夹竹桃茎和根标准化提取物减轻急性高血糖症通过限制系统性糖尿病大鼠氧化应激反应

文摘

不同部位的提取物夹竹桃夹竹桃l .用作抗糖尿病的药物在世界不同地区的传统医学体系。尽管ethnomedicinal系统这些用途,夹竹桃的降糖药势茎(鼻子)和根(诺尔)提取没有药物评估。因此,我们旨在评估抗糖尿病的鼻子和诺尔ethnomedicinal声称,主要专注于葡萄糖稳态和相关代谢的影响。Alloxan-treated小鼠的高血糖(血糖> 200 mg / dL)夹竹桃对待70% hydromethanolic提取连续20天(200毫克/公斤),用积极控制格列本脲和结果进行了比较。降低血糖水平是52 - 65% ( )夹竹桃治疗组,否则在糖尿病小鼠高4.62倍,而控制。胰岛素抵抗是降低无论任何重大(51 - 36% )整个治疗的胰岛素敏感性的变化。提高血清胰岛素仍与降低血糖水平(r_P=−−0.847和0.772; )。标记的hyperglycaemia-related肝糖原,糖化血红蛋白(HbA1c), hyperlipidaemia,肝脏损伤,糖尿病肾病是规范化。改善系统内在抗氧化酶(过氧化氢酶和过氧化物酶)相关(r_P0.952 =−−0.773; )较低的脂质过氧化反应副产物丙二醛(MDA)的循环。主成分分析结合层次聚类分析代表代谢的变化在糖尿病小鼠体内平衡,进一步规范化的夹竹桃和格列本脲治疗。此外,酚酸的分子对接研究用高效液相色谱法与细胞内cytoprotective转录因子核转录因子红细胞两个相关因子2 (Nrf2)显示强烈的分子相互作用。结果集体支持民族医学抗糖尿病的夹竹桃的茎和根和表明系统性抗氧化状态的夹竹桃介导海拔可能负责改善血糖控制。

1。介绍

糖尿病(DM)是一种系统性疾病,主要表现为葡萄糖稳态的损失,受损的胰岛素信号,碳水化合物,脂类代谢,最终导致进行性系统性并发症如高血脂、高血糖症,肾病,肝脏损伤,血管功能障碍等。全球糖尿病患病率在过去的30年里翻了两番1]。预计恶化基于估计将有6.42亿人患有糖尿病,和一个额外的4.81亿年将遭受葡萄糖耐量2040年底(2]。

夹竹桃夹竹桃l . (syn。夹竹桃indicum机和夹竹桃odorum爱)是一种ethnomedicinal灌木用于治疗糖尿病并发症在印度、巴基斯坦、阿尔及利亚和摩洛哥,和它的药用价值也承认在阿育吠陀(3]。之前的生药学研究表明夹竹桃在200毫克/公斤/天降低高胰岛素血症和高血糖症与衰减糖尿病老鼠的肝毒性(体外实验4]。Methanolic确切的夹竹桃叶也改善了alloxan-induced糖尿病通过提高抗氧化酶和限制老鼠体内的脂质过氧化5]。这些好处随着血糖控制是不分类型的提取夹竹桃叶之前的报告表明,一些分数限制高血糖症的老鼠(6]。

然而,尽管其巨大的传统治疗用途,生药学的研究主要集中在它的叶子的生物活性。有趣的是,最近的前瞻性研究证明有效的自由基清除属性和可比夹竹桃茎和根提取物的生物活性调节巨噬细胞生物活性,限制haloalkane-induced肝毒性在小鼠模型7- - - - - -9]。这些报告是另外与详细的植物化学的指纹使用色谱和光谱技术,揭示了几种生物活性成分在夹竹桃。

因此,基于ethnomedicinal使用对糖尿病并发症和生药学王亚南活动的报道,我们假设夹竹桃茎和根的潜力降低高血糖症和改善葡萄糖体内平衡和胰岛素抵抗通过提高系统对自由基氧化应激诱导的小鼠模型1型糖尿病(近年来)。进一步分析了高效液相色谱检测提取,在网上对接研究进行对内在cytoprotective转录因子来验证假设。

2。材料和方法

2.1。化学品和溶剂

所有化学品都来自HiMedia实验室pvt Ltd .(印度孟买),除非另有指示。光谱光度测量的工具来测量血清化学从波峰生物系统采购;印度果阿。高效液相色谱法标准从Sigma-Aldrich购买(圣路易斯,密苏里州,美国)和ChromaDex(欧文、钙、美国)。MilliQ水(Ω18.2)从部门中央设施用于实验。

2.2。动物

天生的瑞士白化小鼠(7 - 8周;男)维持(25±2°C;在部门动物屋12 h光周期),提供食物和水广告libitum。雌性老鼠被排除在研究基于报告,雌性老鼠对实验性肥胖和胰岛素抵抗[10]。所有在活的有机体内综述了实验和大学伦理委员会批准(840 / ac / 04 / CPCSEA)。

2.3。工厂准备样品和提取

茎和根白色的花从部门收集各种各样的夹竹桃花园(26.71°N, 88.35°S)在2015年8月。植物样本验证,凭证标本存储大学植物标本的加入。09618年。Hydromethanolic(70%)中提取的干细胞(鼻子)和根(诺尔)准备如前所述8]。总之,shade-dried和磨100 g的夹竹桃茎和根分别与1000毫升70%的甲醇和混合两次提取12 h在37°C。提取进行减压和在生理温度下保持热不稳定的植物化学物质。结果是过滤和集中在减少压力和冻干。鼻子和诺尔的最终收益是干重的11.82%和15.22%。

2.4。实验设计

刚做好的四氧嘧啶一水(154毫米氯化钠)腹腔注射(200µL;每个鼠标150毫克/公斤)。小鼠血糖水平> 200 mg / dL发布3 d注入被认为是糖尿病和随机(体重(BW); )进群后( ):近年来组接受生理盐水;口齿伶俐的组格列本脲(5毫克/公斤/天)作为参考药物;鼻子和诺尔组强饲法200毫克/公斤/ d鼻子和诺尔,分别。另一个群6非糖尿病的小鼠(不是alloxanized;葡萄糖< 60 mg / dL)被认为是控制(Ctrl)。剂量的鼻子和诺尔选择基于之前报告的急性毒性研究表明,2克/公斤体重口服填喂法提取显示无临床和毒性症状的老鼠,除了改善haloalkane-induced肝毒性剂量200毫克/ BW (9]。根据这些证据,200毫克/ BW剂量被选为本研究是1/10^th最高的剂量(2 g / kg)中选择急性毒性研究。

血糖水平是衡量使用几次从尾静脉glucometer(拜耳,轮廓TS计),和BW定期监测。20 d后,小鼠禁食12 h和全血收集从心脏轻微醚麻醉下,允许柯尔特30分钟和离心机(2000×g;15分钟)获得血清。老鼠牺牲颈椎脱位,肝脏,两个肾脏,和大腿骨骼肌收集,在磷酸缓冲盐洗,snap-frozen,并存储在−80°C冻结,直到进一步的使用。

2.5。Hyperglycaemic代谢参数的测量

血清胰岛素使用Accu-Bind ELISA方法估计的通用酶联免疫试剂盒(美国Monobind Inc .)根据制造商的指示,和糖化血红蛋白(HbA1c)水平测定离子交换高效液相色谱使用十佳™双重糖化血红蛋白程序(Bio-Rad # 220 - 0201)。胰岛素抵抗是计算使用稳态模型评估胰岛素抵抗(HOMA-IR):葡萄糖(mg / dL)×胰岛素(μ/ L)。使用定量胰岛素敏感性计算胰岛素敏感性指数(QUICKI)检查:1 /日志(空腹胰岛素(μ/毫升)+日志(空腹血糖(mg / dL))。根据标准化的肝糖原含量测定蒽酮试剂法(11)对葡萄糖标准曲线在平行于样品准备。

2.6。测量血清化学

血清生化参数(酸性磷酸酶(ACP);丙氨酸转氨酶(高山);丙氨酸氨基转移酶(ALT);天冬氨酸转氨酶(AST);血液尿素氮(BUN);胆固醇、甘油三酯、肌酐和尿酸)spectrophotometrically测量糖尿病肝脏损伤的主要标志,高脂血症,糖尿病肾病,使用商用设备(波峰生物系统;印度果阿)。

2.7。测量的抗氧化酶和脂质过氧化作用

过氧化氢酶(CAT)活性,研究了通过测量的H₂O₂在240纳米12)和过氧化物酶(PX)活动测量guiacol在436纳米的氧化根据标准化的方法(13]。脂质过氧化的程度测定的血清丙二醛(MDA)含量的比色硫代巴比土酸活性物质(TBARS)试验设备(开曼化学、美国)按照制造商的指示。

2.8。口服葡萄糖耐量试验(OGTT)

简而言之,一个单独的队列alloxanized(葡萄糖> 200 mg / dL)和非糖尿病的老鼠受到单独的组( )和治疗之前。20 d后,所有老鼠受到12 h禁食和单剂量(2.5 g / kg)的葡萄糖是口头填喂法。从尾静脉血糖测量0,30、60、120和180分钟后血糖管理。

2.9。高效液相色谱分析

为了在反相高效液相色谱分析和识别相对极性的酚类化合物,鼻子和诺尔delipified布莱和戴尔的方法后14]。总之,methanolic提取与前4卷冷丙酮混合孵化−20°C 1 h。孵化后,混合物被旋转16000×g(15分钟4°C)。上层methanolic分数是精心收集并受到薄层色谱法(TLC)在硅胶板上。氯仿乙酸(10%)是用作溶剂,和相应的二次代谢物被筛选了乙腈与20% (w / v)检测后Na₂有限公司₃和稀释Folin-Ciocaltaeu试剂(1:3;v / v)。样品进行了分析(20μL注射;0.4毫升/毫升流)的高效液相色谱(美国安捷伦)加上Zorbax SB-C18列(4.6×150毫米,3.5μ米),配备二极管阵列检测器。流动相梯度浓度甲醇(M)和B-water H (W)为0.02%₃阿宝₄B为5分钟,25% + 75% + 70% 30% 10分钟,30分钟+ 55%,45%和80% + 20% B 45分钟。山峰被确定相对保留时间(RRT)对各自的标准(σ,美国;美国ChromaDex)和光谱模式。量化是通过postcalibration响应因子的标准。

2.10。分子对接研究

分子对接是表现我们先前描述(15]。总之,x射线衍射结构Nrf2(核转录因子2红细胞两个相关的因素;PDB ID: 5 fnq)获得了研究合作实验室的结构生物信息学(RSCB;http://rcsb.org蛋白质数据库(PDB)数据库。DNA与从2 uzk使用七弦琴Autodock V1.5.6删除。蛋白质序列准备对接的水分子后,紧随其后的是极地的氢原子。网格进行测量后Gasteiger收费计算,随后.pdb文件转换成通过微笑.pdbqt文件服务器(https://cactus.nci.nih.gov/translate/)。三维结构的化合物从NCBI-PUBCHEM检索数据库(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov),准备使用七弦琴Autodock对接分析。对接构象是可视化使用PyMol V1.7.4。

2.11。统计分析

统计分析了使用KyPlot 5.0版(KyensLab Inc .)。组差异用单向方差分析(方差分析)其次是Dunnett事后测试。数据分析了OGTT的使用单向方差分析。报告所有数据的平均数±标准差6测量。二元线性相关(单侧)进行探索成对各个变量之间的联系由皮尔森的方法(r_P)。被认为是显著的。主成分分析(PCA)进行表示和系统性的散度和代谢状态的个人鼠标从每组( )使用correlation-based矩阵和代表作为PCA加载阴谋。此外,系统性和代谢状态的个体动物的散度测量使用皮尔逊的距离与完整的联系方法和由一个系统树图表示。多变量分析是由Minitab®18。

3所示。结果与讨论

目前的发现表明,夹竹桃茎和根提取物显著降低高血糖症和胰岛素抵抗而不影响胰岛素敏感性。近年来相关的系统性氧化应激是降低改善内在抗氧化防御与限制脂质过氧化作用有关。衰减的糖尿病高脂血症相关,肝损伤,肾毒性仍与改善抗氧化状态。此外,强烈的HPLC-identified植物化学物质分子间相互作用与Nrf2表明夹竹桃介导抗糖尿病的保护通过抗氧化活动。

经过20天的干预,显著( ;19%)BW增加被认为只有在近年来集团(图1(一))。BW增加最低的是指出NOSE-treated老鼠(3.15%)。然而,自杀率最低的BW增益的控制(70 mg / d)。不受控制的高血糖症是近年来的标志,夹竹桃提取物显示alloxanized小鼠对葡萄糖代谢产生深远的影响。逐步降低血糖负荷在鼻子和诺尔组(图1 (b))。干预后,显著( )减少(鼻子:55%,诺尔:67%)的观察血糖否则在近年来集团仅仅减少了7%。自身免疫性胰腺β细胞毒性降低循环胰岛素水平导致近年来持续的高血糖症和能量代谢异常。然而,四氧嘧啶毒性导致胰岛素依赖型糖尿病的病因近年来管辖β细胞氧化应激和氧化还原平衡16]。这是反映在显著降低( ;64%)相比,alloxanized小鼠血清胰岛素水平控制(图2(一个))。鼻子和诺尔大大增加( )35%和32%的血清胰岛素水平。的确,降低血糖水平仍与胰岛素水平增加(r_P=−0.847, ;r_P0772年=− ),表明更好的葡萄糖利用率由肝脏由于提高胰岛素水平。鼻子和诺尔进一步改善胰岛素抵抗,否则仍alloxanized受损的老鼠。在支持,HOMA-IR模型显示,66%升高( )胰岛素抵抗在近年来的老鼠,表示四氧嘧啶介导双重糖尿病(17),由鼻子和诺尔降低51%和36%,分别为(图2 (b))。实际上,线性与降低血糖降低HOMA-IR协会(r_P= 0.878至0.860, ),和增加胰岛素(r_P=−−0.585和0.412; )强调改善葡萄糖代谢水平。这表明更好的外围insulin-target高架系统性葡萄糖的吸收器官和组织(即骨骼肌、肝脏和脂肪)通过降低胰岛素抵抗。然而,胰岛素敏感性以QUICKI模型略受损(4%; )alloxanized老鼠,近年来集团相比,夹竹桃的提取物(4 - 6%)结果无显著( )增加胰岛素敏感性(图2 (c))。这表明,夹竹桃茎和根中提取并没有直接减弱alloxan-induced胰腺β细胞毒性。因此,改善胰岛素介导的葡萄糖水平吸收可能不是由于细胞毒性的保护夹竹桃但由于改善胰腺胰岛素信号和/或改善肝葡萄糖代谢。然而,我们的结果与之前的一份报告得出结论低血糖相关改善胰岛素敏感性的夹竹桃拍摄馏分油在体外糖尿病大鼠(18]。因此,要求未来的干预研究夹竹桃的影响胰岛素信号。

(一)

(b)

图1

夹竹桃提取物对体重的影响(BW)和葡萄糖代谢。Alloxanized内转至小鼠(葡萄糖> 200 mg / dL)服用200毫克/公斤夹竹桃茎(鼻子)和根(诺尔)提取连续20天,和格列本脲(Glib)作为标准。干预后,(a) BW增加了鼻子,NORE-treated老鼠低第0天相比,在近年来否则显著高于组20天。(b)在协议假设抗糖尿病的活动,血糖水平下降在alloxanized老鼠由于鼻子和诺尔治疗。数据表示为均数±6测量。 , , ,和^NS 而控制。

(一)

(b)

(c)

(d)

图2

夹竹桃提取物对系统性葡萄糖代谢的影响。20 d治疗鼻子和诺尔导致葡萄糖体内平衡的改善,否则alloxanized动物受损。(a)鼻子和诺尔规范化血清胰岛素水平与系统性葡萄糖负荷有关。(b)升高的胰岛素抵抗,以稳态模型评估胰岛素抵抗(HOMA-IR)模型,是减轻;然而,(c)胰岛素敏感性保持不变( )在整个治疗的定量胰岛素敏感性指数(QUICKI)模型。(d)肝脏糖原水平提高相比,近年来集团,然而没有级别的控制。数据被表示为均数±6测量; , ,和^NS 而控制。^β , ^γ ,和^δ 而近年来。

循环葡萄糖超过转换和存储主要在肝脏糖原。血清葡萄糖水平升高alloxanized老鼠和随后的胰岛素抵抗显著增加( )减少肝脏糖原水平高达57.14%,这进一步提高了26% ( )和40% ( )通过鼻子和诺尔治疗(图2 (d))。即便如此,20天的干预控制未能恢复肝脏糖原水平,改进后的糖原水平仍与改善胰岛素抵抗(r_P=−−0.581和0.49; )和血清胰岛素水平(r_P= 0.945和0.931; ),表明系统性胰岛素升高影响肝脏糖原生成。事实上,这是进一步支持显著相关性(r_P=−−0.767和0.745; )降低血糖和肝糖原水平,表明改进的葡萄糖在肝脏糖原营业额。

夹竹桃提取物改善身体的潜力的能力利用多余的葡萄糖被OGTT进一步评估。三十postglucose填喂法(2.5克/公斤),血糖显著( )上升在所有老鼠(图3(一个))。在餐后180分钟,血糖水平为25%,40%,和34%低在近年来,鼻子,和诺尔组,分别指示更有效去除多余的葡萄糖从血液循环和改善周边葡萄糖吸收由于夹竹桃提取物。事实上,NOSE-treated (r_P=−0.9942; )和NORE-treated (r_P=−0.9997; )组比近年来不仅展示了相对更多的时间活动(r_P=−0.9901; ),但最初的血糖上升的速度是在鼻子(Δ低_{glu /分钟}:5.27 mg / dL /分钟;231%)和诺尔(Δ_{glu /分钟}:5.43 mg / dL /分钟;近年来(Δ相比242%)_{glu /分钟}:6.52 mg / dL /分钟)和Glib(Δ_{glu /分钟}:5.64 mg / dL /分钟)。postintervention后血糖水平,改善全身葡萄糖水平此外反映在糖化血红蛋白水平(图3 (b))。鼻子和诺尔显著( )规范化的糖化血红蛋白水平14 - 15%,分别,否则高53%相比,近年来集团控制( )。降低糖化血红蛋白与血糖水平降低(r_P= 0.940和0.866; )。此外,降低糖化血红蛋白与血清胰岛素仍负相关(r_P=−−0.900和0.939; )和肝脏糖原(r_P=−−0.859和0.860; ),强调夹竹桃刺激过量的葡萄糖代谢的葡萄糖吸收和改进alloxanized老鼠。

(一)

(b)

图3

夹竹桃的影响在口服葡萄糖耐量(OGTT)和糖化血红蛋白(HbA1c)水平。(a)治疗对急性血糖管理测量的影响在一个单独的糖尿病(血糖> 200 mg / dL)和非糖尿病患者控制老鼠,它演示了一个时间改善外围葡萄糖摄取20 d后治疗。(b)提高糖化血红蛋白水平进一步指出由于20 d葡萄糖代谢的增加夹竹桃治疗。数据表示为均数±4测量OGTT和6测量糖化血红蛋白。 , ,和^NS 而控制。^α 和^β 而近年来。

肝脏内稳态中起关键作用能量调节糖酵解、糖质新生,糖原生成(19]。强有力的证据表明肝和糖尿病并发症之间的相互作用(20.],进一步反映了178%,100%,107%,和40%增加ACP,高山,ALT, AST内转至老鼠(表1)。所有的肝脏损伤标记酶降低是由于鼻子和诺尔治疗,反映肝损伤的改善alloxanized内转至老鼠。这印证了之前在活的有机体内和在体外报告显示,夹竹桃茎和叶hydromethanolic提取变弱haloalkane-induced肝毒性(9]。在支持,降低肝酶标记的程度仍按照改进的肝脏糖原(r_P0.938 =−−0.692;0.001)、血清胰岛素(r_P0.932 =−−0.751; ),和葡萄糖(r_P= 0.976 - 0.878; ),展示协会夹竹桃介导hyperglycaemic降低并发症和降低肝损伤。


	控制	四氧嘧啶
	控制	近年来	格列本脲	鼻子	诺尔

机场核心计划	3.39±0.09	8.06±0.76	5.79±0.25^δ	6.15±0.38^γ	5.06±0.24^γ
高山	10.90±1.07	21.85±1.52	11.61±1.25^NSα	14.0±0.37^γ	12.44±0.36^NSβ
ALT	43.12±1.57	89.13±7.05	54.72±2.30^γ	65.27±2.38^γ	54.88±5.97^NSγ
AST	68.32±8.08	95.87±4.86^NS	74.90±1.91^NSγ	85.72±3.89^NSβ	73.95±2.24^NSγ
胆固醇	78.31±6.49	121.29±3.04	75.67±3.07^NSβ	104.92±2.49^NSγ	85.50±4.44^NSα
甘油三酸酯	92.1±4.15	139.19±5.77	95.91±4.24^NSβ	121.95±5.96^γ	109.97±4.25^γ
肌酸酐	0.18±0.01	0.33±0.01	0.19±0.01^NSγ	0.27±0.00^γ	0.25±0.01^β
包子	8.55±1.08	24.90±3.00	12.19±3.08^NSδ	17.20±0.50^γ	14.08±1.02^γ
尿酸	1.77±0.15	2.50±0.20^NS	1.90±0.12^NSα	2.09±0.03^NSδ	1.86±0.09^NSγ

^NS =不重要的( ), , ,和与控制。^α , ^β , ^γ ,和^δ 而近年来。机场核心计划:酸性磷酸酶;高山:丙氨酸转氨酶;ALT:丙氨酸氨基转移酶;AST:天冬氨酸氨基转移酶;包子:血液尿素氮;鼻子:夹竹桃夹竹桃茎中提取;诺尔:夹竹桃夹竹桃根提取;近年来:1型糖尿病。

临床前和临床证据表明,直接与进步协会糖尿病hyperlipidaemia脂肪肝疾病(21]。这是明显的重要( )增加54.88%血清总胆固醇和甘油三酸酯水平(表的51%1)。夹竹桃提取物降低血清总胆固醇(13%和 ;29%, )和甘油三酸酯(12%和22%; )水平,表明其降血脂药的潜力。在支持,之前的报告表明,夹竹桃花提取限制高脂肪饮食诱导dyslipidaemia与BW获得(22]。胰岛素信号被调制肥胖和肝甘油三酯沉积,从而导致糖尿病和肥胖脂肪肝表型(23]。因此,改善hyperlipidaemia通过鼻子和诺尔治疗可能通过改善胰岛素抵抗。一个积极的降低甘油三酯和胰岛素抵抗之间的联系(r_P= 0.654, ;r_P= 0.66, )进一步支持这一观点。

糖尿病肾病是不受控制的二次效应高脂血症,血糖受损体内平衡,和代谢障碍,和四氧嘧啶治疗导致间质性肾炎和肾小管萎缩24]。急性肾损伤的老鼠alloxanized指出了海拔肌酐(83%, ),包子(191%, ),和尿酸(41%, ),作为标记的肾毒性(表吗1)。夹竹桃的治疗后,降低了肾毒性标记仍然与降低血清葡萄糖和甘油三酸酯水平相关,表明限制高血糖症和高脂血症介导降低糖尿病肾病(25]。鼻子和诺尔治疗降低血清肌酐、面包和尿酸18 - 24%,31日至43岁和16 - 26%。

Hyperglycaemia-related glucose-oxidation增加,细胞蛋白质非酶的糖化,和随后的退化导致自由基生成和氧化还原平衡(26]。因此,先进的细胞cytoprotective糖化酶会导致降低抗氧化保护,因此过敏升高氧化应激(27]。夹竹桃提取整体提高了系统抗氧化状态在肝脏、肾脏、和骨骼肌,反映在高架猫和PX的活动,否则是27 - 64%降低(在alloxanized老鼠(图0.01)4(一)和4 (b))。肝脏和肌肉中猫鼻子PX活动是提高11.14%和16.29%,无论内转组相比显著的治疗效果。提高系统抗氧化剂酶活动是负相关的改进的低血糖(r_P0.927 =−−0.822; ),胰岛素抵抗(r_P0.840 =−−0.544;肝ALT水平(0.05),r_P0.309 =−−0.810; ),这表明强有力的协会oleander-mediated改善和缓解低血糖肝损伤的抗氧化保护。这个观点与以前的报告展示的重要中和主要生理相关的细胞内O₂和N₂hydromethanolic提取物自由基的夹竹桃(7]。提高系统抗氧化状态进一步证实了通过测量血清MDA水平。鼻子和诺尔治疗降低MDA水平17% ( )和18% ( ),分别,否则42% ( )高相比,近年来控制(图4 (c))。高协会降低MDA水平进一步提高猫和PX活动支持oleander-mediated提高系统抗氧化状态。

(一)

(b)

(c)

图4

夹竹桃提取物对细胞内抗氧化保护和系统性的影响在近年来氧化应激。连续20天的治疗alloxanized小鼠(葡萄糖> 200 mg / dL)夹竹桃茎(鼻子)和根(诺尔)提取增加了(a)过氧化氢酶和(b)过氧化物酶活动的主要hyperglycaemia-associated组织肝脏,肾脏,骨骼肌。(c)改进系统抗氧化防御和降低细胞内氧化应激所强调降低脂质过氧化(MDA)。 , , ,和^NS 而控制。^α , ^β , ^γ ,和^δ 而近年来。

此外,多元分析,以反映代谢和抗氧化状态的系统性转变其缓解由于近年来和夹竹桃和标准格列本脲。在协议系统代谢和抗氧化状态的转变,近年来老鼠集群控制老鼠(图5(一个))。然而,Glib和夹竹桃提取物治疗在近年来导致老鼠从近年来转移和接近控制。这反映出缓解内转并发症的夹竹桃提取物。鼻子和诺尔聚集在靠近;然而,NORE-treated老鼠仍然相对接近Glib组和对照组,表明诺尔的优越的生物活性比鼻子。此外,对动物个体治疗的密切影响测量使用皮尔逊距离基于相似度的方法和使用系统树图(图表示5 (b))。这也证实了从PCA集群模式加载情节,展示近年来动物的距离差异(7)从剩下的集群在根。控制动物(1 - 6)发散在皮尔森距离41.02,从治疗组生成单独的分支。进一步在皮尔森距离59.98,鼻子集团(19到24)偏离鼻子和油嘴滑舌。这反映了PCA区域的集群模式,这表明近似诺尔的控制和glib诺尔相比。详细账户合并步骤和最终的分区提供的补充材料。

(一)

(b)

图5

夹竹桃连续20天治疗改善全身代谢体内平衡和抗氧化状态。(a)主成分分析(PCA)的装载图演示了一个剧烈的转变的空间排列内转组老鼠从剩下的集群。这是由格列本脲和夹竹桃治疗恢复正常,空间布置的控制和远离附近内转至集团。PC1和PC2占累计方差88.2%和81.8%,分别。(b)的散度的不同集群5实验小组测量(补充材料),并使用一个系统树图表示。

在目前的研究数据6(一)和6 (b)),HPLC-UV(275海里)分析确定4-hydroxybenzoic酸(0.321μg / mg dw)、香草酸(0.307μg / mg syringic酸(dw), 0.556μg / mg dw)、阿魏酸(2.72μg / mg dw)和杨梅酮(0.012μg / mg dw)鼻子。同样,香草酸(0.014μg / mg syringic酸(dw), 0.023μg / mg dw)、阿魏酸(0.0003μg / mg dw)和杨梅酮(0.0006μg / mg dw)在诺尔标识的酚类化合物。之前的报告表明,4-hydroxybenzoic酸产生antihyperglycaemia通过改善外围葡萄糖吸收而不影响胰岛素分泌和肝糖原含量28]。香草酸降低胰岛素抵抗和dyslipidaemia和葡萄糖吸收在高脂饮食大鼠29日]。Syringic酸是低hyperglycaemic alloxanized老鼠的地位提升血浆胰岛素和c -肽水平在体循环(30.]。强有力的抗氧化和抗炎活动阿魏酸已被证明的贡献对降低糖尿病肾病(31日]。此外,几项研究已经报道有益作用的杨梅酮减轻糖尿病引起的并发症如高血糖症、胰岛素抵抗、高脂血症、肥胖等。32]。除了确定的酚酸在目前的研究中,最近的研究已经确定了大量的生物活性成分的茎和根夹竹桃,其中一些都建立了有效的抗糖尿病的活动(8,9]。

(一)

(b)

后的夹竹桃介导提高系统抗氧化状态,植物化学物质的协同效应与氧化还原敏感的转录因子Nrf2调节内在抗氧化酶进行了研究。综合所有植物化学物质的分子对接研究是本研究的范围,在HPLC-identified酚酸只专注与Nrf2直接互动,而转录调节细胞内抗氧化酶的表达和激活与限制糖尿病(33]。的5个化合物,只有阿魏酸,4-hydroxybenzoic酸,和syringic酸与结合能高的Nrf2−5.2−5.3−5.1千卡/摩尔,预测潜在的调制Nrf2激活状态(图7)。事实上,药理研究也表明,夹竹桃的生物活性分数诱导Nrf2激活(34]。

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(f)

4所示。结论

目前研究的表型观察因此提供了令人信服的证据支持使用夹竹桃的提取在中药抗糖尿病的药物。鼻子和诺尔不仅限制急性高血糖症和胰岛素抵抗也变弱糖尿病相关并发症如dyslipidaemia和肝和肾损伤。虽然这些药理作用的分子机制是本研究的范围,实际上数据表明oleander-induced改善系统性抗氧化状态可能是强有力的antiiabetic活动负责。这些数据都表明需要进一步的生药学研究确定添加剂的好处夹竹桃的具有生物活性的植物化学物质。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

伦理批准

动物研究协议验证和北孟加拉大学伦理委员会批准。

的利益冲突

所有的作者表达任何利益冲突。

确认

PD感谢部门生物技术(印度生物技术部)和印度医学研究理事会()提供奖学金来完成研究生学习。确认coauthorship Biswajit哈尔德并不可用,但餐前小吃Kumar乔杜里申明Biswajit哈尔德导致了纸和担保Biswajit哈尔德的coauthorship地位。

补充材料

补充图1:高效液相色谱色谱酚酸和类黄酮的参考标准。1:4-hydroxy苯甲酸(RT: 14.044), 2:香草酸(RT: 16.327), 3: syringic酸(RT: 17.873), 4:p香豆酸(RT: 23.767), 5:阿魏酸(RT: 25.705), 6:芦丁(RT: 32.489), 7:杨梅酮(RT: 36.144),和8:槲皮素(42.217)。(补充材料)

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药理和制药科学的进步

当代疗法的自然药物:扩大视野

夹竹桃茎和根标准化提取物减轻急性高血糖症通过限制系统性糖尿病大鼠氧化应激反应

文摘

1。介绍

2。材料和方法

2.1。化学品和溶剂

2.2。动物

2.3。工厂准备样品和提取

2.4。实验设计

2.5。Hyperglycaemic代谢参数的测量

2.6。测量血清化学

2.7。测量的抗氧化酶和脂质过氧化作用

2.8。口服葡萄糖耐量试验(OGTT)

2.9。高效液相色谱分析

2.10。分子对接研究

2.11。统计分析

3所示。结果与讨论

4所示。结论

数据可用性

伦理批准

的利益冲突

确认

补充材料

引用

版权

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