离体大鼠心房在安妥在哇巴因诱发心律失常抗心律失常作用的炎性细胞因子参与

摘要

考虑到氯贝特的心脏保护和抗炎特性，本实验的目的是研究局部和全身炎症细胞因子参与氯贝特在华宾诱导的大鼠心律失常中可能的抗心律失常作用。大鼠给予氯贝特(300 mg/kg)口服，瓦巴因(0.56 mg/kg)腹腔注射。麻醉诱导后分离心房，记录心律失常和停搏的发生。测量心房炎症细胞因子的水平。与对照组相比，氯贝特明显推迟心律失常和停搏的发生(和、职责)。而瓦班明显提高对照组的心房搏动率()，而氯贝特组()。注射瓦巴因可显著增加心房和全身所有研究的炎性细胞因子水平()。预处理与氯贝丁酯能明显减弱IL-6和TNF-α的哇巴因诱导抬高α在心房(和以及ouabin诱导的血浆中IL-6升高()。根据我们的发现，氯贝特可能通过减轻局部和全身炎症因子IL-6和TNF-具有抗心律失常的作用α。

1.背景

纤维素类降血脂药物广泛用于治疗以高脂血症和高血压为主要表现的代谢综合征。纤维蛋白是过氧化物酶体增殖活化受体(PPARs)的配体[1，2]。这些受体是配体依赖的转录因子，属于核类固醇/甲状腺/维甲酸受体超家族[3，4]。ppar由三种同型组成，包括α，β和γ。PPAR -α在脂质代谢中起重要作用[五]。PPAR -α在具有高的脂肪酸氧化速率的组织，包括心脏，肝脏和肾脏[主要表达6]。它已经表明，贝特类药物通过PPARs的[防止实验性脑缺血/再灌注损伤的心脏动物7，8]。有趣的是，之前的研究表明，在PPAR-中没有观察到纤维蛋白的心脏保护作用α敲除小鼠，表明PPAR-α起着贝特类药物的心脏保护作用[关键作用7，8]。由于多数高脂血症患者都是从共患心血管疾病的人，很明显，许多心血管疾病患者使用氯贝丁酯。它已经证明，PPAR-γα激动剂具有抗炎作用[9-12]，和炎症细胞因子已被报道参与在心房和心室性心律失常[13-15]。因此，本研究的目的是探讨氯贝特对离体大鼠心房内皮素所致心律失常的影响以及局部和全身炎性细胞因子的参与。

2.材料和方法

2.1。动物

Male Wistar albino rats (body weight 250–280 g) were obtained from the Department of Pharmacology and Comparative Biology Unit (Tehran University of Medical Sciences). Animals were housed under the standard laboratory conditions, temperature°C, humidity 70%–80%, and 12 h light-dark cycle, and have自由采食获得食物和水。所有实验都是按照医学院动物实验伦理委员会的建议在德黑兰医科大学进行的。

2.2。化学制品

所有材料均得自默克公司（德国），除非另有说明。安妥来自Zahravi药业公司，伊朗的礼物。哇巴因和酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒，IL-6和TNF-α的测定α均由Sigma-Aldrich提供(美国密苏里州圣路易斯)。ELISA试剂盒测定IL-1β从Abcam公司，英国购买。

2.3。实验计划

为研究离体心房，将12只大鼠随机分为2组。第一组(治疗)给予氯贝特(300 mg/kg溶于橄榄油1 mL/kg口服)，每日1次，连续14天;第二组(对照组)仅给予橄榄油1 mL/kg口服，连续14天。为了测量炎症细胞因子，12只大鼠被分成三组。前2组给予橄榄油(1 mL/kg口服)，每日1次，连续14天;第三组给予氯贝特(300 mg/kg，溶于橄榄油1 mL/kg口服)，每日1次，连续14天。第12 ~ 14天，第一组每日1次腹腔注射1ml /kg生理盐水，第二组和第三组口服溶于生理盐水的瓦巴因，剂量0.56 mg/kg [16]每日一次（腹腔），连续三天。

2.4。孤立心房的制备

After induction of anesthesia with ketamine (80 mg/kg, Alfasan, Netherlands) and diazepam (2 mg/kg, Caspian Tamin, Iran) (i.p.), heart was rapidly removed and atria were carefully dissected from the ventricles, attached to a tissue holder, and then were immersed in a tissue bath containing 25 mL of carbogenated (95% O₂和5％CO₂)改性克雷布斯溶液在37℃和pH 7.4。溶液组成为(mM): NaCl 118.0, KCl 4.7, CaCl₂2.6，氯化镁₂1.2,不₂PO₄1.0,NaHCO₃25.0，葡萄糖11.1,EDTA 0.004，抗坏血酸0.11。向心房施加1000毫克的预负荷张力，并让组织平衡30分钟[17]。由PowerLab系统(ADInstrument, Australia)的等轴力传感器记录自发性收缩的速率和力。用LabChart软件计算心房搏动和收缩力。

2.5。测定il - 1βIL-6和TNF-α心房和血浆

在心房和血浆炎性细胞因子的水平通过特异性ELISA试剂盒测量。Briefly, each atrium was homogenized in 1 mL of phosphate buffered saline (PBS, pH 7.4) and then centrifuged at 10000 g for 15 min at 4°C. For measurement of plasma levels of cytokines, blood samples were taken and centrifuged at 4000 g for 15 min at 4°C. IL-1βIL-6和TNF-α水平通过添加样品上清液和试剂盒的试剂板孔中测量。Absorbance was read at 450 nm using a plate reader (Synergy HT, Biotek, USA), and the contents of IL-1βIL-6和TNF-α计算心房和血浆中ng/mL。

2.6。统计分析

统计分析进行了使用GraphPad Prism 5软件（圣地亚哥，CA，USA）。结果以平均值±SEM。配对学生- 试验进行比较心律失常或心跳停止的发生以及心房搏动率和收缩力治疗组和对照组之间的时间。配对学生- 试验方法检测哇巴因对组内的心房搏动率和收缩力的影响。三组间炎性细胞因子的比较采用单向进行方差分析的分析，随后是杜克的事后测试。小于0.05有统计学显著。

3.结果

3.1。孤立心房的研究

氯贝特明显推迟心律失常发作时间( min) rather than control group ( min,)。同时，我们发现实验组的停搏发生时间显著增加(，对照组为分钟(，图1)。

与哇巴因显著治疗提高的对照组中的心房跳动速率（194之前和每分钟251次的哇巴因孵育后，），而这样的效果没有治疗组观察到的（198之前和199次每分钟的哇巴因孵育后，，图2)。

Treatment with ouabain had no effect on contractile force in both groups (0.627 g before and 0.663 g after ouabain incubation for the control group,和0.569 g before and 0.573 g after ouabain incubation for the treatment group,，图3)。两组患者在应用瓦巴因(心房搏动频率，图2和对收缩力，图3)。数字4一般比较了两组之间的变时性和变力的特性,但对照组(a)心律失常的强度大于治疗组(b)。出现心搏停止的时间也被观察到在对照组(a),峰值的形状是正常的乌本苷在孵化前两组(c, d)图图4（e）对照组心律失常明显，治疗组(f)心律失常严重程度较小。

3.2。IL-1的水平βIL-6和TNF-α心房和血浆

如图五，哇巴因注射显著增加所有研究的炎性细胞因子的水平的心房（对il - 1β和IL-6和对于TNF-αα)。氯贝特预处理可减弱瓦滨诱导的IL-6和TNF-的升高α在心房(和，RESP，图s图5（a）和图5（b）），而它未能降低IL-1的哇巴因诱导高程β（，图图5（c）)。

类似地，哇巴因升压所有炎性细胞因子的血浆水平显著（，和对il - 1βIL-6和TNF-α，RESP，图6)。然而，预处理氯贝丁酯只能逆转IL-6在血浆中的哇巴因诱导抬高（，图图6（a）)，而它并没有减少内皮素诱导的TNF-的增加α和il - 1β血浆水平(， 数据图6（b）和图6（c）)。

4.讨论

心律失常是危及生命的医疗条件。由于大多数抗心律失常药物有严重的不良影响，寻找更安全的抗心律失常药物具有副作用少已提出在文献。在本研究中，我们调查安妥明对哇巴因诱发心律失常离体大鼠心房的影响。为了这个目的，心律失常和炎性细胞因子的测定诱导哇巴因或车辆给出的大鼠中进行。我们的研究结果表明，氯贝丁酯，作为PPAR-γα激动剂，成功地诱导通过延缓其发作和减少特别是IL-6的分离的大鼠心房哇巴因诱导的心律失常的强度和减少炎性细胞因子的哇巴因诱导的标高的抗心律失常作用。另外，氯贝丁酯缓解哇巴因的正性频率作用。

有报道称，瓦巴因可诱导促炎细胞因子的产生。例如，Matsumori等表明，ouabain的孵育增加了IL-1的水平α,il - 1β和IL-6培养的人外周血单核细胞[18]。他们还报告说，哇巴因能增加生产的肿瘤坏死因子α[19]。与之前的研究一致，我们发现ouabain增加了促炎细胞因子(IL-1)βIL-6和TNF-α在两个心房和血浆，图的五和6），在处理的大鼠的心房。此外，我们证明了氯贝特在心房（IL-6，降低了炎性细胞因子TNF-αα， 数据图5（a）和图5（b））和血浆（IL-6，图图6（a）)。对此，Jiang等报道PPAR-γ激动剂可抑制福波尔酯诱导的IL-1升高βIL-6和TNF-α[20]。此外，它已经表明，PPAR-γγ激动剂通过抑制TNF-的作用改善胰岛素抵抗α在脂肪细胞[21]。虽然这些报道都提到了PPAR-的保护作用γ针对炎性细胞因子受体激动剂，我们在PPAR-的情况下，发现了这样的效果α受体激动剂。

炎症细胞因子在病理条件下介导炎症反应中起关键作用。肿瘤坏死因子-αIL-1刺激IL-6等其他炎症细胞因子的释放[22]。有证据表明，患者冠状动脉旁路移植术后发生房颤与IL-6升高有关[23，24]。类似的研究报道房颤导致心脏内炎性细胞因子的隔离[13，14]。与IL-6，还有许多发表的研究，表明TNF-α（在一定程度上的IL-1β）具有致心律失常性质。在此背景下，TNF-α和il - 1β已经报道了通过从肌质网钙泄漏的增加，以提高敏感性心律失常大鼠心室肌细胞[15]。此外，它经常报道TNF-α的过度表达α在转基因动物会导致各种房性和室性心律失常[25-28]。近期证据表明，炎症因子主要为TNF-α，有助于室性心律失常的病理生理[29]。这些发现证明了本研究的结果，并加强了我们的假设，即局部和全身炎症细胞因子的抑制调节了PPAR-的抗心律失常特性α激动剂，氯贝丁酯。看来，IL-6在介导安妥明的抗心率失常特性的作用比TNF-α更加突出α的，因为减少了氯贝特IL-6，局部和系统，而仅降低TNF-α的局部正视α。在另一方面，安妥明的局部抗心律失常作用似乎优于全身抗心率失常特性。

研究的几行表明，有心房颤动等多种心律失常的代谢综合征和脂质代谢紊乱[率高三十，31]。证据表明，预处理PPAR-α激动剂氯贝特可使大鼠实验心肌梗死面积减小43% [32]，它是公认的心肌梗塞和缺血可引起大多数类型的心律失常。Tabernero等。和乐等。也有报道说，PPAR-γα激动剂保护心脏对缺血再灌注损伤[7，8]。由于氯贝特调节脂质代谢，这种作用也可能部分解释其抗心律失常的特性，这可以在未来的研究中进行研究。虽然在本研究中我们没有使用缺血-再灌注模型来诱导心律失常，但氯贝特可以显著推迟华安霉素所致心律失常的起病时间。

5。结论

结论安妥明可能拥有在减少心律失常抗心律失常的性质。似乎氯贝特示出通过一些局部和全身炎性细胞因子的调制包括该有益作用的IL-6和TNF-αα。

利益冲突

这篇论文的作者没有与其他可能对论文内容产生不适当影响或偏见的人或组织有财务或个人关系。

作者的贡献

Somayeh莫拉迪和瓦希德Nikoui同等贡献这项工作。

承认

这项研究是由医学科学德黑兰大学（TUMS）格兰特没有支持。90-03-30-15062。

参考文献

1. B. M. Forman, J. Chen，和R. M. Evans，“降血脂药物，多不饱和脂肪酸，和二十烷酸是配体的过氧化物酶体增殖活化受体和德尔塔，”美国国家科学院院刊卷。94，没有。9，第4312-4317，1997。查看在：谷歌学术搜索
2. T. M. Willson和W. Wahli，《过氧化物酶体增殖活化受体激动剂》，化学生物学的最新观点，第1卷，no。第235-241页，1997年。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
3. R. M.埃文斯，“类固醇和甲状腺激素受体超家族，”科学卷。240，没有。4854，第889-895，1988。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
4. J. McKenna, R. B. Lanz，和B. W. O'Malley，《核受体辅调节器:细胞和分子生物学》，内分泌检查卷。20，没有。3，第321-344，1999。查看在：谷歌学术搜索
5. A. Chawta, J. J. Repa, R. M. Evans, D. J. Mangelsdorf，《核受体和脂质生理学:打开x档案》，科学卷。294，没有。5548，第1866至1870年，2001年。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
6. O. Braissant，F. Foufelle，C.斯科托，M.Dauça和W. Wahli，“过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）的差异表达：PPAR-的组织分布α,β和 -γ在成年鼠中，”内分泌学第137卷第2期1, 1996年354-366页。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
7. “过氧化物酶体增殖剂活化受体的活化”，国立台湾大学化学与化学研究所硕士论文α预防心肌缺血损伤并改善血管内皮舒张。BMC药理学卷。2，2002年第10条。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
8. T.-L.乐，W.宝，B. M. Jucker等人，“过氧化物酶体增殖物激活受体的激活α免受缺血/再灌注损伤的心脏，”循环第108卷，no。19，页。2393年至2399年，2003。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
9. D. S. Straus和C. K. Glass，“PPAR配体的抗炎作用:细胞和分子机制的新见解”，免疫学的趋势卷。28，没有。12，第551-558，2007。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
10. X. R. Chen, V. C. Besson, B. Palmier, Y. Garcia, M. Plotkine, and C. Marchand-Leroux, “Neurological recovery-promoting, anti-inflammatory, and anti-oxidative effects afforded by fenofibrate, a PPAR alpha agonist, in traumatic brain injury,”杂志神经创伤的卷。24，没有。7，第1119至1131年，2007年。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
11. I. P.托拉，P. Gervois，和B. Staels，“代谢病，炎症，动脉粥样硬化和老化过氧化物酶体proliterator物激活受体α，”目前脂学的观点卷。10，没有。2，第151-160，1999。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
12. 王志明，“过氧化物酶体增殖活化的受体”α激动能防止容易发生中风的大鼠的肾脏损伤、氧化应激和炎症过程。”药理学与实验治疗的，第335卷，no。2，第324-331页，2010。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
13. G. M.马库斯，L.M。史密斯，K. Ordovas等人，“心内和心房纤颤过程中炎症的心外标记，”心脏的节奏卷。7，没有。2，第149-154，2010。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
14. M. D. M.恩格尔曼和J. H.斯文森，“炎症中发生和心房纤维性颤动的延续，”欧洲心脏杂志》上第26卷，no。20，第二○八三年至2092年，2005年。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
15. 杨振民，霍普金斯，斯蒂尔，哈里森，< TNF- >α和il - 1β增加钙²⁺肌质网和易感性大鼠心室肌细胞心律失常漏”细胞钙第47卷第2期4，第378-386页，2010。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
16. S. rodriguez - mascarenhas, N. F. D. Santos，和V. M. Rumjanek，“哇巴因和糖皮质激素在诱导胸腺萎缩中的协同效应”，生物科学报告第26卷，no。2，第159-169页，2006。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
17. V. Nikoui, S. Ejtemaei Mehr, F. Jazaeri等人，“前列腺素F_2α调制心房变时反应低下到胆碱能刺激血症大鼠”欧洲药理学杂志，第748卷，第149-156页，2015年。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
18. A. Matsumori, K. Ono, R. Nishio, Y. Nose, S. Sasayama，“氨氯地平抑制ouabain诱导的细胞因子的产生，”细胞因子卷。12，没有。3，第294-297，2000。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
19. “强心糖苷哇巴因对细胞因子产生的调节和对致命内毒素血症的保护”，陈志明，陈志明，等。循环卷。96，没有。5，第1501-1506，1997。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
20. C.江，A. T.婷，和B.种子，“PPAR-γγ激动剂抑制单核细胞产生的炎性细胞因子的，”性质，第391卷，第2号1998年，第82-86页。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
21. Shibasaki, K. Takahashi, T. Itou, H. Bujo，和Y. Saito，“PPAR激动剂可以改善TNF-α在小鼠中的脂肪组织的诱导胰岛素抗性，”生物化学和生物物理研究通讯，第309卷，第1号第419-424页，2003年。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
22. 温顺泉、严宗平，“细胞因子在心肌损伤中的作用:对心脏手术方法的影响”，欧洲杂志心胸外科卷。16，补充1，第S107-S111，1999年。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
23. K.石田，“炎症性细胞因子心房纤颤后关闭泵冠状动脉旁路移植术的关系，”欧洲杂志心胸外科卷。29，没有。4，第501-505，2006年。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
24. S. N. Psychari, T. S. Apostolou, L. Sinos, E. Hamodraka, G. Liakos，和D. T. Kremastinos，“房颤患者c反应蛋白和白介素-6水平升高与左心房大小和发作时间的关系”，美国心脏病学杂志，第95卷，no。6，第764-767页，2005。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
25. B.伦敦，L.贝克C.，J.S。Lee等人。，“在与心脏衰竭转基因小鼠钙依赖性心律失常，”美国生理学杂志——心脏和循环生理学卷。284，没有。2，第H431-H441，2003。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
26. S. E.萨瓦亚，Y. S. Rajawat，T. G.拉米等人，“connexin40的下调以及与肿瘤坏死因子心脏受限过度表达的转基因小鼠的房性心律失常的发生率增加，”美国生理学杂志-心脏和循环生理学卷。292，没有。3，第H1561-H1567，2007年。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
27. 肖华，陈志军，廖洋，等，“肿瘤坏死因子-的正相关”α急性心肌梗死大鼠心肌和室性心律失常的早期表达医学研究档案卷。39，没有。3，第285-291，2008。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
28. “过表达TNF-的转基因小鼠心脏心律失常的数学建模机制。α”,美国生理学杂志——心脏和循环生理学第302卷4, pp H934-H952, 2012。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
29. M. Kowalewski，M.城市，B. Mroczko和M. Szmitkowski，“促炎细胞因子（IL-6，TNF-α）和在年轻人与室性心律失常的心肌肌钙蛋白I（cTnI）水平，”Polskie Archiwum Medycyny Wewnętrznej第108卷，no。1, 2002年647-651页。查看在：谷歌学术搜索
30. E. L. Onuchina, O. V. Solov'ev, O. V. Mochalova, S. K. Kononov, S. G. Onuchin，“代谢综合征与慢性持续性心房颤动，”Klinicheskaia Meditsina，第89卷，no。1, 2011年26-31页。查看在：谷歌学术搜索
31. A. O. Badheka，A. Rathod，M.A.奇兹尔巴什等人，“关于降脂治疗的影响的结果在心房纤维性颤动，”美国心脏病学杂志卷。105，没有。12，第1768至1772年，2010。查看在：出版商网站|谷歌学术搜索
32. N. S.韦曼，B.L。埃利斯，和C. Thiemermann，“过氧化物酶体增殖物激活受体的PPAR-γ配体α减小心肌梗死面积。”医学科学监控卷。8，没有。7，第BR243，BR247，2002。查看在：谷歌学术搜索

版权

版权所有©2016 Somayeh莫拉迪等。这是下发布的开放式访问文章知识共享署名许可，允许在任何媒体中不受限制地使用、发布和复制原创作品，只要原稿被正确引用。