文摘
背景和目的。伤口愈合是一个复杂的生理过程,以保持皮肤完整性后受伤,包括增殖阶段,止血/炎症阶段,通过细胞外和重塑,细胞间和细胞内组件同步。这项研究旨在考察人类胎盘胶原蛋白/布洛芬对伤口愈合的影响在动物模型。材料和方法。细胞生存能力测试是由麻省理工(3 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 2, 5-diphenyl溴化四唑)测定。在动物研究中,三个循环是在割断这12个人的老鼠和注射以下组:胶原蛋白/布洛芬组1;胶原蛋白,组2;和未交货作为对照组,组3两次。伤口愈合过程探讨了通过计算收缩比例拍照在天后7和14。同时,在天7和14日组织病理学进行了评估。结果。MTT结果显示没有明显的细胞毒性,宏观结果表明伤口收缩的比例为85%,79%,和41%的胶原蛋白/布洛芬,胶原蛋白,分别和对照组第14天。组织病理学评估显示,毛囊数,成纤维细胞内容和血管生成胶原蛋白/布洛芬比胶原蛋白和对照组明显更重要。结论。胶原蛋白/布洛芬组有显著成果与胶原蛋白和对照组相比,伤口愈合,伤口收缩。胶原蛋白/布洛芬凝胶可以潜在的水凝胶在加速伤口愈合。
1。介绍
皮肤伤口普遍通过不同的损伤通常发生的原因涉及代谢疾病如糖尿病和热或理化赔偿。皮肤伤口有可能诱发发病率随着功能失衡,残疾,提高疼痛(1]。统计分析估计,美国大约有560万人是通过伤口病变,影响和治疗成本每年超过500亿美元。此外,皮肤伤口可以分为慢性和急性创伤。通常急性伤口愈合自己充分和顺利2]。相反,环境等相关疾病,营养不足,伤口的广泛扩展,年龄和皮肤再生过程的损伤导致慢性伤口(3]。伤口和伤口清创术治疗结束,压力卸料,和感染管理与局部抗生素和局部防腐剂也血管再生,这是治疗伤口的方法的主要原则(4]。有不同的进步清创手术等流程,biosurgery,湿干酱,酶制剂,多糖珠子或聚糖酐多糖粘贴,水凝胶。当伤口敷料改变从潮湿的伤口干燥,他们提供了非选择性清创术,因此与坏死组织清除清洗伤口。应该在每个换药,伤口被调查。Moisture-retentive敷料结束电影、凝胶、hydrofibres,海藻酸盐,水凝胶是有用的在不同临床环境5]。的一个重要的临床问题是伤口护理治疗,拥有几个程序包含炎症,止血,增殖,血管生成,结缔组织重塑,伤口恢复力量。再生和自然增长通常恢复受损组织的完整性在伤口愈合的过程。内源释放趋化因子、细胞因子和生长因子是恢复伤口组织完整性的关键调节成纤维细胞之间的交互,角质细胞,中性粒细胞,内皮细胞、巨噬细胞6]。疼痛治疗慢性伤口的病人来说是一个很大的负担。此外,细胞释放痛苦神经肽应对广泛的刺激,和对疼痛的反应压力不利于改善。神经肽通常诱导单核细胞、白细胞和其他免疫反应性的细胞放电促炎细胞因子(7]。促炎细胞因子的不平衡影响伤口愈合消极,订阅相关的炎性疾病,导致组织的破坏。多进步,以防止急性疼痛和炎症在伤口护理评估。ibuprofen-loaded材料缓释行为也被用来防止过度的炎症的早期愈合,减弱疼痛,刺激组织的修复后阶段的持续时间(8]。布洛芬已经分类的非甾体类抗炎药(非甾体抗炎药)类治疗急性疼痛,炎症,退化性疾病通过禁止环氧合酶(COX)通路。布洛芬biotransformed迅速由于其半衰期短,必须使用快速保存有效的血浆浓度。然而,多个剂量的布洛芬可以阻碍合规和减少临床疗效9]。此外,布洛芬的持续和控释系统可以提高治疗负担通过stimuli-responsive运营商提供的条件要求释放药物(10]。同样,可注射水凝胶,temperature-inducible、局部药物输送系统可能调节药物释放和缓解非特异性药物分发给健康的器官和组织。同样,他们可以支持多重用药抑制和提高病人的依从性(11]。胶原蛋白提供了完整的组织结构和细胞普遍认识到大多数蛋白在皮肤上。安排myofibroblasts和原纤维形成的成纤维细胞组织合成皮肤胶原蛋白经常下剪切应力和拉伸12]。形式的胶原蛋白的I型胶原蛋白,存在于饰带,肌腱,真皮,疤痕组织的基本组件。皮肤的胶原蛋白是用于管理synthesization替代品,也在跨膜蛋白组成、纤维表面,或串珠结构(13]。因此,这项研究的目的是探讨胶原蛋白和布洛芬凝胶对伤口愈合的影响在体内测试和评估组织病理学变化和伤口收缩的百分比。
2。材料和方法
2.1。水凝胶的合成
根据协议(胶原蛋白提取14]。总之,人类胎盘来自腹部通过一般的外科医生。之后,胎盘被(蒸馏水,4°C),然后碎冰1 - 2厘米。氢氧化钠用于移除noncollagenous蛋白(1 n,每2 h,刷新了6 h)。然后,多余的脂肪消除了丁醇(10%,24小时,用粗棉布过滤)。20%的胶原蛋白的沉淀是获得使用生理盐水(pH = 7, 3 m,离心机5000 g 30分钟)。剩下的是溶解在2%乙酸,转移到透析油管,搅拌在蒸馏水(5天),和冻干14]。提取胶原蛋白是沉浸在稀释的盐酸(pH = 2,获得1% (w / v)解决方案)(15]。然后,布洛芬(2 - (4-isobutylphenyl)丙酸;Arora制药、印度德里)(25 wt %)添加到胶原蛋白溶液,搅拌。获得的均匀悬浮液储存在4°C。
2.2。细胞生存能力测试
MTT(甲基噻唑基四唑)测试是直接根据ISO 10993 - 5标准。细胞培养板保持负控制无细胞毒性。MTT试验进行评估水凝胶的细胞毒性。因此,20000年脂肪干细胞(ADSCs)被添加到培养基(50μ20000 L)和成纤维细胞被添加到培养基(50μL)作为负控制没有细胞毒性,分别是水凝胶含有血清和讲究的。培养基被添加到每个3小时后被免职。随后,MTT(100的解决方案μL, 0.5毫克/毫升)被添加到每个。4小时后上层清液的解决方案被淘汰。然后,DMSO (100μl)加入溶解形成紫色甲瓒晶体。解决方案在570纳米波长的光密度检测ELISA读者(收敛ELReader 96 x)。研究结果显示为一个百分比(控制价值= 100.00%)。同时,化验都是显示在一式三份获得准确的结果。细胞可行性研究通过以下方程:
2.3。体内试验
十二个雄性Wistar鼠(180 - 200 g和3 - 4周)被分配在标准条件(20 - 25°C,湿度65 - 75%)的监督下一名兽医。全身麻醉诱导的肌内注射2%甲苯噻嗪(10毫克/公斤)和10%的克他命(50毫克/公斤)。之后,三个圆形切除术(直径8毫米)在每个12老鼠用穿孔7天,14天。不良网站被注入如下:胶原蛋白/布洛芬(组1),胶原蛋白(2组),对照组和空(组3)。提取的胶原蛋白(3毫克/毫升)和40毫克/毫升的布洛芬,然后,混合注射在伤口上。
2.4。宏观分析
在宏观分析,伤口收缩切除伤口的图片得到所有三组使用数码相机干预后7和14天。图像J软件调查伤口收缩照片关于伤口收缩比例。伤口收缩比例计算使用以下方程。
2.5。显微分析
老鼠牺牲后7和14天。样品(每组1厘米的区域)在10%的福尔马林固定48 h。然后,样本在一系列评分的80% - -100%乙醇脱水的解决方案。所有的标本都位于石蜡,切成5μ米部分,然后用苏木精和伊红染色法染色。样品进行评估并使用光学显微镜拍照。组织调查,包括血管生成的数值密度,毛囊数量,和成纤维细胞,包括至少三个部分的形态描述光学显微镜。
2.6。统计分析
弗里德曼的非参数测试是用来比较的组 水平的意义。
3所示。结果
3.1。细胞毒性测试
这个细胞生存能力调查是在24和48小时。在该测试中,菜被认为是控制细胞培养的传统文化。根据图1结果表明,细胞的生存小于对照组24小时内和加班;生存越来越趋势的观察,这可能表明细胞继续繁殖容忍冲击后第一天,经历了一个上升趋势。此外,细胞存活率在48小时内达到约98%在两组(图1)。
(一)
(b)
3.2。宏观结果
老鼠是牺牲和拍照在7和14天,伤口收缩是评估。图2显示了宏观视角的伤口。结果表明,伤口愈合率较高的胶原蛋白/布洛芬组比其他组。愈合伤口收缩和胶原蛋白/布洛芬组比胶原蛋白和对照组更显著。伤口收缩了40%、25%和17%的胶原蛋白/布洛芬,胶原蛋白,分别和控制组织在7天。14天,伤口愈合和收缩显著超过7天,和胶原蛋白/布洛芬可以显著提高伤口愈合。伤口收缩高在胶原蛋白和胶原蛋白/布洛芬组比对照组。伤口收缩了85%、79%和41%的胶原蛋白/布洛芬,胶原蛋白,和对照组14天,分别为(数字2和3)。
3.3。微观结果
组织病理学调查报告适当的伤口愈合的胶原蛋白/布洛芬组7天。成纤维细胞迁移到伤口部位,毛囊检测14天,显示合成水凝胶的关键作用改善伤口愈合和刺激的其他因素在伤口愈合进程迁移具有实用功能14天(数字4和5)。毛囊、血管和胶原蛋白/布洛芬组的成纤维细胞被发现在7天内与其他群体相比,表明这种合成化合物(胶原蛋白/布洛芬)可以发挥基础性作用增强的伤口愈合。过程保持和扩大到了14天,这意味着皮肤组织的积极反应合成水凝胶及其增量伤口愈合的关键部分(数据4和5)。伤口愈合的速度较高的胶原蛋白/布洛芬组相比在14天到7天。这些细胞被转移到伤口,促进血管生成在14天以上7天。观察伤口愈合与胶原蛋白床单和轻微的细胞迁移到伤口的网站在胶原蛋白/布洛芬组;然而,更高的细胞迁移,进一步在第14天发现了血管生成胶原蛋白/布洛芬组。毛囊和血管生成被相当多的胶原蛋白/布洛芬和胶原蛋白组,但是成纤维细胞的胶原蛋白的数量/布洛芬组高于胶原蛋白组。伤口愈合在胶原蛋白组开始从周边地区在7天伤口,增强了14天,基于轻微细胞迁移到伤口面积和增加血管生成。
(一)
(b)
(c)
相反,伤口愈合是不起眼的对照组,微不足道的治疗下检测层的结缔组织。伤口愈合率为14天显著高于对照组的第七天。血管的数量、毛囊和成纤维细胞(伤口恢复的重要因素)大大降低胶原蛋白和对照组在天7和14相比胶原/布洛芬组。
4所示。讨论
功能治疗的进展增加血管再生和伤口愈合,尤其是对于复杂或者无法愈合的伤口,要求复合的能力在富有挑战性的工作环境不足的伤口愈合。此外,几个组件显示重大承诺增加血管再生和伤口愈合伤口愈合动物模型。伤口愈合之前,各种治疗方法,在临床前研究繁荣最终恶化呈现优势病人当检查在临床试验中16,17]。水凝胶有着广泛的管理对于修复和再生受损组织,主要因为他们的特征,如渗透率、粘弹性性质、孔隙度、生物相容性和生物降解性。伤口愈合实验报道,水凝胶显示诱导真皮再生和抗炎的特征。例如,微球凝胶将人参皂苷Rg1(化合物来自人参)加载在壳聚糖/胶原支架。因此,穿着通常是管理再生皮肤的受损组织,因为生物活性化合物的影响(18,19]。协调细胞的炎症反应是一系列事件导致伤口修复,可以执行有害和有益的角色在修复皮肤层。非甾体抗炎药是大量用于管理炎症由于退热剂,镇痛,抗炎和血栓性属性因为抑制环氧酶1和2 (20.,21]。同时,布洛芬等非甾体抗炎药的一线药物治疗骨关节炎、软组织损伤、痛风、疼痛,炎症与估计政府每天超过3000万。最近的研究结果显示,抗炎等因素的组合双氯芬酸和地塞米松可以减少前列腺素E的水平,使用时水肿和组织病理学损伤后临床症状的表现。双氯芬酸是通过抑制环氧酶1和2的影响,因此抑制前列腺素的合成。同样,氯倍他索抑制磷脂酶A2和环氧酶2活动通过抑制糖皮质激素受体,抑制细胞因子的生产和改变的细胞在炎症区域。同时,联合治疗的有效性改善由于不同机制的双氯芬酸和氯倍他索22]。布洛芬治疗会有最重要的影响在减轻早期缺陷和损伤的急性炎症反应的持续时间(23]。Connizo等人探索,布洛芬在术后的早期使用时间摧毁了肌腱愈合(24]。相比之下,延迟使用并不影响肌腱的提高。Connizo等人的研究结果也认为布洛芬在术后早期政府最重要的恢复效果持续时间(2 - 4周)24,25]。呵叻,Kapupara显示当地的渗透低剂量的布洛芬的手术伤口,levobupivacaine,肾上腺素会影响术后疼痛的肌肉缝合伤口。手术伤口渗入了50μL解决方案由8毫克/毫升肾上腺素、w / v levobupivacaine 0.3%, 2毫克/毫升布洛芬和与水的渗透缝合肌肉皮肤伤口之前关闭。相关研究结果显示手术伤口的地方渗透与肾上腺素levobupivacaine,和布洛芬的结合具有高效功能手术伤口愈合,术后疼痛通过减少疼痛,改善血管生成、抗拉强度、大鼠模型研究[26]。李等人研究了壳聚糖/胶原凝胶结合补充cell-penetrating肽凝胶有神奇的愈合速度和加速度在治疗通过增加肉芽组织形成,刺激血管生成,增强伤口组织胶原的沉积。相比之下,微不足道的细胞毒性的凝胶在组织病理学分析(27]。
本研究表明,伤口愈合明显增强的胶原蛋白比胶原蛋白/布洛芬组和对照组。伤口收缩在胶原蛋白/布洛芬组是40%,虽然这胶原蛋白率为25%,对照组在7天的17%。相反,伤口收缩的速度更重要的14天。在胶原蛋白/布洛芬组伤口愈合比胶原蛋白和对照组更显著。胶原蛋白组伤口愈合和收缩显示高于对照组。7天,胶原蛋白/布洛芬组伤口愈合非常可观;成纤维细胞迁移到伤口部位的毛囊和观察治疗14天网站提出了合成水凝胶显著提高伤口愈合,促进了其他因素参与这个过程的迁移到伤口站点。愈合的速度在胶原蛋白/布洛芬组14天高于7天,以胶原蛋白层的形成和迁移的细胞和血管生成。14天,伤口边缘的闭包是更优秀的胶原蛋白/布洛芬组。对照组的治疗是可以忽略的7天开始下结缔组织层。 The healing rate on day 14 was much higher than that on day 7 in the control group. Based on the outcomes, the collagen/ibuprofen synthetic hydrogel may be concluded to enhance wound healing during 14 days effectively. Microscopically, the collagen/ibuprofen synthetic hydrogel increased wound healing and induced the migration of factors responsible for the healing process, which presented the promising capacity of the synthetic hydrogel comprised of collagen and ibuprofen in acute wound healing.
数据可用性
使用的数据来支持本研究的结果都包含在这篇文章,可从相应的作者。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。