文摘

本研究试图探讨细胞毒性活性的乙醇和乙酸乙酯提取物的摩洛哥小檗属植物寻常的及其主要成分小檗碱,一起探索他们的抗氧化性能。它还包括研究小檗碱的组合效应和S-nitroso-N-acetylpenicillamine(提前),一氧化氮(NO)供体,对人类乳房腺癌细胞系(MCF-7)。使用MTT试验,我们报告一个微分细胞毒性效应的乙醇和乙酸乙酯提取自比乙酸乙酯乙醇提取更多的细胞毒性,与集成电路₅₀596.71 = 3.54μg /毫升和μg /毫升,分别。有趣的是,没有观察对正常细胞毒性效应。此外,这些提取物表现出显著的抗氧化活性的DPPH自由基清除实验。事实上,IC₅₀值是69.65μg /毫升和77.75μg /毫升乙醇和乙酸乙酯提取,分别。此外,一些小檗碱的浓度,当结合没有捐赠用于IC_30.活动,诱导协同细胞毒性浓度从8.40μM 33.60μM透露的组合索引值,使用Chou-Talalay方法。然而,在其他浓度测试,在敌对的效果观察。观察到的细胞毒性与细胞凋亡诱导的增长表明annexin-V-streptavidin FITC-staining分析。

1。介绍

我们的知识的植物及其利益是人类一样古老。人很早就发现某些植物克服苦难的治疗特性,改善他的健康。因此,我们选择了工作小檗属植物寻常的从Oujda,摩洛哥,东部植物小檗科家族的本地命名“Aghriss”,“Izergui,”和“Bou-Semmane”和用于退热的传统医学,王亚南,消炎作用[1]。几项研究已经开展了关于其生物活性和小檗碱更具体地说,一个异喹啉生物碱,视为一个活跃分子和许多属性如低血糖、抗菌、抗真菌、抗丙肝病毒、抗癌活动(2- - - - - -8]。事实上,尽管现代医学的重大进展,我们总是注意轻微故障的常规药物治疗的高发病率的副作用和发展的阻力。因此,这项工作的第一部分包括细胞毒性活性的比较小檗属植物寻常的提取物对乳腺癌细胞和正常的人类细胞,随着nonselectivity化疗治疗系统性毒性的原因。我们还研究了细胞毒性的分子机制,为最近的知识分子致癌作用提供了潜在的治疗在癌症专门针对和感光细胞凋亡(9]。

在第二部分,这项工作的目的是探讨小檗碱的组合效应和S-nitroso-N-acetylpenicillamine(提前),一氧化氮(NO)供体,对乳腺癌细胞。知道没有从精氨酸是一种自由基合成合酶(NOS)、三种亚型的NOS(内皮NOS神经元(nNOS),(以挪士)和诱导NOS(间接宾语))是各种组织和细胞中表达。没有扮演重要的角色在不同的生理反应,包括血管张力的调节,神经传递、抗病毒防御和免疫反应(10]。最近的研究也表明,没有细胞死亡是一个有趣的监管机构(11]。这部分的研究旨在探讨的影响没有对乳腺癌细胞的可行性,孤独和结合小檗碱。

2。材料和方法

2.1。小檗属植物寻常的和它的提取

本研究中使用的植物是收集秋季早期冬季结束时(2014年12月),在该地区Oujda,东部的摩洛哥。在这项研究中使用的部分的根叫工厂。根叫分离和干燥在树荫下在室温下然后碎和地面。然后,提取了与索氏萃取器使用两种类型的不同极性的溶剂:乙酸乙酯和乙醇。集中使用旋转蒸发器,直到获得的提取物的总蒸发溶剂。

2.2。化学物质

杜尔贝科修改鹰的介质(DMEM)、二甲亚砜(DMSO)、乙二胺四乙酸(EDTA)磷酸盐(PBS)、甲基四唑(MTT),结晶紫,乙酸乙酯,乙醇,甲醇、三氟乙酸、乙腈(HPLC-MS年级),聚蔗糖、异丙醇、盐酸(HCl)、十二烷基硫酸钠(SDS), annexin-V-FITC,台盼蓝,S-nitroso-N-acetylpenicillamine(提前),黄连素,cisplatine从Sigma-Aldrich购买(圣昆廷监狱、法国)。

2.3。细胞系和文化

肿瘤细胞株用于本研究人类乳房腺癌(MCF-7)慷慨地提供给我们实验室由古斯塔夫Roussy研究所(瑟、法国)。这些细胞培养在37°C在湿润的气氛中有5%的公司₂在培养基(DMEM)补充5%的胎牛血清,100 UI /毫升的青霉素,100μg / mL链霉素,0.2%碳酸氢钠。

2.4。细胞毒性测试

研究了细胞毒性活动对MCF-7肿瘤细胞系使用colourimetric甲基四唑(MTT)测试所述Mosmann [12在我们实验室[]和修改13]。目标细胞被洗两次,放在96孔微量滴定板的密度(Bioster、意大利)3×10⁴细胞在100 /毫升μl /完成的培养基。然后,100年μl培养基,含有减少剂量的乙醇或乙酸乙酯提取物已经水溶性在DMSO溶液,添加在每个包含细胞的微量滴定板为最后一卷200μlμg 400 /毫升初始浓度,达到最终的浓度0.78μg /毫升。cisplatine用作积极控制。暴露后的细胞为48 h系列浓度的测试产品在37°C和5%的公司₂,100年μl介质从每个小心翼翼地吸气,取而代之的是20μl (MTT(5毫克/毫升的PBS)的解决方案。在相同条件下孵化后3 h,板块处理100μl盐酸异丙醇/(10毫升:2.5μl)溶解蓝色细胞内甲瓒产品解决方案。30分钟后在37°C,新陈代谢产生的水溶性甲瓒活跃细胞测量通过扫描96 -孔板的双波长540 - 630纳米使用Multiskan装置(Labsystems,芬兰赫尔辛基)。因此,细胞毒性作用是使用以下公式计算: 在OD₀分别和OD获得的光密度,负控制细胞接收DMSO溶液(0.5%)单独和乙醇或乙酸乙酯提取extract-treated细胞。三个独立的实验中执行重复的进行评估。

2.5。对人外周血单核细胞细胞毒性作用(PBMCs)

这个测试是意识到为了评估测试提取物对正常的人类细胞的影响。隔离PBMCs,血液样本(10毫升)无菌heparinised管收集医学和伦理委员会控制从健康志愿捐献者。

外周血单核细胞被孤立的使用标准Ficoll-hypaque密度离心。接口淋巴细胞收获和洗两次与无菌磷酸盐(PBS)。细胞毒性效应MTT测试在同一测量条件和浓度如上面详细的肿瘤细胞。

2.6。化学分析的小檗属植物寻常的提取

这个分析是由一个质谱色谱法耦合(HPLC-MS)的国家科学和技术研究中心(CNRST)实验室(摩洛哥拉巴特)。HPLC-MS分析是由279 nm和30°C使用RP-C18列(150×4.6)×5μm热费希尔装置配备一个测量员泵耦合到PDA探测器(二极管阵列检测器:200 - 600 nm)和大规模spectrometry-ion陷阱LCQ优势(ESI)(美国加利福尼亚州圣何塞热Finnigan)。一个恒定的流速为0.5毫升/分钟的极性流动相(解决方案1:水/ 0.05%三氟乙酸;解决方案2:乙腈/ 0.05%三氟乙酸)极性改变在76分钟的分析,推动20μl要分析提取的非极性固定相列。样品直接传递给一个质谱仪原理居住在气体分离phase-charged分子(离子)基于质量/电荷比率m / z。完整的扫描质量数据m / z在正面和负面两种方式获得。

2.7。分析细胞凋亡诱导

使用膜联蛋白的细胞凋亡分析V-streptavidin FITC测试。简单地说,MCF-7细胞(4×10⁴细胞)治疗24-well IC板_30.乙醇提取物(0.2μg /毫升)或集成电路_30.小檗碱(0.67μg /毫升)或增加血清饥饿条件下(作为一个积极的控制)。后6小时、12小时和24小时孵化项目在相同的培养条件,PBS的细胞被洗,沾膜联蛋白V-fluorescein异硫氰酸酯(FITC)和治疗与链霉亲和素共轭FITC。荧光是观想使用一个奥林巴斯显微镜BX51配备荧光滤光片和CytoVision软件为了检测细胞凋亡诱导。分析是基于能力的膜联蛋白V(绿色荧光)绑定到磷脂酰丝氨酸暴露表面的细胞发生凋亡[14]。

2.8。抗氧化活性测定

研究了提取和小檗碱在甲醇稀释,和150年μl 0.004%的DPPH添加在每个包含系列浓度的提取,小檗碱,和积极的控制(维生素C)。在室温下在黑暗中孵化后30分钟,吸光度测量在515 nm (15]。DPPH自由基的存在导致了深紫色的颜色解决方案。减少DPPH自由基的抗氧化结果变色的解决方案。抑制的百分比计算使用以下方程: 在515纳米波长在哪里一个₀积极控制吸光度和吗一个_年代提取小檗碱的吸光度。

2.9。一氧化氮的影响MCF-7肿瘤细胞系用结晶紫的测试

我们使用S-nitroso-N-acetylpenicillamine(临时)一氧化氮(NO)供体发布以来没有在生理条件下,成为一个有用的工具来进行药理和生理研究的行为没有(10]。研究了细胞毒性活动MCF-7肿瘤细胞系和测量使用结晶紫染色测试所描述的Zyad et al。16]。目标细胞被洗两次,放在96孔微量滴定板(Bioster、意大利)6×10的密度³细胞在100 /毫升μl /完成的培养基。然后,100年μl的培养基含有浓度的吸附减少,已经在DMSO和PBS,水溶性添加在每个含有细胞的微量滴定板200μl的最后一卷。48 h后孵化在湿润的气氛中在37°C和5%的公司₂中被删除,取而代之的是100μl 0.5%的结晶紫的解决方案。10分钟后在室温下孵化,盘子都仔细清洗,可行的结晶紫染色细胞细胞溶解1% SDS的解决方案。吸光度在540海里然后测量在每个使用Multiskan装置(Labsystems,芬兰赫尔辛基)。因此,细胞毒性效应测量使用以下公式: 在OD₀分别和OD获得的光密度,未经处理的细胞和SNAP-treated细胞。三个独立的实验中执行重复的进行评估。

2.10。一氧化氮的影响和小檗碱MCF-7细胞系

测量后对MCF-7小檗碱细胞株的细胞毒性效应用结晶紫染色法测定之间的合作程度,黄连素,决心通过使用组合指数(CI)分析非常数的比例;药物组合,是由不同的一种药物的浓度(黄连素)同时保持第二药物(SNAP)浓度固定在IC_30.。

描述的组合效应是测量由周和Talalay [17使用以下公式: 在哪里D1是剂量的药物1生产x % 2细胞死亡与药物相结合,(Dx)1是剂量的药物产生x %细胞死亡,D2剂量的药物2生产x % 1细胞死亡与药物相结合,和(Dx)2剂量的药物2生产x %细胞死亡。使用Microsoft Excel 2010 CI计算。

平均CI < 1表示合作,CI > 1表明对抗,和平均CI = 1表示可加性效应。

2.11。统计分析

这项研究的结果发表在平均值±标准差的形式一式三份的化验。平均值的比较是由Microsoft Office Excel软件。的差异被认为是重要的 。

3所示。结果

3.1。体外细胞毒性的影响小檗属植物寻常的提取

体外细胞毒性的活动小檗属植物寻常的MTT试验对提取测定MCF-7肿瘤细胞系在不同浓度。这个活动是评估的乙酸乙酯和乙醇提取根吠叫。结果总结在图1。

细胞培养48 h的提取物浓度的增加小檗属植物寻常的和细胞毒性活动MTT测试测量在材料和方法部分描述。此图所示,各种提取的细胞毒性活动是剂量依赖性。事实上,只要浓度增加,细胞生存能力下降的百分比。然而,这种效应是不同的从一个提取到另一个;可行的百分比MCF-7细胞治疗乙醇提取物的浓度迅速下降只有50% 3.54μg /毫升。然而,乙酸乙酯提取低细胞毒性,导致浓度只有50%的存活数量等于596.7μg /毫升。值得注意的是乙醇提取的细胞毒性效应相当的积极控制(图1)。

3.2。评价小檗属植物寻常的提取细胞毒性对正常人外周血单核细胞(PBMCs)

为了调查的影响乙醇和乙酸乙酯提取物和小檗碱对正常的人体细胞分子,正常的人类PBMCs孵化了这些提取物浓度增加那些用来对付MCF-7相同条件下肿瘤细胞。结果如图所示2。

细胞培养48 h的提取物浓度的增加小檗属植物寻常的小檗碱的分子,然后细胞毒性活动MTT测试测量在材料和方法部分描述。

这个数字表明,尽管浓度的增加刺激,可行性的百分比PBMCs大体上是常数(近100%)。结果表明,这些产品都是容忍由正常的人类细胞的细胞毒性研究产品特定的肿瘤细胞。这些结果是有趣的,因为不属预定目标的肿瘤细胞的实际是原点的系统性毒性抗癌产品。

3.3。乙醇提取物的化学成分分析

只要我们发现乙醇提取的小檗属植物寻常的最MCF-7细胞株的细胞毒性效应,与乙酸乙酯,我们决定探索化学成分的提取使用高效液相色谱与质谱(HPLC / MS)的方法。结果如图所示3。考虑到保留时间和质量/电荷(m / z)的比例不同的色谱峰,我们发现五个主要部分:jatrorrhizine,非洲防己碱,columbamine,黄连素,epiberberine,如表所示1。

3.4。小檗碱对MCF-7细胞株的细胞毒性效应

鉴于小檗碱的乙醇提取是最具代表性的分子小檗属植物寻常的,我们查询是否提取的细胞毒性的活动是由于这个分子。然后,我们进行了比较测试的小檗碱和乙醇提取的细胞毒性效应。测试进行了使用MTT试验在相同条件下与前面上面描述的细胞毒性测试。结果如图所示4。如这个图所示,小檗碱对MCF-7肿瘤细胞也有类似的作用随着乙醇提取物与无意义的差异,表明乙醇提取物可能是介导的细胞毒性效应主要由小檗碱。

这些细胞被培养48 h和小檗碱浓度增加,顺铂或乙醇提取小檗属植物寻常的和细胞毒性活动MTT测试测量在材料和方法部分描述。

3.5。评价小檗碱和一氧化氮(NO)对肿瘤细胞结合作用

一氧化氮(NO)是一种强有力的抗肿瘤产品(23- - - - - -25]。为了确定对小檗碱的影响,没有组合MCF-7肿瘤细胞系(协同、相加性或对立),我们使用了组合Chou-Talalay指数(CI)分析的方法。接下来,我们的细胞毒性效应评估S-nitroso-N-acetylpenicillamine(临时)没有捐赠者独自孤单和小檗碱对MCF-7细胞系在同等条件下(表2)。然后,我们评估的影响吸附浓度时他们的结合常数IC_30.价值观和小檗碱浓度变化从1075年0.525μMμM(表3)。

这是显示在表2没有单独和小檗碱的细胞毒性活动增加剂量依赖性的方式。事实上,只要浓度增加,细胞毒性也显示增加溶解比例迅速增加,达到50%的浓度92.4μM 60μM吸附和小檗碱,分别。

结合时值得注意的是,小檗碱和快速诱导细胞毒性强的活动如表所示3。协同活动观察小檗碱的浓度从8.4到33.6(μMμM结合的IC30提前(15.84μM)。然而,在高或非常低浓度(< 8.4μM)的小檗碱,在敌对的效果观察(表3)。

3.6。抗氧化活性的小檗属植物寻常的提取和小檗碱

调查是否和小檗碱小檗属植物寻常的提取物抗氧化活性,我们分析了自由基清除的百分比的影响下这些产品用DPPH (1.1 -diphenyl-2-picrylhydrazyl)技术(15]。结果表示为一个百分比的抑制自由基DPPH(图5)。

这个数字显示,清除自由基(DPPH)的百分比增加浓度的研究产品(乙醇提取、乙酸乙酯提取物和小檗碱)。在这个图表明,随着这些产品的浓度增加,捕获DPPH的比例也增加。有趣的是,当乙醇和乙酸乙酯提取物显示出比较抗氧化活性IC₅₀= 69.65μg /毫升和77.75μg /毫升,分别只没有显著差异,显示小檗碱抗氧化活性较低。

3.7。凋亡细胞死亡感应的乙醇提取小檗属植物寻常的和小檗碱对肿瘤细胞

为了有助于理解分子机制参与观察到的细胞毒性的活动小檗属植物寻常的乙醇提取物及其主要部件的动力学研究berberine-induced细胞凋亡测定进行了使用膜联蛋白V-FITC测试6小时,12小时,24小时。事实上,利用异硫氰酸荧光素(FITC)共轭膜联蛋白V是一个标准程序监控细胞凋亡的进展。事实上,早期凋亡细胞被膜联蛋白V-positive与一个完整的膜透性,而后期(晚期)凋亡细胞被膜联蛋白V-positive和失去膜透性。可行的细胞仍然是清白的(膜联蛋白V-FITC-negative) [14)(图6)。

结果表明,小檗碱和乙醇提取通过细胞凋亡机制诱导MCF-7细胞的死亡。有趣的是,细胞用小檗碱治疗正在经历早期细胞凋亡与细胞治疗与乙醇提取显示晚期(晚期)细胞凋亡在6小时的刺激,因为他们都是膜联蛋白V-positive膜改变的差异。此外,随着时间的推移,小檗碱和乙醇提取细胞膜变更所增加(图12 h和24小时的刺激6)。

4所示。讨论

本研究旨在评估摩洛哥的抗肿瘤和抗氧化特性小檗属植物寻常的。东部Oujda伏牛花植物收集,摩洛哥,秋季早期冬季结束时(2014年12月)。我们进行了提取从其根叫使用两种不同极性溶剂:乙酸乙酯和乙醇。

在这工作,第一次,我们评估的影响这两个提取物对人体乳房腺癌细胞系(MCF-7)。尽管他们表现出突出的细胞毒性活动对这些肿瘤细胞,乙醇提取细胞毒性高于乙酸乙酯IC₅₀596.71 = 3.54μg /毫升和μg /毫升,分别。这不同的影响可能是由于两个不同极性的溶剂。此外,随着乙醇溶剂极性比乙酸乙酯,乙醇提取特定分子的植物化学的成分,它对MCF-7靶细胞细胞毒性的权力。

此外,植物化学的考试HPLC / MS进行乙醇提取,因为其庞大的细胞毒性的活动对MCF-7细胞株与乙酸乙酯提取物,揭示存在的几种主要分子包括jatrorrhizine,非洲防己碱、小檗碱,epiberberine columbamine。根据我们的乙醇提取物色谱分析和结果Ghareeb et al。3]谁发现1毫克的乙醇提取根叫的小檗属植物寻常的含有0.62毫克的小檗碱、乙醇提取可能主要由小檗碱的分子组成。这些结果是在协议与其他研究结果报告这些分子的存在,其他人根据提取溶剂类型和考虑植物的一部分(26,27]。几个因素可能负责化学成分的变化,从而提取物的生物活性小檗属植物寻常的诸如气候、土壤、栽培时间,保存和提取方法。然而,在这些小产品的参与活动是无法忽视的。

比较我们的结果还表明,当乙醇提取和小檗碱的细胞毒性效应,我们注意到,他们的影响是类似于无意义的差异。这表明,乙醇提取的细胞毒性效应主要是由小檗碱,具有细胞毒性和IC活动₅₀= 8.75μg /毫升MCF-7细胞使用MTT测试。

由于癌症化疗的一个主要问题是系统性毒性由于破坏正常细胞的抗癌药物,我们测试了我们的产品在正常的人类外周血单核细胞(PBMCs)。研究结果表明,所有的刺激诱导毒性浓度在肿瘤细胞对正常细胞无细胞毒性的影响。这些结果与那些Ghareeb et al .,发现乙醇提取物和小檗碱对正常PBMCs没有抗增殖作用,尽管他们报道,正常细胞的孵化72 h后用乙醇提取小檗碱,观察轻微刺激PBMC的扩散(3]。这个结果是非常有趣的,因为不属预定目标的肿瘤细胞的抗癌产品造成系统性毒性是最大的问题。这些结果证实发现乙醇提取物抗病毒药物(尤其是针对丙型肝炎)和抗真菌效果(反对黄曲霉),可能由于其免疫刺激性能力,增加吞噬细胞的活动(3)也因其抗氧化作用的马来西亚伏牛花(28]。

组织和细胞暴露于氧化应激表现出膜的改变,DNA损伤和减少DNA的修复能力,可能导致癌症的发展(29日]。因此,强大的抗氧化剂的研究有助于预防癌症的主题。事实上,注入小檗属植物寻常的收集在秘鲁拥有一个有趣的抗氧化活性30.]。同样,从另一个伏牛花中提取小檗碱植物收集在印度有一个有趣的抗氧化性质,赋予其抗肿瘤活性(29日]。另一方面,其他调查发现小檗碱氧化活动(生产活性oxygen-derived ROS)对肿瘤细胞(31日- - - - - -33]。这些不同的结果让我们评估我们的提取物的抗氧化潜力和小檗碱在体外。我们的研究结果表明,乙醇和乙酸乙酯提取物有一个非常大的抗氧化潜力,和这些结果证实了研究Hanachi和Golkho报告的强力的抗氧化活性小檗属植物寻常的乙醇提取物(28]。

然而,在相同的浓度检测提取,只有25%小檗碱抑制自由基清除两个提取相比,以DPPH测试,证明不是很小檗碱抗氧化剂。这是在协议与几个报告,比如Keawpradub等人的工作报告,小檗碱抗氧化活性(EC低₅₀> 100μg /毫升)(34)和工作在CaSki人类宫颈癌行,在林等人发现小檗碱氧化活动通过增加活性氧的水平(活性氧衍生品),撼动了潜在的线粒体膜,从而降低细胞色素C在胞质进入caspase-3的激活,最终导致细胞凋亡的现象(35]。这也是同意的结果Ho et al .,使用人类的舌头癌症SCC-4行(36]。在这种背景下,我们的研究表明乙醇和乙酸乙酯提取物的抗氧化作用是由于分子除了小檗碱。此外,Hanachi的结果和Golkho表明伏牛花的乙醇提取物的抗氧化作用可能是由于它丰富的酚类化合物(28]。

另一方面,我们研究了乙醇提取的细胞毒性效应的分子机制和使用annexin-V绑定测定小檗碱在6 h, 12小时和24小时。磷脂酰丝氨酸外在化与荧光显微镜的程度评估通过观察streptavidin-fluorescein异硫氰酸酯(FITC) annexin-V绑定。我们发现细胞凋亡现象开始前,在6 h IC的刺激_30.小檗碱和乙醇提取,乙醇提取的细胞治疗显示损坏膜与黄连素治疗的。细胞之间的膜形状的差异处理乙醇提取和小檗碱可能是由于其他分子中包含的乙醇提取细胞膜受损(凋亡晚期)。事实上,它最近报道,非洲防己碱盐酸盐,乙醇提取化合物之一,显著增加了早期和晚期MCF-7细胞的凋亡率(37]。

此外,一些研究报道berberine-induced在不同细胞系细胞凋亡,例如,人类非小细胞肺癌,人类细胞,表皮样癌A431, U937、B16转椅,HL-60, MCF-7细胞(38- - - - - -42]。

小檗碱治疗可能存在剂量依赖的相关性和时间的方式,增加Fas蛋白表达和诱导FasL表达在肿瘤细胞株(43,44]。它还增加了伯灵顿基因蛋白表达在肿瘤细胞33,39,45- - - - - -47]。小檗碱的变更proapoptotic和凋亡基因表达可能是部分由活性氧的生成(ROS) [43]。在这个工作中,表现出apoptosis-promoting小檗碱和抗增殖效果MCF-7乳腺癌细胞系。这一发现是在协议与林等人,帕蒂尔et al。42,48)报道,诱导细胞凋亡的小檗碱是通过细胞周期中断和DNA碎片mitochondria-dependent通路通过增加水平的胞质细胞色素C, caspase-9活动,和PARP的乳沟,而减少的bcl - 2在MCF-7细胞水平。也被报道,小檗碱抑制cox - 2的转录活动存在剂量依赖的相关性和时间依赖方式MCF-7细胞(42]。小檗碱可能可以作为一个潜在的天然化合物对乳腺癌的治疗。

另一方面,评价协同或拮抗药物结合使用是癌症化疗发展不可或缺的一部分。在本文中,我们研究了小檗碱的组合效应结合S-nitroso-N-acetylpenicillamine(提前),一氧化氮(NO)供体,在生理条件下。这个试验是进行使用Chou-Talalay方法(17]。的选择没有基于事实,这种分子被描述为一种有效的生理抗肿瘤剂(23- - - - - -25]。此外,没有被证明都保护和有害的功能(49,50]。我们调查的影响没有乳腺癌细胞,发现它表现出一个杰出的体外细胞毒性剂量依赖性的方式对MCF-7细胞系。

据我们所知,小檗碱之间的交互和没有捐赠者没有以前文献中描述。但是,不可以在许多方面涉及氧化应激损伤细胞,DNA损伤,蛋白质改性,干扰能量代谢,干扰钙稳态和线粒体功能障碍。根据上下文和严重性的破坏,这种干扰可能导致细胞死亡通过坏死或凋亡,或在成功的修复和细胞生存49]。小檗碱在我们的研究中,结合没有供体(提前用于IC_30.),诱导协同细胞毒性活动小檗碱的浓度从8.40μMμM到33.60。然而,在其他的测试浓度,在敌对的效果观察。这些结果可能表明存在的微分的小檗碱和快速交互机制MCF-7细胞剂量依赖性的方式。事实上,预防或诱导细胞凋亡不可以调制相互作用存在剂量依赖的相关性;在低浓度,保护细胞通过抑制肿瘤坏死因子α全身的细胞凋亡,但在高浓度时,没有发生凋亡内皮细胞(10,50]。这把双刃剑效应不可能有重大影响的交互与黄连素,导致不同组合效应(对立和协同)在乳房MCF-7癌细胞。据我们所知,这是第一次,小檗碱的相互作用,已经被报道。

5。结论

总之,我们的研究首次表明选择性摩洛哥乙醇提取的细胞毒性的影响小檗属植物寻常的对MCF-7肿瘤细胞系取决于剂量的接触而不影响正常细胞,这种细胞毒性效应可能是由于其主要化合物小檗碱。我们还报道说,乙醇提取和显示凋亡细胞溶菌作用的途径,强调了小檗碱抗氧化行为。另一方面,这是第一个报告体外相互作用小檗碱和捐赠。

我们的研究提供了一个依据未来的临床研究小檗碱在癌症患者,单独使用或结合NO-inducer药物。佐剂机理与黄连素化合物治疗可能会显著提高临床疗效。连同先前报道,本研究发现在文学,将有助于改善我们的理解对小檗碱的分子机制作为抗癌剂。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关这篇文章的出版。

确认

这项工作是支持Lalla萨尔玛基础:预防和治疗癌症。研究项目。09年/美联社2013 (Rabat-Morocco)。作者感谢CNRST,拉巴特、摩洛哥、HPLC-MS分析和感激地承认Azeddine易卜拉欣教授穆罕默德大学5,拉巴特摩洛哥、他的帮助在细胞凋亡检测。作者也要感谢教授Jędrzej Antosiewicz, Gdańsk医科大学的,波兰,看报纸和改善英语。