分析涉及到铁的还原^{3 +}对菲^{2 +}改变它的颜色,蓝色的抗氧化物质(27]。物种的还原能力获得以下研究是379.98±39.25μ表2 g / mL (b),展示了一个有前途的抗氧化能力,因为研究发现物种的同一家庭相似值的叶子t . diversifolia(334μg / mL),使用相同的方法,表现出抗氧化活性(41]。同一作者状态,减少活动的提取可能发生由于高含量的多酚,类黄酮和单宁。

评价氧化应激参数,粗提物的影响c .高寒草场叶子lipoperoxidation、蛋白质氧化和氧自由基的中和能力通过TBARS水平测定,蛋白质羰基,DCFH。结果表明,提取能够保护细胞不受蛋白质和脂质损伤,以及抑制oxygen-derived自由基的浓度三个测试,0.1,1,10毫克/毫升(数字1(一)- - - - - -1 (c))。Bahramikia et al。66年)观察原油(乙醇)提取的t . polium和c . rotunduns提取的显著影响蛋白质氧化抑制和脂质过氧化水平与控制。斯特维斯和静脉67年肯定,有证据表明,蛋白质氧化可能与脂质氧化有关。

图1(一)显示的效果c .高寒草场提取物对脂质过氧化水平根据TBARS化验没有诱导代理人的存在。这个代理的存在产生活性氧和氮物种(罗恩),这在自由基是主要的氧化剂。从这个意义上说,另一个TBARS测试了使用硫酸亚铁作为引发剂。结果表明提取到1000的巨大影响μg / mL,扭转诱导损伤(图5),从而避免脂质过氧化反应,可以被定义为一组生化事件产生的自由基对细胞膜的作用不饱和脂质,导致结构的破坏,代谢物交换机制的失败,和细胞死亡68年,69年]。氧化应激的结果从一个失衡的生成氧化化合物和抗氧化防御系统的作用。抗氧化防御机制旨在限制罗恩水平和控制细胞损伤的发生(70年,71年]。

Budni et al。72年),用同样的方法,粗提物的验证Tabebuia heptaphylla叶子sulphate-induced亚铁的减少脂质过氧化反应在三个不同浓度测试。相同的行为是观察到ethanolic提取的Mikania glomerata叶子,它能够减少诱导脂质过氧化反应(73年]。这两项研究被证实的抗氧化能力的物种,这印证了我们的研究。高在体外粗提物的抗氧化能力c .高寒草场叶子是由于活性物质如酚类化合物的存在和香豆素的存在73年),抗氧化化合物。这些结果与文献一致,常见的几类天然抗氧化物质,酚类化合物在植物近年来受到关注,因为它涵盖了一系列的物质,从简单的分子与聚合度高,证明酚酸抗氧化活性的抑制脂质过氧化反应(74年,75年]。

物种研究的粗提取液能显著降低氧化DCFH相比基组(图1 (c)),显示明显的抗氧化活性的三个浓度测试,这表明提取的c .高寒草场叶子能中和不同来源的罗恩。

也观察到类似的结果德家族et al。76年的粗提物诉Megapotamica叶子,这被认为是一种抗氧化剂的物种。减少氧化应激中观察到的效果c .高寒草场可以归因于提取的植物化学的成分。建议这种效果是由于多酚类物质的存在,类黄酮,和单宁发现,导致抗氧化活性也由于消除罗恩证明能力。法夫里et al。64年和宝拉等。77年]也观察到抗氧化活动在其他菊科物种在病理证实了这个家庭的广泛流行的使用与罗恩生产。

酚类化合物作为抗氧化剂的能力取决于内在因素,如自己的化学结构和氧化反应的强度(78年]。展示的重要的抗氧化活性methanolic提取的c .高寒草场叶子有积极与酚类化合物的存在之间的关系。研究表明,天然的抗氧化能力p . bleo叶提取物是高度相关的总类黄酮含量和总酚类化合物存在于植物(59]。确凿的结果c .高寒草场Taskin et al。79年)表明,答:grandifolia富含黄酮和酚酸的含量,可以是一个很好的天然植物来源的抗氧化剂。

在过去的二十年里,研究已经进行药用植物在不同的国家来证明其有效性,作为抗菌药物。Maddila和Hemalatha80年)报告说,全球抗菌耐药成为日益严重的公共卫生问题,因为细菌抵抗大多数可用抗菌报道。制药行业和新的生物技术公司正在加强努力发现新的抗菌在试图克服细菌耐药性80年]。从这个意义上说,原油提取的c .高寒草场叶子和他们的分数(正己烷、氯仿、乙酸乙酯和丁醇)进行了测试,但只有树叶的己烷提取是承诺对微生物(表3)。Truiti et al。19粗提取液和根的分数)测试c .高寒草场对金黄色葡萄球菌,大肠杆菌,和铜绿假单胞菌是提取容易金黄色葡萄球菌和耐大肠杆菌和铜绿假单胞菌。对提取物的抗菌活性c .高寒草场离开之前报道了海因里希et al。81年),他们观察到的行动大肠杆菌、枯草芽孢杆菌,和m .危害和Souza et al。17只有]报告行动枯草芽孢杆菌对其他微生物测试,包括大肠杆菌。我们的研究结果一致与Truiti et al。19),Souza et al。17显示阻力)大肠杆菌叶从结果中提取不同的海因里希et al。81年]。这种差异在提取相同的微生物的作用可能与不同的提取技术。叶提取物能够抑制微生物的生长是由次生代谢产物在植物细胞的存在82年]。根据Janovik et al。83年],单宁酸植物在民间医学用作防腐剂,因为他们的作用机制的基础是能够沉淀蛋白质,形成tannin-protein复杂在受损组织防止微生物的发展。。因此,我们可以推断出,低单宁含量的提取c .高寒草场叶子是不够的,有很好的抗菌的潜力。

的卤虫盐沼(答:盐水湖)毒性实验是生物分析认为是使用最广泛的工具之一的初步毒性评估植物提取物(84年]。植物提取物具有高毒性答:盐水湖建议高潜在生物活性,这是非常有用的使用生物测定的方向寻找生物活性物质(植物化学的研究85年]。从这个意义上说,信用证₅₀(342.89μg / mL)发现的提取c .高寒草场叶子(表4)表明它有中等毒性。根据NGUTA et al。86年),有机提取物和水提取物与LC₅₀值低于100μg / mL有很高的毒性,信用证₅₀在100年和500年之间μg / mL有中等毒性,信用证₅₀在500年和1000年之间μg / mL低毒性和LC₅₀超过1000μg / mL被认为是无毒的。类似的结果被发现的methanolic提取Callicarpa candicans(马鞭草科)与LC叶子₅₀383.9μg / mL也抗菌活性(82年]乙醇提取的干细胞及其留下的Dasyphyllun tomentosum(87年),Neurolaena兜水母目叶子(81年),而Mikania cordata叶子(88年),他们提出了适度的毒性和使用没有毒性答:盐水湖模型,它属于菊科家庭和有抗菌和抗肿瘤的潜力。

由于其与其他基因毒性分析,可靠性和协议洋葱(A.cepa)测试系统通常用于药用植物的基因毒性的初步评价35,89年]。药用植物上注入的影响答:cepa细胞周期已报告了作者(90年,91年,92年),这表明,诱变和antimutagenicity发生的主要影响,以及增加和减少细胞增殖的根技巧处理不同种类的药用植物。的叶子的提取c .高寒草场不抑制细胞有丝分裂指数和没有造成异常浓度进行了测试(图2),因此没有抗增殖效果或基因毒性答:cepa细胞。使用相同的方法,Frescura et al。93年没有发现基因毒性和抗增殖作用的叶子和树皮Luehea衣属鸦葱,同样的行为观察的提取大戟属植物hirta(94年),Icacia trichantha叶提取物(95年),而苋属spinosus水提取物(91年]。关于防止草甘膦损害的能力,该物种在研究没有前途,但并未导致染色体异常,证明其广受欢迎的使用不会导致细胞损伤。因此,它可以表示答:盐水湖毒性生物测定和答:cepa基因毒性试验是有效的获得初步结果的潜在毒性c .高寒草场。此外,这些提取物的分离可以帮助在他们的安全评价,以确认使用这种植物的安全。

作为第一个模型来评价提取是LC的毒性₅₀分析与答:盐水湖,这是一个简单,快速,便宜的模型。这是证明所需的浓度杀死一半的个人是6倍与积极的控制浓度,证明提取对该模型低毒性。因此,寻找一个更复杂的实验模型,d .腹使用,这是一个在活的有机体内生物被广泛使用作为一个实验模型,提出一系列的优点,如短生命周期,低维护成本,易于处理。除了它的基因组测序(96年)及其研究中枢神经系统,它是由约1000个神经细胞,使之成为一个伟大的模型来评估植物提取物毒性,神经毒性和神经退行性疾病40,97年,98年]。

的毒性c .高寒草场提取物对d .腹,它是发现,直到15毫克/毫升的浓度的提取没有毒性和信用证₅₀获得24毫克/毫升(图4),遥远的值中使用的浓度对氧化应激防御测试。布里托初级et al。99年粗提物的验证巴豆定留下了信用证₅₀26.51毫克/毫升的4天的治疗后,约为发现c .高寒草场在5天的治疗,表明该物种在研究是安全的,因为它需要一个非常高的浓度,是有毒的,表明它可能的药理应用提取在未来。

通过这种方式,methanolic提取的影响c .高寒草场叶子d .腹中毒和运动造成的损害PQ除草剂进行了测试,被广泛用作压力源代理行为和中毒测试。在过去的十年中,PQ的毒性已被描述在该除草剂负责重要的脑损伤和死亡的个体急性照射后(One hundred.)非常有用对于评估神经保护化合物对运动障碍和PQ-induced神经退化(101年]。的提取c .高寒草场叶子被证明是有效地扭转飞中毒(图上除草剂的作用5),死亡率降低了40%,反向运动损伤(图的能力6PQ引起的),因为更好的飞行性能在攀登更高的浓度,表明提取有能力防止PQ引起的死亡率和脑损伤。苏亚雷斯et al。40观察到类似的结果的行动叶子花属glabra提取物能够降低死亡率和神经毒性的使用时苍蝇与PQ。同时,发现Decalepis hamiltonii根提取物能够防止苍蝇死亡率和PQ-induced运动障碍(39]。不同的结果巴豆定hydroalcolic提取观察和有毒,管理与PQ,增加死亡率,以及改变飞行的运动行为(99年]。

接触PQ除草剂被认为是一个主要危险因素为神经退行性疾病的表现。PQ神经毒性是由于其循环氧化还原作用产生大量的活性氧(ROS)导致氧化应激(40]。结果表明,三个浓度用于防止PQ损害有效地降低死亡率(图5)和提高运动能力(图6),众所周知,这些效应引起的PQ来自氧化应激,几项研究,认为氧化应激是PQ-induced毒性的主要机制(96年]。这些结果表明,好的在体外抗氧化活性可能与PQ损伤的保护作用在活的有机体内模型。这是合理的抗氧化化合物的提取,因为酚类化合物存在于植物的氧化还原性质,充当抗氧化剂(59),和他们对PQ的保护作用已被证明(39]。

结果显示细胞毒性、神经毒性、抗氧化能力,和HPLC-DAD-MS化验,methanolic提取的c .高寒草场叶子可作为天然抗氧化剂的来源,然而,额外的在体外研究,如细胞岩屑和在活的有机体内啮齿动物和水生物种。此外,需要进一步的研究来揭示提取是否可以降低其他不正常因素参与神经退化的过程。

5。结论

本研究以一种前所未有的方式演示的粗提物c .高寒草场叶子富含酚类化合物和黄酮类和有能力消除活性氧的来源不同,以及提出了低毒性和缺乏表示细胞和基因毒性。因此,建议之间有一个合作的化学成分提取、尤其是酚类化合物,高的抗氧化能力演示了通过不同的分析技术和提取的神经保护作用,它能够防止氧化损伤和运动d .腹PQ所致。因此,我们的研究结果为天然抗氧化剂的可能发展经过进一步研究化合物的分离和更具体的调查,说明提取的行动的机制更复杂的细胞和生物体的水平,以及其药理评价。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

所有作者的贡献同样这项工作。

确认

作者感谢CNPq、披肩和FINEP机构。

引用

1. v . k . Yadav,“植物化学的和生药学的研究艾纳香属lacera”,国际绿色医药杂志》上,12卷,不。1,2018。视图:谷歌学术搜索
2. X.-R。田,J.-T。冯,Z.-Q。马et al .,“三全植物的新苷铁线莲lasiandra格言及其细胞毒性,“植物化学信,10卷,第172 - 168页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. d . Egamberdieva n . Mamedov e . Ovidi a . Tiezzi和l .秧鸡”的植物化学成分和药理属性来自乌兹别克斯坦的药用植物:复习一下,”活跃的药用植物杂志》上,5卷,不。2,59 - 75年,2016页。视图:谷歌学术搜索
4. s . Pradeepa s萨勃拉曼尼亚,诉Kaviyarasan”antimicorbial活动的评价Pithecellobium甜酒豆荚浆提取。”亚洲制药和临床研究杂志》上7卷,32-37,2014页。视图:谷歌学术搜索
5. m·c·c·艾尔斯·m·h·查维斯d . w . Vilegas雷纳尔多和通用维埃拉初级Constituintes quimicos e atividade antioxidante de extratos das folha de榄仁树属fagifolia集市。调查。”Quimica新星,32卷,不。6,1509 - 1512年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. b . Ulewicz-Magulska和m . Wesolowski”总酚含量和抗氧化潜力的草药用于医疗和烹饪用途,”人类营养的植物性食物,卷74,不。1,第67 - 61页,2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. s·m·l·塞·伐斯冈萨雷斯,他的m·o·f·Goulart j·b·f·莫拉诉Manfredini m . s . Benfato和l . t .日本久保田公司“Especies reativas de oxigenio e de nitrogenio抗氧化剂维生素e marcadores de端午”Quimica新星,30卷,第1338 - 1323页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. j·h·r·克拉克,s m . k .利率和r . Bridi“嗯alerta尤其uso o de produtos de origem植物na gravidez”Infarma,19卷,不。1 - 2,41-48,2007页。视图:谷歌学术搜索
9. g . l . Nesom”的修订Chaptalia(菊科:mutisieae)从北美和中美洲,大陆”Phytologia,卷78,不。3、153 - 188年,1995页。视图:谷歌学术搜索
10. k·g·Kissmann和d .,足底Infestantes e Nocivas、巴斯夫、圣保罗,巴西,第二版,1997年版。
11. h . Lorenzi和f·j·a·马托斯足底Medicinais没有巴西:Nativas e新奇Cultivadas研究所的杆菌,Nova敖德萨,巴西,2002年。
12. a·l·卡布瑞拉和r·m·克莱恩”Compostas-tribo mutisieae,”植物Ilustrada Catarinense,艾德。r .那个宿舍叫赖茨Herbario巴博萨罗德里格斯,伊塔雅伊,巴西,1973年。视图:谷歌学术搜索
13. m·p·科雷亚”Dicionario das足底uteis巴西e das新奇cultivadas,“国民Imprensa里约热内卢,巴西,1984。视图:谷歌学术搜索
14. e . Pasini l . Katinas m·r·里特,”O genero chaptalia(菊科,mutisieae)没有南里奥格兰德,巴西,“Rodriguesia,卷65,不。1,第158 - 141页,2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. c . b . Empinotti和m . r . Duarte”特征anatomicos de arnica-do-campo:Chaptalia高寒草场”,Acta Farmaceutica Bonaerense25卷,第338 - 333页,2006年。视图:谷歌学术搜索
16. b . Badilla、g·莫拉和l . j . Poveda“水提取物的抗炎活性五哥斯达黎加药用植物Sprague-Dawley老鼠,”航空杂志上Biologia热带47卷,第727 - 723页,2000年。视图:谷歌学术搜索
17. g . c . Souza a·p·s·哈斯·g·l·冯·难题e·e·s . Schapoval和e . Elisabetsky”Ethnopharmacological巴西南部的抗菌药物的研究,”民族药物学杂志卷,90年,第143 - 135页,2004年。视图:谷歌学术搜索
18. m . d . c . t . Truiti和m . h . Sarragiotto“三5-methylcoumarinsChaptalia高寒草场”,植物化学卷,47号1,第99 - 97页,1998。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. m . c . t . Truiti m . h . Sarragiotto b a·阿伯球场,c . v .中村和b·p·迪亚斯球场,”7-O-beta-Dglucopyranosyl——nutanocoumarin的体外抗菌活性Chaptalia高寒草场(菊科),“Oswaldo Cruz记忆做网页,卷98,不。2、文章ID 283286, 2003。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. n . Osafo k的射门,o·科菲•Yeboah”的植物化学成分和药理的回顾Cryptolepis sanguinolenta(采用)。阿。”药理科学的进步ID 3026370条,卷。2017年,13页,2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. f·j·a·马托斯Introducao Fitoquimica实验,Edicoes终极格斗冠军赛,福塔雷萨,巴西,第3版,2009年版。
22. 钱德拉和e·冈萨雷斯de Mejia”,多酚类化合物、抗氧化能力和醌还原酶活性水提物的管理compressain比较交配(冬青属paraguariensis)和绿色(茶树)茶,”农业与食品化学杂志》上,52卷,不。11日,第3589 - 3583页,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. r . g . Woisky和a . Salatino”分析蜂胶:一些参数和化学质量控制程序”《学研究工作,37卷,不。2、99 - 105年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. 莫里森,e·a·Asiedu t . Stuchbury和a . a·鲍威尔“木质素和单宁含量测定豇豆种子的外套,“《植物学,卷76,不。3、287 - 290年,1995页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. r·f·维埃拉r . j .灰色的a·佩顿和j·e·西蒙,”基因的多样性罗勒属gratissimuml根据挥发油成分,黄酮类和RAPD标记”,生物化学分类学和生态学卷,29号3、287 - 304年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. 崔c·w·s . c . Kim s s黄et al .,“抗氧化活性和自由基清除能力由assay-guided韩国药用植物和类黄酮之间的比较,“植物科学,卷163,不。6,1161 - 1168年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. m . s . m . Rufino r·e·阿尔维斯·e·s·布里托et al .,Metodologia Cientifica: Determinacao da Atividade Antioxidante总em举Pelo Metodo de Reducao做铁(捆牢),Comunicado Te cnico。巴西,巴西利亚,senior德尽管Agropecuaria, 2006。
28. h . Ohkawa: Ohishi, k .八木”测定动物组织中脂质过氧化物,硫代巴比土酸反应,”分析生物化学,卷95,不。2、351 - 358年,1979页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. w . Vyncke”,直接测定硫代巴比土酸值trichloracetic酸提取的鱼来衡量氧化酸败,”Fette、Seifen Anstrichmittel,卷72,不。12日,第1087 - 1084页,1970年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. r·l·莱文·d·加兰,c·n·奥利弗et al .,“氧化改性蛋白质羰基含量测定”,氧自由基在生物系统B部分:氧自由基和抗氧化剂卷,186年,第478 - 464页,1990年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. o . Myrhe j·m·安徒生h . Aarnes和f . Fonnum评估探测器2′7′二乙酸-dichlorofluorescin、鲁米诺和lucigenin作为活性物种形成的指标,“生化药理学,卷65,不。10日,1575 - 1582年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. CLSI-Clinical实验室标准协会,稀释方法为细菌药敏测试从有氧锻炼成长国家临床实验室标准委员会,韦恩,宾夕法尼亚州,美国,2012年。
33. CLSI-Clinical和实验室标准协会,参考方法肉汤稀释抗真菌敏感性测试酵母美国宾夕法尼亚州韦恩CLSI,第3版,2008年版。
34. l·l·席尔瓦·c·g . Heldwein l . g . b . Reetz r·霍纳c . a . Mallmann和b . m . Heinzmann Composicao quimica, atividade antibacteriana体外e toxicidade em卤虫盐沼油压实质das inflorescencias德吗罗勒属gratissimuml,Lamiaceae,”航空杂志上Brasileira de Farmacognosia,20卷,不。5,700 - 705年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. s b·特德斯科和h . d . Laughinghouse IV”基因毒性的生物学指标:洋葱测试”,环境污染InTech, j·k·斯利瓦斯塔瓦,Ed的哲理,里耶卡,克罗地亚,2012。视图:谷歌学术搜索
36. m . Guerra和m·j·苏扎科莫Observar Cromossomos:嗯Guia de Te cnica em Citogenetica植物,动物e胡玛纳、FUNPEC圣保罗,巴西,2002年。
37. j·j·苏亚雷斯,m . b . Goncalves m . c .华美的et al .,“连续液体喂养:新方法研究农药的毒性黑腹果蝇”,分析生物化学卷。537年,60 - 62、2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. t . z Rzezniczak l·道格拉斯j·h·沃特森和t·j·s·梅里特,”百草枯管理果蝇用于代谢氧化应激的研究。”分析生物化学,卷419,不。2、345 - 347年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. s . r . Jahromi m . Haddadi t . Shivanandappa和s·r·拉梅什”的神经保护作用Decalepis hamiltonii该文就近年来关于百草枯所致神经毒性的发生在黑腹果蝇:生化和行为证据,”神经化学研究,38卷,不。12日,第2624 - 2616页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. j·j·苏亚雷斯,d·t·罗德里格斯,m . b . Goncalves et al .,“百草枯exposure-induced帕金森病症状和氧化应激黑腹果蝇:神经保护作用叶子花属glabraChoisy。”生物医学和药物治疗卷,95年,第251 - 245页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. i r . Pretti a·c·d·鲁兹c·m·贾马尔和m . d . c . p . Batitucci“生化变化和抗氧化活性的物候阶段Tithonia diversifoliaHemsl。(菊科)人群,“工业作物和产品卷,121年,第249 - 241页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. l·布拉沃,“多酚:化学、膳食来源、代谢和营养意义,”营养评价卷,56号11日,第333 - 317页,1998年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. k·d·克罗夫特,”黄酮和酚的化学和生物效应acidsa,”纽约科学院上卷,854年,第442 - 435页,1998年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. s e·苏亚雷斯”类药物fenolicos科莫抗氧化剂,航空杂志上Nutricao,15卷,不。1,第81 - 71页,2002。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. d·m·d·奥利维拉和d·h·m·巴斯托斯“Biodisponibilidade类fenolicos,”Quimica新星,34卷,不。6,1051 - 1056年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. r·w·佩罗、h·隆德和t . Leanderson“抗氧化代谢奎尼酸引起的尿排泄增加色氨酸和烟酰胺,”植物疗法的研究,23卷,不。3、335 - 346年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. t,张齐兵。熊,ai Ketut et al .,“研究肝细胞保护活动和奎尼酸和咖啡酸衍生物的结构活性关系的花蕾金银花bournei”,足底》,卷67,不。4、322 - 325年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. l . Inbathamizh和大肠Padmini奎尼酸作为前列腺相等比较有力的候选药物药代动力学的方法,”亚洲制药和临床研究杂志》上》第六卷,第112 - 106页,2013年。视图:谷歌学术搜索
49. h·魏S.-J。金,z . Zhang et al .,“ER和氧化压力是常见的细胞凋亡在神经退行性和non-neurodegenerative介质溶酶体储存障碍和减轻化学陪伴,”人类分子遗传学,17卷,不。4、469 - 477年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. h·杨,y, h·杜h·史和李x, y Peng”从中国在安徽、收集的蜂胶抗氧化化合物,”分子,16卷,不。4、3444 - 3455年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
51. r . o .•克尔”埃及的显微镜和植物化学的调查艾犹太文物l . var. sinaitica tackholm及其自由基清除活性,”国际期刊的生药学和植物化学的研究》第六卷,没有。4、698 - 703年,2015页。视图:谷歌学术搜索
52. m . Azadbakht a·马斯顿k . Hostettmann m .他和m . Jahromi Maghddam,“叶提取物的生物活性和phenologlycoside熊果苷Pyrus boisserianaBuhse。”《药用植物,3卷,不。10日,9-14,2004页。视图:谷歌学术搜索
53. j .第五名的K.-A。柯伐,p .链接,h . Hamacher“尿排泄的熊果苷代谢产物熊果叶提取物口服后,“足底》,卷71,不。2、147 - 152年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
54. j . Gruz o·诺瓦克,m . Strnad”快速分析中的酚酸饮料UPLC-MS /女士,”食品化学,卷111,不。3、789 - 794年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
55. l·麦基、f . Liebel和m .索思豪尔”成分抑制或减少发炎的皮肤,”2007年,专利申请出版。视图:谷歌学术搜索
56. 的摄影记者c . m . o . e . p . Schenkel g . Gosmann j·c·p·梅洛l . a . Mentz和p . r . PetrovickFarmacognosia da足底ao Medicamento,Editora哒UFSC,弗洛,巴西,第六版,2010年版。
57. s c·桑托斯·w·f·科斯塔j·p·里贝罗et al .,“单宁成分barbatimao物种,”Fitoterapia,卷73,不。4、292 - 299年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
58. e . Nalewajko-Sieliwoniuk a . Pliszko j . Nazaruk e . Barszczewska和w·Pukszta”四个分类群的酚类化合物进行比较分析飞蓬属植物阿克利s l。(菊科)。”Biologia,卷74,不。12日,第1577 - 1569页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
59. m·a . Johari和h . y . Khong“总酚含量和抗氧化和抗菌活性Pereskia bleo”,药理科学的进步卷,2019篇文章ID 7428593, 4页,2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
60. e . m . Granato m . m . Granato m . m . Gerenutti g·席尔瓦·h·o . Ferraz和m . m . d . c .维拉”Prospeccao fitoquimica da especie植物Trixis antimenorrhoea Kuntze(双门衣柜),“航空杂志上Brasileira de Farmacia,卷94,不。2、130 - 135年,2013页。视图:谷歌学术搜索
61. l·巴尔德斯a Cuervo博士:萨拉查,p . Ruas-Madiedo m . Gueimonde和s·冈萨雷斯,“从饮食和微生物群酚类化合物之间的关系:对人类健康的影响,”食品与函数》第六卷,没有。8,2424 - 2439年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
62. s . v . f .化为p c . l . Nogueira和s . v . r . s . Morae”Aspectos quimicos e biologicos做genero Lippia enfatizando Lippia Schauer股薄肌,“Ecletica Quimica杂志,36卷,不。1,第77 - 64页,2011。视图:谷歌学术搜索
63. m·a .甘尼c . Barril d·r·Bedgood和p·d·Prenzler”发展适合大规模筛选的方法测定抗氧化活性亚油酸乳状液,”抗氧化剂,8卷,不。9,366年,页2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
64. r·l·法夫里m . s . Nogueira l . b .南美洲m . l . m . Bouzada大肠新办,“潜在antioxidante e antimicrobiano de especies da“菊科,”航空杂志上Brasileira de足底Medicinais,13卷,不。2、183 - 189年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
65. a . l . Gindri l . b . de Souza r·c·克鲁兹a . a . Boligon m . m . Machado和m . l . Athayde”基因毒性评价、次生代谢物,根和叶的抗氧化能力Urera bacciferaGaudich(荨麻科),“天然产物的研究,28卷,不。23日,第2216 - 2214页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
66. s . Bahramikia a Ardestani, r . Yazdanparast”保护作用四个伊朗药用植物反对自由radical-mediated蛋白质氧化,”食品化学,卷115,不。1,37-42,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
67. m .这几年会和r .静脉,”迷迭香精油的有效性作为一个脂质和蛋白质氧化抑制剂:矛盾的影响在不同类型的法兰克福香肠,”肉类科学,卷72,不。2、348 - 355年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
68. i . f . f . Benzie“脂质过氧化作用:审查的原因,后果,测量和饮食的影响,“国际食品科学与营养杂志》上卷,47号3、233 - 261年,1996页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
69. E。美国利马和d s p·阿布达拉Peroxidacao lipidica: mecanismos e avaliacao em amostras biologicas,”巴西制药科学杂志》上,37卷,不。3,2001。视图:谷歌学术搜索
70. k·b·f·巴博萨n·m·b·科斯塔r . d . c . g . Alfenas s . o . de Paula v . p . r .二分音符和j . Bressan”Estresse oxidativo: conceito, implicacoes e因子modulatorios,”航空杂志上Nutricao,23卷,不。4、629 - 643年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
71. 诉二叠纪、大肠Junn和m . m .额度远远没“氧化应激在帕金森病的作用,“帕金森病杂志》上,3卷,不。4、461 - 491年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
72. p . Budni f . c . Petronilho诉Citadini-Zanette et al .,“Estudos preliminares da atividade antioxidante做extrato hidroetanolico de folha jovens e adultas deTabebuia heptaphylla(好。)托莱多(ipe-roxo)。”拉丁美洲的药学杂志》上,26卷,不。3、394 - 398年,2007页。视图:谷歌学术搜索
73. l·c·l·r·桑塔纳o·a·席尔瓦·m·r·m·布里托et al .,“Avaliacao潜在antioxidante, atividade antimicrobiana e antihelmintica做extrato etanolico padronizado das folha deMikania glomerataSprengel。”航空杂志上Brasileira de Farmacia,卷94,不。2、120 - 129年,2013页。视图:谷歌学术搜索
74. r·r·d·s .代理诉g·a·阿尔梅达e·m·f·席尔瓦et al .,“潜在antioxidante e antibacteriano做extrato etanolico de足底美国科莫底盘,”航空杂志上Semente》第六卷,没有。6,240 - 249年,2011页。视图:谷歌学术搜索
75. m·m·桑蒂f·s . Sanches j·f·m·席尔瓦和p . m . l .桑托斯“Determinacao perfil fitoquimico de extrato com atividade antioxidante da especie药用科迪亚verbenacea直流。为什么HPLC-DAD。”航空杂志上Brasileira de足底Medicinais,16卷,不。2、256 - 261年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
76. t·德家族,m . Zadra m·et al .,“高效液相色谱法分析叶子的酚醛树脂化合物和抗氧化能力牡荆megapotamica(Sprengel) Moldenke。”分子,18卷,不。7,8342 - 8357年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
77. c . s . Paula v c, d . Canteli m . c . s . Verdam et al .,“Atividade antioxidante e toxicidade preliminar做extrato e fracoes obtidas das folha e cascas caule deDasyphyllum tomentosum(Spreng)。卡布瑞拉。”航空杂志上Brasileira de足底Medicinais,16卷,不。2、189 - 195年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
78. m·n·隆德m . Heinonen c·p·巴伦和m .这几年会”在肌肉蛋白质氧化食物:复习一下,”分子营养与食品研究,55卷,不。1,第95 - 83页,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
79. d . Taşkin d . b . Alkaya和大肠Dolen评价主要酚类化合物的抗氧化能力和分析蓍属grandifolia通过HPLC-DAD Q-TOF LC / MS确认。”清迈的科学》杂志上,45卷,不。1,第298 - 287页,2018。视图:谷歌学术搜索
80. Maddila和k . p . j . Hemalatha“植物化学的筛查和在体外原油叶提取物的抗菌性Wrightia tinctoriaR.Br。”国际目前的微生物学和应用科学杂志》上》第六卷,没有。1,第720 - 707页,2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
81. m·海因里希·m·Kunhnt c·w·赖特,h .涟漪,j·d·菲利普森和a . Schandelmaier低地mixe印度药用植物:寄生虫学的和微生物评价和初始的植物化学的研究Chaptalia高寒草场”,足底》57卷,1991。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
82. k . Nurtjahja t . b . Kelana d Suryanto et al .,“抗菌活性的特有的药草tangkahan保护森林北来华朝贡细菌和酵母,”协议生物科学杂志》,20卷,不。4、177 - 181年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
83. 诉Janovik, a . a . Boligon a·c·Feltrin d·f·佩雷拉j . k . Frohlich和m . l . Athayde Doseamento de polifenois黄酮类e taninos没有extrato bruto e fracoes deCariniana释放有(集市)。迈尔斯。”Saude(圣玛丽亚),35卷,不。2、25 - 28,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
84. p . d . a .•萨尔门托·t·d·r·Ataide a·p·f·巴博萨x j . d . Araujo-Junior i m . l .卢西奥和m·l·d·a·巴斯托斯”提取评价Zeyheria tuberculosa为伤口愈合产品,”航空杂志上Latino-Americana de Enfermagem,22卷,不。1,第172 - 165页,2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
85. c·b·d·Amarante a·h·穆勒m . m . Povoa和m . f . Dolabela Estudo fitoquimico biomonitorado pelos ensaios de toxicidade前面卤虫盐沼e de atividade antiplasmodica caule de aninga (Montrichardia linifera),“Acta Amazonica第41卷。。3、431 - 434年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
86. j . m . Nguta j . m . Mbaria d . w . Gakuya p . k . Gathumbi j . d . Kabasa和s . g . Kiama生物筛选肯尼亚药用植物使用卤虫盐沼(Artemiidae),“Pharmacologyonline,2卷,第478 - 458页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
87. ·马约加k·r·佩雷斯·s·m·克鲁斯,a·卡塞雷斯和a·卡塞雷斯”比较使用anostracan甲壳类生物卤虫盐沼和Thamnocephalus platyurus植物提取物的毒性筛选。”航空杂志上Brasileira de Farmacognosia,20卷,不。6,897 - 903年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
88. 的长子,a . a . a . Khatun m . s .拉赫曼和m·拉赫曼”评价的植物化学成分和药理性质Mikania cordata(菊科)叶子,“生药学和植物疗法》杂志上,3卷,不。8,118 - 123年,2011页。视图:谷歌学术搜索
89. m·d·Bagatini a·c·f·d·席尔瓦和s b·特德斯科Uso”做sistema证人de洋葱科莫bioindicador de genotoxicidade de infusoes de足底medicinais,”航空杂志上Brasileira de Farmacognosia,17卷,不。3、444 - 447年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
90. j . c . Chukwujekwu和j . Van Staden水提取物的“细胞毒性、基因毒性的影响Distephanus angulifolius在洋葱林。”南非植物学杂志》上卷,92年,第150 - 147页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
91. 诉Prajitha和j . e . Thoppil”基因毒性和antigenotoxic潜在水叶中提取的苋属spinosus林恩。使用洋葱化验。”南非植物学杂志》上卷。102年,15岁至25岁2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
92. c·a·l .嘘m . Pasqualli k·c·特拉普et al .,“Atividade antiproliferativa e determinacao dos compostos fenolicos de extratos aquosos amoreira-preta (悬钩子属植物sp)pelo sistema证人体内de洋葱L。”航空杂志上Brasileira de Biociencias,15卷,不。1,43-48,2017页。视图:谷歌学术搜索
93. 诉D.-S。Frescura、h·d·Laughinghouse和s b·特德斯科树的“抗增殖效应和药用物种Luehea衣属鸦葱在洋葱细胞周期。”Caryologia,卷65,不。1,即,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
94. k .玉萍Darah,英国优素福,c . Yeng和s . Sasidharan”的基因毒性大戟属植物hirta:一个洋葱化验。”分子,17卷,不。7,7782 - 7791年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
95. o . Timothy m . Idu的d . i Olorunfemi o . Ovuakporie-Uvo,“叶中提取的细胞毒性和基因毒性属性Icacina trichantha摘要采用。”南非植物学杂志》上卷,91年,第74 - 71页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
96. 机票的。金,J.-W。荣格,Y.-J。安、l . l . Restifo H.-W。Kwon“果蝇作为模式系统研究寿命和神经活动的植物化合物”亚太地区昆虫学杂志》,14卷,不。4、509 - 517年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
97. j . h . Sudati f·a·维埃拉帕文et al .,”缬草officinalis变弱的rotenone-induced毒性黑腹果蝇”,神经毒理学37卷,第126 - 118页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
98. 英国应,a . k .女子。”黑腹果蝇“潜在的生物模型”的识别植物的药理特性/植物的成分,”生物医学和药物治疗卷,89年,第1345 - 1331页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
99. f·e·b·小g·e·马赛,a . p . Zemolin et al .,”croton campestrisin氧化剂的效果和毒性黑腹果蝇”,生物制药,54卷,不。12日,第3077 - 3068页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
100. t . Blanco-Ayala a . c . Anderica-Romero和j . Pedraza-Chaverri”新的见解抗氧化剂策略对百草枯中毒自由基的研究,48卷,不。6,623 - 640年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
101. s . Niveditha s r·拉梅什该文就近年来关于百草枯所致运动障碍发生,t . Shivanandappa与氧化stress-mediated大脑中的神经退化黑腹果蝇”,神经化学研究,42卷,不。11日,第3320 - 3310页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2020 Letiele de Souza勃拉克等。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。