功效的芦荟,菠萝comosus,虎尾兰masoniana霜在皮肤上的伤口感染了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

文摘

热带地区有很多草药等芦荟精华素(AV),菠萝comosus(AC)和虎尾兰masoniana(SM)。所有这三个有一个独特的潜在影响作为抗菌和愈合剂。本研究的目的是探索AV的角色,AC, SM在皮肤伤口感染了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)。45成年女性的雄性sd大鼠中重250 - 300克被分成5组。所有的团体都暴露在两轮全层穿孔活检和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染。C组是对照组/治疗;集团公元前对待基础霜/没有提取;集团AV对待AV奶油75%;小组交流处理75% AC奶油,和组SM处理75% SM奶油。伤口观察5天,10和15。皮肤伤口的愈合被关闭的比例来衡量,皮肤抗拉强度和组织病理学。结果表明,AV、交流和SM有相似的潜在影响愈合的伤口感染MRSA组C和BC(相比)。它显示了所有的三个草药配方可以用作伤口感染MRSA的另类疗法。

1。介绍

金黄色葡萄球菌是一种常见的机会性细菌在人类和动物皮肤1]。这种细菌成为一个严重的问题,因为它是对甲氧西林耐药。如今,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是一个全球问题,不受地理位置的限制,2]。也是一个主要的细菌引起的皮肤和软组织感染(3]。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染引起重大的发病率和死亡率(4),包括脓毒性休克、心内膜炎、肺炎、菌血症(5]。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的主要途径是通过开放的伤口6]。伤口如切除伤口受到感染,复杂的和他们引起长时间和延迟伤口愈合(7]。延迟伤口愈合可能因为CD8 +的失败在另一个消除细菌介导的免疫反应(8]。失败是由于不正确的治疗方法或高细菌浓度(9]。

草药是促进伤口愈合的另类疗法通过激活免疫复合物(10]。据报道,活性成分芦荟精华素(AV)可以作为抗菌药物和愈合推动者11]。另一方面,菠萝comosus(AC)含有菠萝蛋白酶,它广泛管理作为抗炎和愈合剂12]。以前的研究报道的药用效果虎尾兰sp。13,14];然而,的功效虎尾兰masoniana在伤口愈合(SM)仍是复杂的。本研究的目的是探索AV的功效,AC, SM在皮肤伤口感染MRSA。

2。材料和方法

2.1。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)隔离

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分离获得的微生物学、兽医学院、大学Gadjah马达思班,日惹,印尼。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的生化和电阻稳定是再次得到一个标准实验室测试和头孢西丁(30µg)盘扩散法使用前在本研究15]。所有的实验过程进行了综合实验室,大学教师的健康穆罕默迪亚Sidoarjo从4月到2017年11月。

2.2。准备的提取

植物材料(AV、交流和SM)获得拔都,玛琅。植物干,使用乙醇索氏提取器中提取。提取使用绘画纸滤纸过滤减少大气压力下1号。提取存储在−在使用前20°C。提取物溶解在5%二甲亚砜(DMSO)对抗菌药物敏感性测试。

2.3。定性的植物化学成分筛选

定性的植物化学成分筛选AV、交流和SM提取使用标准方法进行。提取筛选几个组件如单宁、皂苷、黄酮、生物碱、酚和糖苷。

2.4。抗菌测试

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分离测试使用纸片扩散法药敏的Mueller-Hinton琼脂(尼古拉斯)。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌被转移到营养肉汤和孵化(6小时),直到它显示0.5麦克法兰的浊度标准。暂停使用无菌棉签传播在尼古拉斯。空白光盘(6毫米,Oxoid CT0998B)浸满0%,25%,50%,75%,100%浓度的植物提取物溶解在DMSO溶液。板块在37°C孵化24小时。完整的抑菌圈测量后24小时。

此外,完整的分析了抑菌圈确定直径增长的抑制百分比(PIDG)根据下面的方程16]: 在哪里是提取和抑制的直径的直径是抑制溶剂。

2.5。霜配方

植物提取物显示中间的有效浓度和/或敏感的抗菌测试准备到奶油公式。奶油是油和水的混合物准备阶段。油相(硬脂酸、氢氧化钾和甘油)在70°C,不断搅拌融化。在相同的温度下,水相(methylparaben、尼泊金丙酯、水和植物提取物)。水相油相加入慢慢不断搅拌。奶油是每天准备的。

2.6。实验动物

本研究使用45成年女性的雄性sd大鼠中重250 - 300克提供的商业育种。丙烯酸水族馆内的老鼠被放置个人和适应标准的实验室条件下至少7天(12/12小时光明/黑暗、标准实验室动物饲料和水随意)。所有动物协议的批准从大学的伦理委员会批准获得Gadjah马达思班,日惹,印尼,程序遵循联邦实验室动物保健和使用指南。

2.7。实验过程和设计

老鼠被分为5组。老鼠和使用氯胺酮麻醉50毫克/千克BW和甲苯噻嗪4毫克/公斤体重。70%异丙醇擦洗皮肤。皮肤暴露在两轮4毫米全层打孔切片用无菌一次性冲压工具。每个伤口都覆盖着消毒透明敷料和接种10⁵集落形成单位(CFU) 30耐甲氧西林金黄色葡萄球菌µL(磷酸缓冲盐(PBS)。

C组是对照组/治疗;集团公元前对待基础霜/没有提取;集团AV对待AV奶油75%;小组交流处理75% AC奶油;和组SM处理75% SM奶油。治疗了一天两次在6/6 (am / pm) 15天,并开始受伤后第一天。用无菌棉签治疗是局部使用。

2.8。伤口测量

每组的伤口是记录和测量的比例在天5日关闭10和15。伤口的抗拉强度是衡量使用张力计麻醉下15天。抗拉强度是记录在g。

2.9。组织病理学和免疫组织化学

在5、10和15日从每组三只老鼠安乐死使用氯胺酮和甲苯噻嗪致命剂量的组合。皮肤伤口从每组存储在10%中性缓冲福尔马林24小时与组织病理学的标准实验室技术和加工用苏木精和伊红染色())和胶原蛋白沉积使用马洛里染色。

免疫组织化学,组织部分是安装在幻灯片涂上了赖氨酸。的部分与单克隆抗体染色CD8 + (anti-rat CD8 +、Novocastra rtu - CD8 - 295只猫。PA0183)使用标准的染色这个产品的协议。

2.10。形态测量学

幻灯片被随机在盲目的条件下分析了两种不同的病理学家。半定量的评估使用评分系统0 - 3(无(0);轻度(1);中(2);标记(3)对于每个部分进行血管增生,炎症细胞浸润,纤维母细胞、胶原沉积,CD8 +的表达(17]。

2.11。分析数据

数据分析SPSS 16,被当作平均值±标准偏差(SD)。伤口缝合的抗拉强度和比例进行了分析与方差分析和事后测试;然而,组织病理学评估结果进行了分析与测试和Mann-Whitney克鲁斯卡尔-沃利斯U测试。

3所示。结果

定性的植物化学成分的初步研究筛选的所有三个提取显示各种组件如单宁、皂苷、黄酮、生物碱、酚和糖苷。不过,所有这三个有单宁,皂苷、生物碱(表1)。此外,AV的抗菌活性,AC, SM在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分离基于阀瓣扩散试验显示出类似的结果。75%浓度的植物提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌有效隔离,并证明了完整的抑菌圈AC和SM提取物和中间结果,然而,敏感结果AV提取(表2)。


变量	提取
变量	AV	交流	SM

丹宁酸	+	+	+
皂苷	+	+	+
类黄酮	+	+	- - - - - -
生物碱	+	+	+
苯酚	- - - - - -	- - - - - -	+
配糖体	+	- - - - - -	+

+ =现在;- =缺席。


提取	浓度
提取	0%	25%	50%	75%	100%

AV	- - - - - -	8.46±0.30	16.76±0.61	24.23±0.20	32.10±0.20
交流	- - - - - -	8.16±0.41	13.63±0.20	19.06±0.20	25.20±0.26
SM	- - - - - -	- - - - - -	9.26±0.55	18.10±1.60	26.20±0.45

基于光盘的有效浓度结果扩散法;- =缺席。

基于PIDG的决心,AV显示较高的抑制能力与交流和SM(图1)。不过,所有这三个提取物在体外对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌有潜在的影响。

公元前组C和没有任何差异的所有参数()。这些结果表明,底霜配方在这个研究中没有任何潜在影响伤口愈合。治疗组(AV、交流和SM)显示的更好的结果在伤口愈合耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染与C组相比,所有参数和BC ()。局部应用AV、交流和SM伤口收缩,增加皮肤抗拉强度,血管生成,成纤维细胞,在伤口组织胶原沉积,从第五天开始()(表3)。


参数	集团	一天
参数	集团	5	10	15

伤口缝合的百分比(%)	1 (C)	3.60±1.05	29.94±2.72	54.36±5.75
	2 (BC)	4.51±1.37	32.04±3.88	59.63±2.69
	3 (AV)	10.00±0.76	64.17±4.86	99.10±1.18
	4 (AC)	12.82±4.07	63.67±5.80	99.06±1.62
	5 (SM)	9.25±0.78	42.04±9.13	87.02±9.49
皮肤抗拉强度(克)	1 (C)	NT	NT	218.33±9.50
	2 (BC)	NT	NT	219.33±5.85
	3 (AV)	NT	NT	578.00±12.00
	4 (AC)	NT	NT	566.67±28.29
	5 (SM)	NT	NT	500.67±15.56
血管生成	1 (C)	0.50±0.54	0.83±0.40	1.00±0.63
	2 (BC)	0.50±0.54	1.33±0.51	1.66±0.51
	3 (AV)	1.50±0.54	2.16±0.40	2.66±0.51
	4 (AC)	1.33±0.51	1.83±0.75	2.66±0.81
	5 (SM)	1.16±0.75	1.83±0.75	2.50±0.83
炎症细胞浸润	1 (C)	3.00±0.00	2.00±0.89	2.00±0.63
	2 (BC)	3.00±0.00	2.66±0.51	2.16±0.75
	3 (AV)	2.50±0.54	1.83±0.75	0.83±0.75
	4 (AC)	2.33±0.51	2.00±0.63	1.00±0.63
	5 (SM)	2.50±0.83	1.50±0.83	1.33±0.51
纤维母细胞	1 (C)	0.66±0.51	1.16±0.75	1.50±0.54
	2 (BC)	0.66±0.81	1.50±0.54	1.50±0.54
	3 (AV)	1.66±0.51	2.00±0.63	2.50±0.83
	4 (AC)	1.33±0.81	1.83±0.40	2.66±0.51
	5 (SM)	1.33±0.81	2.00±0.63	2.66±0.51
胶原蛋白沉积	1 (C)	0.16±0.40	0.83±0.40	1.33±0.81
	2 (BC)	0.33±0.51	1.00±0.63	1.33±0.81
	3 (AV)	1.16±0.40	1.66±0.51	3.00±0.00
	4 (AC)	0.66±0.51	1.66±0.51	2.50±0.54
	5 (SM)	1.00±0.63	1.66±0.51	1.66±0.51
CD8 +淋巴细胞的表达	1 (C)	0.16±0.40	0.83±0.75	1.33±0.81
	2 (BC)	0.33±0.51	0.66±0.51	1.50±0.54
	3 (AV)	2.83±0.40	2.33±0.51	0.66±0.51
	4 (AC)	2.33±0.81	2.16±0.75	1.00±0.63
	5 (SM)	2.00±1.26	2.00±0.63	1.50±0.54

元,而不是测试;的值表示为平均数±标准差;不同的上标在同一列和参数显示显著不同的值()。

此外,AV、交流和SM应用程序降低炎性细胞浸润以及伤口愈合()。在这项研究中,受感染的伤口的愈合支持CD8 +的伤口组织的渗透。治疗组显示的主要渗透CD8 + 5天(图2(一个)顺序)和减少在10和15天()(表3)。令人惊讶的是,细菌殖民化是对照组5天(图所示2 (b))有轻度浸润CD8 +。

(一)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

图2

显微照片的真皮皮肤伤口愈合的一部分。主要表达CD8 + 5天治疗组(a);皮肤伤口的对照组5天显示严重坏死与细菌殖民化(b);真皮BC组(c);集团AV (d);小组交流(e);和真皮组织SM 15天(f)。注意:CD8 +表达式(箭头);成纤维细胞(箭头);细菌殖民化(bc);出血(h); inflammatory cells infiltration (i); necrosis (n); edema (o); neovascularization (v). CD8+, DAB, 100x, scale bar: 50 µ(一);他走时,400 x;酒吧规模:50µ米(b-f)。

局部应用AV、交流和SM也有类似的潜在影响血管生成,炎症细胞浸润,成纤维细胞(图2 (c)- - - - - -2 (f));胶原蛋白沉积(图3(一个)- - - - - -(d));和CD8 +与组C和BC。然而,AV和交流有更好的影响关闭伤口和皮肤抗拉强度的百分比与SM ()(表3)。两组C和BC显示弱皮肤抗拉强度(表3),它是最小的表达支持的真皮胶原沉积的部分有严重出血15天(图3(一个))。另一方面,更好的胶原蛋白沉积和皮肤抗拉强度出现在真皮草药治疗组(表的一部分3;图3 (b)- - - - - -3 (d))。它证明了胶原蛋白沉积与皮肤抗拉强度显著相关。

(一)

(b)

(c)

(d)

图3

显微照片的真皮胶原蛋白沉积在15天皮肤伤口愈合的一部分。胶原蛋白沉积BC组主要出血(a);主要是老真皮中胶原沉积组AV (b)的一部分;胶原蛋白沉积组交流(c);SM (d)。注意:红细胞(橙红色);新的胶原纤维(浅蓝色/箭头);旧的胶原纤维(深蓝/箭头)。马洛里,400 x;酒吧规模:50µ米(模拟)。

4所示。讨论

AV、交流和SM已经包含各种组件作为传统药物。所有三个草本植物有不同的组件:AV(丹宁酸、皂苷、黄酮、生物碱和糖苷);AC(丹宁酸、皂苷、黄酮和生物碱);和SM(丹宁酸、皂苷、生物碱、酚和糖苷)(表1)。这些各种组件产生的次生代谢物植物对抗环境中的微生物(18),他们可以用作草药抗菌制剂体外(19- - - - - -21]。

丹宁酸和碱对一些病原体如细菌有潜在影响(22,23),他们可以作为抗炎剂(24)以及草药治疗。然而,皂素本身可以作为抗炎剂(25]。根据这项研究,提取物在体外抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌有类似的效果。它是由单宁和生物碱属性在AV, AC, SM提取物。丹宁酸和生物碱被称为主要活性化合物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(26]。

先进的伤口护理策略是通过开放伤口需要防止耐甲氧西林金黄色葡萄球菌入侵通过抑制细菌殖民化和引发伤口地区逐步浸润t细胞子集。发挥重要作用的t细胞亚群之一,在消除感染区域CD8 + (27]。本研究证明,AV、交流和SM被广泛用作传统医学和有潜在的作用,激活CD8 +渗入伤口组织的机制来消除耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染(28]。细胞毒性t细胞,CD8 +中扮演一个重要的角色不仅在控制感染,而且在消除感染细胞29日]。

伤口的细菌殖民化是抗菌性抑制的AV (30.,交流31日,32),和SM,支持CD8 +在伤口愈合的功能和显示协同效应与C组相比,BC。此外,抑制细菌殖民化会缩短炎症期间通过环氧酶和前列腺素途径(33]。的炎症阶段,CD4 +和CD8 +释放各种细胞因子刺激细胞迁移、增殖,细胞外基质的沉积34]。细胞迁移是促进血管新生或新船在伤口组织。血管生成促进纤维母细胞角化细胞,炎症细胞,各种类型的细胞因子渗入伤口组织(35]。本研究证明,成纤维细胞合成胶原蛋白来支持组织矩阵和胶原沉积支持皮肤抗拉强度(36]。它类似于本研究的结果显示,更好的血管形成,纤维母细胞浸润,胶原沉积,肌肤抗拉强度的草药治疗组。

5。结论

目前的研究表明芦荟精华素(AV),菠萝comosus(AC)和虎尾兰masoniana(SM)潜在影响促进感染伤口的愈合。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

所有的技术人员都承认对他们的援助在这学习。

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药理和制药科学的进步

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