骨髓和外周血AML细胞CNDAC高度敏感,Sapacitabine的活性形式

文摘

实现改善生存和减少复发仍然是一个挑战在急性髓系白血病(AML)患者。本研究评估了在体外功效的活性形式的小说代理sapacitabine CNDAC,相比目前的化疗药物Ara-C和米托蒽醌使用两个AML细胞株,HL-60(早幼粒细胞)和THP-1(单核细胞的),以及骨髓(BM)和外周血细胞(PB)收集的AML患者。细胞系被暴露于复合和主细胞3 - 6天4天。主要细胞是另外的可行性评估3,7,31天后删除测试化合物来确定响应的耐久性。我们的研究表明,CNDAC和米托蒽醌对生存能力的影响大于ara-C在初级AML细胞和AML细胞株。CNDAC更有效地减少生存能力和诱导细胞凋亡在当量浓度比ara-C THP-1细胞系,这被定义为显示ara-C阻力。作为sapacitabine显示在活的有机体内活动在临床上可实现的剂量,未来的研究是必要的评估潜在的结合ara-C和/或米托蒽醌,重点是细胞和ara-C治疗的病人不敏感。

1。介绍

急性髓系白血病(AML)治疗是不断挑战高发病率的疾病复发和患者死亡率。AML的总体5年生存率是30 - 40%病人45年>和< 10%的患者超过60年1]。然而,这些患者的长期活动免费的存活率只有20 - 50% (2,3]。当前AML疗法,“7 + 3”方案与阿糖胞苷(ara-C)和道诺霉素等蒽环霉素idarubicin,或合成anthracenedione米托蒽醌,几十年来一直关心的标准。核苷模拟ara-C形式治疗AML的支柱,在诱导治疗,低剂量或高剂量的维修后缓解(4,5]。虽然高剂量治疗已经显示出改善生存,60 - 70%的患者复发和最终死亡由于疾病进展(4,6]。此外,患者停止响应ara-C和有许多老年AML患者不能容忍政权,因此不适合密集化疗。新颖的治疗方法因此要求。

核苷类似物,如ara-C,代表一大群antileukemic代理(5]。他们是细胞随周期变动的细胞毒性药物,融入越来越多的DNA链迫使链终止和抑制DNA合成。他们被激活的顺序添加磷酸盐,首先到5′脱氧胞苷一磷酸形成的酶激酶(dCK),随后被其他细胞酶将其转换为di -和三磷酸盐形式,在准备纳入DNA (7]。研究表明,抗核苷类似物主要出现由于脱氨基作用的酶胞嘧啶核苷脱氨酶(CDA)或由于细胞质酶的活动5′核苷酸酶,脱去磷酸5′一磷酸产品,反对dCK活动(8]。其他耐药机制包括过度的跨膜射流泵和减少表达拓扑异构酶(9]。小说主要的核苷类似物的结果小现有药物的结构修饰,以提高活性和抑制电阻(5]。

米托蒽醌的合成anthracenedione已经开发了一个模拟阿霉素减少药物相关cardio-toxicity [10]。广泛应用于以前未经治疗和复发的治疗AML患者(11]。米托蒽醌是由多个机制诱导细胞死亡。在分子水平上,它显著影响酶的活性,导致DNA拓扑异构酶2单引号和双链断裂。形成一个稳定的topoisomerase-DNA可分裂的复杂的链断裂防止重新加入。它插入堆基地的DNA,也可以通过静电结合DNA交联互动。米托蒽醌的氧化活化生成自由基,诱导非蛋白[相关链断裂11,12]。在细胞水平,显示了药物活性的免疫抑制剂,影响巨噬细胞的活性,T细胞和B细胞(10]。因此,米托蒽醌是活跃的增殖和nonproliferating细胞。2′-C-Cyano-2′-deoxy-1 -β-d-arabino-pentofuranosylcytosine (CNDAC),口服药物的主要代谢物sapacitabine,是一个结构相关的核苷模拟ara-C和吉西他滨13,14]。含氰基的集团的主要区别是取代糖2′氢的一半(14]。Ara-C和其他核苷类似物诱导细胞周期阻滞在s阶段。然而,CNDAC诱导细胞周期阻滞在延迟后的G2期S期(15]。与ara-C不同,它不会引起链终止公司的网站。附加伸长后,强亲电含氰基的集团的财产将核苷酸,它缺乏一个免费的3′哦组(13,16]。这个合成单链断裂修复细胞的最小切除修复机制(17]。复制的结果是一个双链断裂,最终终止DNA合成。为了测试在体外CNDAC的有效性,本研究CNDAC传统药物相比,ara-C米托蒽醌,早幼粒细胞细胞系HL-60, ara-C已知敏感,THP-1单核细胞的细胞系,ara-C不太敏感,和外周血和骨髓细胞从5 AML患者。

2。材料和方法

2.1。细胞系

AML细胞株,HL-60和THP-1写明ATCC(马纳萨斯,弗吉尼亚州)和来自RPMI 1640培养基培养(酚红)(洛根,热科学Hyclone UT)补充10%胎牛血清(热科学Hyclone), 100 U / 100 /毫升青霉素μg / mL链霉素溶液(热科学Hyclone)、谷酰胺(热科学Hyclone)和2毫米。细胞培养在37°C, 5%的公司₂,100%的湿度。在对数生长期细胞所有实验的开始。

M2-10B4从写明ATCC购买、培养基质细胞RPMI 1640年媒体。基质层是由辐射细胞在80 Gy,镀在糊化24孔板在集中5×10⁴细胞/。井糊化通过添加0.1%明胶在水中(EMD微孔、Billerica MA)每个孵化6小时。M2-10B4基质层是孵化37°C, 5%的公司₂前至少24小时,100%湿度的AML细胞。

2.2。患者样本

外周血(PB)和骨髓(BM)标本取自5 AML患者知情同意在IRB批准协议符合赫尔辛基宣言。这些患者,3是新诊断和2有复发。2复发患者三倍体13和复杂的分析,分别。所有其他患者正常的细胞遗传学。总白细胞计数的患者范围从27.06到93.75 K /μL和56.6 - 98.5%爆炸的骨髓。表提供更多的临床信息1。治疗前所有标本收集。外周血中收集肝素化真空采血管管和BM在肝素化注射器吸入物收集。单核细胞(跨国公司)分数通过密度梯度离心法使用Ficoll-Paque +(通用电气医疗集团,皮斯卡塔韦,新泽西)。细胞冷冻和储存在液氮和解冻之前使用。PB跨国公司与药物治疗在暂停期间,和BM跨国公司在对待coculture系统鼠标M2-10B4基质细胞系。悬浮介质IMDM(热科学Hyclone)补充20%的边后卫,100 U / 100 /毫升青霉素μ谷酰胺g / mL链霉素,2毫米,100 ng / mL自洽场(干细胞技术,加拿大温哥华),和50 ng / mL IL-3 (EMD微孔,Billerica MA)。培养媒体一样悬浮介质的1μM氢化可的松(西格玛奥德里奇、圣路易斯、钼)。

2.3。药物、治疗和文化条件

阿糖胞苷(ara-C)从贝德福德购买实验室(贝德福德,哦)和米托蒽醌从梅恩制药有限公司(澳大利亚Mulgrave)。CNDAC被Cyclacel请提供有限公司(英国邓迪)。股票浓度ara-C(100毫米)和米托蒽醌(1毫米)在杜尔贝科的磷酸盐(DPBS)和存储在−80°C而CNDAC(100毫米)溶解在二甲亚砜(DMSO)(西格玛奥德里奇)和存储−20°C。股票的药物是在媒体工作。

细胞系(HL-60和THP-1)治疗悬浮在48孔板在播种密度为0.05×10⁶细胞/毫升(低)或0.5×10⁶细胞/毫升(高)。细胞治疗与ara-C或CNDAC为0.5,1,2,3,4,5,10μ米和米托蒽醌为0.0025,0.005,0.01,0.02,0.03,0.04和0.05μ一式三份,37°C, 5%的公司₂,100%的湿度。包括适当的未经处理的控制。细胞分析了3、4、5、6天后处理。

1×10⁶主要BM和PB细胞治疗1μM(低),10μ(中),100μM ara-C CNDAC或0.005的(高)μ0.05 M(低)μ(介质)和0.5μ米(高)米托蒽醌在24孔板在37°C, 5%的公司_2,和100%的湿度为4天。包括适当的未经处理的控制。Postdrug治疗,PB和BM non-adherent细胞被洗去复合,山肩M2-10B4基质层,和reincubated 37°C, 5%的公司₂,100%的湿度。细胞分析后立即治疗后,3、7,31天postdrug去除。

2.4。Alamar蓝试验

Alamar蓝试验进行确定药物IC₅₀值在AML细胞株。HL-60和镀THP-1细胞96平底盘子在5×10³细胞/。细胞培养在37°C, 5%的公司₂,100%湿度24小时之前的药物。细胞治疗ara-C CNDAC和米托蒽醌浓度0.005至100一式三份μm .盘子reincubated了72小时后的药物。72小时后,Alamar蓝色(AbD Serotec,牛津大学,英国)添加到所有井的最终浓度为10%,和盘子都回到了孵化器的吸光度是前8小时读光谱仪(SpectraMax M5,分子器件、桑尼维尔CA)在波长570 nm和600 nm。细胞增殖是由计算减少Alamar蓝色。使用的方程如下:

和的摩尔消光系数Alamar蓝色氧化和减少的形式,在哪里,,和。的吸光度是消极的控制。

%抑制计算使用公式: 负控制的媒体+ Alamar蓝色,但没有细胞和积极控制细胞+ Alamar蓝色,但没有药物。

2.5。可行性的分析

在每个时间点,细胞株和初级AML细胞评估整体生存能力的获取对血细胞计数器计数幻灯片用台盼蓝排斥染料。活和死细胞细胞株百分比计算的原始计数。为初级细胞生存的百分比计算剩下的活细胞除以初始细胞数量。

2.6。分析细胞凋亡

细胞被洗两次冷DPBS和resuspended绑定缓冲区包含适当的7卷aad AnnexinV和孵化在黑暗中在室温下15分钟。多余的抗体/染料被冲洗掉,数据获得在流式细胞分析仪在1小时的染色。细胞块7-AAD与AnnexinV进行评估。细胞染色为阴性7-AAD和AnnexinV(7法^{- - - - - -}AnnexinV^{- - - - - -})被认为是生活和non-apoptotic /健康。细胞染色阳性只为AnnexinV(7法^{- - - - - -}AnnexinV⁺)是早期凋亡和那些7-AAD和AnnexinV呈阳性(7法⁺AnnexinV⁺)迟到了凋亡或坏死。7-AAD细胞的总和^{- - - - - -}AnnexinV⁺和7-AAD⁺AnnexinV⁺象限是死细胞。

2.7。统计分析

数据表示为平均值±SEM。比较药物治疗在细胞系进行使用的学生t以及,假设方差相等。集成电路₅₀值的药物在细胞系是从非线性回归确定标准曲线的情节。在初级细胞,Mann-Whitney等级和测试是用来确定组,差异和logrank测试是用来比较曲线。被认为是显著的。所有统计分析使用SigmaPlot (Systat软件公司,芝加哥,IL)。

3所示。结果

3.1。损失的细胞增殖

的集成电路₅₀值,定义为half-maximal抑制浓度,ara-C和CNDAC HL-60 THP-1细胞通过Alamar蓝试验(图1)与其他出版的数据(13,15,18- - - - - -22]。相似的化学结构和集成电路₅₀ara-C和CNDAC让我们测试的值相同剂量的药物在细胞系和主细胞。米托蒽醌活性更低剂量;因此,细胞被测试在100倍低剂量的药物效应与ara-C和CNDAC。选择药物稀释的范围,它涉及集成电路₅₀值。Alamar蓝试验被认为是不适合初级细胞由于试验的依赖细胞增殖。

3.2。敏感细胞株Ara-C, CNDAC、米托蒽醌

比较药物在低和高的影响细胞增殖率、细胞系镀在2播种密度不同的10倍。HL-60细胞,在高密度板,显示剂量反应ara-C (0.5μ米到10μ米药物)%细胞死亡从6.26±1.39,63.8±5.35 3天(图2 (b))和8.32±1.13,86.6±6.36 6天()。然而,ara-C诱导高细胞死亡在镀细胞低密度为16.2±7.33到94.0±2.82%的细胞死亡在3天(图2(一个))和19.6±2.88到100±0.00 6天。引起的细胞死亡CNDAC等效剂量ara-C,范围从17.3±3.27%在第三天(图70.2±0.84%2 (b)95.9)91.7±1.02%±1.01%镀6天细胞密度高,和77.4±7.65%,第三天(图98.1±1.75%2(一个))96.3±2.9%至100±0.00%镀6天细胞低密度。在细胞密度越高,尽管HL-60细胞表现出剂量反应CNDAC 3天,细胞死亡并没有显著的%,直到第四天为0.5μ米和1μ米药物(,)(图2 (b))。在细胞密度,显著增加%治疗之间的细胞死亡和细胞低剂量药物治疗HL-60 4天的药物治疗(,)。然而,较低的播种密度、等效浓度比ara-C CNDAC更有效诱导细胞死亡(图2(一个))。的集成电路₅₀CNDAC的值,这里定义所需的药物浓度诱导细胞死亡始终低于50% ara-C在所有时间点(表2)。

THP-1细胞有最小响应ara-C播种密度高。细胞死亡的比例在10μ米在第三天(图12.1±0.282 (b)6(天)和19.7±2.31)。THP-1细胞整体低反应CNDAC 3天,然而,细胞死亡在剂量明显高于ara-C > 2μ米(,)。还有一个显著增加细胞死亡的细胞治疗≥2μM CNDAC比第三天第四天(,)。细胞死亡的% CNDAC-treated细胞范围从39.9±4.08 (2μ54.6±3.08(10米)μ米)天4和49.8±1.55,86.9±2.17 6天(n= 3)。相比之下,在播种密度越低,ara-C诱导细胞死亡0.5之间的药物浓度μ米和10μM是最高的一天3 - 1.52±1.67%(图55.6±9.87%2(一个)6 - 4.47天)和最低6.84±1.04%±5.05%。在这个细胞密度,THP-1细胞表现出剂量反应CNDAC第三天,与细胞死亡的%明显高于ara-C剂量测试(,)(图2(一个))。集成电路₅₀值在THP-1 CNDAC细胞低于ara-C,不管播种密度(表2)。

细胞死亡的%米托蒽醌范围从15.9 (0.0025±1.89%μ(0.05米)90.8±2.72μ米)在3天(图2 (b))和45.3±4.67到100±0.0%的6天HL-60镀细胞在细胞密度越高。THP-1细胞相对减少响应对药物与细胞死亡从10.2±1.48%到第三天(图68.8±4.92%2 (b)97.7)19.7±1.23%±1.21%天6。%的细胞死亡明显高于细胞治疗的最低剂量米托蒽醌(0.0025μ米)作为HL-60但不是THP-1比未经处理的细胞(,)。在播种密度越低,米托蒽醌能够诱导≥84.9±4.76% HL-60细胞中细胞死亡3天,只有在THP-1细胞≥30.7±11.1%剂量的0.0025μ米及以上(图2(一个))。然而,这两种细胞系细胞死亡100%剂量> ss0.0025展出μ米托蒽醌的M。

分析两种细胞系的细胞凋亡是播种密度高。死细胞总数从7-AAD /膜联蛋白V分析获得补充,从台盼蓝。然而,有一个不同的分布之间的早期和晚期凋亡事件两个细胞系。总死亡的细胞,在HL-60晚期凋亡/坏死细胞的百分比≤55.4±0.76%和THP-1细胞是≥58.4±0.48%的所有药物治疗和时间点。这是指示性的细胞死亡方式的差异在两个细胞类型(图之间3)。

3.3。从AML患者Ara-C主要细胞的敏感性,CNDAC和米托蒽醌

悬架和coculture系统为初级AML PB和BM跨国公司在第一次使用4天来模仿在活的有机体内在药物治疗情况。共培养系统postdrug逃学,用于提供额外支持扩张PB和BM细胞逃避药物的效果。假设100%生存在时间为零的实验,PB跨国公司增加到115.6±21.6%的生存在没有药物在悬浮培养在第一次4天。未经处理的BM跨国公司培养系统,然而,有一个较慢的增长速度与生存在4天后106.4±18.9%。第七天的文化(细胞被洗了,转移到新的基质层4天),PB的生存和BM细胞百分比分别为125.91±38.7%和130.91±35.8%。没有进一步的细胞扩张超出7天作为PB生存为130.83±68.3%和129.24±55.5%的细胞在35天(金属堆焊后31天)。

主要PB和BM跨国公司进行了测试在低,中,高剂量的ara-C CNDAC,米托蒽醌。缺乏可用性大细胞数量有限数量的剂量测试。在任何时间点,分析之间没有显著差异在细胞生存治疗和低剂量ara-C (1μ米)PB细胞治疗。然而,10μM ara-C诱导显著减少细胞生存在天4和7相比,未经处理的(,)。虽然不重要,PB的生存比未经处理的细胞呈现下降趋势(;4天)后低剂量CNDAC治疗。然而,到了第七天,CNDAC-treated细胞的生存在这个剂量明显低于未经处理的(,)。治疗10μ(中等剂量)CNDAC导致细胞存活率显著下降比未经处理的第4天,7和14 (,)。35天,细胞存活率仍呈现下降趋势,但不显著(;)(图4(一))。低剂量(0.005μ米)mitoxantrone-treated细胞有显著降低细胞生存4和7天(,)相比,未经处理的。0.05治疗μ米托蒽醌的M(中等剂量)导致重大损失在细胞生存在所有分析天(4、7、14和35)(,)。在高剂量(100或0.5μ米),所有三个药物诱导PB细胞生存的重大损失比未经处理的(,)(图4(一))。PB细胞的整体存活率较低的治疗剂量CNDAC,和米托蒽醌明显低于未经处理的整个35天文化时期(,)(图5(一个))。

在大英博物馆的细胞,lowdose ara-C或CNDAC无法产生重大损失在细胞生存与未经处理的4点文化相比,7、14岁或35天。然而,lowdose米托蒽醌治疗细胞表现出下降趋势在细胞生存比未经处理的(;)。与铅、BM的反应细胞10μM ara-C没有统计学上不同于未经处理的控制在4至7天(和分别地,)。中等剂量的形象CNDAC (10μ和米托蒽醌(0.05 M)μ米)治疗细胞相比,未经处理的控制是类似PB(图4 (b))。减少细胞的生存能力接受低剂量CNDAC和米托蒽醌和未经处理的细胞在整个文化时期是大英博物馆中维护细胞在PB细胞(,)(图5 (b))。

总细胞生存在PB跨国公司,经过3天的文化postdrug清除,大大降低了细胞治疗1μM CNDAC或0.005μM米托蒽醌和1μM ara-C (,)(图4(一))。类似的趋势观察与大英博物馆跨国公司,但没有达到显著性(图4 (b))。个体患者数据表明CNDAC整体有一个更大的细胞毒性影响细胞相比ara-C不管病人的突变状态的差异(临床数据未显示)。

4所示。讨论

本研究比较了细胞毒性的影响小说代理CNDAC传统代理,ara-C和米托蒽醌。的活动ara-C和CNDAC是依赖于细胞周期的。细胞系镀播种密度较低的扩散率表明积极细胞分裂从而降低集成电路₅₀的药物。相反,在高播种密度、细胞增殖率较低因此需要更高剂量的药物来达到类似的效果(表2)。不管播种密度,比ara-C CNDAC HL-60细胞更敏感。重要的细胞死亡是由CNDAC在低剂量(0.5μ米),这表明高剂量是不必要的。低有效剂量是非常理想的临床,在低剂量通常等同于少的毒性和meylosuppression病人。

THP-1细胞被认为是不太敏感的ara-C由于高胞嘧啶核苷脱氨酶(CDA)的活动,这使脱去氨基ara-C到不活跃的ara-U [7,8,18]。也显示酶释放到文化媒体因此去活化药物(18]。Ara-C镀时发现是活跃在这些细胞在低密度虽然很高的浓度(IC₅₀= 7.7μ米)。更高的细胞死亡ara-C-treated THP-1细胞相比,3天6天,镀在低密度时,可以解释为越来越多的CDA文化媒体带来活跃的增殖的细胞。播种密度高,一个集成电路₅₀THP-1细胞的药物剂量测试并未实现,也许由于CDA ara-C完全失活。THP-1细胞,然而,回应CNDAC IC₅₀值≤2.774μ米,无论细胞密度(表2)。的集成电路₅₀已被证明是在1μ在肿瘤细胞系(14和老鼠16]。PK人类研究也发现CNDAC的等离子体浓度高达0.25μ米(2]。综合来看,这些研究都表明,生成的数据是与其他研究和临床相关。CNDAC CDA是一个贫穷的衬底,(16]因此解释CNDAC类似活动在细胞密度。有趣的是,CNDAC似乎对THP-1延迟效应细胞作为一个温和的效果出现在第三天用一种更健壮的效果出现在天4 - 6(表2和图2(一个))。米托蒽醌在很大程度上是受播种密度的细胞的影响。虽然米托蒽醌活动激增和nonproliferating细胞,在细胞分裂比它更活跃的潜伏期(23]。这是显而易见的,我们的实验从大的集成电路₅₀值在细胞密度越高,反之亦然。更高的集成电路₅₀值THP-1, HL-60相比,表明THP-1细胞耐米托蒽醌略高于HL-60细胞。

基质细胞常被认为是保护区为主要的白血病细胞。他们产生细胞因子和生长因子,保护其利基和影响细胞增殖,分化和生存24- - - - - -26]。永生的人类基质细胞系,HS-5,已被证明保护AML细胞毒性作用的ara-C [27,28]。M2-10B4支线层已经被使用在长期文化启动细胞(LTC-IC)和鹅卵石区域形成细胞(CAFC)化验和已知凋亡信号提供给健康和人类和小鼠白血病细胞在接触培养(29日- - - - - -31日]。使用M2-10B4主要细胞共培养系统来评估药物影响AML患者没有被报道。在这项研究中使用的文化系统因此提供了一个独特的药物不限于AML的评估工具。

在我们的实验中,当PB细胞对药物的影响似乎更敏感,BM的一小部分细胞免受毒性作用是他们对待药物基质的存在。中低剂量,PB和BM细胞治疗ara-C似乎长出来后除药物与基质细胞(图的支持4)。然而,BM细胞的产物是高,表明基质细胞基本上不支持PB细胞的生长。与之相反,连续亏损PB和BM跨国公司处理介质,和高剂量的米托蒽醌作为细胞培养的,暗示的时间越长,药效即使惨败。额外的研究测试的白血病势AML细胞,生长出postdug治疗,在免疫缺陷小鼠模型系统是必要的。

与Ara-C细胞,治疗残余细胞,在BM和PB CNDAC-treatment后,没有在文化扩张。2′- C-cyano - 2′, 3′-didehydro-2′, 3′双脱氧胞苷(CNddC)链终止βCNDAC消除中间,是一个贫穷的DNA链伸长生长的基质,负责诱导DNA单链断裂。众所周知,有很长的保质期在整个细胞由核苷酸及其去除修复(尼珥)机制被认为是一个缓慢的过程17]。这种独特的机制因此产生长期影响CNDAC对细胞的生存。

我们的实验显示比ara-C CNDAC更活跃在主细胞和细胞系。Sapacitabine CNDAC的棕榈酰导数。棕榈酰链允许口服吸收的药物,保护陶瓷氨基脱氨基作用。提出的比较CNDAC和sapacitabine Serova et al。15]本文提供的数据表明,sapacitabine可以有效管理病人在较低剂量比目前完成;从而最大限度地减少对正常细胞毒性药物诱导myelosuppression和组织。CNDAC也被证明比ara-C更活跃在活的有机体内在鼠标P388白血病模型(32,33]。活动在低剂量CNDAC THP-1细胞表明其使用替代疗法的病人抵抗ara-C。

在临床方面,sapacitabine表明承诺antileukemic活动。第一阶段试验证明该药物是安全的和积极的治疗某些血液疾病(MDS和AML)和实体肿瘤(34]。也有效的AML和MDS患者预后不良(2]。Sapacitabine目前三期临床试验的新诊断的AML患者,70岁或更老的,不适合密集的诱导治疗。

未来的研究是必要的评估相结合的潜在CNDAC AML同时或在预先设定的顺序与标准化疗;尤其是在病人不响应ara-C-based疗法。有寿命限制管理米托蒽醌病人作为其毒性是累计35]。然而,CNDAC没有寿命限制,使其适合维持治疗。低毒的概要文件,它可能会被容忍和有意义的改进可以预计的反应。

作者的贡献

K.W.C.构思和设计研究项目;中华民国,L.A.P. and R.R.F. designed and performed research experiments; S.J., L.A.P., P.V., M.L. and K.W.C., analyzed and interpreted data and wrote the manuscript.

利益冲突

所有作者宣称他们没有竞争的经济利益。

确认

作者感谢Cyclacel ltd .)请提供CNDAC。他们也感谢海基会基色博士,从拉什大学医学中心,收集骨髓吸入物;fom Cyclacel Sheelagh框架,对知识的贡献。这项工作主要是由泰勒椅子PV。KWC也支持这项研究期间由NIH-National糖尿病、消化和肾脏疾病研究所(DK074892),美国癌症研究协会(07-10-19-CHRI)、白血病和淋巴瘤协会(6044 - 08年),冲转化科学财团(08102761),国家血液基金会/美国血库协会(031824),保罗和琼·S Rubschlager基金会和科尔曼基金会(5008)。

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