的影响石榴花提取物在大鼠烧伤引起的皮肤损伤

文摘

背景。我们比较的功效p . granatum(P)花提取物与磺胺嘧啶银盐(SSD)治疗热烧伤大鼠。方法。在每组十Wistar鼠局部给定的底霜,生理盐水、奶油含有1% SSD,或面霜含有5%或10%石榴花中提取。处理管理每天一次,直到完成观察伤口愈合。伤口面积和愈合时间进行评估。此外,伤口收缩比例和组织病理学特点,如确定新血管形成和胶原蛋白的形成。丹宁酸含量p . granatum提取决心。结果。减少15天的平均大小的伤口治疗的小鼠高霜含有p . granatum提取含奶油的小鼠比SSD (厘米²与厘米²)。在25天伤口完全愈合,治疗的大鼠治疗霜含有p . granatum花提取的小鼠相比与其他代理。结论。这些结果表明,p . granatum花提取物在大鼠和促进伤口愈合可用于管理烧伤。

1。介绍

烧伤病人是一个全球公共卫生问题,特别是在不发达国家,缺乏足够的医疗设施,在发病率方面,长期残疾,和死亡率(1,2]。烧伤感染是关键的并发症和负责各种健康问题1]。燃烧与高昂的医疗保健成本,多种手术过程,长时间的康复期,长期残疾,住院时间延长,身体四肢,感染,甚至死亡3- - - - - -7]。接触到热水灼伤(最常见的原因之一6]。烧伤伤口愈合是一个复杂的过程,适当的伤口愈合恢复中断的关键解剖连续性和干扰功能状态的皮肤(7]。伤口愈合涉及三个阶段,即炎症、组织形成,和组织重构(8]。面霜含有1%磺胺嘧啶银盐(SSD)主要用于治疗烧伤因为SSD的抗菌活性1,4,9,10]。然而,SSD与一些缺点如延迟伤口愈合,发展阻力,肾毒性、白血球减少症,不良反应(4,5,10]。因此,重要的是要找到一个更有效的药物治疗烧伤用更少的副作用。

治疗烧伤的天然产品的使用是健康管理的一个重要组成部分,是一个足智多谋的方法提供更有效和更便宜的医疗选择(11- - - - - -13]。石榴林恩。(石榴科),俗称石榴,是一个小的树原产于地中海地区(14,15]。这棵树叫Golnar在伊朗的传统医学。几项研究已经检查对于伤口愈合(草药的功效11,13,15]。的水果和鲜花Golnar家庭疗法用于治疗胃疼痛,胃肠道感染,出血或胃痛,痢疾,hemorrhagia和伤口愈合15,16]。这个草药有抗肿瘤,止泻剂,抗溃疡,抗真菌,抗氧化剂和王亚南属性(14,17]。p . granatum提取物已被用于治疗糖尿病和微生物感染(18,19]。此外,一些研究已经表明,石榴花的提取物对伤口愈合有有益的影响。在目前的研究中,我们比较了含霜的效果p . granatum与奶油花提取包含SSD在大鼠烧伤伤口愈合。

2。材料和方法

2.1。的制备p . granatum花提取物

植物材料。p . granatum花儿从当地购买草药药品市场(纱丽,伊朗)在2013年的夏天。这些花的身份证实了高级植物学家穆罕默德博士Azadbakht马赞达兰大学的医学科学,伊朗(标本号:1003)。花儿是干在室温和使用磨粉。水乙醇(70%)逐渐添加到花,粉和混合物在室温下一直没有暴露在直射光72 h。过滤后,解决方案集中在旋转蒸发器压力降低。旋转蒸发器的温度是40到50°C。鲜花的hydroalcoholic提取粉在冷冻干燥机。干提取的收益率为26.8%。

2.2。高效液相色谱分析p . granatum花提取物

高效液相色谱法。丹宁酸的浓度p . granatum花提取物被执行高效液相色谱分析。高效液相色谱法进行了HPLC Knauer Smartline系统(Knauer协会、德国)包含泵1000毫升、溶剂输送系统、取样器注入器,光电二极管阵列检测器(模型爸爸2800;所有从Knauer协会购买)设定在280 nm和附加到ChromGate软件(版本3.1.7)。分析了使用c18色谱柱(250×4×6毫米,5μ米粒子大小;NUCLEODUR Duren、德国)和相应的列。所有的溶剂过滤和脱气前注射到列。流动相是methanol-water-phosphoric酸(50:50:0.01),和流动相的流速为1.0毫升/分钟。在环境温度进行了测量。

2.3。单宁的测定p . granatum使用分光光度法方法

丹宁酸中p . granatum花对分光光度法测定提取利用Folin-Denis试剂(20.]。在这种方法中,丹宁酸中的Folin-Denis试剂(phosphomolybdic-phosphotungstic试剂)在碱性溶液。产品的吸光度测定6505 760海里用紫外分光光度计(英国Jenway)。校准曲线(标准)是准备使用一些鞣酸含量(0.1 1毫克/毫升)。含有1毫克/毫升的三种方案p . granatum准备花提取物,其吸光度是读同样的丹宁酸的标准溶液。单宁酸的浓度p . granatum花中提取使用校准曲线进行了计算。所有的试剂用于分光光度法从默克公司(德国)获得。

2.4。准备和制定霜含5%和10%p . granatum花提取物

p . granatum花提取物混合液体石蜡,硬脂醇,十六醇,跨越80年在70°C。80年的水相制备通过添加渐变,丙和尼泊金甲酯,甘油在蒸馏水和通过加热到70°C。接下来,水和油阶段混合和均质在500 rpm,持续15分钟。奶油被允许在室温下冷却均匀化。所有公式都储存在4°C, 25°C,和40°C两周,及其稳定性评价。

2.5。研究动物

实验动物研究协议是批准的伦理和马赞达兰大学医学科学研究委员会(118 - 92)。雄性Wistar鼠(;体重:160 - 200克;年龄:8 - 10周)得到马赞达兰大学的医学科学。他们被安置在标准条件下室温12 h与实验室光/暗周期和提供食物和水随意。老鼠被注射50毫克/公斤的硫喷妥钠麻醉腹腔内,和背上被刮,用70%的乙醇清洗。一个绝缘框的基础准备2×5厘米,被用来诱导基线在老鼠受控条件下燃烧。盒子里的老鼠被放置在仰卧位,与他们的背暴露于热水在90°C 6 s [4]。这种方法允许一个精确的直径的燃烧皮肤和导致常规,矩形二级烧伤(大约10%的总身体表面)的老鼠。这个设备可以帮助创建一个控制燃烧在动物模型。所有的老鼠都立即复苏注入5毫升生理盐水腹腔内(4,6]。

老鼠与烧伤包含10大鼠随机分为5组。第1组是对照组的老鼠只有使用生理盐水治疗没有任何局部治疗。老鼠2治疗组与基础霜没有任何有效的代理。老鼠在3组治疗霜含有1% SSD (Behvarzan制药公司、伊朗)。老鼠与面霜含有治疗组4和5 5%和10%p . granatum分别花提取物。所有的治疗都开始24小时后燃烧伤害。伤口是日常穿一次。在穿衣服之前,在所有组用生理盐水洗净伤口,伤口被类似的薄层覆盖的奶油在每组。72小时后,所有的组伤口敷料后保持打开状态。量化伤口愈合的速度,确定病变的面积在1、3、7、10、14、20、25、30、33燃烧后受伤。伤口面积平方毫米在每一天的实验,测量了统治者和照片。伤口收缩比例在每个时间点决定使用以下公式:伤口收缩比例=(最初的伤口面积−电流)/最初的伤口面积×100。测量了每日由相同的考官用尺子和拍照(7,21]。

2.6。组织学分析

皮肤组织标本进行组织学分析得到麻醉下做一个小中心地区的切除后的伤口在天8日和21燃烧伤害。组织样本是固定在10%福尔马林和嵌入石蜡。石蜡包埋组织切成4块μ米厚的部分与苏木精和伊红染色。光学显微镜进行评估血管增生等病理变化,肉芽组织(GT)的形成,和reepithelialization伤口(4,6,7]。结果表示为平均10微观领域。组织病理学分析是由评估reepithelialization。Reepithelialization决心通过测量以下参数:表皮层的厚度,厚度颗粒细胞层,组织鳞状细胞和角蛋白层和orthokeratin的程度。完成治疗被确定评估程度的疤痕形成,胶原组织和神经支配,形成毛囊在3周后燃烧伤害。0 - 3分被分配到所有的参数值:0 =缺席,1 =温和,2 =适度,和3 =强烈(7]。胶原蛋白组织得分也在0 - 3水平如下:0 =−,落后、混乱和不佳的胶原纤维1 = +,胶原纤维横向的10 - 20%2 = + +,横向的30 - 40%的胶原纤维3 = + + +,格式良好的,水平导向的胶原纤维

细菌学的评估。拭子从烧伤创面换药前第四和第八天。样本收集和转移到实验室进行测试。在定量计算研究中,0.5毫升的生理盐水被添加到每个样本。每个样本稀释扩散到血液琼脂和MacConkey琼脂板在37°C孵化24 h。诊断测试的殖民地与新生霉素应用测试histopathologist蒙蔽。

2.7。统计分析

伤口每天网站进行评估。宏观评价进行日常的直接观察伤口敷料。发炎组织表现为水肿,分泌物,发红,暗分泌物或脓液,疼痛,出血在伤口敷料。使用SPSS统计分析软件和MS Excel。单向方差分析被用于比较定量变量组中。矫正人员事后多重比较测试是用来比较各组之间的手段。组之间的差异被认为是重要的。

3所示。结果

在这项研究中,一个权力平等主义的洗脱甲醇在酸性水介质被用来分析丹宁酸浓度p . granatum花中提取。丹宁酸的分离图所示1。鞣酸标准的典型的保留时间为3.7分钟,3.8分钟的提取,鞣酸与峰值提取被确认的纯粹的丹宁酸。丹宁酸的纯度在高效液相色谱色谱峰被确认使用光电二极管阵列检测器。纯丹宁酸的紫外光谱的一样是单宁酸的高效液相色谱色谱峰p . granatum花提取物(图1)。丹宁酸含量p . granatum花中提取使用分光光度法。校准曲线的标准溶液鞣酸准备(=+ 0.0684,= 0.9693)的帮助下,这条曲线草本提取物的单宁含量估计。丹宁酸存在于的平均重量p . granatum花提取物是毫克/毫克(提取的)(毫克/ 100毫克的提取,即。,48.7%)。

燃烧伤害在大鼠体重的影响被记录。各组之间无显著差异观察对减肥燃烧引发的伤害。皮肤损伤测量在1、3、7、10、15、20、25、30后燃烧伤害。第一天伤口平均大小,,,,厘米²奶油含有1%的小鼠SSD,基地奶油,包含5%生理盐水、奶油p . granatum花提取物,含有10%和奶油p . granatum分别花提取物。伤口面积与面霜含有老鼠治疗p . granatum花中提取低1厘米²在治疗后20天(图2)。

伤口地区没有显著不同的组中3天,7,10后燃烧伤害但明显不同的燃烧损伤后15天)。事后多重比较菸害试验表明,治疗有面霜含有5%的老鼠石榴有1%的SSD是重要的()和10%p . granatum花提取物显示小伤口面积烧伤后15天的老鼠相比对待霜含有1%的SSD ()。老鼠的平均伤口面积在不同组如图2。没有观察到显著差异在伤口大小老鼠用生理盐水治疗,基地奶油、奶油含有1% SSD。然而,老鼠之间的显著差异的大小是在伤口治疗基地奶油和霜含5%和10%p . granatum花提取物()。伤口面积并不是不同的老鼠接受面霜含5%和10%之间p . granatum花提取烧伤后15天。

伤口收缩比例明显增加大鼠治疗霜含5%和10%p . granatum花提取的小鼠相比,与其他代理。老鼠接受奶油含有1% SSD显示较长的治疗时间比面霜含有对待p . granatum花中提取。这些研究结果在表中做了总结1。

在25天完成观察伤口愈合的老鼠接受面霜含5%和10%p . granatum花提取和与其他代理的小鼠在33天(表1)。

这些结果表明,在大鼠治疗伤口愈合p . granatum花提取物10天前发生在大鼠治疗与其他代理。燃烧的状况在受伤后伤口在天12和23日图所示3。

视觉分析烧伤创面处理基地奶油和奶油含有1% SSD显示发红和伤口水肿区域;然而,这并不是在伤口治疗霜含5%和10%p . granatum花提取液和生理盐水。实验室评估显示,没有证据表明病理细菌。天5和8,无色分泌霜出现在伤口治疗基地,10%p . granatum花提取物,生理盐水,包含1%的SSD和奶油。培养的皮肤组织样本处理上述代理在血琼脂产生大,凸,圆的,和白色的殖民地。新生霉素测试是用来区分coagulase-negative葡萄球菌。这些细菌是推断葡萄球菌epidermidis,这是一个皮肤正常菌群的一部分。重要的新血管形成和成纤维细胞的增殖观察8天的老鼠接受面霜含有5%和10%p . granatum花提取物和1% SSD与生理盐水治疗和基础霜(表2)。

GT形成观察8天在伤口治疗霜含5%和10%p . granatum花提取物和1% SSD伤口用生理盐水治疗和基础霜。GT形成得分高10%p . granatum花提取物组比伤口治疗和其他代理(表2)。

8天,巨噬细胞组织细胞的渗透和成纤维细胞的增殖是相似的伤口处理面霜含有5%和10%p . granatum花提取物、基础霜,含有1% SSD和奶油。组织病理学分析燃烧后的21天真皮损伤表明,神经支配的程度和形成淋巴导管在伤口治疗霜含有10%p . granatum花提取物比在伤口治疗和其他代理。reepithelialization组织病理学分析的结果表明,21天,颗粒细胞层厚度和表皮厚度伤口处理面霜含有10%p . granatum花提取物和1% SSD是高于伤口治疗与其他代理(表3)。此外,水平导向的胶原纤维的形成适当的张力和力量在伤口治疗疤痕组织好面霜含10%和5%p . granatum花提取物比接受其他代理(图4)。

4所示。讨论

在这项研究中,含霜的功效p . granatum花提取物在老鼠评估治疗烧伤的伤口。这项研究的结果表明,面霜含5%和10%p . granatum花提取物促进燃烧组织的愈合。包含的外用药膏p . granatum花提取更有效诱导伤口愈合比面霜含有1% SSD和其他代理。烧伤后15天,伤口大小明显小的老鼠接受霜含5%和10%p . granatum花中提取的小鼠比与其他代理。p . granatum有不同的药理性质,包括抗炎(22),抗氧化剂(23,24),抗菌3),伤口愈合25,26,抗真菌14,27),抗痉挛(28)和抗溃疡的属性(29日,30.]。我们的研究表明,乳霜含有提取的p . granatum花儿比面霜含有1% SSD更有效治疗烧伤的伤口。用面霜含有治疗p . granatum花提取加速GT形成的程度相比,奶油和生理盐水治疗基地。疤痕组织的程度和毛囊形成在伤口治疗霜含有更高p . granatum花提取物比伤口治疗和其他代理。伤口愈合的时间是短的伤口处理霜含有p . granatum花提取物比伤口治疗和其他代理。胶原蛋白组织在伤口治疗霜含有较高p . granatum花提取物比伤口治疗和其他代理。初步的化学分析p . granatum花提取表明它含有高浓度的单宁(0.487毫克/毫克,48.7%)。先前的研究已经报道说p . granatum提取物含有的多酚类化合物如鞣花酸、3、3′,4′tri -O甲基鞣花酸,乙brevifolin羧酸盐,maslinic酸、胡萝卜甙,单宁(31日- - - - - -33]。辛格et al。(2002)报告说Punica皮和种子提取物有抗氧化和抑制过氧化反应(24]。单宁对许多细菌起到抗菌作用。单宁的多酚类化合物包含hydroxylic、羧基和其它亲水集团,被认为是大分子(31日,34,35]。尽管众所周知,单宁起到抗菌作用和促进伤口愈合,这些影响的机制尚不清楚(36,37]。我们的研究表明,p . granatum花提取物中含有高水平的单宁。这可能有效的材料在这个研究促进伤口愈合。

伤口愈合是一个多相过程表现为伤口收缩,造粒,外皮形成,collagenation。伤口愈合涉及3个阶段,即炎症扩散,重构[38,39]。核扩散是紧随其后的是上皮形成、血管生成和胶原蛋白的形成。GT的最后形成扩散阶段。成纤维细胞、胶原蛋白、水肿和新血管形成和接受成熟在装修阶段,导致瘢痕组织的形成。胶原蛋白是主要的蛋白质,有助于伤口强度(8,39]。皮肤的屏障功能破坏后热损伤,这可能导致伤员感染区域的发展。感染使燃烧和延迟愈合的伤口。因此,伤口敷料应该执行适当的防止环境微生物的条目(31日,34- - - - - -40]。

我们观察到,伤口的愈合治疗霜含5%和10%p . granatum花中提取的速度比伤口治疗和其他代理。这可能是因为的有利影响p . granatum等伤口愈合参数提取血管再生,纤维素增生,伤口收缩,和胶原蛋白合成。此外,这种有益的影响p . granatum花提取物可能与它的抗菌、抗炎和抗氧化性能。这些属性的p . granatum一起花提取物可能增加,促进伤口愈合而SSD的抗菌效果标准1%。面霜含有SSD常用治疗烧伤,因为SSD的抗菌特性。尽管霜含有SSD推荐作为治疗的标准治疗烧伤的伤口,SSD的使用可能会增加住院治疗的持续时间(4,6,40]。因为面霜含有p . granatum花提取物促进伤口愈合速度比面霜含有1% SSD,这些面霜的使用可能会导致更短的住院烧伤患者。面霜含有治疗伤口p . granatum花提取物导致伤口收缩比伤口的治疗与其他代理。研究的15天,伤口收缩比例与霜包含伤口治疗p . granatum花提取物是77 - 78%和32相比,40岁,42%,伤口处理膏含有1% SSD,基地奶油,和生理盐水,分别说明p . granatum花提取物对伤口愈合有最好的影响比其他代理。

5。结论

这项研究的结果显示,包含的面霜p . granatum花提取物显著改善烧伤伤口的愈合与SSD霜含有标准1%,基础奶油,和生理盐水。这可能是相关的单宁p . granatum花中提取。因此,这项研究的结果支持使用Golnar (p . granatum)花治疗烧伤,伊朗传统医学中提到。

相互竞争的利益

作者声明没有潜在的利益冲突对这项研究的作者和/或出版。

确认

本研究支持格兰特马赞达兰大学的医学科学,纱丽,伊朗。这项研究的博士论文的主题Ebrahim Nasiri马赞达兰大学医学科学的学生。

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