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Protus Arrey Tarkang,阿喀琉斯冻糕Nwakiban Atchan, Jules-Roger Kuiate,信仰Apoelot Okalebo,阿纳斯塔西娅Nkatha Guantai,加布里埃尔Agbor Agbor, ”的抗氧化潜力Polyherbal抗疟治疗价值的一个指标”,药理和制药科学的进步, 卷。2013年, 文章的ID678458年, 9 页面, 2013年。 https://doi.org/10.1155/2013/678458
的抗氧化潜力Polyherbal抗疟治疗价值的一个指标
文摘
Nefang是一个polyherbal产品组成的Mangifera籼(树皮和树叶),Psidium guajava、番木瓜、Cymbopogon citratus,柑橘sinensis,罗勒属gratissimum(树叶),用于治疗疟疾。与抗氧化活性的化合物被认为调节plasmodial感染。抗氧化活性成分的水植物提取物,在体外评估使用的2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH),总酚含量(TPC)和铁降低抗氧化能力(收紧)方法,在活的有机体内,Nefang(100和500毫克公斤−1)活动评估碳tetrachloride-induced氧化强调Wistar鼠。超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性和丙二醛和脂质过氧化反应的总蛋白质化验。p . guajava籼稻叶,树皮提取物抗氧化性能最高在所有三个化验,没有统计上的显著差异。与四氯化碳大鼠治疗甘油三酯水平显著降低,超氧化物歧化酶和过氧化氢酶()和丙二醛的活动,增加总蛋白质含量、肝脏和肾脏功能标记,而老鼠处理Nefang显示增加的水平在前和剂量依赖性降低到正常水平。这些结果揭示了植物组成的Nefang导致其在活的有机体内抗氧化剂的潜力。这个活动是一个好迹象的治疗潜力Nefang。
1。介绍
分子氧好氧生物的生活不可或缺的元素,因为它使形成的活性氧(ROS),少量的许多生理过程是必不可少的。在高剂量时,ROS非常有毒的(1]。人类的主要ROS超氧化物阴离子、过氧化氢氢氧化,激进的和活性氮物种(RNS)和一氧化二氮(NO)。这些不断内产生细胞接触外源性物质,污染物,紫外线,吸烟,和一些内源性代谢物的氧化还原和呼吸链电子转移(2]。
在正常生理条件下,细胞内ROS水平之间存在均衡和内源性抗氧化系统。内源性抗氧化系统酶组成的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)及谷胱甘肽(GSH)。在生产活性氧超出生理系统的抗氧化能力让位于氧化应激。过度氧化应激导致的解放身体自由基导致的氧化至关重要的分子如核酸、脂质、糖甙和蛋白质,通过引起细胞病变,可能导致坏死和凋亡3,4]。各种生物分子的氧化也是一个病因涉及许多与年龄有关的慢性疾病条件如癌症、糖尿病、神经退行性疾病,心血管疾病(5- - - - - -8),只提到一些。减少氧化应激可以因此改善许多物理条件和帮助防止某些退行性疾病引起的自由基(9]。
抗氧化剂是很少使用在过去由于稀缺和高成本(10目前在上升),但其使用的偏好被那些从自然资源而不是合成的(butyl-hydroxyl甲苯、butyl-hydroxyl苯甲醚,没食子酸),具有一个相对无害的能力(11]。植物是小说的储层抗氧化分子特别是那些有高浓度的酚类化合物12]。因此有一种天然抗氧化剂在食品的兴趣越来越浓,特别是水果和蔬菜。一些流行病学报告显示他们对越来越多的疾病的保护作用[13- - - - - -15]。
氧化应激参与了疟疾的病理生理学。疟原虫消化血红蛋白导致血红素的生产。血红素触发ROS的产生是与疟疾的病理生理学(16,17),并可能导致贫血的发展(18,19和细胞凋亡20.]。这些都是与致病机制引发的寄生虫(21)以及自由基的生产(22和抗氧化防御系统23在减少感染的宿主细胞。等抗疟药物青蒿素的形成取决于自由基中间体的破坏疟原虫(24,25]。
氧化应激在疟疾已经广泛地查阅[26)和结论都是对它的作用这一事实,疟疾是一种多因素疾病的病理生理学现象,代表了错综复杂的一个重要方面开始的关系。
植物和与抗氧化活性的化合物可能会改善疟疾感染的进展,可能防止其后遗症。在动物身上进行的实验表明,抗氧化剂预防脑并发症的发展(27]。
Nefang是一个polyherbal产品组成的Mangifera籼(树皮和树叶),Psidium guajava、番木瓜、Cymbopogon citratus,柑橘sinensis,和罗勒属gratissimum(叶)和用于治疗疟疾喀麦隆西南部地区。这些成分植物具有许多生物活性,除了素类其他人已经报道,有antiplasmodial活动(28]。很可能这polyherbal产品和/或其组成植物提取物含有代谢物与自由基清除活性和氧化剂还原能力可能有益影响疟疾的管理。
因此本研究旨在评估在体外和在活的有机体内这种polyherbal产品的抗氧化潜力作为其治疗价值的指标。
2。材料和方法
2.1。道德的考虑
批准获得的研究机构审查委员会的医学研究和药用植物研究所(IMPM) Yaounde-Cameroon,内罗毕大学和肯雅塔国家医院/伦理和研究委员会,肯尼亚内罗毕。实验动物保健和使用中所描述的基本原理和方法研究按照目标,结果,和注意事项在指南中定义的实验动物保健和使用委员会本指南的更新,美国国家科学院国家研究委员会(29日]。研究按照协议和GLP确保保护的各个方面研究动物的道德权利和福利。
2.2。收集和提取的植物材料
新鲜的树皮和树叶Mangifera籼和叶的Psidium guajava,番木瓜,Cymbopogon citratus,素类,罗勒属gratissimum从他们的天然栖息地在喀麦隆的几个月的7月和8月,2011年。植物识别和凭证标本进行引用IMPM标本在雅温得,喀麦隆的植物学家。刚收获的植物部分被风干和粉。
为在体外抗氧化评价10毫升蒸馏水被添加到100毫克的每个粉植物并在水浴中加热在100°C的90分钟。这一夜之间被允许冷却和水上层清液是立即使用。
为在活的有机体内研究,水提取的植物材料是由渗流。植物在水中浸泡4 h。mac被转移到一个锥形过滤器72 h和80年的提取与筛过滤μ米孔隙大小(30.]。滤液首次集中使用一个旋转蒸发器,然后枯竭在一个烤箱60°C。提取称重和储存在密封的塑料容器在4°C供后续使用。
2.3。实验动物
雄性Wistar鼠(170 - 200 g)获得IMPM动物屋的使用在活的有机体内抗氧化研究。他们被安置在不锈钢金属网最多6每笼笼,在通风良好的房间,12 h光/暗周期,提供免费获得干净的饮用水和食物(标准鼠饲料)。他们被允许适应实验前一周。植物提取物的口服药物。
2.4。评价在体外抗氧化活性
2.4.1。2,2-Di-phenyl-1-picryl-hydrazyl DPPH自由基清除活性测定
DPPH自由基清除活性测定使用日元和咄(描述的方法31日]。二十μ介绍了L水的植物提取物2毫升甲醇溶液DPPH(0.3毫米)和孵化37°C在黑暗中30分钟。提取取代甲醇控制和儿茶素的标准。吸光度的解决方案是使用分光光度计测量517海里。所有的测试进行了一式三份,结果取平均值。DPPH自由基清除活性百分比计算进行比较的结果测试与控制(不处理提取)使用以下方程:
2.4.2。总酚类化合物的估计
每个植物提取物中总可溶性酚醛含量决定使用Folin-Ciocalteu试剂(货代)根据Slinkard描述的方法和单例32]。短暂,0.1毫升的水植物提取物被转移到100毫升锥形烧瓶然后最终成交量调整46毫升蒸馏水。3分钟后,1毫升的货代和3毫升的Na2有限公司3(2%)添加到混合物。混合培养2小时在室温(25°C)的吸光度测量在760海里。所有的测试进行了一式三份,结果取平均值。在每个提取物总酚类化合物的浓度估计毫克儿茶酸当量的儿茶素标准曲线的线性插值。
2.4.3。铁降低抗氧化能力(收紧)测定
铁减少每个提取物抗氧化能力的确定根据Benzie描述的方法和应变33]。收紧试剂由十部分醋酸缓冲(300 mM, pH值3.6)的一部分,2,4,6-Tri (2-pyridyl) -s-triazine (TPTZ)(10毫米400毫米的盐酸)和氯化铁的一部分(10毫米)。每个提取(75μL)被转移到一个小池包含2毫升的收紧解决方案和搅拌后吸光度是读孵化12分钟后,在593海里。铁降低抗氧化能力在每个提取测定儿茶素的毫克当量线性插值的儿茶素的标准曲线。
2.5。评价在活的有机体内抗氧化活性
2.5.1。动物实验
从之前的在活的有机体内antiplasmodial研究中,我们观察到的最小和最大剂量100毫克公斤的活动−1和500毫克公斤−1BW分别给出标准剂量确定在本研究中。白化Wistarrats重170 - 200克被分成四组(A, B, C, D) 5的动物。第一组是处理车辆(玉米油)。氧化应激诱导的其他三组动物的口服1毫升公斤−1BW四氯化碳在玉米油(1:5 v / v)。两组治疗100和500毫克公斤−1BW的Nefang每日口服水提物的14天。24小时最后剂量后,所有的动物都是由肌肉麻醉管理Zoletil 50(30毫克/公斤)+甲苯噻嗪(5毫克/公斤)5 - 10分钟和血液通过心脏穿刺收获到EDTA管之后,他们牺牲了颈椎错位。血液样本是在3000转离心10分钟。浮在表面的等离子体收集进行生化分析。生理盐水(0.9%)被添加到包装细胞层体积的两倍。混合后离心机在3000 rpm,上层的丢弃。这个过程重复三次,红细胞被孤立和储存在−20°C供后续使用。肝脏、肾脏和心脏是收获,清洁血液,称重。
2.5.2。生化参数的确定
等离子体受到生化分析使用标准从堡垒诊断分析工具有限公司,英国。测定的参数包括葡萄糖(GLU)、胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TGY)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、血尿素氮(BUN)测定,肌酐(CRE)。
2.5.3。分析氧化应激标记
红细胞被用作一个细胞模型评价抗氧化剂的能力穿过等离子体膜进入活细胞。加拿大皇家银行hemolysate氧化应激标志物进行了分析。
超氧化物歧化酶(SOD)。活动确定了使用Misra和Fridovich[描述的方法34]。0.2毫升的整除的haemolysate添加到2.5毫升0.05米碳酸盐缓冲(pH值10.2)。这是允许平衡分光光度计。反应开始通过增加0.3毫升缓冲样品刚做好的0.3毫米肾上腺素的混合物。这是快速混合反演和放置在分光光度计。参考电池包含2.5毫升的缓冲区,0.3毫升的衬底和0.2毫升蒸馏水。吸光度的增加在480 nm监控每30秒对一个空白的150秒。
SOD是计算单位所需的数量导致50%氧化的抑制肾上腺素肾上腺素红在一分钟。
过氧化氢酶(猫)。活动确定了使用Sinha[描述的方法35]。在六种不同管含有过氧化氢浓度的增加(0 - 640μM), 2毫升的酸化重铬酸钾是补充道。每个管和加热在100°C动摇了10分钟然后允许冷却和光学密度在570海里。标准曲线的吸光度与浓度的过氧化氢被绘制。
1毫升的稀释haemolysate (1: 10 v / v)被添加到管包含2毫升的过氧化氢和2.5毫升的0.01米磷酸缓冲(pH值7.0)和混合。从这个混合物1毫升的解决方案被撤回每30秒后,转入2毫升的酸化重铬酸钾为120秒。混合物是动摇和加热10分钟100°C。冷却后的光密度测量在570海里一片空白。
过氧化氢酶的活动然后计算单位1的催化还原所需的数量μM H2O2在1分钟。
脂质过氧化是衡量应用丙二醛(MDA)测定方法所描述的早些时候Biswas et al。36]。0.4毫升的稀释haemolysate (1: 10 v / v)被添加到管包含2毫升的乙酸和2毫升的一个工作试剂(氢氧化钠+硫代巴比土酸)。管是在烤箱孵化100°C 20分钟;然后吸光度是阅读对空白532海里。脂质过氧化物的浓度是摩尔消光系数的计算摩尔−1厘米−1如下: 在哪里摩尔消光系数和吗小池的长度(厘米)。
总蛋白质被描述的方法估计Lowry et al。37]。不同管含0.2毫升的稀释haemolysate和0.2毫升牛白蛋白(2 g / dL)标准,2毫升蒸馏水和1毫升的试剂1(1卷(CuSO工作4+ NaK) + 100卷(Na2有限公司3+氢氧化钠)]被添加。内容在室温下混合反演和孵化了十分钟。0.25μL 50%的Folin Ciocalteu试剂随后补充道,在室温下混合,孵化了十分钟。吸光度是然后读取与一个空白的570海里。
总蛋白的浓度红细胞haemolysate决心从以下方程如下:
2.6。统计分析
数据使用SPSS 20.0软件进行了分析。方差比较跨组使用单向方差分析和结果表示为平均数±标准差。Waller-Duncan测试用来测试手段的差异。皮尔森相关的线性测试用于测试。小于0.05的值被认为是具有统计学意义。
2.7。结果
2.7.1。在体外植物提取物的抗氧化性能
结果每个提取物的抗氧化活性分析的各种方法展示在表1。没有观察到显著差异之间的总酚含量,铁降低抗氧化能力,彻底清除活动p . guajava,m .籼树叶和树皮o . gratissimum水提取物。分析DPPH自由基清除活性的测定显示p . guajava和m .籼(叶和树皮)的最大活动抑制(> 90%)。他们的总酚含量范围从61.7到67.2毫克儿茶素/ g提取。o . gratissimum有一个温和的活动抑制(59%)和总酚含量儿茶素34毫克当量/ g提取。c . citratus木瓜,c . sinensis有很弱的活动和较低的总酚含量。
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| 结果显示平均±标准差;。在同一列,指定不同的值标是明显不同的。()排名。 |
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数据1,2,3总结之间的关系DPPH、TPC和收紧的抗氧化活性。一个非常重要的()正相关是观察之间的自由基清除活性和总酚含量,自由基清除活性和抗氧化活性和总酚含量和抗氧化活性,相关指数为0.985,0.980,和0.993,分别。
2.7.2。在活的有机体内抗氧化活性:效果Nefang在同4中毒大鼠
对生理参数的影响。我们观察到显著减少体重增加()在所有测试组(B, C和D)与未经处理的对照组相比,单独使用四氯化碳治疗组(B)显示至少增加重量,总结图4。这减少体重增加可能是由于显著降低了水和食物摄入量()。也有肥大的肝脏B和C组大鼠相比,控制。这些影响在表中做了总结2。在实验中我们还发现减少流动性和CCl皮毛的颜色的变化4治疗大鼠持续沿着实验与测试组的皮毛恢复了色彩的实验。
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| 结果显示平均±标准差;;显著差异:*,* *。 |
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影响生化参数和氧化应激标记。的影响Nefang水提物对生化参数和氧化应激标记在表3和4,分别。这些分析显示显著降低胆固醇()和TGY级别()和一个显著增加面包、CRE ()、ALT和AST ()在B组(三地4全身的氧化压力)大鼠与正常对照组相比。在大鼠治疗Nefang(C和D组),我们观察到的剂量100毫克公斤−1、胆固醇和ALT水平异常高的未经处理的对照组相比,而在500毫克公斤−1恢复正常时,胆固醇对正常的ALT水平下降。然而,Nefang避免增加AST、面包和CRE虽然增加TGY水平对正常剂量依赖性的方式相比,治疗组。Nefang没有影响GLU水平相比,未经治疗的对照组。
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| GLU:葡萄糖、胆固醇:胆固醇、TGY:甘油三酯,ALT:丙氨酸转氨酶、AST:天冬氨酸转氨酶,包子:血液尿素氮,CRE:肌酐。结果显示平均±标准差;;显著差异:相比正常控制- *,* *,而未经处理的控制#
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| SOD:超氧化物歧化酶,猫:过氧化氢酶、MDA:丙二醛,TP:总蛋白。结果显示平均±标准差;;显著差异:相比正常控制- *,* *,而未经处理的控制#
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我们还观察到显著降低SOD和CAT的水平(),TP和MDA的增加()在未经治疗的对照组(三地4全身的氧化压力)与正常对照组相比。在低Nefang剂量100毫克公斤−1MDA, SOD水平,猫,和保持与未经处理的对照组。然而,在高剂量500毫克公斤−1我们观察到显著增加SOD ()和降低MDA ()水平与未经处理的对照组相比,显示这个活动摄入量有关。
3所示。讨论
抗氧化剂是化学不同,因此他们的分离和量化对源非常苛刻。由于抗氧化剂,越来越浓的兴趣增加在体外生物分析来自不同来源的总抗氧化活性的评估。在这项研究中,其目的是使用在体外生物方法比较组成植物提取物的抗氧化活动Nefang而在活的有机体内抗氧化活性评估潜在的保护作用NefangCCl对抗氧化应激引起的4。全血的抗氧化能力主要包含在循环红细胞的有效和强大的抗氧化系统一直强调作为一个潜在的主要优点为使用红血球研究ROS生成(38]。
组成的植物之一Nefang的叶提取物p . guajava籼稻(叶和树皮)o . gratissimum表现出强大的在体外抗氧化活性在DPPH自由基清除和收紧化验,这与他们的总酚含量高。之间的相关系数分析是很强的,接近于1。
2,2-Diphenyl-1-Picryl-Hydrazyl (DPPH)是一种抗氧化研究中普遍采用测定植物提取物或特定化合物的短时间内,因为它为反应性的信息提取提供了一个稳定的自由基。功效的抗氧化剂通常与抑制氧化损伤,清除自由基的能力(39]。总酚含量的估计是一个简单的可再生的试验来估计总酚类抗氧化剂的提取(15]。酚类化合物被认为是最重要的抗氧化植物成分(40)和植物提取物的抗氧化活性与酚类化合物的含量(41]。收紧是一个简单廉价的方法来测量总抗氧化植物提取物的还原能力红细胞(42]。所有的植物成分Nefang具有自由基清除活性,TPC和收紧(除外素类,Cymbopogon citratus,番木瓜叶子与活动)表明,相对薄弱Nefang可能具有潜在的抗氧化剂对抗氧化应激诱导期间疟疾感染或治疗。
在目前的研究中,使用四氯化碳诱导氧化应激评估的潜力Nefang作为在活的有机体内抗氧化剂。四氯化碳被广泛使用作为实验的毒物诱导肝毒性的实验动物,因为它诱导脂质过氧化反应在几分钟内实验动物管理。CCl的积累4在薄壁组织细胞结果为溶血性乳沟生产三氯甲基和氯(Cl *)自由基由于细胞色素P的激活效应450年酶。的烷基化物细胞蛋白质和其他分子同时攻击多不饱和脂肪酸的氧气,形成脂质过氧化物,导致严重损坏一些脏器(43- - - - - -46)和自由基的大量代. .因此CCl管理4在特定剂量产生明显的器官损伤,就是明证显著()增加肾(ALT, AST)和肝(面包,CRE)酶和脂质过氧化作用。它会导致肝毒性,其特点是器官质量的增加。的肝脏相对重量CCl组处理4增加比正常对照组的动物。然而,这种增加肝脏重量减少Nefang治疗组和剂量依赖效应,保护自然Nefang。老鼠接受500毫克公斤−1BW的Nefang记录至少增加体重。这证实了降低食欲的特点是减少食物和水的摄入量。
Nefang似乎提供保护作用存在剂量依赖的相关性,因为肾和肝酶的水平低extract-treated老鼠比未经处理的对照组。这是通过抑制创新领导力的影响4在等离子体。
CCl的口服4降低胆固醇和TGY水平早些时候报道了斯特恩et al。47]。胆固醇一直报道调节脂质双分子层膜流动性和其他生理过程(48]。创新领导力4会导致细胞膜的过氧化降解导致功能形态的变化和损失功能膜的完整性(15]。通过恢复正常的胆固醇水平,很明显Nefang可以调节胆固醇的作用和其他生理过程。
人体有一个有效的防御系统对自由基引起的损失,由内源性抗氧化酶(例如,CAT和SOD)和非酶的酶(如谷胱甘肽)。SOD和CAT酶氧化系统的组成部分的红血球而MDA是肝脏中脂质过氧化反应的最终产物和其他组织。脂质过氧化的程度是衡量膜损伤改变其结构功能和衡量MDA的水平。红细胞更容易受到脂质过氧化(49]。SOD是一种金属蛋白的酶参与抗氧化剂防御,它通过降低稳态水平而过氧化氢酶保护细胞免受自由基的毒性,催化过氧化氢的分解水和氧气。CCl的SOD和CAT含量下降4治疗大鼠可能是由于过度使用这些酶抗氧化剂或与MDA这些酶的交联,导致增加超氧化物阴离子进而增加脂质过氧化水平(50]。在目前的研究中,水平的猫SOD和MDA水平下降增加了未经处理的对照组相比,正常对照组。这提供了证据表明氧化应激导致脂质过氧化反应增强,组织损伤,自由基和抗氧化防御机制的崩溃。然而,在管理Nefang在高剂量,这些参数没有任何压力的抗氧化防御系统,但在低剂量水平的这些参数是相媲美,在未经处理的老鼠。这可以解释为强力的抗氧化活性或增加酶的表达。Nefang因此提供抗氧化的效果。
TP估计给出了蛋白质含量和反映了抗氧化能力。增加的CCl TP水平4全身的氧化应激大鼠(B组)可能是由于脱水51]。TP是剂量依赖性的小鼠恢复正常与提取、显示Nefang可能帮助潜在的抗氧化系统通过其酚醛含量高的证明吗在体外研究。
鉴于实验室证据表明,抗氧化剂改善疟疾的症状(27),很有可能,强有力的抗氧化剂Nefang导致在疟疾的管理使用传统的有效性。这或许可以解释为什么多个草药配方中包括因为每个可能有不同的用途。
4所示。结论
本研究产生了实质性的证据在体外构成植物的抗氧化效果在活的有机体内抗氧化的影响Nefang。水叶提取物p . guajava和m .籼(叶和树皮)最高在体外抗氧化能力。之间有很强的正相关关系获得的结果通过DPPH, TPC和收紧。Nefang可能有助于改善氧化抗氧化状态的跟压力并发症包括疟疾。研究抗疟的特性和抗氧化作用Nefang在恶性疟原虫受感染的老鼠正在进行。
利益冲突
本研究引用原始研究的作者,因此,作者声明没有利益冲突有关的出版。
确认
作者真诚地感谢中心的技术人员研究药用植物和传统医学、医学研究和药用植物研究所(IMPM),喀麦隆雅温得对这项研究的成就他们的贡献。
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