文摘

马兜铃酸肾病的特点(长)近端小管间质纤维化和萎缩,但是没有改变肾小球。探讨AA对肾脏功能的影响及药物动力学(PKs)p-aminohippuric酸(多环芳烃)和菊粉、新西兰白兔被用于这项研究。血浆浓度的多环芳烃和菊粉是由高效液相色谱方法进行验证。后一个静脉管理0.5毫克/公斤马兜铃酸钠(AANa),兔子表现出轻度至中度肾毒性的第七天。阻力指标损伤肾脏标本被发现,也许可以显著但没有显著的肾小球的变化。间隙的多环芳烃和菊粉都显著减少AANa-treated兔子。此外,间有显著相关性的阻力指标变化和PK也许可以度参数多环芳烃AANa政府后,但没有相关性指出PKs的菊粉。兔子有轻度至中度感染,肾血浆流量显著减少了55%,而肾小球滤过率也显著降低了85%。总之,主要肾损伤被发现在近端小管AANa管理。多环芳烃的PKs和菊粉明显改变,肾脏功能,包括卢旺达爱国阵线和肾小球滤过率(GFR)下降。

1。介绍

中药诱导肾毒性在1992年初首次报道了Vanherweghem et al。1),由两个类似案件的迅速进步fibrosing间质性肾炎在年轻的比利时女性遵循相同的减肥方案。相同的草药名减肥公式(斯蒂芬妮5)无意中被取代马兜铃fangchi(2]。马兜铃酸(AAs)的主要化合物的物种马兜铃(3),已被证明导致肿瘤诱导和肾毒性实验和临床研究3- - - - - -5]。因此,肾脏疾病是更适当地称为马兜铃酸肾病(感染)。在比利时6),超过100例感染患者记录,其中有30%的中度肾功能衰竭,70%被维护透析或肾移植治疗,和类似的案件也观察到在世界各地(7- - - - - -12]。2001年,美国食品和药物管理局(FDA)建议消费者停止使用草药产品含有原子吸收光谱法(13]。尽管FDA和监管机构的行为在其他国家,这些产品包含AAs和疑似含有AAs仍在互联网上可用的(14]。

河畔的形态学特性包括广泛hypocellular小管间质纤维化和萎缩和损失,主要位于表面皮层(15,16]。然而,有趣的是,肾小球结构不受影响15,16]。肾脏在消除外源性物质起着关键的作用。因素影响肾脏消除药物的能力可能会导致显著的药物动力学的变化(PKs)的化合物。在先前的研究中,肾脏形态学研究,包括近端小管损伤在兔子AANa治疗后17),是类似于其他实验研究和报告从人类患者(5,15,16,18,19]。肾损伤增加随着AANa剂量的增加,AAI公司和协会显示非线性PK属性(17]。探讨AA兔子的肾功能的影响,目前的研究进行了评估的党p-aminohippuric酸(多环芳烃)和菊粉在0.5毫克/公斤AANa-treated兔子。肾血浆流量(RPF)和肾小球滤过率(GFR)也被调查。

2。材料和方法

2.1。化合物

所有化学试剂级,溶剂都是高效液相色谱级。马兜铃酸钠美国个人投资者协会(AAI AANa,包含41%和56%),p氨基苯钾酸盐(≥99%),和p从σ-aminohippuric酸钠盐了。菊粉是来自丙烯酰胺。

2.2。动物研究

兔子的一般生理是类似于人类19]。此外,组织感染的兔子的组织病理学特征类似于人类。因此,雄性新西兰白兔(2.0 ~ 3.0公斤)被用于这项研究。在实验之前,兔子渴望至少12 h,但水被随意。两组兔子iv-administrated 20毫克/公斤的多环芳烃 和菊粉 前和后7天一个静脉注射剂量为0.5毫克/公斤AANa管理。AANa政府之前收集的数据显示为对照组。收集血液样本在5、10、20、30、45、60、90分钟,2,3,4,6 h后剂量。血液采样后,兔子被牺牲获得肾脏标本。此外,3更多的兔子没有AANa政府作为对照组进行组织学检查。所有动物实验符合机构的指导方针。

2.3。高效液相色谱法(HPLC)

高效液相色谱仪器由一个泵(日本岛津公司LD-10AD),紫外可见检测器(Shimadzu-10A),自我注射器(日本岛津公司SIL-9A),和积分器(日本岛津公司C-R7A)。5 Cosmosil c-18ar 列在等离子体用于分析多环芳烃和菊粉样品。流量被设定1.2 mL / min,和紫外线波长设置为290海里。多环芳烃由4%的流动相乙腈和0.3%氯化tetramethylammonium在0.01磷酸脂溶液pH值(4.0)。菊粉的流动相是由2.5%的乙腈和0.3%的氯化tetramethylammonium在0.01磷酸脂溶液pH值(2.9)。

2.4。定量的多环芳烃的血浆浓度

一百毫升的1μ克/毫升p氨基苯酸(PABA)作为内标与高氯酸的解决方案是添加到200年的4.2%μL血浆样本,然后混合,在13000转离心5分钟。上层清液被转移到另一个管,然后补充了200μL二氯甲烷。在13000 rpm管涡和离心5分钟再一次,和上层清液被转移到另一个管含有200毫克硫酸铵和200年μ乙酸乙酯。在13000 rpm管涡和离心5分钟一次,然后是浮在表面的被转移到另一个管。下干燥氮气后,样本与200年重组μL的流动相,50μ用于高效液相色谱法。标准曲线的浓度范围是0.1 ~ 30μ克/毫升。这种分析方法验证的“指导生物分析方法验证。“(20.)多环芳烃和PABA各自的保留时间为4.4和10.3分钟,分别,没有重要的内源性coeluted在峰值对应的色谱。标准曲线的线性回归方程 相关系数为0.9999。定量的多环芳烃的极限是0.1μ克/毫升。

2.5。菊粉的血浆浓度的定量

一百毫升的1μg / mL PABA作为内部标准高氯酸溶液添加到200年的7%μL血浆样本,然后混合,在13000转离心5分钟。上层清液被转移到另一个管,然后补充了200μL二氯甲烷。涡流和离心法在13000 rpm之后5分钟,这上层清液被转移到另一个管,在煮30分钟水解菊粉果糖,允许将果糖转化为5 -(羟甲基)布(羟甲基糠醛)。然后样本用冷水冷却5分钟和转移到另一个管含有200毫克硫酸铵和200年μ乙酸乙酯。在13000 rpm管涡和离心5分钟一次。上层清液被转移到另一个管。下干燥氮气后,样本与200年重组μL的流动相,50μ用于高效液相色谱法。标准曲线的浓度范围是0.1 ~ 30μ克/毫升。这种分析方法验证的“指导生物分析方法验证。“(20.]菊粉和PABA各自的保留时间为8.6和11.7分钟,没有重要的内源性coeluted在峰值对应的色谱。标准曲线的线性回归方程 相关系数为0.9995。菊粉的定量的极限是5μ克/毫升。

2.6。数据分析和统计

血浆浓度时间数据的多环芳烃和菊粉兔子进入了计算机程序,PKCALC [21),获得初始估计参数,这些都是单独加权和另一个计算机程序,WinNonlin [22]。所有的药代动力学参数,包括分销半衰期 ,消除半衰期 间隙(CL)、体积分布的稳态( )、体积分布(V),分布在中央室的体积(风投),中央室的消除速率常数( ),中央和周边隔间之间传输速率常数 是直接从WinNonlin获得输出。曲线下的面积(AUC)确定使用的梯形法则领域从血液采样时间无穷估计最后药物浓度除以预计终端消除速率常数, 。这是计算0.693除以 。

使用多环芳烃萃取率(RPF计算 )从Gouyon和Guignard [23]值92.9%±1.9%的观察到29 normoxemic兔子和90.0%±2.7%的观察在21个血氧过低的兔子。其他肾功能参数计算与下列方程:肾小球滤过率(GFR)滤过分数= / RPF,肾小球滤过率(GFR) = CL菊粉RPF = ,净的分泌 (24,25]。

所有的数据表示为均值±SE。统计学意义是由双向方差分析对PK参数(方差分析)。

2.7。组织学检查

肾组织块缓冲福尔马林固定在10%的常规组织学检查。因为最小改变肾小球,肾的严重程度变化受到阻力指标变化也许可以的程度分级。周期性acid-Schiff——(PAS)染色部分进行评估的放大100×,皮质是半定量的得分和发现。阻力指标组织学得分也许可以的决心所描述的佐藤et al。18]。用于评估的分数变化上皮小管被定义如下:0,没有管状上皮变性;1,一个组或一个退化小管;2、几种集群的退化小管;3、管状上皮中度退化;4、更严重的肾小管上皮细胞变性;5,非常严重的肾小管上皮细胞变性,坏死和萎缩。单核细胞浸润到间质是由以下四点量表评估:0,缺席;1、一些分散的细胞;2、单核细胞组; 3, dense and widespread infiltration. The existence of hyaline cylinders in distal tubules was evaluated as follows: 0, absent and 1, cylinders present. Interstitial fibrosis was defined as follows: 0, absent; 1, mildly diffuse fibrosis; 2, moderate fibrosis; 3, severe fibrosis. The histological score of each rabbit was expressed as the sum of these 4 scores. Nonparametric variables were analyzed by the Mann-Whitney 以及。组定义在统计上显著的差异 。

3所示。结果

3.1。药物动力学的多环芳烃

后多环芳烃的血浆浓度时间曲线单一iv-administrated剂量为0.5毫克/公斤AANa图所示1。PK数据之前和之后AANa管理表1。后发现AA管理、CL ( ), 减少一半。 , 和AUC显著增加( )。RPF计算使用 从工作获得的Gouyon和Guignard23]。在对照组中, 为92.9%,RPF为22.36±4.01毫升/公斤/分钟。因此,在集团管理AANa,提取比例为90.0%,卢旺达爱国阵线是10.11±2.72毫升/公斤/分钟,大大不同于控制兔子( )。

表1
0.5毫克/公斤的马兜铃酸钠(AANa)治疗p在兔子-aminohippuric酸 。

图1
等离子体的浓度p第四-aminohippuric酸(PAH)后管理0.5毫克/公斤马兜铃酸钠(AANa)兔子 ( = 1 0 ) 。
3.2。药物动力学的菊粉

表2显示了菊粉的PK数据前和后7天0.5毫克/公斤的第四AANa管理。血浆浓度时间曲线如图2。CL和 显著减少,AUC显著增加。肾小球滤过率(GFR)显著降低了从5.95±1.79,0.89±0.18毫升/公斤/分钟感染组。

表2
0.5毫克/公斤的马兜铃酸钠(AANa)治疗在兔子的菊粉 。

图2
等离子体浓度的菊粉后静脉管理0.5毫克/公斤马兜铃酸钠(AANa)兔子 ( = 1 0 ) 。
3.3。后肾组织学发现AANa管理工作

7日的前一天,一个四0.5毫克/公斤AANa管理,兔子牺牲获得肾标本。温和的近端肾小管损害和0.5毫克/公斤AANa治疗(图3)。组织学评分在控制包括管状上皮细胞的变性(1.55±0.38),细胞渗透(0.49±0.39),和透明圆柱体(0.05±0.05),但间质纤维化是缺席。然而,AANa治疗后7天,管状上皮细胞的变性(2.66±0.09, ),细胞浸润(1.11±0.10),透明圆柱体(0.78±0.06, )、间质纤维化(0.49±0.11, )观察。组织学分数在7天的资金控制分别为2.09±0.71,5.03±0.23 ( 在AANa-treated兔子(图)4)。此外,与之前的研究相比(17),没有显著差异在0.5毫克/公斤AANa-treated组织学结果兔子。尽管这些管状的变化,没有非凡的肾小球的变化。


图3
光显微镜发现肾脏标本兔子和0.5毫克/公斤马兜铃酸钠治疗后(AANa)。肾组织学改变后7天0.5毫克/公斤AANa iv管理。(PAS染色,放大×100)。 ( 1 ) 肾小管上皮细胞的退化; ( 2 ) 单核细胞浸润; ( 3 ) 透明圆柱体的存在。

图4
Tubulointerstitial组织学评分在治疗后的兔子和0.5毫克/公斤马兜铃酸钠(AANa)。 ∗ ∗ < 。 0 1 。

4所示。讨论

河畔的病理(15,16)的特点是一个贫穷的再生能力和强大的倾向没有肾小球纤维化损伤。到目前为止,肾血浆流量和肾小球滤过长没有明显的变化。原子吸收光谱法能引起肾毒性和肿瘤毒性实验研究[5,18,19)和原子吸收光谱法的毒性是不可逆的26,27]。在目前的研究中,一个四0.5毫克/公斤AANa管理是根据之前的研究(17]。AANa管理局在7天之后,兔子的组织学变化特点是轻度至中度退化的管状上皮和间质纤维化和非凡的透明圆柱体在远端小管的存在。整体是轻度至中度肾毒性程度的影响,和组织学得分之和为5.03±0.23,类似于以前的研究的结果(17]。河畔的实验模型被重复剂量诱导,近端小管的组织学检查发现的5,18,19类似的研究,没有发现交替在肾小球胶囊(18,19]。

多环芳烃通过过滤和分泌,因此,被用来估计RPF和肾的功能离子分泌转运蛋白(燕麦)[24,28]。OAT1和OAT3 [29日- - - - - -31日调解PAH的运输),位于近端小管河畔展览的主要损失。卢旺达爱国阵线与20毫克/公斤PAH控制兔子显示本研究之间无显著差异(22.36±4.01毫升/公斤/分钟)和一个由Guignard et al。(13.66±1.83 ~ 25.54±3.14毫升/公斤/分钟)(32- - - - - -35]。一些研究[36,37)报道,减少管周毛细血管阻力指标纤维化面积也许可以(PTC)密度和增加感染肾脏。因此,缺血和缺氧发生在感染,这可能导致阻力指标纤维化也许可以进步。因此,在集团管理AANa,提取比例为90.0%,卢旺达爱国阵线是10.11±2.72毫升/公斤/分钟,大大不同于那些控制兔子( )。AANa的PK从第四政府确定的数据表1。长礼物的时候,结果显示在CL和显著下降 、显著提高 和 。改变药代动力学参数的多环芳烃在河畔兔子似乎与几个因素有关:第一,减少RPF和PAH的减少交付肾元或肾小管(22.36±4.01和10.11±2.72毫升/公斤/分钟, )。许多ptc在感染动物36和病人37扭曲和崩溃。PTC损伤可以想象相关血液供应减少肾小管(38]。第二,肾小球滤过率(GFR)(5.95±1.79和0.89±0.18 mL / kg /分钟, )和净分泌(14.82和8.21毫升/公斤/分钟)也减少多环芳烃消除。此外,有一个阻力指标变化也许可以接近的程度之间的相关性和药代动力学数据的多环芳烃在AA管理;间质性浸润 ;阻力指标病变也许可以和整体 与AUC呈正相关,和透明缸 和间质纤维化 是负相关 。净分泌下降受到影响的近端小管间质炎症和纤维化PK PAH的变化。

菊粉是用来测量平。肾小球滤过率(GFR)无显著差异在5.95±1.79毫升/公斤/分钟控制兔子相比,报告由Guignard et al。32,33,39),皮切特et al。40)(3.69±0.37 ~ 6.4±0.6毫升/公斤/分钟)。在这项研究中,CL−85%,显著减少 −53%,AUC AANa治疗后增加了594%,如表所示2。然而,之间没有相关性的PK数据菊粉在AANa-treated兔子和阻力指标病变也许可以的程度。菊粉通过肾路线只能通过过滤,消除阻力指标病变也许可以,因此没有直接关联的PKs菊粉。虽然肾小球结构光显微水平保持不变,肾小球滤过率(GFR)水平显著下降 在轻度至中度感染。肾小球滤过率(GFR)突然下降可能与传入血管收缩有关,transtubular backleak滤液,和间质炎症。河畔的特点是广泛的近端小管间质炎症和纤维化的重吸收,增加肾间质压力阻碍等渗的流体在管状上皮细胞。滤过分数的扮演了一个角色在决定管等渗的再吸收效率,尤其是在近端小管(41]。在这项研究中,一个下降的趋势在滤过分数从27%到4%代表净水重吸收和减少有机溶解物,如氯化钠和葡萄糖。正常血糖糖尿的早期发展中观察到感染患者(42)和在这些AA-treated动物(5,19]可能解释病变近端小管提高被动管等渗的滤液backleak,而滤过分数减少,减少的部分视为近端小管重吸收钠导致增加氯化钠浓度和交付致密斑。这种增强tubuloglomerular反馈灵敏度和肾素分泌43)由于传入血管收缩导致肾小球滤过率(GFR)下降。此外,钠重吸收一直阻止疾病的恶化,这也影响了水在近端小管重吸收,然后减少细胞外液的体积收缩。这个推论证明了菊粉的分布体积减少被用作衡量细胞外液(44]。然后,细胞外液量减少会导致血容量下降。传入小动脉的收缩可能导致降低肾小球滤过率(GFR)和卢旺达爱国阵线通过tubuloglomerular反馈机制。然而,还需要进一步的研究来调查这些猜测。

总之,轻度至中度肾毒性被认为单一AANa管理局后7天。AANa政府后,主要肾近端小管损伤被发现。多环芳烃的PKs和菊粉明显改变,肾脏功能,包括卢旺达爱国阵线和肾小球滤过率(GFR)下降。有显著相关性的阻力指标变化和PK也许可以度参数多环芳烃AANa政府后,但没有相关性指出PKs的菊粉。