文摘

微生物感染的各种类型的伤口是一个挑战,治疗伤口和伤口愈合。的研究旨在探讨抗菌和抗氧化甲醇的叶和茎皮提取物Kigelia africana和甲醇的叶和根提取物毒毛旋花子hispidus伤口愈合并确定提取的属性。甲醇提取物的抗菌活性测定对两个革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌和真菌使用琼脂扩散和micro-dilution方法。抗氧化活性测定使用1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH)方法。提取的影响对伤口愈合率调查使用切除伤口模型和组织病理学的调查处理和未经处理的伤口组织执行。叶提取物的中等收入国家k .非洲"对测试生物2.5 - -7.5毫克/毫升和树皮中提取的干细胞是2.25 - -7.5毫克/毫升。叶中提取的美国hispidus有麦克风的范围2.5 - -7.5毫克/毫升和2.5 -10毫克/毫升根提取物。的集成电路50叶和茎的树皮中提取的k .非洲"分别为56.9和13.7μg / mL,分别和叶和根的美国hispidus分别为49.8和45.1μ分别g / mL。k .非洲"提取7.5% (w / w)显示显著( 在第七天)伤口收缩72%的伤口闭合的重要( 伤口收缩)观察11天的干树皮k .非洲"、叶和根中提取的美国hispidus。伤口组织处理提取显示改善collagenation re-epitheliazition和快速肉芽组织形成与未经处理的伤口。提取被发现含有生物碱、皂苷、丹宁酸、黄酮类化合物、碳水化合物,和sapogenetic苷。的高效液相色谱指纹图的提取。叶子,茎和根中提取的k .非洲"美国hispidus表现出抗菌、抗氧化和增强伤口愈合属性和这些可能证明的药用用途的植物治疗微生物感染和伤口。

1。介绍

指的伤口时最常用的损伤皮肤或皮下组织或器官的打击,削减,导弹,或刺。伤口还包括皮肤损伤造成的化学物质,冷,摩擦,热、压力和射线,和皮肤表现的内部条件,例如,压疮和溃疡1]。伤口愈合医疗经济有巨大的影响。慢性伤口是一个主要的健康负担,消耗世界上卫生保健资源包括加纳(2]。

一个主要问题与伤口感染的高风险;因此,如果一个代理主动对这些微生物引起的感染是治疗过程中使用,它将有助于减少感染的风险和整体可以显著减少伤口愈合的时间。例如,细菌很容易进入破碎的皮肤和穿透身体的其他部位。细菌在伤后48小时内损伤和细菌等金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌链球菌spp可能导致感染,这可能会延长伤口愈合的炎症阶段(3]。因此可以使用合适的抗菌药物局部或系统以防止伤口感染,加速伤口愈合的过程。

通常会导致炎症的过程,吸引中性粒细胞释放生物活性介质,白细胞和单核细胞,伤口面积和这些攻击外国碎片通过吞噬作用和微生物。这将导致氧自由基的生产如过氧化氢、超氧化物阴离子,羟基阴离子和超过这些代理引起组织损伤在人或动物如果他们压倒宿主的天然抗氧化剂如过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶。因此,抗氧化剂防止自由基的活动,从而防止损害细胞和组织,为人类和动物提供保护,同时提高感染和未感染伤口的愈合3,4]。

Kigelia africana(林)。Beneth。属于家庭紫葳科。它被称为“Nufutene”在当地Asante-Twi在加纳。它广泛分布于非洲包括加纳、塞拉利昂、冈比亚、苏丹和尼日利亚和发现在潮湿的草原和河流附近的身体出现在丰度(5]。它是用来治疗皮肤疾病包括真菌感染,沸腾,牛皮癣和湿疹、麻风病、梅毒、和癌症。根、木材和叶子被发现含有kigelinone, vernolic酸,kigelin,环烯醚萜苷,毛地黄黄酮,6-hydroxyluteolin [6]。环烯醚萜苷有抗菌作用[7]。

毒毛旋花子hispidus直流。属于家庭夹竹桃科,它被称为“Maatwa”在当地Asante-Twi。发现在非洲和草原森林在加纳,塞内加尔,苏丹,刚果博士、乌干达和坦桑尼亚。它有许多药用用途,如颈眼镜蛇的毒解药,治疗梅毒溃疡、骨梅毒,麦地那龙线虫溃疡和伤口1]。植物包含一个非晶态糖苷与重油(pseudo-strophanthin),两个生物碱(葫芦巴碱、胆碱)、树脂、粘液和鼠李糖糖(5]。这项研究的目的是探讨抗菌,抗氧化剂,伤口愈合甲醇的叶和茎皮提取物的属性k .非洲"和甲醇的叶和根提取物美国hispidus

2。材料和方法

2.1。植物材料和化学品

干树皮和树叶k .非洲"和树叶和树根美国hispidus2011年5月,收集从Krofrom Atwima-Kwanwoma区阿地区和验证博士答:加纳Asase标本,植物学,加纳大学。凭证标本的植物已经沉积在加纳标本,加纳大学加纳。在室温下各种植物部分干(28 - 30°C)两周。干植物部分被磨成粉末材料。除非另有规定,所有的化学品都购自σ(Deisenhofen,德国)。

2.2。准备的提取

20克的粉k .非洲"叶子被加入300毫升70%的甲醇和提取Ultra-Turrax T 50 (Janke & Kunkel、Labortenik、德国)冰的冷却的速度24000转3 - 5分钟。合成混合物然后使用Whatmann滤纸过滤是10号。旋转蒸发器被用来集中上层清液低于40°C和冻干。所有其余的过程重复粉植物材料(k .非洲"干皮,美国hispidus叶和根)。叶提取物的产量(粗铁)和干树皮提取(KASB)k .非洲"和叶提取物(SHL)和根提取(月)美国hispidus分别为4.3,12.8,13.0,11.4% w / w(干物质)有关。

2.3。植物化学的初步筛选

植物化学的筛选进行了甲醇的叶和茎皮提取物k .非洲"和树叶和树根美国hispidus确定存在的淀粉、单宁、苷(sapogenetic、蒽和生氰),类黄酮,类固醇,生物碱(8,9]。单宁含量测定的方法Glasl [10使用焦棓酸)和(默克公司,达姆施塔特,德国,纯度99.5%,高效液相色谱法)作为参考。

2.4。高效液相色谱指纹图的提取

提取的高效液相色谱指纹图(SHL粗铁,KASB,月)进行热Finnigan高效液相色谱系统上使用海波西尔金C18反相柱( 毫米)。提取10毫克/毫升的浓度。高效液相色谱最佳条件:注入体积:10μL,检测波长:254 nm,流动相:甲醇:水/ 50:50(权力平等主义的条件),温度:22°C,泵压力:28 MPa,流量:1毫升/分钟,和运行时间:10分钟。

2.5。测定提取物的抗菌活性
2.5.1。抗菌药物敏感性试验

提取物的抗菌活动(SHL粗铁,KASB,月)和参考药物(氯霉素和克霉唑(σ,Deisenhofen,德国)测定根据Agyare和他的同事描述的方法(9]。营养琼脂(Oxoid有限,英国)和sabouraud琼脂(英国Oxoid有限)媒体用于决定的抗菌和抗真菌的活动,分别。一百微升(106cfu /毫升)的测试生物体(大肠杆菌写明ATCC 25922,铜绿假单胞菌写明ATCC 27853,金黄色葡萄球菌写明ATCC 25923,枯草芽孢杆菌国家反恐怖主义中心的10073年,临床真菌剂白色念珠菌)是用于种子营养琼脂和sabouraud琼脂板,分别。在每一个盘子,四(4)等距井的直径8毫米减少使用无菌软木钻孔机和井充满了不同浓度的提取和参考药物溶解在二甲亚砜(DMSO)和允许分散在室温下(28 - 30°C) 1 h。增长的区域抑制测量24小时孵化后37°C(细菌)和3天在30°C(真菌)。DMSO溶液的活性测定,发现具有活性没有对测试生物体。

2.5.2。采用方法

提取的麦克风(SHL粗铁,KASB,月)对测试细菌测定使用修改后的采用技术所描述的Agyare et al。9]和Eloff [11]。测试解决方案(100毫克/毫升)的提取和DMSO准备和测试解决方案(25 - 100μL)是连续稀释至100年μ克/毫升和100年μL (106cfu /毫升)测试的细菌生长在营养肉汤(英国Oxoid有限)添加到每个在微型板块。覆盖微型板块是孵化24小时37°C。表明增长,30岁μ5-dimethylthiazol-2-yl L (3 - (4) 2, 5-diphenyltetrazolium溴化(MTT、噻唑基蓝)溶解在水中添加到微型板块井和孵化在37°C为30分钟。测试真菌剂(白念珠菌)在sabouraud葡萄糖肉汤培养(英国Oxoid有限),然后培养3天在30°C。KASB,中等收入国家的粗铁,和月提取物对试验菌测定根据指南中描述国家临床实验室标准委员会(12丝状真菌)。提取物对测试的最小抑制浓度生物检测的最低浓度提取后,并未表现出微生物生长的MTT的媒介和孵化37°C 20分钟(9,13]。上述实验重复三次。

2.6。自由基清除活性的测定

提取物的自由基清除活性测定的方法Chizzola和他的同事们(14使用1],1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH)。解决方案(0.1毫米)的DPPH甲醇制备和10μ这个解决方案的L被添加到100μL甲醇提取物在一起α生育酚在不同浓度在96 - microtitre板块。盘子都摇动了30秒,30分钟后吸光度测量在517海里。自由基清除的抑制百分比(%)是计算使用以下方程。抑制 ,在那里 的吸光度控制, 在517纳米样品的吸光度和抑制浓度,集成电路吗50量(μg / mL)减少50%的吸光度。

2.7。评估伤口愈合的属性(切除伤口模型)
2.7.1。实验动物

35(女性的雄性sd)中老鼠被安置在不锈钢笼子和美联储商业大鼠与正常饮食(加纳特马,GAFCO),鉴于水随意和维护在实验室条件下(温度28 - 30°C,相对湿度60 - 70%,和正常的光暗周期)。一天在实验之前,老鼠被带到实验室,习惯于实验者处理和设备来减少压力和新奇的效果。在这些研究中使用的所有程序和技术是按照国家健康研究所的实验室动物保健和使用指南(NIH、卫生服务部门发布83号——23日修订1985年)。研究协议部门伦理委员会批准。

2.7.2。切除伤口模型

动物(雌性的雄性sd大鼠中)重115 - 120克与氯胺酮麻醉在120毫克/公斤体重皮下注射前的伤口。背部皮毛的动物被刮了一个圆形,直径约40毫米刀片和预期的伤口面积提出了创建刮皮肤。切除前的区域与70%乙醇清洗伤口了根据Bhakta等的修改方法。15]。皮肤伤口一起创建标记使用齿钳,手术刀片,剪刀。整个伤口就打开了,动物分为七(7)五组动物。第一组局部用1% w / w磺胺嘧啶银软膏(Arytons药物,加纳)作为参考药物(16]。第二组是处理水膏(车辆)。第三组不及时治疗并允许正常伤口愈合。最后四组治疗7.5% w / w精华霜(粗铁,KASB、SHL、月),分别。伤口治疗开始后第二天伤口创造。提取并参考药物局部应用于伤口24小时24天。在治疗的过程中,扩大伤口区域的照片拍摄(通过高分辨率数码相机)与毫米范围内测量每48 h从伤口治疗的第一天。伤口区域确定每两天直到24日一天。

2.8。组织病理学研究

伤口组织未经处理和对待动物的标本被在第14天愈合过程。横截面厚度伤口疤痕,从每组约6毫米厚的部分,收集实验结束时评估的组织病理学改变17]。样品缓冲福尔马林固定在10% 24 h和脱水ethanol-xylene序列的一系列解决方案,处理和阻塞与石蜡-°C,然后分为5 - 6μ米厚的部分。与苏木精和伊红染色,染色的部分Van Gieson的污点,甲苯胺蓝染色。苏木精和伊红染色部分和Van Gieson的彩色部分检查胶原沉积。甲苯胺蓝染色的部分被用来染色肥大细胞(18]。

2.9。统计分析

GraphPad Prism 5.0版本Windows(美国GraphPad软件,圣地亚哥,CA)是用于所有统计分析。数据提出了的意思 扫描电镜( ),分析了单向方差分析Dunnet紧随其后的多重比较的测试。* ,* * 和* * * 被认为是在所有分析具有统计学意义。图形绘制使用西格玛情节为Windows版本11.0 (Systat软件有限公司、德国)。

3所示。结果

3.1。植物化学的初步筛选

叶和茎的树皮k .非洲"美国hispidus被发现含有单宁(不同数量),类固醇,皂甙,sapogenetic苷和碳水化合物,而两种植物的叶子含有类黄酮。生物碱是出现在叶和根美国hispidus(表1)。

3.2。高效液相色谱指纹图的提取

的高效液相色谱指纹图的提取物(SHL粗铁,KASB,月)决心识别的主要山峰(化合物)的各种提取识别和质量控制(数据的目的1,2,3,4)。

3.3。抗菌活性

甲醇提取物(KAL KASB SHL、和月)被发现是积极反对测试生物体(大肠杆菌,铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,白念珠菌)与不同区域的抑制和意思铜绿假单胞菌被发现不容易提取。的最小抑制浓度范围k .非洲"提取(粗铁和KASB)对测试生物体从2.25到7.5毫克/毫升的美国hispidus提取(SHL和月)是2.5到10毫克/毫升(表2)。对琼脂扩散法,提取(SHL粗铁,KASB,月)浓度的20 - 50毫克/毫升展览区对测试生物抑制高于10毫克/毫升浓度(表3)。

3.4。抗氧化活性

所有提取显示一定程度的抗氧化特性的生化KASB有最低的IC50和最低的粗铁自由清除活动(表4和图5)。

3.5。伤口愈合活动(伤口愈合率)

所有提取(SHL粗铁,KASB,月)治疗组活动方面表现出显著的伤口闭合率比未经处理的车辆单独与大韩航空和SHL有显著影响( 、职责)在伤口愈合率从7到15天治疗后(数字68、表5)和KASB和月表现出显著的类似对伤口愈合的影响从10到18天治疗后(数字79、表5)。

3.6。组织病理学研究

组织学研究显示丰富的成纤维细胞的增殖有不同程度的纤维化。标本显示80%到70致密和增厚纤维化伤口处理提取,而1% w / w磺胺嘧啶银软膏(积极控制)显示60 - 70%纤维化。成纤维细胞和胶原纤维明显出现在参考和提取物治疗组与未经处理的控制。有丰富的血管生成,增强collagenation reepithelialization,标志着治疗的证据在持续的炎症反应与治疗伤口组织提取物比未经处理的伤口组织(图10)。

4所示。讨论

目前的调查描述了一些生物活性包括抗菌和伤口愈合的属性叶子,茎和根从热带植物中提取出来的k .非洲"美国hispidus。植物产品潜在的伤口愈合剂,主要喜欢广泛的可用性,减少或没有副作用,和有效性作为原油的准备工作(2]。干叶子和根的植物化学的筛查美国hispidus揭示了单宁的存在,生物碱、皂甙、类固醇、碳水化合物和sapogenetic苷和黄酮类化合物的树叶。生物碱的叶子和茎干树皮缺席k .非洲"和皂甙,类固醇,碳水化合物,sapogenetic苷在植物材料。类黄酮的叶子还发现k .非洲"(表1)。提取的高效液相色谱指纹图(SHL粗铁,KASB,月)也为识别和开发(数据质量控制目的1,2,3,4)。

植物的植物化学的成分往往决定对人体的生理作用。抗氧化剂是特工,保护细胞免受损伤引起的分子称为自由基。提取物的抗氧化活动主要是由于存在的酚类化合物如类黄酮、酚酸、单宁和酚类二萜19]。因此,提取的成分,如单宁和类黄酮,扮演了重要的角色在伤口愈合,预防和保护从自由基氧化损伤20.,21]。

的甲醇提取物的抗菌活性k .非洲"叶子和茎皮和美国hispidus叶和根决心对四个细菌,两个革兰氏阳性细菌(金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌),两种革兰氏阴性细菌(大肠杆菌铜绿假单胞菌)和真菌(白念珠菌),使用杯子盘子琼脂扩散法。两种植物甲醇提取物的活性与所有的生物体(表进行测试2)。最低抑制浓度(MIC)确定的最低浓度粗提取液,没有微生物生长和粗铁的中等收入国家金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,大肠杆菌,绿脓杆菌,白念珠菌5、2.5、5.5、7.5和2.5毫克/毫升,分别和KASB 5, 5.5, 5.25, 7.5,和2.25毫克/毫升。和月提取物也表现出类似的抗菌活性和中等收入国家在相同的范围k .非洲"提取(表23)。提取物的抗菌和抗真菌的活动(SHL粗铁,KASB,月)叶提取物表现出的类似活动Kigelia pinnata(Jacq)。直流。据Binutu et al。22]。的抗菌作用的提取物可能归因于收敛特性酚醛成分包括单宁和其他多酚提取物中(23]。

等病原菌的居住葡萄球菌,链球菌,假单胞菌在伤口通常会导致感染的伤口可能会导致慢性伤口的形成(24]。从这项研究中,它是意识到k .非洲"美国hispidus提取物表现出坚强和广谱抗菌活性对这些病原体。因为大多数中等收入国家的提取物对测试生物体低于8毫克/毫升,可以推断出,据Fabry提取物表现出强大的抗菌活性和他的同事们(25]。的局部应用抗菌药物或提取物是一种有效的治疗方法,破坏微生物种群,因为在伤口处主动代理的可用性导致增强的伤口愈合活动(20.,21]。

的集成电路50提取的值(SHL粗铁,KASB,月)分别为1.5,56.9,13.7,49.8和45.1μ分别为g / mL(表4)。这些结果表明,提取的提取物具有抗氧化特性的生化异常美国hispidus这可能促进伤口的愈合3]。这可能表明,传统的使用美国hispidus伤口愈合剂可能不是必然因其抗氧化活性,而是基于其他的生物效应。的集成电路50值的叶子和茎皮的k .非洲"类似的结果Gathirwa和他的同事们(26]。

提取(KAL KASB、SHL、月)有显著影响伤口愈合率不同天的治疗的基础上提取与未经处理的伤口。SHL提取方面表现出显著的提高影响伤口愈合过程在11天( (图90.13)和百分比伤口关闭8)与未经处理的伤口。SHL伤口上的影响是类似于月提取显著增加伤口收缩的速度在11天( (图)和伤口关闭了91.72%9)。KASB提取(图的影响7)是类似于SHL和月提取。不过,大韩航空提取显著提高伤口收缩从7天( (图)和伤口关闭了85.1%617天)。组织病理学检查伤口组织了丰富的血管生成,增强collagenation和reepithelialization比未经处理的伤口(图10)。这些提取物的生物活性增强可能是由于成纤维细胞和角质细胞扩散27)和成功减少病原菌的提取(28),这些可能是由于植物化学的成分的提取。

效果观察到奶油只处理和未经处理的伤口未达到统计上的显著水平相比节选或磺胺嘧啶银(参考)治疗伤口。这也可能表明水奶油的组件不干扰提取的活动,因此提取的增强效应可能完全是因为在这些提取物的生物活性原则礼物。提取的伤口愈合的影响可能是由于各种植物化学的成分存在。单宁如原花青素和其他单宁包括鞣酸,geraniin, furosin已知促进伤口愈合(27,29日- - - - - -31日]。提取被发现含有类黄酮和皂苷和这些次生代谢物被发现提高伤口愈合(31日,32),从而增强伤口愈合的影响提取可能归因于他们的植物化学的成分。

上述发现可能支持声称伤口处理植物提取物比未经处理的伤口愈合更快更好[22,33)和使用这些植物治疗微生物感染。然而,隔离和表征生物活性化合物(s)负责这些药理属性需要执行。

5。结论

甲醇的叶和茎皮k .非洲"和甲醇的叶和根提取物美国hispidus表现出抗氧化,抗菌活动与麦克风范围2.25 - 7.5毫克/毫升和2.5到10毫克/毫升,分别针对测试生物,提高伤口愈合属性和这些药理属性可能证明这些植物的药用用途治疗微生物感染和伤口。生物活性化合物的生物活性导向分离和隔离负责生物活动将进行。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

作者想表达自己的感激之情的托马斯先生Ansah药理学系KNUST,加纳库马西的技术援助和娜娜偏航Atefah收集的植物。他们也承认保罗医生Ossei病理学系,Komfo Anokye教学医院,加纳库马西,对伤口组织的病理评价他的贡献。