文摘

叶甲醇提取物的c . orbiculatal .追究antinociceptive和抗炎活动使用醋酸打滚、抗测试和carrageenan-induced水肿试验在小鼠和大鼠,分别。c . orbiculata(100 - 400毫克/公斤,i.p)显著抑制醋酸段地扭动着显著延迟老鼠hot-plate-induced热刺激的反应时间。扑热息痛(300毫克/公斤,i.p)显著抑制醋酸段在老鼠身上打滚。吗啡(10毫克/公斤,i.p。)显著延缓小鼠热刺激的反应时间与热板生产。叶甲醇提取物的c . orbiculata(50 - 400毫克/公斤,i.p)显著减毒carrageenan-induced老鼠爪子水肿。吲哚美辛(10毫克/公斤,订单。)也显著减毒carrageenan-induced老鼠爪子水肿。LD的₅₀值因植物种类所得大于4000毫克/公斤(订单)。获得的数据表明c . orbiculataantinociceptive和抗炎活动,为民俗植物物种的使用传统医学从业者治疗疼痛和炎症条件。相对较高的LD₅₀获得显示,c . orbiculata可能在或无毒安全的老鼠。

1。介绍

疼痛和炎症是一些最常见的许多疾病困扰全世界数以百万计的人的表现(1,2]。即使有有效的传统药物用来缓解这些症状(3),传统医学从业者,主要发展中国家使用草药来治疗各种疾病包括疼痛和炎症(4]。人口特别是农村社区的依赖在南非植物药物以及传统医学从业者的医疗需要的是文化。这样的植物之一,传统医学从业者用来治疗各种疾病子叶orbiculatal . (5,6]。它属于家庭景天科。是一个小的一种灌木,叶肉质,广泛分布在非洲南部。它在当地被称为“Seredile”在梭托人和茨瓦纳语,在南非荷兰语“Plakkie”,“Imphewula”科萨人(5,6]。c . orbiculata用于治疗各种疾病的不同部分的南非。肉质的叶子被用来治疗玉米和疣。叶子的汁滴耳痛,牙痛,使用热治疗疮和炎症(5- - - - - -7]。注入的肉质的叶子c . orbiculata也一直在使用传统药物从业者在南非治疗癫痫、炎症和疼痛(口语交际)。

根据文学,非常有限的评估已经完成药理活性的植物物种,尽管广泛的民间使用[8]。因此,本研究旨在调查antinociceptive和抗炎的活动c . orbiculata在小鼠和大鼠,分别。植物物种的急性毒性和高效液相色谱研究也进行了。

2。材料和方法

2.1。植物材料

肉质叶的c . orbiculata收集来自Kirstenbosch国家植物园,开普敦,2010年9月。植物材料被确认的馆长花园以及分类学者在生物多样性和保守的生物学、西开普省和大学凭证标本(25套)存入大学植物标本。

2.2。植物提取物的制备

肉质的叶子(10.5公斤)c . orbiculata用水洗,切成小块,和干通风烤箱在40°C 120 h。植物干物质(640克)使用华林商业实验室搅拌机磨成细粉,通过850年μ米筛。制备的甲醇提取、干燥粉(120克)与甲醇在索氏提取器中提取72 h。甲醇滤液被蒸发干燥使用Buchi RE11 rotavapor Buchi 461水浴。收益率的55.4 g粗甲醇提取获得并保存在干燥器。新鲜解决原油叶甲醇提取物制备溶解给定数量的甲醇提取体积小的二甲亚砜(DMSO)和组成与生理盐水到合适的音量。甲醇溶液是腹腔内接种(i.p)对小鼠和大鼠的体积1毫升/ 100克体重。

2.3。动物

雄性小鼠白化动物屋的药理学的纪律,学院制药、南非西开普大学重18 - 30 g用于antinociceptive活动和急性毒性研究。年轻的成年雄性Wistar鼠,买了从开普敦大学,南非,和重160 - 210克被用于抗炎活性研究。动物们被安置在一个安静的实验室环境温度的°C和h a12光/ 12 h暗周期维护。他们都有食物和水随意。所有的动物都禁食16 h在他们访问水实验开始前。每个动物都仅用于一个实验。

2.4。药物和化学物质

吲哚美辛(西格玛化工有限公司)是溶解在最少的二甲亚砜(DMSO,西格玛化工有限公司)与生理盐水并调整到合适的音量。卡拉胶(西格玛化工有限公司)和硫酸吗啡(Bodene)溶解在生理盐水给适当的体积。醋酸(默克公司)溶解在生理盐水给适当的强度。扑热息痛(西格玛化工有限公司)是400年丙二醇溶解在一个最小的体积(英国BDH)和调整到适当的体积与生理盐水。DMSO溶液是由溶解等量的DMSO溶液用于溶解植物提取物,以适当体积的生理盐水。吲哚美辛口服老鼠通过一个球状的钢铁针。卡拉胶的subplantar表面注入大鼠后爪。

吗啡、醋酸和扑热息痛是腹腔内接种(ip)的老鼠。每天早上新鲜药物解决方案准备的实验。所有药物管理的体积1毫升/ 100克体重,虽然不断卷角叉菜胶,DMSO,生理盐水和醋酸。控制动物注射了等于体积合适的车辆。叶甲醇提取物的剂量和预处理时间的c . orbiculata和标准药物吲哚美辛、吗啡、扑热息痛和车辆,生理盐水和DMSO,来自我们的实验室初步研究。

3所示。评估药理活性

3.1。Antinociceptive活动子叶orbiculata

3.1.1。醋酸翻滚测试

科斯特的方法等。9和威廉姆森等。10)被用于评估antinociceptive活动的c . orbiculata。老鼠用于组8每剂的植物提取物,标准药物,扑热息痛或DMSO溶液。他们单独放置在一个透明的有机玻璃老鼠笼,并允许适应他们的环境,在实验开始前30分钟。在控制实验中,动物们使用0.25毫升的生理盐水(i.p) 15分钟,然后由于腹腔内注射0.20毫升的3%醋酸溶液中,一个刺激物,用于诱导扭动(痛苦)。老鼠然后离开5分钟,扭动着被计算在接下来的20分钟。的扭动被定义为收缩腹部肌肉伴随着身体的伸长和后肢。

在测试实验中,一组8老鼠经过15分钟与植物提取物(i.p)或标准的镇痛药物,扑热息痛(i.p),之后他们注射0.20毫升的3%醋酸腹腔内,允许站了5分钟,然后扭动着清点的数量为20分钟的控制实验。实验重复了另一组小鼠8使用0.25毫升的DMSO溶液(i.p) 15分钟,之后他们注射0.20毫升的3%醋酸腹腔内,允许站5分钟,然后扭动着的数量清点了20分钟。所有实验都是在一个相当实验室的环境温度°C。植物提取物的能力,以防止或显著减少醋酸段的数量是一个痛苦地扭动antinociceptive活动的迹象。

3.1.2。抗

威廉姆森的方法等。10]和艾迪和Leimback [11)被用于抗antinociceptive活动c . orbiculata。老鼠用于组8每剂的植物提取物,标准药物,吗啡或DMSO溶液。控制动物被单独放置在一个21玻璃烧杯放置在一个恒温控制的热板(模型HC500,毕比Sterilin有限公司,英格兰)设定在50 - 55°C,前15分钟后腹腔内注射0.25毫升的生理盐水。疼痛阈值被视为达到当动物升力和舔爪子或试图跳出烧杯。老鼠表现出这些特点所花费的时间,也称为反应或响应时间,指出通过秒表。动物测试前15分钟,30分钟,45分钟,60分钟后腹腔内注射0.25毫升的生理盐水。实验被重复使用其他组的动物,这是测试之前和15分钟,30分钟,45分钟至60分钟后腹腔内的植物提取物,吗啡或DMSO溶液。所有实验都是在一个相当实验室的环境温度°C。60年代的截止时间是用来避免伤害老鼠。植物提取物的能力延迟的反应时间被视为antinociceptive活动。

3.2。抗炎活性子叶orbiculata

3.2.1之上。老鼠爪子水肿测试

修改方法,威廉姆森et al。10和冬天et al。12)被用来评估的抗炎活性c . orbiculata。老鼠被用于组8每剂的植物提取物,标准药物,生理盐水或DMSO溶液。老鼠被分为五组。老鼠在我组(控制)是0.25毫升(i.p)的生理盐水。第二组老鼠收到植物提取物(50 - 400毫克/公斤,i.p)。第三组小鼠受到标准的抗炎药,消炎痛(10毫克/公斤,订单。)和第四组老鼠收到0.25毫升(i.p)的DMSO(车辆)。集团V老鼠未经处理的。水肿或急性炎症诱导我或控制老鼠进行预处理组15分钟0.25毫升(i.p)生理盐水注射0.1毫升的卡拉胶(1%溶解在0.9%生理盐水)到subplantar表面的后爪。角叉菜胶注射后的水肿明显在30 - 40分钟。正确的体积后爪测量之前和之后的注射角叉菜胶每隔30分钟4 h体积位移法使用plethysmometer(美国IITC生命科学)。 Group II rats were pretreated for 15 min with plant extracts intraperitoneally (i.p.), Group II rats for 1 h with indomethacin orally (p.o.) and Group IV rats for 15 min with DMSO (i.p.) prior to the injection 0.1 mL of carrageenan into the subplantar surface of the right hind paws of the rats in each group. The experiments were repeated with the volumes of the rats’ right hind paws measured before and then after the injection of carrageenan at 30 min intervals for 4 h using the plethysmometer. The volumes of the untreated rats’ right paws were also measured at 30 min intervals for 4 h. Oedema was expressed as a mean increase in paw volume with respect to physiological saline control. Inhibition was expressed as a percentage increase or decrease in oedema volume. The ability of the plant extract to inhibit the foot oedema was taken as an indication of an anti-inflammatory activity. All experiments were performed in a quite laboratory with an ambient temperature of°C。

3.2.2。高效液相色谱分析

色谱系统:贝克曼高效液相色谱系统组成的双溶剂泵可编程模块模型126;二极管阵列检测器模块型号168;386年三星电脑管理系统黄金(黄金V601)软件由贝克曼;列,使用C18 Bondapak 5μm和维度(250×4.6毫米)。

色谱条件:流动相:溶剂:1%乙酸;B溶剂:甲醇;模式:梯度;流量,1分/分钟;注入体积,10L;探测器,在350 nm紫外线。高效液相色谱操作条件设定给以下:0分钟,溶剂B: 20%;5分钟,溶剂B: 40%;15分钟,溶剂B: 60%;20分钟,溶剂B: 80%, 27分钟,溶剂B: 20%。运行速度是30分钟。

3.2.3。急性毒性试验

Lorke[描述的方法13种脐等)和修改。14)是用来确定半数致死量(LD₅₀叶甲醇提取物的)。小鼠禁食16 h,然后随机分为8组小鼠每笼。分级剂量的植物提取物(100,200,300,400,600,800,1600,2000,2400,2800,3200,3600,和4000毫克/公斤)分别口服药物的球状的钢针在每个测试组小鼠。对照组与0.25毫升管理(订单)的生理盐水的球状的钢铁针。老鼠在试验和对照组被允许免费获取食物和水并观察了超过5天急性毒性的迹象,包括死亡。半数致死量(LD₅₀叶甲醇提取物的)c . orbiculata将计算如果适用,将构造一个情节日志剂量反应曲线的植物物种。

3.3。统计分析

扭动着的数量表现出的数据老鼠和卡拉胶的效果对老鼠的后爪进行了分析使用单向方差分析(方差分析)其次是Dunnett多重比较检验(GraphPad棱镜,5.0版本,GraphPad软件,Inc .,圣地亚哥CA p2130,美国),平均值±标准错误意味着(SEM)。的值小于5% ()被认为是具有统计学意义。

3.4。道德的考虑

在这项研究中使用的实验协议批准(07/04/31)大学的伦理委员会西开普省,Bellville 7535年,南非,和符合学校的规定有关动物实验。

4所示。结果

4.1。药理作用:Antinociceptive活动子叶orbiculata

以下4.4.1。醋酸翻滚测试

叶甲醇提取物的效果子叶orbiculata在醋酸段打滚
0.20毫升(i.p)。3%的醋酸生产大量的扭动控制老鼠使用0.25毫升(i.p)的生理盐水。叶甲醇提取物的c . orbiculata(100 - 400毫克/公斤,i.p)在剂量依赖性的方式,大大降低了乙酸4段的数量。100毫克/公斤(i.p。) 4植物种类减少了51%。200毫克/公斤(i.p)和400毫克/公斤(i.p)c . orbiculata生产减少67%和76%地由0.20毫升的3%乙酸在老鼠中,分别。同样,扑热息痛(300毫克/公斤,i.p)深刻地扭动着引起的数量减少了0.20毫升的3%醋酸93%。DMSO(0.25毫升,i.p。)没有显著改变乙酸在老鼠(表4段1)。

叶甲醇提取物的效果子叶orbiculata在Hot-Plate-Induced伤害感受
用生理盐水预处理对小鼠抗热刺激在50°C-55°C通过提升和舔爪子或试图跳出烧杯。这种现象发生在sec在第一个15分钟后腹腔内政府0.25毫升生理。生理盐水,秒,60分钟后注入0.25毫升的生理盐水。叶甲醇提取物的c . orbiculata(100 - 200毫克/公斤,i.p)的反应时间明显延迟动物抗热刺激治疗后30分钟。c . orbiculata(400毫克/公斤,i.p)显著延迟小鼠的疼痛反应时间hot-plate-induced热刺激1 h段测量。同样,吗啡(10毫克/公斤,i.p。)显著延迟反应时间的老鼠hot-plate-induced热刺激1 h段测量。DMSO(0.25毫升,i.p。)没有显著改变小鼠的反应时间hot-plate-induced热刺激1 h段测量(表2)。

叶甲醇提取物的效果c . orbiculata对Carrageenan-Induced后爪水肿
卡拉胶(1%)注入的subplantar大鼠后爪用生理盐水预处理诱导水肿或急性炎症的爪子在30 - 40分钟。水肿达到最大强度注射后3小时以内。50毫克/公斤(i.p。)叶甲醇提取物c . orbiculata显著降低carrageenan-induced水肿从60分钟到4 h段测量。c . orbiculata(100 - 400毫克/公斤,i.p)显著减少了carrageenan-induced水肿4 h段测量。吲哚美辛(10毫克/公斤,订单。)深刻地减少了carrageenan-induced水肿在正确的后老鼠的爪子4 h段测量(表3)。

4.1.2。急性毒性试验

没有死亡或急性毒性的迹象后观察口服100 - 4000毫克/公斤的叶甲醇提取物子叶orbiculata最高剂量测试(4000毫克/公斤,订单)是no-adverse-effect-level(科学)。也就是说,LD₅₀可能是大于4000毫克/公斤(订单)在老鼠身上。

4.1.3。高效液相色谱分析

叶甲醇提取物的色谱光谱c . orbiculata获得了主要山峰下面的保留时间(分钟):6.983,10.521,12.088,12.838和13.342(图1)。

5。讨论

在目前的研究中,叶甲醇提取物c . orbiculata显著抑制醋酸段打滚并显著抑制痛觉过敏产生的热板。c . orbiculata也显著减毒carrageenan-induced大鼠后爪水肿。Satyanarayana et al。15]表明,乙酸产生扭动或伤害感受通过刺激前列腺素的生产。扑热息痛,标准的镇痛药物(2),已被证明在大脑中抑制前列腺素合成(16]。因此,毫不奇怪,扑热息痛药减毒醋酸段伤害感受。扑热息痛在前列腺素的影响与acetic-acid-induced翻腾可能直接或间接的关系。自c . orbiculata还减毒醋酸段打滚,很可能植物物种可能生产antinociceptive影响前列腺素系统活动。吗啡,一个标准的集中作用镇痛药物(3),显著减毒热刺激或痛觉过敏产生的热板。c . orbiculata也大大减毒热板产生的痛觉过敏。可能植物可能通过某些中枢疼痛受体作用减弱热板产生的痛觉过敏。根据科斯特et al。9),威廉姆森et al。10]和艾迪和Leimback [11),醋酸扭动和热板测试是用来评估周边地分别和集中代理镇痛药物。在这项研究中,c . orbiculata减毒的醋酸段扭动和热板产生的伤害感受这可能表明,植物物种都外围和中央antinociceptive效果。

击打(17]表明,前列腺素、组胺、5 -羟色胺、缓激肽调解员carrageenan-induced水肿的不同阶段。Di罗莎et al。18),卡帕索等。19],Salvemini et al。20.)也报道的参与组胺,5-hydroxytrptamine、缓激肽、前列腺素和一氧化氮carrageenan-induced爪子水肿。Nag-Chaudhuri et al。21)在其报告他们的工作在抗炎和相关的行为气味清香cuminii种子提取建议前列腺素E₁、组胺、5 -羟色胺、缓激肽调解carrageenan-induced老鼠爪子水肿。吲哚美辛已被证明产生抑制酶的抗炎效应,环氧酶,从而抑制前列腺素合成(22]。它也表明,非甾体类抗炎药可能对抗介质如5 -羟色胺、缓激肽、辣椒素(23]其中一些涉及carrageenan-induced爪子水肿。毫不奇怪,在这项研究中,吲哚美辛减毒carrageenan-induced大鼠后爪水肿。c . orbiculata也减毒carrageenan-induced鼠后爪子水肿可能表明,可能是植物物种可能影响许多介质产生它的抗炎效果。

Amabeoku et al。8显示的叶子c . orbiculata含有单宁,皂苷、三萜烯类固醇还原糖,心脏苷。Bruneton [24)报道,皂甙有镇痛和抗炎作用。这是有可能的,因此,皂甙也可能导致antinociceptive和抗炎的活动c . orbiculata在这项研究中。植物获得的高效液相色谱指纹图谱显示在以下主要特征峰保留时间(分钟):6.983,10.521,12.088,12.838,and13.342。进行急性毒性试验表明,有限的₅₀获得价值c . orbiculata可能大于4000毫克/公斤(订单)。

总之,获得的数据显示c . orbiculata既有antinociceptive和抗炎活动可能产生的植物物种抑制多种化学介质包括前列腺素、缓激肽。相对较高的LD₅₀值为4000毫克/公斤(订单)获得的植物物种表明它可能是安全的或无毒的老鼠。结果证明使用传统医学从业者在南非的植物治疗痛苦的条件如头痛、耳痛、牙痛、炎症。然而,需要更多的研究来进一步阐明antinociceptive和抗炎的机制c . orbiculata。

确认

南非国家研究基金会(NRF: 67983)为这项研究提供资金支持。植物材料由Kirstenbosch捐赠国家植物园,南非西开普省。作者感谢f .韦茨先生验证植物物种和诉Jeaven先生为他的有价值的技术援助。